专利名称：Ral GTP鸟嘌呤解离刺激因子的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新的多核苷酸，由该多核苷酸编码的多肽，以及利用所述多核苷酸生产所述多肽的方法。更具体地说，本发明的多肽是Ral GTP酶的鸟嘌呤解离刺激因子(RalGDS)家族的一个新成员。
Ras基因与细胞的生长、分化和转移性有密切关系，特别是该基因的突变往往与癌症的发生有关(Barbacid，M.(1987)Annu.rev.Biochem.56，.779-827)Ras通过与被称之为效应物的底物作用发挥其功能。目前已发现了多种Ras的效应物，包括Raf、PI(3)激酶的p110亚基、RalGDS家族、Byr2(S pombe)、Adenylyl cyclase(S.cerevisiae)Rin、AF6、canoe、PKC-ζ和MEKK-1等(McCormick，F.and Wittinghofer，A.(1996)Current Opinion in Biotechnology.7，449-456)。Ras可以通过几个不同的信号传递途径发挥功能，目前了解得最为清楚的是Raf/MAPK(mitogen-activated protein kinase)途径。
但是近几年越来越多的研究表明，存在着Ras-RalGDS-Ral这样一个不依赖于Raf的新的途径，从而RalGDS家族在Ras功能中起着重要作用。现已发现的RalGDS家族成员大多数都被证明具有催化结合于Ral蛋白上的GDP(非活化状态)解离的功能，从而促使Ral向其活化状态(与GTP结合)转化。实验表明，许多RalGDS家族成员都能与Raf协同作用，增强其在诱导癌变方面的作用，并且，这种协同作用不是通过增强Raf途径的作用而实现的。有的RalGDS家族成员还被发现能与TC21的活化状态结合，它们可能参与了TC21在诱导肿瘤方面的作用。除Ras(或TC21)外，许多RalGDS家族成员还能与Rap蛋白结合。Rap也是Ras家族的一个成员，但是，与众不同的是，它能够抑制Ras致癌作用，RalGDS在其中的作用值得研究。另外，在对鼠RalGDS的研究中，还发现RalGDS可能有除Ral以外的底物，这说明RalGDS家族还可能在其它的信号传递途径中发挥作用。
1993年，Albright，C.F.等首先在小鼠的3T3/ΔXB细胞系和大鼠的成纤维细胞系cDNA文库中，通过寻找编码与CDC25和ste6蛋白保守区同源的基因的办法发现了RalGDSa和RalGDSb基因的全长(Albright，C.F.et al.(1993)EMBO J.12(1)，339-347)。次年，Kikuchi，A.等在寻找Ras结合蛋白时，运用酵母双杂交系统发现了小鼠基因RGL(RalGDS-like)的Ras结合区域RID，以此为探针筛库而得到该基因全长。RGL与RalGDS具有70％氨基酸同源性，在CDC25同源区两者的同源性更高，故在而认为RGL和RalGDS构成一个家族(Kikuchi，A.et al.(1994)Mol.Cell.Biol.14，7483-7491.)。RLF(RalGDS-like factor)则是最初作为一个新的CDC25家族成员，在1996年由Wolthuis，R.M.等发现的小鼠基因，它是在寻找Rap 1A的结合蛋白时在酵母双杂交系统中得到的(Wolthuis，R.M.et al.(1996)Oncogene 13，353-362)。该基因编码了一个778个氨基酸的蛋白，这一蛋白与RalGDS和RGL都约有30％的氨基酸是相同的，尤其在RLF的羧基端保守性更强，也被认为是RalGDS家族的一个新的成员。Peterson，S.N.等于1996年用酵母双杂交系统寻找Rap1b的结合蛋白时，发现发现了一个人cDNA的部分克隆。通过同源比较发现，这一部分cDNA与RalGDS和RGL具有重要的同源性，它包括了完整的羧基端和部分的RBD，他们把它命名为RGL2(peterson，S.N.et al.(1996)J.Biol.Chem.271(47)，29903-29908)。
