专利名称：在17α位置上无取代基的新型孕甾烷衍生物,其作为药物的应用、制备方法及其中间产物 ...的制作方法
技术领域：
本发明的主题是孕甾烷，其作为药物的应用，其制备方法，此方法的中间产物以及含有此类化合物的药物组合物。
本发明的主题是具有结构通式(Ⅰ)的产物
其中R1或者代表卤原子、羟基、含1～8个碳原子的烷氧基、含1～12个碳原子的酰氧基，并且R2代表卤原子或氢原子，或者R1和R2一起形成一个双键。Z选自含1～8个碳原子的烷氧基、含1～8个碳原子的非取代或取代的烷硫基、含6～12个碳原子的非取代或取代的芳硫基、卤素、氰基、巯基、氰硫基、CO2A、CH2CO2A，其中A是氢原子或含1～8个碳原子的烷基。Y代表氢原子或甲基。1-2位或5-6位的虚线任选地代表另一个键及其与酸或碱的加成盐，应理解的是9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-21-氯-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮被排除在外，并且当R1和R2一起形成双键时，Z不代表卤原子。
卤原子是指氟、溴、氯和碘原子。
含1～8个碳原子的烷氧基和烷硫基优先指甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基和相应的硫代基团。
含1～12个碳原子的酰氧基优先指乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基和苯甲酰氧基。
含1～8个碳原子的烷基指下列基团甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正己基、2-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、3-甲基-3-乙基戊基，尤其是指甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和叔丁基。
芳硫基优选指苯硫基。
当Z是取代的烷硫基或芳硫基时，取代基可以是氟、氯、溴、碘；烷基如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基；烷氧基如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基；烷硫基如甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、丁硫基；氨基；烷氨基如甲氨基或乙氨基；二烷氨基如二甲氨基、二乙氨基、甲乙氨基；任选的酰基化羟基如乙酰氧基或式-O-CO-(CH2)nCO2H所表示的基团，其中n=2～5；含2～8个碳原子的酰基如乙酰基、丙酰基、丁酰基、苯甲酰基；游离羧基；酯化羧基如甲酯基、乙酯基等烷酯基；氰基；三氟甲基或苯基。烷基一词指含1～12个碳原子。
当然，“任选取代的”是指可能有一个或多个相同或不同的取代基。
芳基上的取代可以在邻、间、对位。
当Z是一个任选取代的烷硫基时，基团S-CH2-CH2-A’的优选方案是A’是羟基、卤原子或乙酰氧基。
当B环饱和时，Y优选在α位。
本发明自然地扩展到式(Ⅰ)的化合物的盐类，当这些化合物含有氨基时，尤其与下列酸形成盐盐酸，氢溴酸，硝酸，硫酸，磷酸，乙酸，甲酸，丙酸，苯甲酸，马来酸，富马酸，琥珀酸，酒石酸，柠檬酸，草酸，二羟乙酸，天冬氨酸，烷基磺酸如甲基磺酸和乙基磺酸，芳基磺酸如苯磺酸、对甲苯磺酸和芳基羧酸；当式(Ⅰ)的化合物含有一个酸官能团时，形成任选取代的碱金属盐、碱土金属盐和铵盐。
本发明一个更特别的主题是前面定义的式(Ⅰ)的产物，其中R1代表羟基且R2是氟原子及其与酸或碱的加成盐。
在本发明的化合物中，应优先被提及的是B环饱和且Y是氢原子的式(Ⅰ)的化合物，及其与酸或碱的加成盐。
