专利名称：人工合成的果糖胺及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种医学体外测定试剂，具体说是一种人工合成的果糖胺及其制备方法。
果糖胺是人体内存有的有机化合物，系葡萄糖和蛋白质经非酶促糖基化反应，生成一种具有酮胺结构的物质，医学上称之“糖化蛋白质”，亦即果糖胺。果糖胺的人工合成(即体外合成)，在国内、外文献中末见报道。经文献及资料查实，朱忠勇主编、实用医学检验学，人民军医出版社、1992年1月第1版133页“糖化血清蛋白测定”一节叙述DMF的合成方法取无水D-葡萄糖90g、吗啉58g，在60-70℃水浴中搅拌，开始为黄色糊状物、颜色逐渐加深，20分后移去水浴，缓缓加入丙二酸18g，并不断搅拌，10分后加入无水乙醇70ml，维持75℃、30分，再加丙酮70ml，此时可见到结晶析出，放4℃冰箱过滤，收集结晶，用无水乙醇重结晶3次，使产物脱色纯化、干燥备用。目前，医学检验方面对人体内血清糖化蛋血-果糖胺测定方法的标准参照物是1-脱氧-1-吗啉果胺(DMF)为参照，因1-脱氧-1-吗啉果糖在硷性条件下可能化成1-脱氧-1-氨基-乙酮基，和果糖胺具有相同的酮胺结构，用硝基四氮唑兰为反应试剂，产生相同结果的反应，其吸收曲线一致，吸收峰范围为530-550nm。
本发明的目的在于提供一种操作简便、实用、易掌握，且造价低的人工合成的果糖胺及其制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案一种果糖胺，其特征在于它由白蛋白与D-葡萄糖合成，其配比组成为8.5g/l的生理盐水1l中白蛋白为20-50g，D-葡萄糖为1000-2000g。
上述的果糖胺制备方法为将白蛋白溶解于8.5g/l生理盐水中，制备白蛋白溶液，将D-葡萄糖加入所制备的白蛋白溶液中，于37℃水浴中搅拌，至完全溶解为止，转入40℃-50℃的水浴中，置电磁搅拌器8小时后，放4℃冰箱过夜，冷冻干燥成白色粉末状。
本发明的积极效果在于合成成本低；合成全过程的温度要求单一，范围较宽、易掌握，合成时间及过程固定，不需人照看，其反应步骤简单，其反应的终产物系根据蛋白质N端的氨基多少决定，计算恒定；合成方法的仪器设备要求低，得率却高，即使是非本领域的普通技术人员都能实施。
以下结合附图和实施例对本发明作详细说明。
图1为37℃条件下果糖胺合成时间曲线图；图2为温度与果糖胺合成率的关系曲线图3为40℃-50℃时合成时间与合成率的关系曲线图；图4为蛋白含量与果糖胺合成量的关系曲线图。
实施例1、果糖胺人工合成原材料浓度的选择。
(1)白蛋白浓度选择，称取正常人血清白蛋白(卫生部上海生物制品研究所提供)20g、30g、40g、50g溶解于8.5g/l生理盐水11中，分别制得白蛋白浓度为20g/l、309/l、40g/l、50g/l，分别加入D-葡萄糖，D-葡萄糖终浓度为1.0kg/l。以相同合成过程制作，观察合成情况，并以与硝基四氮唑兰作合成物-果糖胺浓度的监测，以求合成果糖胺基础母液的制备。合成过程初始期发现白蛋白含量20g/l、3Dg/l的母液加入D-葡萄糖的溶解速度较40g/l、50g/l快。溶解速度20g/l＞30g/l＞40g/l＞50g/l，而合成的果糖胺含量则20g/l＜30g/l＜40g/l，蛋白浓度40g/l与50g/l的果糖胺含量则较接近(如图4所示)。考虑人体白蛋白平均正常生理值，白蛋白浓度40g/l为较佳选择的合成基础母液。
(2)D-葡萄糖浓度的选择，以40g/l白蛋白为基础母体，分别配制D-葡萄糖含量为1.0kg/l、1.5kg/l、2.0kg/l三种浓度的葡萄糖白蛋白溶液，用相同方法合成制作。D-葡萄糖溶解速度的观察1.0kg/l＞1.5kg/l＞2.0kg/l，当葡萄糖含量＞1.5kg/l时，在37℃水液中葡萄糖则过饱和，为了有充足量的葡萄糖和白蛋白作用，使反应完全，通过检测，证实40g/l白蛋白为基础母液加入≥1.5kg/lD-葡萄糖，其合成的果糖胺浓度为最高。
2、合成过程设置的温度与时间。
(1)温度，考虑合成反应所需温度，首选考虑人体正常生理温度-37℃，实践提示合成时间太长(图2所示)。反应时水液温度高则有利合成反应速度，但又不宜过高及保证白蛋白的理化活性和有利反应的快速，选择40℃-50℃为宜。
(2)合成的时间，固定合成的水液温度为40℃-50℃，除溶解过程所耗时间外，一般控制8小时为宜。实验结果提示2、4、6小时果糖胺合成量＜8小时合成量，当合成时间≥8小时，则果糖胺合成量几乎平衡，不再增加，故较佳合成时间选择为8小时(如图3所示)。
综上所述，本发明的较佳实施例配比组成是称取正常人血清白蛋白40g、溶解于8.5g/l生理盐水1l中，称取D-葡萄糖1.5kg，缓缓加入40g/l白蛋白溶液中，于37℃水浴中搅拌，至完全溶解为止，转入40℃-50℃的水浴中，置电磁搅拌器8小时后，放4℃冰箱过夜，冷冻干燥成白色粉末状。
本发明的临床应用糖基化血清蛋白可以反映二周至一个月内的血糖水平，且不受临时血糖浓度波动的影响。临床上的糖尿病人的诊断和血糖水平监控提供了一个很好指标。
权利要求
1.一种果糖胺，其特征在于它由白蛋白与D-葡萄糖合成，其配比组成为8.5g/l的生理盐水1l中，白蛋白为20-50gD-葡萄糖为1000-2000g。
2.一种制备权利要求1所述的果糖胺的方法，其特征在于将白蛋白溶解于8.5g/l生理盐水中，制备白蛋白溶液，再将D-葡萄糖加入所制备的白蛋白溶液中，于37℃水浴中搅拌，至完全溶解为止，转入40-50℃的水浴中，置电磁搅拌器8小时后，放4℃冰箱过夜，冷冻干燥成白色粉末状。
全文摘要
本发明公开了一种人工合成的果糖胺及其制备方法,它由白蛋白与D－葡萄糖合成,其配比组成为:8.5g/l的生理盐水1l中:白蛋白为20—50g,D－葡萄糖为1000—2000g。其制备方法:将白蛋白溶解于8.5g/l生理盐水中,制备白蛋白溶液,将D－葡萄糖加入所制备的白蛋白溶液中,于37℃水浴中搅拌,至完全溶解为止,转入40℃—50℃的水浴中,置电磁搅拌器8小时后,放4℃冰箱过夜,冷冻干燥成白色粉末状。
文档编号C07K14/765GK1169436SQ96116399
公开日1998年1月7日 申请日期1996年6月21日 优先权日1996年6月21日
发明者杨福明 申请人:杨福明