1997年，在兔中又得到了一个可能是RalGDS家族成员的基因的部分序列(D’Adamo，D.R.et al.(1997)Oncogene 14，1295-1305)。D’Adamo，D.R.等在经DNBA诱导的兔鳞状上皮细胞中，运用裸鼠致瘤实验(nude mouse tumorigenesis assay)分离到一全长cDNA——rsc(rabbit aquamous cell carcinoma)。分析发现这一基因是一个癌基因，它由两个不同的基因断裂拼接而成阅读框中前785bp编码的氨基酸序列与人的HHR23A基因有大于95％的相同性；随后的1.4kb则与小鼠的RalGDS有60％相同，而在氨基酸水平上则为40％。后者意味着这可能是RalGDS家族的一个新的基因，它被命名为rgr(RalGDS related)。rgr也具有CDC25同源的催化功能区，在这一区域它与RalGDS的氨基酸相同率高达72％。Rgr蛋白同样具有对Ral的GDS活性，而对Ras或Ran则没有。缺失分析表明具有致癌潜力的部分仅存于rsc的rgr部分。
人类的RalGDS也已被部分克隆(Spaargaren，M.and Bischoff，L.R.(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91，12609-12613；Hofer，F.et al.(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91，11089-11093)。
本发明的一个目的是提供一种新的多核苷酸，该多核苷酸编码RalGDS家族的一个新成员，本发明的RalGDS新成员命名为hRalGDS(GenBank Accession No.AF027169)。
本发明的另一个目的是提供一种新的RalGDS蛋白家族成员，命名为hRalGDS。
本发明的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的RalGDS家族成员的方法。
本发明涉及一种新的多核苷酸，由该多核苷酸编码的多肽，以及利用所述多核苷酸生产所述多肽的方法。更具体地说，本发明的多肽是RalGDS家族的一个新成员。本发明的RalGDS同系物命名为hRalGDS(GenBank Accession No.AF027169)。编码本发明的多核苷酸可以是RNA形式和DNA形式，DNA包括cDNA、基因组DNA和合成DNA，DNA可以是双链或单链，如果是单链，可以是编码链或非编码链。
在本发明中，术语“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内天然状态下的多核苷酸和多肽是没有分离的，但同样的多核苷酸或多肽如从天然状态中同存的其他物质中分开，则为分离的。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸全长为3585个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO1，其中开放读框位于160-2718位核苷酸。该多核苷酸是如此获得的，以人胎盘λgt11cDNA文库(购自Clontech公司)为模板，合成正向引物5’-CAGCTTCGTCCCGGAGTCTCCTG-3’和反向引物5’-GATGCCCTTGGCAATCTTGAGTC-3’，进行PCR，获得568bp的目的片段。然后标记该片段，以该标记片段为探针与扩增后的人胎盘λgt11cDNA文库杂交，挑取阳性克隆，经同样的探针及筛选过程对得到的阳性克隆进行复筛后，最终得到若干阳性单克隆。鉴定测序后得到部分序列。以此序列为参考，又设计了反向引物5’-TGGAGGCTGAGCTGATGCCGGAG-3’和5’-TCGCATGAAGCTGTTTGGACTCAAG-3’，将它们分别与载体引物S1、S2进行搭配扩增，并将扩增产物测序。将所测得的序列拼接后得到如SEQ ID NO1的全长cDNA序列。
根据本发明的另一方面，本发明的多核苷酸序列可用来表达或生产重组的hRalGDS蛋白或多肽。一般来说有以下步骤用本发明的编码hRalGDS的DNA片段(或变异体)或含有该DNA片段的重组表达载体转化合适的宿主细胞；在合适的培养基中培养的宿主细胞；从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。
