专利名称：瑞拜克霉素类似物的稳定溶液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及抗肿瘤化合物8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素[8-N-diethylaminoethyl)-rebeccamycin]的稳定溶液及制备该溶液的优选方法。
Kaneko等(美国专利No.4，785，085)公开了包括8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素在内的具有下式的瑞拜克霉素(rebeccamycin)类似物，
其中n为2.R1和R2各自为乙基。
在Kaneko等的美国专利No.4，785，085中将该化合物称为6-(2-二乙氨基乙基)瑞拜克霉素。其制备方法在该专利的实例1中叙述，它在试验动物系统中抑制肿瘤生长的效果见该专利的表3。但是，当为了配制注射用的水溶液而将该化合物加到水中时，它不是完全可溶解的，而是形成了悬浮液。
Kaneko等在其公开专利的第9栏第9～41行中提出采用酸加成盐和碱式盐的方法来增加瑞拜克霉素类似物的溶解度，在Kaneko等公开专利的实例2中叙述了8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的盐酸盐(在该专利中称为6-(2-二乙氨基乙基)瑞拜克霉素盐酸盐)的制备方法，并在该专利的表3中表明了上述化合物在试验动物系统中抑制肿瘤生长的效应。
关于8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的酸加成盐包括其盐酸盐，遇到的问题是当将1摩尔当量的酸与游离碱反应生成的结晶状酸加成盐加到水中配制足够浓度的药用剂型应用时者稀释时，结晶状的酸加成盐不能形成贮存稳定的水溶液。相反，长期研究结果表明，异常的物理不稳定性的时间范围小于药用组合物可以接受的时间范围(即在室温下至少2年)。上述不希望有的物理不稳定性质包括胶凝、沉淀、浑浊性和形成液体结晶相，结果使结晶状盐的溶液不适合作为注射溶液实际应用，也不适合用水稀释作为注射溶液应用。
本发明的目的是提供用于注射的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜霉素的水溶液或稀释液，它们在室温下至少2年内在化学上或物理上是稳定的。
如果在其他方面没有限制，本文所用的术语“稳定”是指当避光贮存时(例如用不透明的材料遮蔽光线或将溶液封装在琥珀色玻璃容器内)，于室温下至少2年期间内在化学上和物理上是实质稳定的。术语“化学上实质稳定”意指经分析表明，至少95%(按重量计)原先溶解量的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素仍然在溶液中。术语“物理上实质稳定”意指实际上不形成使溶液不适合作为注射溶液应用的凝胶、沉淀、混浊、液体结晶相或其他颗粒状物质。
已经发现，将一定量特定的酸与8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素有效浓度的水溶液结合起来，可以提供8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素在该浓度下稳定的水溶液。所用的酸是药学上适用的酸，其1摩尔当量可以使得8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素增溶。为了使pH小于4，酸的用量应超过所述摩尔当量。应用1摩尔当量的酸不能形成本发明的优点。因此，将结晶状的酸加成盐本身配制在水溶液中不能提供稳定的溶液。
除了在室温下是稳定的以外，本发明所述的溶液在低温(例如在装运或贮存时所遇到的冷冻温度或冷芷条件等)下可增加溶解度。
本发明所述的稳定溶液主要包括(a)水，(b)有效剂量的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素，其浓度高至50mg/ml水，(c)其摩尔当量的存在可以使(b)增溶的可药用酸，所述酸的存在量应超过所述摩尔当量以使pH的范围稳定在3～4。
此处所用术语“有效剂量”意指当服用溶液本身或者其稀释液后能有效地抗肿瘤的剂量。
术语“摩尔当量”或“摩尔等效量”意指对于1.0摩尔8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素，需要1.0摩尔当量的酸，以便使游离碱充分地中和。因此，对于双质子的酸(如酒石酸)，1.0摩尔8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素需要0.5摩尔双质子的酸作为1摩尔当量的酸，多于0.5摩尔的酸提供了超过所述摩尔当量的酸。
一种制备上述稳定水溶液的优选方法包括以下步骤
