丙氟沙星胃肠外用的组合物的制作方法

专利名称：丙氟沙星胃肠外用的组合物的制作方法
背景技术：
本发明涉及基本上不含弱极性杂质的萘啶酮类抗生素丙氟沙星(alatrofloxacin)甲磺酸盐、所述丙氟沙星甲磺酸盐的胃肠外用的组合物和纯化丙氟沙星甲磺酸盐的方法。
丙氟沙星甲磺酸盐是有关萘啶酮类抗生素托氟沙星(trovafloxacin)的甲磺酸前药的盐。用目前的方法制备的丙氟沙星甲磺酸盐的纯度非常高。不过，用这些目前的方法制备的丙氟沙星甲磺酸盐含有微量弱极性杂质，这些杂质在经过不确定的一段时间后，会从胃肠外用的组合物中沉淀出来。这些弱极性杂质不能用工业上可行的方法充分除去，例如重结晶、利用闪蒸硅胶的标准色谱法、溶剂/溶剂萃取法，或者用硅藻土处理。本发明人已经发现，用聚苯乙烯树脂处理粗反应产物，即用任意目前已知的文献方法制备的产物，能够成功地除去这些杂质。
以前已知喹诺酮类抗生素环丙沙星也含有杂质，使产物不适用于胃肠外制剂。1988年10月26日出版的欧洲专利公报287926描述了用硅藻土处理环丙沙星进行纯化，以便得到适用于胃肠外制剂的产物。如上所述，用硅藻土处理丙氟沙星甲磺酸盐不能充分除去弱极性杂质。
上述丙氟沙星的抗菌活性和合成方法描述在分别于1992年11月17日和1993年7月20日公告的在此作为参考文献引用的美国专利5,164,402和5,229,396中。上述专利与本申请共同转让。
1997年1月3日出版的国际专利申请公布号WO97/00268要求保护制备丙氟沙星的另一种方法。上述公布的申请在此作为参考文献引用。
1997年3月6日出版的国际专利申请公布号WO97/08191描述了制备丙氟沙星及其多形体的第三种方法，在此作为参考文献引用。上述专利公报与本申请共同转让。
1995年7月20日出版的国际专利申请公布号WO95/19361、1996年7月9日提交的美国专利申请60/021419和1996年10月31日提交的国际专利申请PCT/EP 96/04782要求保护用于制备丙氟沙星和托氟沙星的新颖中间体，这些文献均在此引用。上述专利公报和申请与本申请共同转让。
1995年12月12日公告的美国专利5,475,116和1993年10月26日公告的美国专利5,256,791要求保护用于合成丙氟沙星和托氟沙星的多种氮杂二环己烷中间体，运些文献均在此引用。上述专利与本申请共同转让。
1996年12月2日提交的美国专利申请08/764655涉及用丙氟沙星和托氟沙星治疗幽门螺杆菌感染的方法，这些文献均在此引用。上述专利申请与本申请共同转让。
1996年12月12日出版的国际专利申请公布号WO96/39406要求保护无水7-([1α，5α，6α]-6-氨基-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-6-氟-1-(2，4-二氟苯基)-1，4-二氢-4-氧-1，8-萘啶-3-羧酸，甲磺酸盐的新颖品形、使用所述化合物治疗哺乳动物、尤其是人的细菌感染的方法、和药物组合物，该文献在此引用。上述公布的专利申请与本申请共同转让。
1996年7月29日提交的国际专利申请PCT/IB 96/00756要求保护托氟沙星的两性离子形式，它可用于以混悬液方式给药的药物，该文献在此引用。上述专利申请与本申请共同转让。
发明概述本发明涉及纯化式I化合物的方法，