本发明的一个更特别的主题是前面定义的式(Ⅰ)的产物，其中Z代表氰基或含1～8个碳原子的烷硫基。
在本发明优选的产物中，应该提到下列产物-9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-孕甾烷-4-烯-3,20-二氧代-21-腈-3,20-二氧代-11β-羟基-16α-甲基-21-降胆烷-1,4-二烯-24-酸甲酯-21-氟-11β-羟基-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮-21-硫-(2-羟基亚乙基)-9α,11β-二氯-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮-21-硫-(2-乙酰氧基亚乙基)-9α,11β-二氯-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮-9α,11β-二氯-21-氟-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮和特别是-9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二氧代-21-腈-9α-氟-11β-羟基-16-甲基-21-硫甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮。
本发明的主题还包括式(Ⅰ)的产物的制备方法，其特征在于使通式(Ⅱ)的产物
其中或者R’1代表羟基且R’2是卤原子或氢原子；或者R’1是卤原子且R’2是卤原子或氢原子；或者R’1和R’2一起形成双键并且Y如前面定义；与通式Hal-SO2-B的醇活化试剂相作用，其中Hal是溴原子或氯原子，B是非取代的或被1～5个卤原子取代的含有1-6个碳原子的烷基，或者是非取代的或被1～5个含有1～6个碳原子的烷基取代的苯基或萘基，得到通式为(Ⅲ)的化合物
需要时，式(Ⅲ)的产物经过一步反应或以合适的顺序经过下面几步反应，得到通式为(Ⅰ)的产物-与氯化、碘化、溴化或氟化试剂作用，-与任选取代的烷基硫醇或芳基硫醇作用，-与硫代酰胺或硫脲作用后再水解，-与氰化钾作用，-将氰基在酸性介质中水解后任选酯化或成盐，-依次发生与CH2(COOEt)2的反应、皂化反应、脱羧反应后进行任选的酯化反应，-与硫氰化钾或硫氰化钠作用，-与醇或醇化物作用，-在11位进行酰化作用，-在11位进行烷基化作用，-1-2位双键的还原，-在1-2位形成双键，-进行脱水反应，在9-11位形成双键，-进行成盐作用。
B优选-CH3、-CF3、-Ph-Me。
式(Ⅲ)所示的甲磺酸酯、对甲苯磺酸酯或三氟甲磺酸酯是在碱如吡啶存在下，通过甲基磺酰氯、苯甲磺酰氯或三氟甲磺酸酐与式(Ⅱ)相应的醇在低温下反应、生成的。
21-氯代衍生物是由相应的式(Ⅲ)的甲磺酸酯得到，其合成方法是本领域所熟知的，特别是经氯化钾或氯化锂作用。
21-溴代衍生物是由相应的式(Ⅲ)的甲磺酸酯得到，其合成方法是本领域所熟知的，特别是经溴化钾或溴化锂作用。21-溴代产物也可以直接由相应的醇经氢溴酸或三溴化磷作用得到。
21-碘代衍生物是由相应的式(Ⅲ)的甲磺酸酯得到，其合成方法是本领域所熟知的，特别是与碘化钾或碘化锂作用。
21-氟代衍生物是由相应的21-氯代衍生物、21-溴代衍生物或碘代衍生物形成的，特别是经氟化钾在乙二醇中回流或用冠醚、经相转移或离子交换树脂得到。
21-氟代衍生物是由相应的式(Ⅲ)的甲磺酸酯得到，其合成方法是本领域所熟知的，特别是经氟化钾作用。
21-烷硫基或芳硫基衍生物是从相应的21-氯代衍生物得到，优选方法是在碱如三乙胺存在下在四氢呋喃中经硫醇或硫酚作用。
相应硫醇的优选合成方法是间接方法，如先与硫代酰胺或硫脲反应再水解。
21-氰基取代衍生物是在乙醇介质中用氰化钾与相应的21-氯、溴或碘取代衍生物作用得到。
