一种从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素a和粘杆菌素b的方法

文档序号:3496609阅读:271来源:国知局
一种从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素a和粘杆菌素b的方法
【专利摘要】本发明涉及一种从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素A和粘杆菌素B的方法,该方法首先将粘杆菌素发酵液的粘度降至400~500Pa.s,后降温至0~10℃,调节pH至2~3,然后加入其重量的0.5%~0.8%的絮凝剂,充分搅拌后过滤,所得滤液降膜浓缩至其体积的30%~50%,之后进行二级逆流萃取,所得萃取液通过层析分离方式分离得到粘杆菌素A溶液和粘杆菌素B溶液,分别将粘杆菌素A溶液和粘杆菌素B溶液采用二级逆流反萃取、喷雾干燥后得到硫酸粘杆菌素A和硫酸粘杆菌素B的盐粉末。本发明实现了粘杆菌素A和B的有效分离,提高了其质量,使其含量分别在97%以上,总提取收率达到88~92%,降低生产成本;避免了重金属和废水的污染问题,降低了环保压力。
【专利说明】一种从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素 A和粘杆菌素 B的 方法

【技术领域】
[0001] 本发明属于抗生素提取、合成【技术领域】,特别是涉及一种从粘杆菌素发酵液中分 离粘杆菌素 A和粘杆菌素 B的方法。

【背景技术】
[0002] 粘杆菌素是由多粘芽肥杆菌变种粘菌素 (Bacillus polymyxa var. colistinus) 产生的碱性多肽类抗生素,其含有30多种不同成分的混和物,主要为粘杆菌素 A(多粘菌素 E1)和粘杆菌素 B (多粘菌素 E2)的混合物。对多数革兰氏阴性菌有效。被视为"最后一线 药物"。
[0003] 目前,国内采用离子交换法、膜过滤方法或沉淀法提取粘杆菌素,存在的主要问题 是: 1采用膜过滤法提取粘杆菌素,首先提取过程中产生的废水较多,其次膜过滤设备需 定期进行维护和保养,导致生产成本较高。
[0004] 2沉淀法和离子交换法提取粘杆菌素,其生产周期较长,工艺复杂,导致提取收率 较低,一般不超过80%。
[0005] 3采用以上工艺提取粘杆菌素,粘杆菌素 A和B组份总量不超过90%,杂质含量偏 商。
[0006] 4以上方法不能有效地提取、分离粘杆菌素 A和B组份。


【发明内容】

[0007] 本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷,提供一种有效提高提取收率,降 低成本,缩短生产周期,减少环境污染,实现稳定、有效分离的从粘杆菌素发酵液中分离粘 杆菌素 A和粘杆菌素 B的方法。
[0008] 为实现上述目的所采取的技术方案为: 一种从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素 A和粘杆菌素 B的方法,其特征在于粘杆菌素 发酵液经预处理、降膜浓缩、萃取、层析、反萃取、喷雾干燥后得到多粘素 E1和E2的盐粉末。 [0009] 所述预处理是指将发酵液加入饮用水,发酵液的粘度将至400?500Pa. s ;温度降 温至0?l〇°C,加入10?15%的草酸溶液,调节pH至2?3 ;加入0. 5?0. 8%的絮凝剂, 搅拌20?30min并过滤,其中所述絮凝剂为氨甲基聚苯乙烯或阳离子聚丙烯酰胺。
[0010] 所述降膜浓缩是指利用逆流降膜浓缩蒸发设备,将粘杆菌素滤液体积浓缩30? 50%。
[0011] 所述萃取是指用高速离心分离机进行二级逆流萃取处理,将粘杆菌素从水相转移 到复合有机溶媒项中,其萃取的工艺控制参数分别是: a萃取温度:0?10°C ; b V枯杆麵滤液.V擁溶媒=1 . 5?10(L/L),

【权利要求】
1. 一种从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素 A和粘杆菌素 B的方法,其特征在于其工艺 步骤为:首先将粘杆菌素发酵液的粘度降至400?500Pa. s,后降温至O?KTC,调节pH至 2?3,然后加入其重量的0. 5%?0. 8%的絮凝剂,充分搅拌后过滤,所得滤液降膜浓缩至其 体积的30%?50%,之后启动高速离心分离机进行二级逆流萃取,所得萃取液通过层析分 离方式分离得到粘杆菌素 A溶液和粘杆菌素 B溶液,分别将粘杆菌素 A溶液和粘杆菌素 B 溶液采用二级逆流反萃取、喷雾干燥后得到硫酸粘杆菌素 A和硫酸粘杆菌素 B的盐粉末。
2. 按照权利要求1所述的从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素 A和粘杆菌素 B的方法, 其特征在于所述絮凝剂为氨甲基聚苯乙烯或阳离子聚丙烯酰胺。
3. 按照权利要求1所述的从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素 A和粘杆菌素 B的方法, 其特征在于所述高速离心分离机进行二级逆流萃取的工艺条件为: a萃取温度:0?KTC, b V粘杆菌素滤液.V有机溶媒=1 . 5?10,
所述有机溶媒为醋酸丁酯和丁醇的混合物,其中丁醇的含量为5%?10%, c pH :一级萃取pH控制在8?9,二级萃取pH控制在9?10, d萃余液效价低于1000u/ml。
4. 按照权利要求1所述的从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素 A和粘杆菌素 B的方法, 其特征在于所述层析是以DEAE高流速琼脂糖微球为填充剂、醋酸丁酯为洗脱剂进行的,其 中填充剂用量为萃取液体积的3?5%,填充剂的径高比控制在5 : 1,洗脱剂用量为萃取液 体积的40?50%,层析过程中,控制萃取液温度0?KTC,每次萃取液上样量为填充剂用量 20 ?30%。
5. 按照权利要求1所述的从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素 A和粘杆菌素 B的方法, 其特征在于所述二级逆流反萃取的控制参数为: a温度控制在0?5°C; b pH :-级控制pH值3. 5?4. 5 ;二级控制pH值2. 0?3. 0 ; c效价:废醋酸丁酯效价低于500 μ /ml ; d浓度:硫酸溶液浓度为3. 6?3.8% (W/V); e搅拌时间:加酸后搅拌时间:一级反萃取20?35min ;二级反萃取15?25min ; f澄明度:反萃取液澄清透明,无可见溶媒; g水相用量: 一级反卒取:V硫酸滤液.V擁溶媒=1 . 3?5 (L/L) 一级反卒取:V硫酸滤液.V有机溶媒=1 . 5?8(L/L)。
6. 按照权利要求1所述的从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素 A和粘杆菌素 B的方法, 其特征在于所述喷雾干燥过程中,控制进料压力:6?12MPa ;进料转速:250?450r/min ; 进风温度:140?160°C ;出风温度:30?60°C ;塔内温度60?80°C。
【文档编号】C07K1/36GK104231056SQ201410432706
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年8月29日 优先权日:2014年8月29日
【发明者】任勇, 奇乃, 李小萍, 董媛 申请人:宁夏泰瑞制药股份有限公司
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