包括用一种疏水性树脂处理含有一定量所述式I化合物和弱极性杂质的不纯反应产物。所述弱极性杂质是由它们的高效液相色谱(HPLC)保留时间所定义的，条件是将样本注入惠普1100型系列高效液相色谱仪，用40％乙腈、0.05M磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.3％高氯酸(V/V)的移动相溶液洗脱，流速约为每分钟2ml，柱子为Puresil5微米C18二氧化硅HPLC柱(4.6×150mm)，注射体积为20μl，检测器为惠普1100系列二极管组检测器，检测波长为270nm。HPLC柱在环境温度(20-25℃)下使用。由上述HPLC条件定义的所述弱极性杂质的保留时间为约2.1分钟至约30分钟。一种特定的不需要的弱极性杂质在上述HPLC条件下的保留时间为9-12分钟。上述保留时间为9-12分钟的杂质具有式II结构
(以下也称之为“低聚物杂质”)。优选地，处理后的弱极性杂质占粗产物重量的500ppm以下，更优选为60ppm以下。最优选地，所述杂质占20ppm以下。优选地，该疏水性树脂是一种交联聚苯乙烯树脂，例如DiaionHP-20或Amberchrom CG-161。
本发明也涉及式I化合物，
它基本上不含弱极性杂质，更优选为基本上不含式II化合物。
本发明也涉及胃肠外用的组合物，它包含抗菌有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐和一种药学上可接受的载体，基本上不含弱极性杂质，优选为基本上不含式II化合物。优选地，该药学上可接受的载体是水。
本发明也涉及上述式I化合物是冻干产物的胃肠外用组合物。
本发明也涉及这样一种药物组合物，其中上述式I化合物在单位剂量容器中的含量约10mg至约700mg，优选为约275mg至约500mg，最优选为约300mg。
本发明也涉及式II化合物。
本发明也涉及这样一种药物组合物，它包含抗菌有效量的式II化合物或其药学上可接受的盐。
本发明也涉及治疗细菌感染的方法，它包括将抗菌有效量的式II化合物对被细菌感染的患者给药。
本发明也涉及式III化合物。
本发明还涉及这样一种药物组合物，它包含抗菌有效量的式III化合物或其药学上可接受的盐。
本发明也涉及治疗细菌感染的方法，它包括将抗菌有效量的式III化合物对被细菌感染的患者给药。
发明详述丙氟沙星可以用三种方法制备，这些方法已经描述在公布了的专利或专利申请中。具体来说，可以通过BOC-(L-Ala-L-Ala)氮杂二环己烷与活化喹诺酮的偶合反应来制备丙氟沙星，如1992年11月17日公告的美国专利5,164,402和1993年7月20日公告的美国专利5,229,396所述。第二种制备丙氟沙星的方法涉及BOC-L-Ala-L-Ala与被保护的氮杂二环己烷-萘啶核的反应，如1997年1月3日出版的国际专利公布号WO97/00268所述。最后，第三种制备丙氟沙星的方法涉及托氟沙星甲磺酸盐与BOC-L-Ala-L-Ala的偶合反应，如1997年3月6日出版的国际专利公布号WO97/08191。上述专利或专利申请均在此作为参考文献引用。上述专利和专利申请与本申请共同转让。
用任意上述方法制备的丙氟沙星粗产品含有少量弱极性杂质。杂质的具体种类和数量取决于所用的方法和条件。按照上述三种方法之一制备的丙氟沙星药物粗产品的HPLC色谱特征，分别描绘在

图1-3中，记录条件如上所述。具体来说，图1描绘了按照Brighty等人于1992年11月17日公告的美国专利5,164,402和1993年7月20日公告的美国专利5,229,396所述方法制备的丙氟沙星甲磺酸盐的色谱。这种原始方法中杂质的大致浓度折算为已知的低聚物浓度后，列在下表1中。图2描绘了按照1997年1月3日公开的国际专利申请WO97/00268所述方法制备的丙氟沙星甲磺酸盐的HPLC色谱。由该第二种方法产生的杂质的大致浓度折算为已知的低聚物浓度后，列在下表2中。图3描绘了按照1997年3月6日公开的国际专利申请WO97/08191所述方法制备的丙氟沙星甲磺酸盐的HPLC色谱。由该第三种方法产生的杂质的大致浓度折算为已知的低聚物浓度后，列在下表3中。