本发明还涉及含有本发明的多核苷酸序列的表达载体及用所述的表达载体遗传工程化的宿主细胞。表达载体的一个重要特征是含有适当的启动子和翻译控制元件。多种表达载体可从商业途径得到。常用的载体包括(但不限于)质粒，噬菌体，粘粒，酵母表达载体，病毒，Ti质粒等，但最常用的载体首选质粒。常用的宿主细胞包括(但不限于)细菌，酵母，昆虫细胞，动物细胞或植物细胞等，但最常用的宿主细胞为细菌，尤其是大肠杆菌。另一个较常用的表达系统是哺乳动物细胞系，如Hela，COS细胞系或CHO细胞系等。
可用本领域中熟练人员已知的方法构建含hRalGDS编码序列的重组表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术，DNA合成技术，体内重组技术等(J Sambrook等1989，分子克隆实验手册)。
本发明还涉及针对本发明的多肽的抗体，有多种方法可用于生产针对hRalGDS抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于)多克隆抗体，单克隆抗体，嵌合抗体，单链抗体，Fab片段和Fab表达文库产生的片段。
多克隆抗体的生产可用hRalGDS蛋白或多肽免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。
hRalGDS单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature，1975，256495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison等，PNAS，1985，816851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.Pat No.4946778)也可用于生产抗hRalGDS的单链抗体。
以下将通过实施例对本发明进行进一步的描述，但实施例仅是举例性的，并非对本发明的限制。实施例1 hRalGDS的cDNA的克隆和测序1.引物扩增以人胎盘λgt11cDNA文库(购自Clontech公司)为模板，用寡核苷酸5’-CAGCTTCGTCCCGGAGTCTCCTG-3’为正向引物，寡核苷酸5’-GATGCCCTTGGCAATCTTGAGTC-3’为反向引物，进行PCR，PCR条件为93℃4分钟，随之以93℃1分钟、68℃1分钟和72℃1分钟进行35个循环，最后72℃延伸5分钟。电泳检测得到的568bp目的片段。2.探针及其标记以上述PCR目的片段为探针，用α-32P-dATP(DuPont公司)对其进行随机引物标记，条件为37℃1小时，具体操作见MegaprimeDNA标记系统说明书(Amersham)。3.cDNA文库扩增及印迹标记(筛选文库)将人胎盘λgh11cDNA文库进行扩增，克隆数达100万个，然后将扩增好的cDNA文库印迹到Hybond TM-N+尼龙膜上(Amersham)，再将标记好的探针变性后与印迹膜杂交，洗膜，放入带增感屏的片夹，与FUJI MEDIAI X光胶片于-80℃下进行放射自显影，72小时后冲片。4.挑取克隆及初筛克隆的复筛通过上述杂交筛选获得13个初筛阳性克隆，用上述相同的探针杂交和筛选过程对这13个阳性克隆进行复筛，最终得到6个阳性单克隆。5.单克隆的鉴定和测序以上述步骤4中得到的单克隆噬菌体为模板，用探针序列设计新的反向引物5’-TGGAGGCTGAGCTGATGCCGGAG-3’和5’-TCGCATGAAGCTGTTTGGACTCAAG-3’，分别与λgt11左右臂上的引物S1及S2(S15’-GTTCAACATCAGCCGCTACA-3’；S25’-CACCAGACCAACTGGTAATG-3’)进行搭配扩增，然后进行琼脂糖凝胶电泳，以判断每个克隆从探针出发向5’或3’步移(延伸)的长度，从中选出向两端延伸最长的克隆，电泳鉴定它们分别向5’和3’延伸的长度，前者的插入片段约为2.3kb，后者的插入片段约为1.0kb。将这两个克隆S1、S2扩增产物与pGEM-T载体(Promega)连接，转化大肠杆菌JM109，用QIAprep Plasmid试剂盒(QIAGEN)提取质粒，用双链嵌套式缺失试剂盒(Pharmacia)对插入片段进行定向系列缺失，然后用PCR对缺失子进行快速鉴定及排序。用SequiTherm EXCELTMDNA测序试剂盒(Epicentre Technologies)对依次截短的缺失子进行测序，最后用电脑软件拼接顺序，获得全长cDNA序列，共3585bp，详细序列见SEQ ID NO1，其中开放读框位于160-2718位核苷酸。