(a)配制8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的水悬浮液，其浓度至少为1mg/ml水。
(b)加入超过所述摩尔当量的可药用酸以使pH范围稳定在3～4，所述可药用酸为其摩尔当量的存在可以使存在于步骤(a)悬浮液中的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素增溶的酸。
我们首先叙述本发明的稳定溶液。
水的成分应当适用于制备注射溶液，例如，美国药典规定的注射用水。
8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素一般应该以至少0.1mg/ml水的浓度存在，通常以至少1mg/ml水的浓度或至少5mg/ml水的浓度存在，因为该浓度可以提供或者可以稀释到抗肿瘤有效的注射浓度范围。上限浓度可以通过酸成分(c)的增溶作用来实现，并且决定于8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素与摩尔当量的所述酸所形成的酸加成盐的溶解度。8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的浓度应当在该溶液置于冷芷条件(即2～8℃)下时不析出结晶。一般的上限浓度50mg/ml水系选用超过药物毒性试验所预定的最大预期剂量，因此应将其稳定释到有效剂量。
如上所述，酸成分(c)必须是可药用的。这是指酸成分(c)应该对游离碱的毒性不产生促进作用。
酸成分(c)最好是这样的酸，即它的酸加成盐(由游离碱与摩尔当量的该酸所形成)于室温下在水中的溶解度大于25mg/ml。符合该溶解度标准的可药用的酸成分(c)包括例如L-(+)酒石酸、D，L-苹果酸、L-(-)-苹果酸、柠檬酸、L-(+)-乳酸、乳糖酸、甲磺酸、磷酸、焦谷氨酸、琥珀酸和硫酸。其中最好的酸是L-(+)-酒石酸。
如上所述，上述酸成分(c)的存在量应超过(b)的摩尔当量，以便使pH范围约在3～4。为了得以稳定的溶液(即物理稳定)，pH的上限必须约为4。虽然低于约pH3的制剂是稳定的，但在生理上来说这种酸性pH值是不可接受的。当8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的浓度约为10～25mg/ml水时，酸成分(c)的存在最好提供约在3.0～3.6范围的pH。
最好是用与8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素等摩尔量的酒石酸作为成分(c)。如果8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的浓度为25mg/ml水，那么上述酸提供的pH值为3.2。用水稀释上述组合物将会使溶液pH向中性增加，这是本领域所熟知的。应该注意的是，尽管有效成分的浓度相同，但是纯度不同可以引起pH细微的变化。
如上所述，制备本发明溶液较好的方法是首先配制8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的水悬浮液，然后加入酸成分以提供所需的pH值。接着进行搅拌，例如于室温下搅拌5～15小时。通过过滤可以方便地除去任何轻微的混浊。
或者，本发明的溶液可以按下法制备首先将酸加到水中，然后加入8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素有效成分，或者将酸和有效成分先加到容器内，然后再加入水。
为了提高溶解速度，可以应用本领域已知的方法(例如加热、激烈搅拌、声波处理等)。
本发明溶液还可由下法容易地制得，将酸加成盐加到水中(由酸形成，因此提供了8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素所需的初始溶解度)，然后用生成酸加成盐同样的酸或者用符合成分(c)标准的其他酸调节pH范围到3～4。
用于治疗患恶性肿瘤的哺乳类宿主(例如试验动物宿主)，应该服用抑制肿瘤生长有效量(即抑制肿瘤生长剂量)的本发明溶液。一般说来，抑制肿瘤生长的剂量约在0.1～100mg/kg动物体重/每天的范围内。实际上优选的化合物剂量取决于需治疗动物的需要量、肿瘤的位置、肿瘤的类型以及给药途径，这是可以理解的。熟悉本领域的专业人员注意到了改变抗肿瘤剂作用的各种因素，本发明认为有关的因素包括例如年令、体重及性别、饮食、给药时间、排泄速度、宿主的状况及疾病的严重程度。应用一般的剂量确定试验方法，熟悉本领域的专业人员可以容易地确定已知各种情况适宜的给药(或应用)剂量。
如果可注射的量可以提供所需要的剂量，那么可以将溶液本身用作注射液，或者如果可注射的量提供了太大的剂量，那么可以将其稀释后应用。应用美国药典规定的注射用水、盐水、5%葡萄糖溶液等可以容易地进行稀释。以每毫升水中游离碱的量为单位，注射液浓度一般在0.1～50mg/ml。