21-氰基水解反应的优选方法是在盐酸或硫酸存在下进行。
21-硫氰基衍生物的优选合成方法是在乙醇介质中用硫氰化钾或硫氰化钠与相应的21-氯取代衍生物作用得到。
丙二酸二乙酯与21-氯代衍生物作用得到相应的21-CH(COOEt)2的优选方法是在非质子传递偶极溶剂如HMPT中，有强碱如氢化钠存在下进行反应。
皂化用已知方法，如在乙醇中在苏打的存在下反应。
脱羧也是用熟知的方法，特别是加热法。
酯化用熟知方法进行，尤其用重氮甲烷作用。也可以先生成酰基氯，然后脂肪醇与其反应。
21-烷氧基取代衍生物的优选合成方法是脂肪醇如甲醇或正丁醇与21-氯代衍生物反应，该反应在非质子传递偶极溶剂如二甲亚砜中且在碱如苏打存在下进行。
成盐反应可在通常条件下进行。例如反应在乙醇苏打存在下进行。同样可以用一种钠盐如钠或钾的碳酸盐或酸式碳酸盐。
9-11位是双键的(Ⅰ)的化合物，是按常规方法对通式为(Ⅰ)、(Ⅱ)或(Ⅲ)且其中R1是羟基、R2是氢原子的化合物进行脱水反应得到的。可以提到的例子是与甲磺酰氯或三氟甲磺酸酐作用后进行加热反应。
式(Ⅰ)所示1-2位是双键的产物可以被还原为式(1)所代表的1-2位饱和的产物，还原方法是本领域人们所熟知的常规的氢化反应。
用通常的酶催化法或化学方法可以在1-2位形成双键，尤其是在1,4-二氧六环中与2,3-二氯-5,6-二氰基苯醌(DDQ)反应。
11位上羟基的酰化可以通过与羧酸或酸酐反应来完成。
11位上羟基的烷基化可以以如下反应为例在碱如叔丁醇钾存在下，在例如四氢呋喃溶剂中，与碘代烷反应。
本发明的主题还有作为工业新产品的式(Ⅲ)的产物，下列化合物除外-21-(甲磺酰氧基)-16α-甲基孕甾烷-1,4,9(11)-三烯-3,20-二酮-21-(甲磺酰氧基)-11 β-羟基-16α-甲基孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮-21-(4-甲基苯基磺酰氧基)-16α-甲基孕甾烷-1,4,9(11)-三烯-3,20-二酮式(Ⅱ)的产物作为制备过程中的起始物是人们熟知的，特别是氟二羟基甲基孕甾二烯二酮(US3232839),9α,11β-二氯-16α-甲基-21-羟基孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮(增补专利证书N°2381065),16α-甲基-1,4-孕甾二烯-11β,21-二醇-3,20-二酮(US3354186),6α,16α-二甲基-1,4-孕甾二烯-11β,21-二醇-3,20-二酮(US3232839)或6α-氟，16α-甲基-1,4-孕甾二烯-11β,21-二醇-3,20-二酮(US3232839)。
在现有的抗炎和免疫抑制剂分子中，糖皮质激素是药效最好的一类。
然而，由于有许多副作用，它们的应用受到限制，其导致的副作用有-对下丘脑-脑下垂体-肾上腺(HPA)中枢有抑制作用-耐糖性差，可能会促使糖尿病的形成-肌肉僵化-延缓治愈-皮肤萎缩-骨质疏松-增加感染的可能-神经错乱-高胆固醇血症。
糖皮质激素的这些作用被属于孕甾烷受体类的核受体缓解。这些受体是一种“配体-可传导的”转录因子，可正向或负向调节目标基因的转录。(Evans,R.M.,1988 Science,240,889-895),(Green,S.,Kumar,V.,Theulaz,I.,Wahli,W.,and Chambon,P.1988EMBO J.,7,3037-3044),(Beato,M.1989.Cell,56,335-344),(Jonat,C.,Rahmansdorf,H.J.,Park,K.K.,Cato,A.C.,Gebel,S.,Ponta,H.,Herrlich,P.,1990 cell,62,1189-1204),(Pfahl,M.1993 Endocrine Reviews,14,651-658)。