如上所述，所述弱极性杂质是由它们的保留时间所定义的，条件是将样本注入惠普1100型系列高效液相色谱仪，用40％乙腈、0.05M磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.3％高氯酸(V/V)的移动相溶液洗脱，流速约为每分钟2ml，柱子为Puresil5微米C18二氧化硅HPLC柱(4.6×150mm)，注射体积为20μl，检测器为惠普1100系列二极管组检测器，检测波长为270nm。由上述条件定义的所述弱极性杂质的保留时间为约2.2分钟至约30分钟。一种特定的不需要的杂质在上述条件下的保留时间为9-12分钟(约为10.5分钟)。上述保留时间为9-12分钟的杂质具有式II结构。
该杂质占按照上述第三种方法制备的反应产物的约700ppm。杂质的绝对含量取决于所用方法和条件。经过纯化后，该杂质占反应产物的约100ppm以下，优选为50ppm以下，最优选为20ppm以下。
按照上述条件，其他杂质的保留时间为约23.0、20.1、13.6、11.7、11.0、10.9、9.8、8.4、7.6、7.1、6.2、5.5、5.0、4.8、3.9、3.6、3.1、2.8、2.5和2.1分钟。由于ppm浓度较低，对应于这些保留时间的化合物还没有进行过特征鉴别。
这些杂质可以用树脂色谱法除去，用一种极性溶剂洗脱。具体来说，将反应产物溶于少量水。然后将溶解了的粗反应产物加入到一种聚苯乙烯树脂柱中，例如水合Amberchrom CG-161聚苯乙烯树脂(TosohaasChemicals 156 Keystone Drive，Montgomeryville，PA 18936)、AmberliteXAD-4或XAD-16(Rohm and Haas)或Diaion HP-20(Mitsubishi Chemical Co.)，优选为水合Amberchrom CG-161聚苯乙烯树脂。聚苯乙烯树脂是疏水性大孔苯乙烯类聚合物珠粒型树脂，它提供了用于吸收的非极性芳族表面。本领域的普通技术人员将理解的是，可以得到不同粒径、孔径和表面积的非离子型聚合物树脂，这些参数影响了分离条件。本领域的普通技术人员也将理解的是，可以通过改变树脂参数来优化具体应用结果。粗反应产物(千克)与干树脂重量(千克)的重量比为约8至约15千克粗反应产物比约一千克干树脂。优选地，粗反应产物重量与干树脂重量之比约为10-12千克粗反应产物每千克干树脂。环境温度下，洗脱液体积(升)与粗药物物质重量(千克)之比为约1至约70升溶剂每千克粗药物物质，优选为10至40升水每千克药物物质。最优选地，在环境温度下，约25升水每千克药物物质用来洗脱纯产物。洗脱液通过柱子的流速在1-10床体积每小时范围内(即，所需洗脱液的量在一小时内充满和流空树脂床)。优选地，洗脱溶液的流速为3-5床体积每小时。
按照上述方法制备的产物基本上不含弱极性杂质，适合用作胃肠外用的组合物。用上述三种方法制备的粗丙氟沙星药物产品为原料得到的纯丙氟沙星甲磺酸盐的HPLC色谱分别描绘在图4-6中，记录条件如上所述。具体来说，图4描绘了按照Brighty等人于1992年11月17日公告的美国专利5,164,402和1993年7月20日公告的美国专利5,229,396所述方法制备的粗丙氟沙星甲磺酸盐经过树脂处理后，所得纯丙氟沙星甲磺酸盐的色谱。纯化后杂质的大致浓度折算为已知的低聚物含量后，列在下表1中。图5描绘了按照1997年1月3日公布的国际专利申请WO97/00268所述方法制备的粗丙氟沙星甲磺酸盐经过处理后，所得纯丙氟沙星甲磺酸盐的HPLC色谱。纯化后杂质的大致浓度折算为已知的低聚物含量后，列在下表2中。图6描绘了按照1997年3月6日公布的国际专利申请WO97/08191所述方法制备的粗丙氟沙星甲磺酸盐经过处理后，所得纯丙氟沙星甲磺酸盐的HPLC色谱。纯化后杂质的大致浓度折算为已知的低聚物含量后，列在下表3中。