下面介绍实例，以便详细地叙述本发明的典型实例，但是不应解释为是对本发明范围的限制。
实例Ⅰ用249.2mg游离碱(即8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素，纯度96.2%)、54.0mgL-(+)-酒石酸和20ml无菌注射用水，按下法制备112mg/ml(每毫升水中的游离碱)的溶液。将游离碱悬浮在水中，然后加入酸。在为了避光而用铝箔包裹的燧石玻璃管形瓶内于室温下搅拌过夜。然后将得到的轻微混浊的溶液通过0.2微米的AcrodiscCR滤器进行过滤，得到澄清的黄色溶液。该配方中的游离碱与酸的摩尔比为1∶1。滤液的pH值为3.6。
当应用520.15mg游离碱和112.6mg酒石酸按上述方法制备溶液时，制得含有25mg/ml(每毫升水中的游离碱)的溶液，该溶液中含有的游碱与酒石酸的摩尔比为1∶1，并且pH值为3.2。
实例Ⅱ用10.40g8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素(纯度为96%)、2.26gL-(+)-酒石酸和美国药典规定的无菌注射用水加至1000ml，按下法制备10mg/ml(每毫升水中的游离碱)的溶液。将8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素悬浮在部分注射用水(所需量的90%)中。然后加入L-(+)-酒石酸，悬浮液搅拌过夜，生成轻微混浊的溶液。再加适量的注射用水至1000mg，在氮气压下，通过GelmanCapsule过滤器(P/N12120)进行无菌过滤，并收集到无菌接收容器内。在无菌条件下，将溶液装到美国药典规定的Ⅰ类燧石玻璃安瓿内(10mg/安瓿)。用无菌氮气充溢安瓿，并进行封口。该溶液含有的游离碱与酒石酸的摩尔比为1∶1，并且pH值为3.5。
于直至56℃温度下贮存4周进行试验，未发现有物理或化学变化，这表明于2～30℃避光贮存时可能的贮存其至少为2年。
对于静脉滴注，可以将所得溶液进行稀释，例如每毫升水含1mg游离碱的溶液可以用美国药典规定的注射用水或5%葡萄糖溶液进行稀释。在通常的室内光照条件下观察24小时，稀释溶液在物理上是稳定的。
实例Ⅲ用下述酸和酸与碱的摩尔比制备每毫升水中含有25mg8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的溶液。所得溶液于56℃避光贮存4周，结果如下酸pH物理稳定留在溶液中的性结果碱基(%)L-(+)-酒石酸3.2未观察到变化96(1酸∶1碱基)L-(+)-酒石酸5.1形成凝胶未分析(1酸∶2碱基)L-(-)-苹果酸3.4未观察到变化100(1.7酸∶1碱基)L-(-)苹果酸3.8形成沉淀94(1酸∶1碱基)磷酸3.5未观察到变化99(1.2酸∶1碱基)磷酸4.5形成混浊溶液98(1酸∶1碱基)L-(+)-乳酸3.6未观察到变化100(2.5酸∶1碱基)琥珀酸3.5未观察到变化99(4酸∶1碱基)乳糖酸3.3未观察到变化102(3酸∶1碱基)
以上表明了在得到物理稳定性时pH的临界性。上述试验中没有物理变化的结果表明，于2～30℃避光贮存时预计物理稳定性至少可达2年。
还可以将上述溶液置于冷冻/温暖条件下在-20℃和室温之间1周5次交替地进行试验。在上述试验中物理上稳定的溶液在本试验中物理上也是稳定的，这表明可以将该溶液进行冷芷或冷冻而无有害影响。
实例Ⅳ按照Geran等在文献(Cancer Chemother.Repts.，3，1～103，1972)中所述的方法，用8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素和酒石酸制得的溶液进行抗肿瘤活性试验，所用的瘤株为小白鼠移植的白血病p-338。筛选方法包括向用1×106腹水型细胞经腹腔感染的CDF1雌性小白鼠(18～22g)经腹腔(IP)给予试验化合物，以及用1×106腹水型细胞从静脉感染的CDF1雌性小白鼠(18～22g)经静脉(IV)给予试验化合物。在第1天(接种的当天)开始进行药物治疗。每天给予1次，连续5天。应用浓度为每毫升水含25mg游离碱的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素和与游离碱摩尔比为1∶1的酒石酸溶液，通过稀释使剂量含在0.5ml中用于腹腔(IP)注射，含在0.2ml中用于静脉(IV)注射，并在下面以“本发明”表示。在下面的结果中，MST代表平均存活时间(以天表示);%T/C为试验动物平均存活时间除以对照动物平均存活时间，再乘100;AWC为5天平均体重变化，以g表示。用丝裂霉素C进行比较。腹腔注射试验的结果如下