糖皮质激素受体变体的应用确定了这些受体的明确区域，这些区域参与了反式激活和反式抑制的功能，因此，理论上这两种功能是可区分的(Heck,S.,Kullmann,M.,Gast,A.,Ponta,H.,Rahmansdorf,H.J.,Herrlich,P.,and Cato,A.C.B.1994 EMBOJ.,13,4087-4095)。
作为消炎药，在生物体中起作用的糖皮质激素受体的配体的获得，及反式激活功能的丧失，将促使更耐受的分子被开发出来。
通式为(Ⅰ)的化合物具有有用的药理学特性1)糖皮质激素活性实际上申请者揭示了一类新的糖皮质激素。不同的动物(大鼠、小鼠)模型揭示了本发明中的产物具有很有效的抗炎特性。特别是通过局部途径，它们具有显著的糖皮质激素活性(参考用小鼠进行的巴豆油诱导的耳水肿试验，其活体内活性等于或大于氢化泼尼松和地赛米松)。2)解离活性本发明的产物通过如下的作用机理起作用事实上，这些分子使受体的反式激活和反式抑制功能可被分开。它们对目标基因的转录具有所谓的“解离”活性。
本发明的分子经过被GRE-tk-CAT质粒(反式激活)或pColl-CAT质粒(反式抑制)感染的HELA细胞模型中试验(参考试验1)。
这些分子象地赛米松一样，能抑制胶原酶促催化剂的转录；另一方面，与地赛米松相反，它们不激活或很少激活GRE-tk促催化剂的转录。
上面所述产品具有和氢化泼尼松同等的消炎活性和免疫抑制活性，其治疗上的应用仍然是与氢化泼尼松一样的传统应用方法。
例如它们可用于过敏、皮肤、消化、内分泌、血液、感染、肿瘤、肾、神经、眼、呼吸或风湿等方面疾病的治疗。特别是它们不仅对器官移植很有用，能抑制移植排斥作用，同时对治疗局部炎症如水肿、皮肤病、瘙痒、各种类型的湿疹、晒斑、腱炎或扭伤有益。对眼炎等疾病的治疗也非常有效。
它们的解离活性使得本发明的化合物对上述疾病有特别好的治疗效果，同时减轻了某些副作用。
因此，本发明的主题是作为药物，式(Ⅰ)的产物及其与药物上是可接受的酸或碱的加成盐。
本发明特别的主题是作为具有糖皮质激素活性的药物，式(Ⅰ)的产物及其与药物上可接受的酸或碱的加成盐。
本发明更特别的主题是式(Ⅰ)的产物及其与药物上可接受的酸或碱的加成盐，作为药物它们具有糖皮质激素离解活性，这种离解使其副作用减轻或消失。
在本发明的药物中，可以特别提到-9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二氧代-21-腈，-9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-3,20-二氧代-孕甾烷4-烯-21-腈，-9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-21-硫甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮，-3,20-二氧-11β-羟基-16α-甲基-21-降胆烷-1,4-二烯-24-酸甲酯-21-氟-11β-羟基-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮在本发明的药物中，尤其可以提到-9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮-21-腈，-9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-21-硫甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮，使用的剂量根据治疗的疾病和给药途径而变化。例如成人一天的口服剂量从1～1000毫克不等。
本发明扩大到含至少一种如上所定义的药物(作为活性成份)的药物组合物。