表1
表2
表3
胃肠外用组合物比其他药物组合物更易受痕量污染物的影响。这是因为胃肠外用组合物无论是稀释的还是重组的，都是液体剂型，其质量标准易为目检确定。胃肠外用组合物的目检能够检测出低至10ppm的弱极性杂质。可见杂质的存在影响公众对产品安全性、稳定性和使用的信心。因此，从胃肠外用组合物中除去尽可能多的弱极性杂质是很重要的，因为弱极性杂质的水溶性一般较差，很可能从制剂中沉淀出来。而且，大多数工业国家要求，按照药物准许的角度考虑，胃肠外用组合物应当满足纯度和没有微粒污染的最低标准。美国的最低标准是胃肠外用组合物“基本上不含目检能够观察到的粒子”，《美国药典》R-246(1994)。美国药典(USP)没有对满足该标准的微粒状物、即杂质的最小量提供具体说明。USP提供了若干试验，列举亚可见的外来粒子，这有助于定量微粒状物质。不过，这些试验都不足以满足组合物应当“基本上不含目检能够观察到的粒子”这一标准。尽管没有一种试验可以证明组合物的纯度，不过，浊度分析是一种普遍接受的用于定量微粒状物的测量方法，见W.J.Passl等《分析员》105，512-515(1980)。根据标准浊度测量法，若比浊法浊度单元(NTU)值为0-0.45，则可以认为溶液是不含微粒状物的。本发明产物用普通浊度仪分析，如Hellige浊度仪(Hellige，Inc.877Stewart Avenue，Garden City，New York 11530)，所测浊度通常可低至0.3NTU。按照国际专利公布号WO97/08191所述方法制备的粗原料的浊度测量结果高达约1NTU。图7显示浊度与杂质浓度(相对于粗原料的低聚物ppm)之间的函数关系。本发明方法包括所有浊度测量结果小于0.5NTU的组合物。
如此纯化的产物可以配制成用于胃肠外给药(例如静脉内、肌内或皮下)的剂型，用于治疗哺乳动物、包括人的细菌感染，方法是本领域普通技术人员所熟知的或者是下述方法。一般来说，式I化合物的给药剂量为约0.5至约16mg/kg/天，优选为约4-7mg/kg/天，最优选为4.5mg/kg/天。不过，根据所治疗患者的状况，也可对剂量进行某些必要的调整。无论如何，负责给药的人员将针对个体患者确定适当剂量。
本发明的丙氟沙星甲磺酸盐可以以多种不同的剂型给药，一般来说，本发明治疗上有效的化合物在这些剂型中所含的浓度范围为约0.5重量％至约70重量％(冻干产物为100重量％)。对胃肠外给药(肌内、腹膜内、皮下和静脉内)来说，通常制成活性成分的无菌、不含热源的可注射溶液。基本上不含弱极性杂质、优选为不含式II化合物的式I化合物溶液可以在一种溶剂中制得，例如芝麻油、花生油、水或含水丙二醇。优选地，该溶液是不被缓冲的水。如果必要和液体稀释剂首先赋予了等渗性，水溶液也可以进行适当调整和缓冲。这些水溶液适用于静脉内注射。油溶液适用于动脉内、肌内和皮下注射。所有这些溶液均在无菌条件下制备，按照本领域普通技术人员熟知的标准药学工艺，这一点是容易实现的。在治疗动物的情况下，化合物可以肌内或皮下给药，剂量水平为约0.1至20mg/kg/天，优选为约0.2至约10mg/kg/天，分一次或最多3次给药。
式II化合物体外水解除去L-Ala-L-Ala二肽基后，也具有抗菌活性。该水解了的化合物具有式III结构。
式III化合物的抗菌活性可以按照本领域普通技术人员熟知的方法测定，例如E.Steers等《抗生素与化疗》9，307(1959)所述。按照上述方法测定时，式III化合物对化脓链球菌的最低抑制浓度(MIC)为6.25μg/ml，对多数金黄色葡萄球菌菌株的MIC为12.5-25μg/ml。