根据得到的cDNA序列推导出hRalGDS的氨基酸序列，共852个氨基酸残基，其氨基酸序列详见SEQ ID NO2。实施例2 hRalGDS的表达谱分析和染色体定位多种组织Northern(MTNTM)印迹膜(16种组织)购自Clontech公司，以上实施例1步骤中的568bp克隆片段为探针，探针的标记方法同实施例1步骤2，Northern杂交按用户手册操作。
16种组织的Northern杂交结果显示(h)RalGDS基因为广谱表达基因，在胸腺、前列腺、胎盘、卵巢、小肠、大肠、外周血白细胞、胎盘、肺、肝、骨骼肌、肾及等12种组织中均有表达，表达量稍有差异，在脾、脑、心脏和胰腺中较高表达。根据国际blastn nr数据库检索，将该基因定位于9号染色体9q34。
实施例3人RalGDS在大肠杆菌中的表达在该实施例中，以人胎盘λgt11cDNA文库(购自Clontech公司)为模板，将编码人RalGDS的cDNA序列用对应于该DNA序列的5’和3’端的PCR寡核苷酸引物进行扩增，获得人RalGDS cDNA作为插入片段。
PCR反应中使用的5’寡核苷酸引物序列为5’-GTTGGTCGAC ATGGTAGATT GCCAGAGCT-3’，该引物含有SalI限制性限制性内切酶的酶切位点，在该酶切位点之后是由起始密码子开始的人RalGDS编码序列的19个核苷酸；3’端引物序列为5’-gcttAAGCTT TCAGAAGATG CCCTTGGC-3’，该引物含有HindIII限制性限制性内切酶的酶切位点、翻译终止子和人RalGDS的部分编码序列。
引物上的限制性内切酶的酶切位点对应于细菌表达载体pQE-9(Qiagen Inc.，Chatsworth，CA)上的限制性内切酶酶切位点，该质粒载体编码抗生素抗性(Ampr)、一个细菌复制起点(ori)、一个IPTG-可调启动子/操纵子(P/O)、一个核糖体结合位点(RBS)、一个6-组氨酸标记物(6-His)以及限制性内切酶克隆位点。
用SalI和HindIII消化pQE-9载体及插入片段，随后将插入片段连接到pQE-9载体并保持开放读框在细菌RBS起始。随后用连接混合物转化购自Qiagen，商品名为M15/rep4的E.coli菌株，M15/rep4含有多拷贝的质粒pREP4，其表达lacI阻遏物并携带卡那霉素抗性(Kanr)。在含有Amp和Kan的LB培养皿上筛选转化子，抽提质粒，测序验证人RalGDS的cDNA片段已正确插入了载体。
在补加Amp(100μg/ml)和Kan(25μg/ml)的LB液体培养基中过夜培养(O/N)含所需构建物的阳性转化子克隆。过夜(O/N)培养物以1∶100-1∶250的稀释率稀释，然后接种到大体积培养基中，培养细胞生长至600光密度(OD600)为0.4-0.6时，加入IPTG(“异丙基硫代-β-D-半乳糖苷”)至终浓度为1mM。通过使lacI阻遏物失活，IPTG诱导启动P/O导致基因表达水平提高。继续培养细胞3-4小时，随后离心(6000×g，20分钟)。超声裂解包涵体，收集细胞并将细胞沉淀溶于6M的盐酸胍中。澄清后，通过在能使含6-His标记物蛋白紧密结合的条件下，用镍-螯合柱层析从溶液中纯化溶解的人RalGDS。用6M盐酸胍(PH5.0)从柱中洗脱人RalGDS。可用几种方法从盐酸胍中变性沉淀蛋白。或者，使用透析步骤除去盐酸胍，或者从镍-螯合柱中分离出的纯化蛋白。纯化后的蛋白质被结合到第二个柱中，该柱中具有递减的线性盐酸胍梯度。在结合到该柱时蛋白质变性，随后用盐酸胍(PH0.5)洗脱。最后，将可溶的蛋白质用PBS进行透析，然后将蛋白质保存在终浓度为10％(w/v)甘油的贮存液中。
用12％的SDS-PAGE胶进行电泳，鉴定表达蛋白的分子量大小为约94kDa。
此外，用常规方法对达蛋白的N端和C端各10个氨基酸长度的氨基酸进行测序，发现与推测的蛋白序列一致。
实施例4人RalGDS在真核细胞(CHO细胞株)中的表达在该实施例中，以人胎盘λgt11cDNA文库(购自Clontech公司)为模板，将编码人RalGDS的cDNA序列用对应于该DNA序列的5’和3’端的PCR寡核苷酸引物进行扩增，获得人RalGDS cDNA作为插入片段。