式(Ⅰ)的化合物可经消化道、非肠胃途径或局部途径使用，如经过皮肤途径使用。用常规方法，它们可被制为简单的片剂或糖衣片、胶囊、颗粒、栓剂、丸剂、注射剂、膏剂、霜剂、凝胶、微球、埋植、贴剂等处方形式。
活性组份其中可以加入这些药物组合物中常用的赋形剂，如滑石粉、阿拉伯胶、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、可可脂、水或非水载体、动物或植物源脂肪物质、烷烃衍生物、二元醇类、各种润湿、分散或乳化剂、防腐剂。
使用剂量因人因病而异。例如，膏剂中实例1产品的含量可从0.1％到5％，每天使用的次数可从1次到4次。
本发明的特别主题是药物组合物，它们经局部途径使用，含有上面已经描述过的作为药物的下列化合物。
实例式(Ⅰ)的化合物制备19α-氟-11β-羟基-16α-甲基21-氯-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮(参考Mol.And Cell.Endocrinal(1981)22 153-168)将6克氟二羟基甲基孕甾二烯二酮溶于24毫升吡啶，保持温度低于50℃，依次加入6克氯化锂和6毫升甲基磺酰氯，然后在室温下搅拌2小时。将反应混合物倒入水中，粗产物分离出来经洗涤、干燥后用硅胶色谱法纯化，洗脱剂为2/8的氯仿/乙酸乙酯混合物，得到1.86克预期的纯产品。M.P.=185℃红外C=O 1726和1707cm-1例1:9α-氟-11β-羟基-16α-甲基21-硫甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮，
将制备1得到的产品1.86克溶于20毫升四氢呋喃(THF)和2毫升三乙胺(TEA)中，在0℃通入甲基硫醇一小时，然后室温下搅拌48小时。将反应混合物倒入水中，分离得到粗产物，经洗涤、干燥后用二氯甲烷(CH2Cl2)和异丙基醚混合溶剂重结晶，得到1.477克预期的纯产品。M.P.=166℃红外(CHCl3)OH3620 cm-1，+羟基缔合C=O 1715(肩状)，1694,1666cm-1C=C 1627,1611cm-1例2:9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮-21-腈，将3.9克制备1的产品、39毫升乙醇、1.080克氰化钾(90％)和1.6毫升水在惰气环境下混合，回流1.5小时。经冰浴冷却后，用醋酸调节pH=4，将无机盐分离后，减压蒸出溶剂得到4.7克粗产品，粗产品用硅胶色谱法纯化，洗脱剂为4/6的乙酸乙酯/苯混合物，得到2.7克预期的纯产品。M.P.=250℃红外(CHCl3)OH 3615 cm-1，+羟基缔合C=O 1723,1664cm-1△1-4 1627,1608cm-1C≡N 2260cm-1例3:21-氯-9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-孕甾烷-4-烯-3,20-二酮实验方法同制备1，起始反应物为8克16α-甲基-9α-氟-孕甾-4-烯-11β,21-二醇-3,20-二酮(FR1315629)。用2,2-二甲氧基丙烷重结晶得到4.95克预期的纯产品。M.P.=196℃红外(CHCl3)OH 3616cm-1，+羟基缔合C=O 1725,1706cm-1△4 1663,1624cm-1例4:9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-3,20-二氧代-孕甾烷-4-烯-21-腈实验方法同例2，起始反应物为3.450克例3的产物。得到2.36克预期的纯产品。M.P.