式III化合物可用常规方式利用一种或几种药学上可接受的载体进行配制。因此，可以被制成用于经口、颊或直肠给药的剂型。
对口服给药来说，式III化合物的药物组合物例如可以采取片剂或胶囊的剂型，通过常规方法与下列药学上可接受的赋形剂制备，例如粘合剂(例如预凝胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或淀粉羟乙酸钠)；或润湿剂(例如月桂基硫酸钠)。片剂可以用本领域的熟知方法进行包衣。口服给药的液体制剂例如可以采取溶液、糖浆或混悬液的剂型，或者它们可以以干燥产物形式存在，使用前与水或其他适当的载体构成液体。该液体制剂可以通过常规方法，与下列药学上可接受的添加剂制备，例如悬浮剂(例如山梨糖醇糖浆、甲基纤维素或氢化食用脂)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)；不含水的载体(例如杏仁油、油性酯或乙醇)；和防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯、或山梨酸)。
对颊部给药采说，式III化合物的组合物可以采取片剂或锭剂的剂型，用常规方法制备。
式III化合物也可以被制成直肠用组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，例如含有常规的栓剂基质，例如可可脂或其他甘油酯。
用于治疗普通成年人细菌感染的口服、直肠或颊给药的式III化合物的建议剂量为约0.1至约500mg/kg/天、优选为约0.5至约50mg/kg/天的活性成分每单位剂量，例如每天可以分1至4次给药。
下列实施例举例说明本发明化合物和组合物的制备。熔点未经校正。NMR数据以百万分浓度(δ)记录，并参照来自样本溶剂(除非另有说明，为氘代二甲基亚砜)的氘阻信号。所用商品试剂不经进一步纯化。DMF指的是N，N-二甲基甲酰胺。色谱法指的是高效液相色谱法，条件是在惠普1100型系列高效液相色谱仪上，用40％乙腈、0.05M磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.3％高氯酸(V/V)的移动相溶液洗脱，流速约为每分钟2ml，柱子为Puresil5微米C18二氧化硅HPLC柱(4.6×150mm)，注射体积为20μl，检测器为惠普1100系列二极管组检测器，检测波长为270nm。HPLC柱在环境温度下使用。室温或环境温度指的是20-25℃。为了方便和使产率最高，所有不含水的反应均在氮气下进行。减压下的浓度指使用旋转蒸发器。
实施例1丙氟沙星甲磺酸盐的成批树脂处理将除了其他弱极性杂质以外还含有700ppm低聚物杂质的丙氟沙星甲磺酸盐(50g)溶于0.05％甲磺酸水溶液(714ml)，然后加入MitsubishiDiacon HP-20疏水性树脂(50g)。在黑暗中搅拌树脂悬液24小时后，悬液过滤，溶液用高效液相色谱法(HPLC)分析(HPLC条件如上所述)。过滤了的溶液含有19ppm低聚物杂质，丙氟沙星甲磺酸盐的收率为80％。低聚物具有下列NMR (1NMR DMSO d6)δ9.98(d，1H)；8.79(s，1H)；8.51(s，1H)，8.45(d，1H)，8.16(d 1H)，8.03(d 1H)，7.92(d1H)，7.76(m 2H)，7.61(m 2H)，7.33(m 2H)，4.18(q 1H)，3.77(q 1H)，3.60(m 8H)，2.54(s 1H)，2.34(s 1H)，2.27(s 3H)，1.92(b.s.2H)，1.72(b.s.2H)，1.28(d 3H)，1.17(d 3H).