PCR反应中使用的5’寡核苷酸引物序列为5’-GTTGAAGCTT ATGGTAGATT GCCAGAGCT-3’该引物含有HindIII限制性限制性内切酶的酶切位点，在该酶切位点之后是由起始密码子开始的人RalGDS编码序列的19个核苷酸；3’端引物序列为5’-GCTTGAATTC TCAGAAGATG CCCTTGGC-3’该引物含有EcoRI限制性限制性内切酶的酶切位点、一个翻译终止子和人RalGDS的部分编码序列。
引物上的限制性内切酶的酶切位点对应于CHO细胞表达载体pcDNA3上的限制性内切酶酶切位点，该质粒载体编码抗生素抗性(Ampr和Neor)、一个噬菌体复制起点(fl ori)、一个病毒复制起点(SV40 ori)、一个T7启动子、一个病毒启动子(P-CMV)、一个Sp6启动子、一个SV40启动子、一个SV40加尾信号和相应的polyA顺序、一个BGH加尾信号和相应的polyA顺序。
用EcoRI和HindIII消化pcDNA3载体，随后将插入片段连接到pcDNA3载体。随后用连接混合物转化E.coli DH5α菌株。在含有Amp的LB培养皿上筛选转化子，在补加Amp(100μg/ml)的LB液体培养基中过夜培养(O/N)含所需构建物的克隆。抽提质粒，测序验证人RalGDS的cDNA片段已正确插入了载体。
质粒转染CHO细胞是采用脂转染法，用Lipofectin(GiBco Life)进行的。转染48小时后，经2-3周的持续G418加压筛选，收集细胞及细胞上清测定表达蛋白酶活力。去G418，连续传代培养；对混合克隆细胞极限稀释，选择具有较高蛋白活性的细胞亚克隆。按常规方法大量培养上述阳性亚克隆。48小时后，开始收集细胞及上清，用超声裂解方法破碎细胞。以含0.05％Triton的50mMTris·HCl(PH7.6)溶液为平衡液及洗脱液，用经预平衡的Superdex G-75柱收集上述蛋白的活性峰。再用50mMTris·HCl(PH8.0)平衡的DEAE-Sepharose柱，以含0-1M NaCl的50mMTris·HCl(PH8.0)溶液为洗脱液进行梯度洗脱，收集上述蛋白的活性峰。然后以PBS(PH7.4)为透析液对表达蛋白溶液进行透析。最后冻干保存。
用12％的SDS-PAGE胶进行电泳，鉴定表达蛋白的分子量大小为94KDa。
此外，用常规方法对达蛋白的N端和C端各10个氨基酸长度的氨基酸进行测序，发现与推测的蛋白序列一致。
根据上文教导，本发明可有各种改进和变动，因此，在所附权利要求范围内，本发明可以与具体所述不同的方式实施。
序列表(1) 一般信息(i)申请人复旦大学(ii) 发明名称Ral GTP酶的鸟嘌呤解离刺激因子(iii) 序列数2(iv) 联系地址(A) 收信人永新专利商标代理有限公司(B) 街道金融大街27号(C) 城市北京市(D) 国家中国(E) 邮政编码100032(vi) 本申请资料(A)申请号(B)申请日(C)分类号(viii) 律师/代理人信息(A) 姓名林晓红(B) 注册号72002027(C) 卷号I98602CB(ix) 电讯信息(A) 电话8610-66211834(B) 传真8610-66211845(2) SEQ ID NO1的信息(i)序列特征(A) 长度3585bp(B) 类型核酸(C) 链性单链(D) 拓扑结构线性(iii) 分子型cDNA(xi) 序列描述SEQ ID NO11 CGAGGGCCGC AGAGTCCTGG GCCCGGCGGG GACCGGAGGC CGCGCCATGA GCCCCGCAGC61 CGGGCGCACC CCTGCGCCGC GCGCGGGCCC AGGCGAGCGG CCTCTGCGAG CCCCGGGTCC121 CGCCCTGGGG CCGGCGATGT GCCACCGAGG CTGAGGATGA TGGTAGATTG CCAGAGCTCC181 ACGCAGGAGA TCGGTGAGGA GCTGATCAAC GGAGTCATCT ACTCCATCTC CCTGCGCAAG241 GTGCAGCTGC ACCACGGAGG CAACAAGGGG CAGCGCTGGC