=224℃红外(CHCl3)OH 3610cm-1，+羟基缔合C=O 1722cm-1△4 1667,1625cm-1C≡N 2260cm-1例5:3,20-二氧代-11β-羟基-16α-甲基-21-降胆烷-1,4-二烯-24-酸甲酯步骤A:21-氯-16α-甲基-孕甾烷-1,4,9(11)-三烯-3,20-二酮在10℃，惰性气氛中，将8.8毫升甲基磺酰氯加入15克16α-甲基-21-羟基-孕甾烷-1,4,9(11)-三烯-3,20-二酮和40毫升甲基乙基吡啶的混合物中，然后室温下搅拌5小时。将反应混合物倒入冰水中，用盐酸酸化，过滤，洗涤，干燥，得到16.2克预期的粗产品，用色谱法纯化，洗脱剂为8/2的苯/乙酸乙酯混合物。得到13.4克预期的纯产品。M.P.=154℃步骤B:3,20-二氧代-23-乙氧羰基-16α-甲基-21-降胆烷-1,4,9(11)-三烯-24-酸乙酯将13.9克上步得到的氯代产物溶于80毫升HMPT，在惰性气氛中加入到1.860克50％的氢化钠、50毫升HMPT和6毫升丙二酸二乙酯的混合物中，室温搅拌4小时。将反应混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取，干燥后减压蒸发，得到21.5克粗产品，用色谱法纯化，洗脱剂为9/1的苯/乙酸乙酯混合物，得到16.4克预期的纯产品。步骤C:23-羧基-3,20-二氧代-16α-甲基-21-降胆烷-1,4,9(11)-三烯-24-酸16.4克上步制备的二酯与200毫升乙醇、100毫升2N的苏打溶液混合，在室温搅拌3小时。减压蒸出乙醇后，加入1升冰水稀释，用盐酸酸化。过滤，洗涤，干燥后得到14.6克预期的产品。M.P.=170℃步骤D:3,20-二氧代-16α-甲基-21-降胆烷-1,4,9(11)-三烯-24-酸上步得到的14.6克二酸溶于250毫升HMPT中，用预热到180℃的金属浴加热4分钟，然后将其倒入1500毫升冰水混合物中。过滤出沉淀的一元酸，洗涤，干燥。得到11.9克预期的产品。M.P.=208℃步骤E:3,20-二氧代-16α-甲基-21-降胆烷-1,4,9(11)-三烯-24-酸甲酯上步得到的11.9克一元酸溶于250二氯甲烷中，向其中加入13克/升的重氮甲烷的二氯甲烷溶液，然后减压蒸发，得到12.3克预期的产品。M.P.=98℃步骤F:9α-溴-3,20-二氧代-11β-羟基-16α-甲基-21-降胆烷-1,4-二烯-24-酸甲酯在0-10℃，惰性气氛中，依次将7.3克N-溴代琥珀酰亚胺、7.3毫升高氯酸和35毫升水加入到含10.8克甲基酯的150毫升丙酮的溶液中，在0-5℃混合2小时，将反应混合物倒入500毫升水中，过滤，干燥沉淀，得到12.8克预期的产品。M.P.=230℃步骤G:3,20-二氧代-11β-羟基-16α-甲基-21-降胆烷-1,4-二烯-24-酸甲酯在惰性气氛中，将18克乙酸亚铬加入到上步制备的12.8克溴代醇、50毫升二甲亚砜(DMSO)和6毫升硫酚的混合物中，室温搅拌一小时，反应混合物倒入1升水中，用乙酸乙酯萃取，有机相经洗涤、干燥后减压蒸发，得到16克预期的粗产品，用色谱法纯化，洗脱剂为7/3的苯/乙酸乙酯混合物，最后在热乙醇中重结晶，得到3.4克预期的纯产品。M.P.=166℃红外(CHCl3)C=O1735cm-1(酯)，1709cm-1(20-酮)C=O1609,1626,1664cm-1OH 3615cm-1例6含有式(Ⅰ)化合物的药物组合物的实例制备的片剂中，含有50毫克例1的产品作为活性成分。例1的产品- - - - - - - - -50毫克赋形剂(滑石粉，淀粉，硬脂酸镁)本发明产品的药理学研究Ⅰ)转染的海拉细胞中的转录调节研究被转染前，海拉细胞(ATCC ref:CCL-2)分配在一个六孔板中，在营养介质中细胞密度为4×105细胞/毫升，在37℃下培养24小时。暂时转染按照沉淀法用磷酸钙完成。研究反式激活时，细胞用1μg的GRE-tk-CAT质粒、1μg的polyⅡβ-GAL质粒和适量至5μg的KS质粒(Stratagene)转染。在研究反式抑制时，细胞用3μg的Coll(-517/+63)CAT质粒、250ng的pSV-cjun质粒和适量至5μg的KS质粒(Stratagene)转染。沉淀与细胞接触16小时后被沉出，经清洗，用含有不同浓度地赛米松或被研究产品的营养介质覆盖(10-9M、10-8M、10-7M、10-6M)。加入被研究产品24小时后，细胞被溶解于250μl的MOPS-NaCl-TritonX-100缓冲液中。在细胞提取液中，用ELISA Kit(Boehringer Mannheim)给CAT定剂量。