实施例2丙氟沙星甲磺酸盐的树脂柱处理在环境温度下，将丙氟沙星甲磺酸盐溶于10至40升水每千克药物物质。溶液过滤，然后通过含有水合Amberchrom CG-161聚苯乙烯树脂的柱子(大约10-12kg粗反应产物每千克干树脂)(3-5床体积每小时)。柱子用水洗涤(3L/kg粗反应产物)，然后合并洗脱液和洗液。经过处理的丙氟沙星甲磺酸盐溶液用HPLC分析。经过聚苯乙烯树脂柱处理，使式II杂质含量从500ppm减小到30ppm以下，以药物物质计。另外，药物从树脂中的回收产率为95％。
实施例3两性离子的分离向含有用树脂处理过的丙氟沙星甲磺酸盐(10g)(由实施例1或2制备)、去离子水(154ml)和乙醇(31ml)的溶液中滴加10％苛性剂水溶液，中和至pH为6.5-7.5。将混悬液在24℃下粒化30分钟后，过滤。所过滤的固体用乙醇(30ml)冲洗后，两性离子在40℃真空下干燥大约16小时。回收得到丙氟沙星(800g)，产率为95％，为白色梯形晶体。
实施例4丙氟沙星甲磺酸盐的生成将丙氟沙星两性离子(湿块重25g)湿块或干燥产物与10％乙醇水溶液(242ml)混合，然后向浆液中加入甲磺酸(1.9ml)，调节pH为3.5-4.5。反应混合物然后加热回流，过滤，然后在大气压下浓缩至约原始体积的一半。溶液然后冷却至0-5℃，所得固体粒化1小时。固体过滤并用乙醇(39ml)洗涤后，将丙氟沙星甲磺酸盐在40℃下干燥24小时。分离得到适用于胃肠外制剂的丙氟沙星甲磺酸盐(17.7g)，产率为90％。
实施例5小瓶装的胃肠外用组合物将丙氟沙星甲磺酸盐(314.46mg，按照实施例4制备)溶于少量符合美国药典标准的注射用水(WFI)。用下列溶液将所得溶液的pH调至4符合美国国家药品集标准(NF)的盐酸在注射用水中的1％重量/重量(w/w)溶液、和/或符合美国国家药品集标准的氢氧化钠在注射用水中的1％重量/重量(w/w)溶液，并稀释至浓度为7.86mg/ml。所得溶液(40.12g)过滤，装入40ml小瓶中，用塞子基住。密封的小瓶在115℃高压灭菌器中灭菌15分钟。
实施例6安瓿装的胃肠外用组合物将丙氟沙星甲磺酸盐(314.4mg，按照实施例4制备)溶于少量符合美国药典标准的注射用水(WFI)。用下列溶液将所得溶液的pH调至4符合美国国家药品集标准(NF)的盐酸在注射用水中的1％重量/重量(w/w)溶液、和/或符合美国国家药品集标准的氢氧化钠在注射用水中的1％重量/重量(w/w)溶液，并稀释至浓度为7.86mg/ml。所得溶液(40.12g)过滤，装入40ml安瓿中，密封。密封的安瓿在115℃高压灭菌器中灭菌15分钟。
实施例7冻干物将丙氟沙星甲磺酸盐(314.46mg，按照实施例4制备)和乳糖(500mg，美国国家药品集)溶于足量符合美国药典标准的注射用水，得到最终重量为10000mg。所得溶液过滤，装入20ml小瓶中。将该小瓶在0.1大气压的真空下冻干24小时，然后用塞子塞住小瓶密封。密封的小瓶在115℃高压灭菌器中灭菌15分钟。
实施例8小瓶装的等渗胃肠外用组合物将葡萄糖(500mg，美国药典)和丙氟沙星甲磺酸盐(314.46mg，按照实施例4制备)溶于少量注射用水(美国药典)，用下列溶液调pH为4盐酸(美国国家药品集)在注射用水中的1％(w/w)溶液、和/或氢氧化钠在注射用水(美国药典)中的1％(w/w)溶液，并稀释至浓度为3.14mg/ml。所得溶液(101.7g)过滤，装入100ml小瓶中，用塞子塞住。密封的小瓶在115℃高压灭菌器中灭菌15分钟。
