专利名称：一种由白介素-ii组成的生物调节剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种高效的生物反应调节剂，能在体外试验中极大地提高所诱导的LAK细胞对癌细胞杀伤的能力。可直接运用于肿瘤和爱滋病的免疫学和生物学治疗。
目前在国际生物免疫学界发展和研制生物反应调节剂(BRMS)的热潮中，干扰素是最典型的调节剂，但由于只能取得部分免疫恢复的效果，其应用受到了限制(J.Clin.Oncol.4.1101-1109(1986))，而另一有效的生物调节剂白介素-Ⅱ低浓度时对LAK细胞诱导的杀伤力弱，在高浓度时对肿瘤杀伤力强，但在体内试验有强的副作用以至人们对之使用前景有所怀疑(JAMA，256，3141(1986))。因此寻求一个具有完全免疫恢复效果，低浓度(接近于体内环境)具有诱导LAK细胞强大的杀伤力的生物反应调节剂很有意义。
本发明的目的在于提供一种有效的生物反应调节剂。它在体内的效果类似于体外效果，能诱导LAK细胞大量杀伤肿瘤细胞从而能对肿瘤患者、爱滋病病人及其他免疫缺陷病人起到良好的治疗作用。
本发明的内容与要点在于，生物反应调节剂是由黄芪提取成份F3与白细胞介素-Ⅱ组成，获得了比单独使用白介素-Ⅱ所诱导的LAK细胞强大得多的杀伤效果，从而首次开创减少白介素-Ⅱ用量而不影响杀伤效果的习能性，为白介素-Ⅱ功击恶性肿瘤的生物免疫学治疗拓开了新的前景。本发明中黄芪提取成份F3(简称F3)由以下方法制备干燥黄芪根通过200孔罗研磨成细粉，以每100克干粉1.5升去离子水的比例回流提取。上清液过滤后旋转脱水浓缩15倍。为了分离和鉴定黄芪中的活性部分，用凝胶滤过色层分离法来分离粗提物。将上述样品置250°F高压消毒20分钟后，20℃常温中超离心(40000×G)30分钟。将5ml所得上清液加到2.6×100cm口径Sephacryl S-200柱中(分离范围是多糖1000-80000分子量)，用去离子水平衡之。过柱以25ml/小时的液流速度洗脱，每管收集6ml，吸收光强为280nm，参见洗脱图3。洗脱物分为四部分，分别命名为F1、F2、F3、F4。(F1含有最高分子量成份，F4含最低分子量的成份)。将这些样品旋转脱水再用水重新调整到最初上柱容积5ml。高压消毒后储存于4℃，供做干重，碳水化合物和蛋白质成份分析。F2分子量范围为13000-22000。成份主要为碳水化合物占99%。蛋白质含量不到1%。本发明的要点在于按上述方法提取的混合物F3以浓度30-1000ug/ml与白介素-Ⅱ浓度为10-2000u/ml形成的组合物作为一个新的生物反应调节剂。这种新的生物调节剂比单纯使用白介素-Ⅱ诱导的LAK细胞杀伤的生物学效应大(
图1，图2)。
本发明的优点与积极效果在于新的生物调节剂能在低浓度时(接近体内浓度)诱导LAK细胞对肿瘤及其它免疫性疾病的治疗，从而提供了一个具有完全恢复免疫功效的生物调节剂。
本发明的附图及说明。
图1表示加用F3后，经白介素-Ⅱ诱导的LAK细胞杀伤的生物学效应大大增强。横坐标为白介素-Ⅱ的浓度，以u/ml表示;纵坐标为对A375P黑色素瘤的杀伤百分数。2条杀伤曲线的比较，实线为单纯白介素-Ⅱ所诱导的杀伤，虚线为F3加白介素-Ⅱ所诱导的杀伤。特别是在接近人体真实情况的低浓度白介素-Ⅱ存在时，F3的加入提高杀伤非常显著。如10u/ml的白介素-Ⅱ只有2%的杀伤，而加F3后达20%杀伤。
图2，显示F3对于LAK细胞的杀伤增强作用，加用F3后即使对于低效应细胞/靶细胞比例值，如T∶E＝1∶30，也有明显的增强效应，使之恢复增强到高效应细胞/靶细胞比例组(T∶E＝1∶60)。如在A375P黑色素瘤系中，低T∶E＝1∶30组未加F3时杀伤仅有16±8%，加用后上升到33±15%与高T∶E＝1∶60的杀伤水平28±17%相似，说明F3加入后可以减少效应细胞数量的一倍。
图3，黄芪组成的提取洗脱图。
实施例1、白介素-Ⅱ100u/ml2、黄芪提取物F355ug/ml
权利要求
1.一种新的生物调节剂，其特征在于生物反应调节剂是由黄芪提取物F3与白介素-Ⅱ组成的组合物。
2.根据权利要求1所述的生物调节剂，其特征在于黄芪提取物F3浓度为30-1000ug/ml。
3.根据权利要求1、2所述的生物调节剂，其特征在于白介素-Ⅱ浓度为10-2000u/ml。
4.一种制备权利要求1所述的生物调节剂的方法，其特征在于干燥黄芪根研磨成细粉，以每100克干粉1.5升去离子水的比例回流提取，上清液过滤后旋转脱水浓缩15倍，经凝胶过滤色层分离法分离，样品在250°F高压消毒20分钟后，20℃常温中超速离心，将上清液过Sephacryl S-200柱，在280nm监测收集F3脱水调整到所需浓度，F3与白介素-Ⅱ配制成新的生物调节剂。
全文摘要
本发明从黄芪各成分中筛选到一组分(F
文档编号C07G99/00GK1047296SQ89103120
公开日1990年11月28日 申请日期1989年5月13日 优先权日1989年5月13日
发明者储大同 申请人:储大同