标准的糖皮质激素如地赛米松引起GRE-tk促催化剂转录的激活和胶原酶促催化剂转录的抑制
结论实例1和实例2的产品是良好的胶原酶抑制剂，但是是弱的转录激活剂。2)抗炎活性肉芽肿试验-溶胸腺活性按照标准的肉芽肿试验研究消炎活性。采用的技术是改良的Meier和Coll的方法(Experentia,1950,6,469)。在重90-100克的Wistar雌鼠的胸部皮下植入两个各重10毫克的棉球后，立即将研究产品用口服法给药，每日一次，共四日。然后处死这些动物，棉球被形成的肉芽肿包围，将其在新鲜状态、60℃下保存18小时后分别称重，减去棉球的原始重量得到肉芽肿的重量。
为测定产品的溶胸腺活性其胸腺也被取出并称重。
结论实例1和实例2的产品具有接近于氢化泼尼松的抗炎活性。巴豆油诱发的耳水肿试验按照Tonelli等(Endocrinology,1965,77,625-324)描述的方法，对产品进行了巴豆油诱发的小鼠耳水肿模型试验。用溶于比例为4∶1∶14.6(体积比)的吡啶-水-乙醚中的巴豆油(2％v/v)诱发小鼠的耳水肿，小鼠为雄性，重18-22克。实验动物6小时后被处死，耳朵被取下称重。由于用巴豆油处理过的耳朵与对照组的耳朵(未经处理)重量的差异，使得100％的水肿被测定。被测产品溶于巴豆油的溶液中并涂在耳上实验。
结论在这个试验中，实例2的产品具有介于氢化泼尼松和地赛米松之间的消炎活性。3)免疫抑制活性。
按照Hambleton等在文章中描述的抑制过敏反应测试，对免疫抑制活性进行了研究(Agents and Actions,1990,29,328)。在第0天，先从尾巴根部皮下注射4mg/ml的分支杆菌结核的液体石蜡悬浮液，敏化重150-160克的雄性Wistar鼠(0.1ml/只)。
从第4到第7天，将实验产品口服给药。
在第7天，最后一次给药一小时后，给实验动物注射抗原可溶部份，引发过敏反应从小鼠的一只后爪植入，体积为0.2ml，含量为0.4mg/鼠，另外一只注入相同量的溶剂。
24小时后，水肿用APLELEX生产的UGO BASIL血管充盈度计测定。
相对于对照组动物，被注射爪的动物根据其增重减少百分比来评价药物的活性。
结论氢化泼尼松的ED50平台在5和20mg/kg之间，最大抑制为50％，实例1和实例2的产品的ED50量分别为2.3和1.5mg/kg。它们的活性与剂量相关，剂量为10mg/kg时，最大抑制分别为82％(例1)和90％(例2)。
权利要求
其中或者R1代表卤原子、羟基、含1～8个碳原子的烷氧基、含1～12个碳原子的酰氧基，并且R2代表卤原子或氢原子，或者R1和R2一起形成一个另外的键；Z选自含1～8个碳原子的烷氧基、含1～8个碳原子的非取代或取代的烷硫基、含6～12个碳原子的非取代或取代的碳环芳硫基、卤素、氰基、巯基、氰硫基、CO2A、或CH2CO2A，其中A是氢原子或含1～8个碳原子的烷基；Y代表氢原子或甲基；1-2位或5-6位的虚线任选地代表另外的一个键以及它们与酸或碱形成的加成盐，应理解的是不包括9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-21-氯-孕甾烷-1,4-二酮-3,20-二酮，并且当R1和R2一起形成双键时，Z不代表卤原子。
2.按照权利要求1，通式(Ⅰ)的产物，其中R1是羟基且R2是氟原子，及其与酸或碱的加成盐。