剂量.IP药物mg/kgMST%T/CAWC丝裂霉素C4.820.5205-0.63.220.5205-0.1本发明2415.5155-0.81816.5165-1.01215.01500.1对照101001.6静脉注射试验的结果如下药物mg/kgMST%T/CAWC丝裂霉素C4.812.0160-0.13.211.0147-0.41.69.51270.4本发明9612.5167-0.78012.0160-0.36411.01470.34810.01331.4对照7.51001.4上述结果表明，含有酒石酸的本发明溶液具有抗肿瘤的活性。
很显然，熟悉本技术领域的专业人员可以进行许多变化。因此，本发明的范围由权利要求书确定。
权利要求
1.一种主要由以下成分组成的稳定溶液(a)水，(b)有效剂量的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素，其浓度最高为50mg/ml水，(c)其摩尔当量的存在可以使(b)增溶的可药用酸，所述酸的存在量应超过所述摩尔当量以使pH范围稳定在3～4。
2.按照权利要求1所述的稳定溶液，其中加入了所述的酸以使pH范围为3.0～3.6。
3.按照权利要求2所述的稳定溶液，其中所述的酸与8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素形成的酸加成盐于室温下在水中的溶解度大于25mg/ml。
4.按照权利要求3所述的稳定溶液，其中所述的酸系选自L-(+)-酒石酸、D，L-苹果酸、L-(-)-苹果酸、柠檬酸、L-(+)-乳酸、乳糖酸、甲磺酸、磷酸、焦谷氨酸、琥珀酸和硫酸。
5.按照权利要求4所述的稳定溶液，其中所述的酸系选自L-(+)-酒石酸、L-(-)-苹果酸、磷酸、L-(+)-乳酸、琥珀酸和乳糖酸。
6.按照权利要求5所述的稳定溶液，其中所述的酸为L-(+)-酒石酸。
7.按照权利要求6所述的稳定溶液，其中L-(+)-酒石酸与8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素以等摩尔的量存在。
8.按照权利要求7所述的稳定溶液，其中8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的浓度为10mg/ml水。
9.按照权利要求7所述的稳定溶液，其中8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的浓度为25mg/ml水。
10.制备8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素稳定水溶液的方法，该方法包括以下步骤(a)配制8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的水悬浮液，其浓度至少为1mg/ml。(b)加入超过所述摩尔当量的可药用酸以使pH范围稳定在3～4，所述可药用酸为其摩尔当量可以使步骤(a)悬浮液中的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素增溶的酸。
11.按照权利要求10所述的方法，其中在步骤(a)中加入所述酸以使pH在3.0～3.6范围。
12.按照权利要求11所述的方法，其中所述的酸为L-(+)-酒石酸。
13.按照权利要求12所述的方法，其中将等摩尔量所述酸加到8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素中。
14.按照权利要求10～13中任何一项所述的方法，其中步骤(a)中8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的浓度为10mg/ml。
15.按照权利要求10～13中任何一项所述的方法，其中步骤(a)中8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的浓度为25mg/ml。
全文摘要
瑞拜克霉素类似物的稳定溶液主要由下述成分构成(a)水，(b)有效剂量的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素，(c)其摩尔当量的存在可以使(b)增溶的可药用酸，所述酸的存在量应超过所述摩尔当量以使pH范围稳定在3～4，最好为3.0～3.6。较好的溶液含有10mg/ml游离碱，并且酒石酸与游离碱为等摩尔量，以便使pH为3.5。优先选用的制备方法是首先配制8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的水悬浮液，然后加入酸，以便使pH范围为3～4。
文档编号C07H17/02GK1047204SQ90102658
公开日1990年11月28日 申请日期1990年5月9日 优先权日1989年5月10日
发明者乌布拉尼·V·文卡塔拉姆, 米里亚姆·K·弗兰基尼, 约瑟夫·B·博加达斯 申请人:布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司