实施例9安瓿装的等渗胃肠外组合物将葡萄糖(500mg，美国药典)和丙氟沙星甲磺酸盐(314.4mg，按照实施例4制备)溶于少量注射用水(美国药典)，用下列溶液调pH为4盐酸(美国国家药品集)在注射用水中的1％(w/w)溶液、和/或氢氧化钠在注射用水(美国药典)中的1％(w/w)溶液，并稀释至浓度为3.14mg/ml。所得溶液(101.7g)过滤，装入100ml安瓿中，密封。密封的安瓿在115℃高压灭菌器中灭菌15分钟。
实施例10L-丙氨酰-N-[3-[6-[[[3-[6-羧基-8-(2，4-二氟苯基)-3-氟-5，8-二氢-5-氧-1，8-萘啶-2-基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基]氨基]羰基]-8-(2，4-二氟苯基)-3-氟-5，8-二氢-5-氧-1，8-萘啶-2-基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基]-L-丙氨酰胺，甲磺酸盐将250ml单颈圆底烧瓶装上回流冷凝器和磁搅拌棒。净化烧瓶，然后使其保持在干燥氮气下。向该烧瓶中加入(1α，5α，6α)-7-(6-氨基-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1-(2，4-二氟苯基)-6-氟-1，4-二氢-4-氧-1，8-萘啶-3-羧酸乙酯(2.50g，5.62mmol)(按照国际专利公布号WO97/00268所述方法制备)、(1α，5α，6α)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-丙氨酰-N-[3-[8-(2，4-二氟苯基)-6-羧基-3-氟-5，8-二氢-5-氧-1，8-萘啶-2-基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-6-基]-L-丙氨酰胺(3.37g，5.11mmol)(按照国际专利公布号WO97/08191所述方法制备)和100ml二氯甲烷，得到白色浆液。向反应混合物中加入4-二甲氨基吡啶(0.37g，3.07mmol)和溴-三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(2.86g，6.14mmol)后，历时30分钟缓慢加入1.8ml二异丙基乙胺(10.2mmol)。反应混合物在25-30℃下搅拌过夜，然后用薄层色谱法(Merck Kieselgel60 F254二氧化硅板(5×10cm)，洗脱液为氢氧化铵/甲醇/二氯甲烷(1∶10∶90))确认反应完全。稠浆液过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤(2×20ml)，然后在25-30℃真空下干燥，得到4.63g(83％产率)去保护的中间体，是式II化合物前体。
1H NMR(CDCl3)δ8.58(s，1H)，8.35(s，1H)，8.02(d，J＝12.7Hz，1H)，7.96(d，J＝12.5Hz，1H)，7.33(m，2)，7.05(m，6H)，6.70(m，1H)，5.24(m，1H)，4.39(q，J＝7.26Hz，1H)，4.33(q，J＝7.26Hz，2H)，4.03(q，J＝1.7Hz，1H)，3.87(m，4H)，3.55(m，4H)，2.66(s，1H)，2.40(s，1H)，1.87(m，4H)，1.41(s，9H)，and 1.35(m，9H)；FABMSm/z 1086(MH+).