3.按照权利要求1或2的通式(Ⅰ)的产物，其中B环是饱和的且Y是氢原子，及其与酸或碱的加成盐。
4.按照权利要求1～3中任一项的通式(Ⅰ)的产物，其中Z选自氰基和含1～8个碳原子的烷硫基。
5.按照权利要求1的通式(Ⅰ)的产物，其名称如下-9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二氧代-21-腈-9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-孕甾烷-4-烯-3,20-二氧代-21-腈-9α-氟-11β-羟基-16α-甲基-21-硫甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮-3,20-二氧代-11β-羟基-16α-甲基-21-降胆烷-1,4-二烯-24-酸甲酯-21-氟-11β-羟基-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮-21-硫-(2-羟基亚乙基)-9α,11 β-二氯-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮-21-硫-(2-乙酰氧基亚乙基)-9 α,11β-二氯-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮-9α,11β-二氯-21-氟-16α-甲基-孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮。
6.权利要求1定义的通式(Ⅰ)的产物的制备方法，其特征在于使通式(Ⅱ)的产物
其中或者R’1代表羟基且R’2是卤原子或氢原子；或者R’1是卤原子且R’2是卤原子或氢原子；或者R’1和R’2一起形成另外的键且Y如前面定义，与通式Hal-SO2-B醇的作用，其中Hal是溴原子或氯原子，B是非取代的或被1～5个卤原子取代的含有1～5个碳原子的烷基，或者是非取代的或被1～5个含有1～6个碳原子的烷基取代的苯基或萘基，得到通式为(Ⅲ)的化合物
其中B如前定义，式(Ⅲ)产物以合适的顺序经过下列一步或几步反应，得到通式(Ⅰ)的产物-与氯化、碘化、溴化或氟化试剂作用，-与任选取代的烷基硫醇或芳基硫醇作用，-与硫代酰胺或硫脲作用后再水解，-与氰化钾作用，-将氰基在酸性介质中水解后任选酯化或成盐，-依次发生与CH2(COOEt)2的反应、皂化反应然后脱羧反应后进行任选的酯化成盐反应，-与硫氰化钾或硫氰化钠作用，-与醇或醇化物作用，-在11位进行酰化作用，-在11位进行烷基化作用，-1-2位双键还原，-1-2位双键形成，-脱水反应，在9-11位形成双键，-成盐作用。
7.作为药物，权利要求1定义的通式(Ⅰ)的化合物及其与药物上可接受的酸或碱的加成盐。
8.作为药物，权利要求2～4之一项所定义的通式(Ⅰ)的化合物及其与药物上可接受的酸或碱的加成盐。
9.作为药物，权利要求5定义的通式(Ⅰ)的化合物。
10.含有权利要求7～9定义的药物的药物组合物。
11.权利要求6定义的通式(Ⅲ)的产物作为工业产品，应理解的是下列式(Ⅲ)的化合物被排除在外-21-(甲磺酰氧基)-16α-甲基孕甾烷-1,4,9(11)-三烯-3,20-二酮-21-(甲磺酰氧基)-11β-羟基-16α-甲基孕甾烷-1,4-二烯-3,20-二酮-21-(4-甲基苯基磺酰氧基)-16α-甲基孕甾烷-1,4,9(11)-三烯-3,20-二酮
全文摘要
本发明的主题是通式(Ⅰ)的产物:其中或者R
文档编号C07J9/00GK1222160SQ9719562
公开日1999年7月7日 申请日期1997年4月17日 优先权日1996年4月18日
发明者N·巴特纳加, A·克劳斯纳, C·马参德奥, M·雷斯彻里贡, J·－G·托特施 申请人:赫斯特·马里恩·鲁索公司