TCGGGTATGA GAATGAGTCG301 GCCCTGAACC TTTATGAGAC TTGCAAGGTG CGGACCGTGA AGGCTGGCAC GCTGGAGAAG361 CTGGTGGAGC ACCTGGTGCC AGCCTTCCAG GGCAGCGACC TCTCCTACGT CACCATCTTC421 CTGTGTACCT ATAGAGCCTT CACCACCACC CAACAGGTCC TGGACCTGCT GTTCAAAAGG481 TACGGTAGAT GTGACGCCCT CACGGCCTCC TCTAGATACG GCTGCATCCT CCCCTATTCC541 GACGAGGATG GTGGACCCCA 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PSWPSPVVAENGLSEEKPHLLVFPPDLVAEQFTLMDAELFKKVVPYHCLGSIWSQRDKKG361 KEHLAPTIRATVTQFNSVANCVITTCLGNRSTKAPDRARVVEHWIEVARECRILKNFSSL421 YAILSALQSNSIHRLKKTWEDVSRDSFRIFQKLSEIFSDENNYSLSRELLIKEGTSKFAT481 LEMNPKRAQKRPKETGIIQGTVPYLGTFLTDLVMLDTAMKDYLYGRLINFEKRRKEFEVI541 AQIKLLQSACNNYSIAPDEQFGAWFRAVERLSETESYNLSCELEPPSESASNTLRTKKNT601 AIVKRWSDRQAPSTELSTSGSSHSKSCDQLRCGPYLSSGDIADALSVHSAGSSSSDVEEI661 NISFVPESPDGQEKKFWESASQSSPETSGISSASSSTSSSSASTTPVAATRTHKRSVSGL721 CNSSSALPLYNQQVGDCCIIRVSLDVDNGNMYKSILVTSQDKAPAVIRKAMDKHNLEEEE781 PEDYELLQILSDDRKLKIPENANVFYAMNSTANYDFVLKKRTFTKGVKVKHGASSTLPRM841 KQKGLKIAKGIF
权利要求
1.一种分离出的多核苷酸，其编码具有SEQ ID NO2的推导的氨基酸序列的多肽或者所述多肽的片段、类似物或衍生物，所述的片段、类似物或衍生物具有与全长多肽相同的生物学功能。
2.如权利要求1所述的多核苷酸，其中该多核苷酸是DNA。
3.如权利要求1所述的多核苷酸，其中该多核苷酸是RNA。
4.如权利要求1所述的多核苷酸，其中该多核苷酸是基因组DNA。
5.如权利要求1所述的多核苷酸，其编码具有SEQ ID NO2的推导的氨基酸序列的多肽。
6.如权利要求1所述的多核苷酸，其具有SEQ ID NO1所示的编码序列。
7.含有权利要求2所述的多核苷酸的载体。
8.一种宿主细胞，其用权利要求7的载体转化、转染或转导。
9.如权利要求8所述的宿主细胞，该宿主细胞为原核细胞。
10.如权利要求9所述的宿主细胞，该宿主细胞为大肠杆菌。
11.如权利要求8所述的宿主细胞，该宿主细胞为真核细胞。
12.如权利要求11所述的宿主细胞，该宿主细胞为COS-7、CHO、Hela细胞。
13.如权利要求11所述的宿主细胞，该宿主细胞为酵母细胞。
14.生产多肽的方法，包括在合适的条件下培养权利要求8-13的宿主细胞，使之表达所述的多肽。
15.一种多肽，所述的多肽是具有SEQ ID NO2的推导的氨基酸序列的多肽或所述多肽的片段、类似物或衍生物，所述的片段、类似物或衍生物具有与全长多肽相同的生物学功能。
16.如权利要求15所述的多肽，所述的多肽具有SEQ ID NO2的推导的氨基酸序列。
17.抗权利要求15或16所述多肽的抗体。
全文摘要
本发明提供了一种新的多核苷酸,由该多核苷酸编码的多肽,以及利用所述多核苷酸生产多肽的方法。更具体的说,本发明的多肽是Ral GTP酶的鸟嘌呤解离刺激因子(RalGDS)家族的一个成员。
文档编号C07K14/435GK1257923SQ98125688
公开日2000年6月28日 申请日期1998年12月21日 优先权日1998年12月21日
发明者余龙, 郑其平, 张宏来, 赵勇, 傅强 申请人:复旦大学