向去保护的中间体(4.63g，4.28mmol)在135ml 1-甲基-2-吡咯烷酮中的混悬液中加入甲磺酸(1.4ml)和水(3.1ml)。反应混合物在80-85℃下加热15分钟后形成溶液，额外在80-85℃下加热48-58小时后则基本上反应完全。溶液冷却至室温，缓慢加入270ml二氯甲烷。所得浆液在室温下搅拌2天，然后过滤。固体在减压下干燥，得到4.0g粗产物。颗粒状固体用研钵和研棒研磨，然后与160ml二氯甲烷制浆。浆液在室温下搅拌24小时后，固体过滤，然后风干，得到式II化合物的甲磺酸盐(3.20g，75％产率)。
1H NMR(DMSO-d6)δ9.98(d，1H)，8.79(s，1H)，8.51(s，1H)，8.45(d，1H)，8.16(d，1H)，8.03(d，J＝12.6Hz，1H)，7.92(d，J＝12.9Hz，1H)，7.76(m，2H)，7.61(m，2H)，7.33(m，2H)，4.18(q，J＝6.85Hz，1H)，3.77(q，J＝7.06Hz，1H)，3.60(m，8H)，2.54(s，1H)，2.34(s，1H)，2.27(s，3H)，1.92(s，2H)，1.72(s，2H)，1.28(d，J＝6.85Hz，3H)，and 1.17(d，J＝7.06Hz，3H)；FABMSm/z 957(M-CH3SO3H).
实施例11(1α，5α，6α)-7-(6-[7-(6-氨基-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1-(2，4-二氟苯基)-6-氟-4-氧-1，4-二氢-1，8-萘啶-3-甲酰氨基]-(1α，5α，6α)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1-(2，4-二氟苯基)-6-氟-4-氧-1，4-二氢-1，8-萘啶-3-羧酸，甲磺酸盐向装有回流冷凝器、磁搅拌棒和氮气入口的20ml圆底烧瓶中加入(1α，5α，6α)-1-(2，4-二氟苯基)-7-[6-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-6-氟-1，4-二氢-4-氧-1，8-萘啶-3-羧酸(232mg，0.45mmol)(按照美国专利5,164,402所述方法制备)、三乙胺(1.14g，11.3mmol)、2.0ml的1-丙烷磷酸环酐(1.43g，4.50mmol)在乙酸乙酯中的2.0ml 50％(w/w)溶液和10ml四氢呋喃(THF)。所得淡黄色混悬液保持在惰性惰性氮气下。在另一只装有磁搅拌棒和压力均衡加液漏斗的烧瓶中，制备(1α，5α，6α)-7-(6-氨基-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1-(2，4-二氟苯基)-6-氟-1，4-二氢-4-氧-1，8-萘啶-3-羧酸乙酯(200mg，0.45mmol)(按照国际专利公布号WO97/00268所述方法制备)在5ml THF中的混悬液。向加液漏斗中倾入含有三乙胺的黄色混悬液，然后历时20分钟缓慢加入到含有(1α，5α，6α)-7-(6-氨基-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基)-1-(2，4-二氟苯基)-6-氟-1，4-二氢-4-氧-1，8-萘啶-3-羧酸乙酯的烧瓶中。混合物在室温下搅拌6小时，用薄层色谱法(Merck Kieselgel 60 F254二氧化硅板(5×10cm)，洗脱液为甲醇/二氯甲烷(1∶9))确认反应完全。将黄色混悬液倾入70ml水中，用2N盐酸调pH为3.0。水溶液用70ml二氯甲烷萃取，二氯甲烷溶液然后用水(70ml)洗涤。在减压下除去二氯甲烷，得到粗固体(449mg)，用6ml乙醇研制6小时。浆液过滤，固体用2ml乙醇洗涤，然后在45℃真空下干燥18小时，得到304mg(72％产率)式III化合物的二保护中间体，为白色晶状固体。
Mp 248-251℃；1H NMR(CDCl3)δ10.0(d，2H)，8.60(s，1H)，8.35(s，1H)，8.05(d，1H)，7.96(d，1H)，7.33(m，2)，7.05(m，4H)，4.70(m，1H)，4.36(q，2H)，3.92(m，3H)，3.05(m，3H)，2.68(s，1H)，2.23(s，1H)，1.86(m，2H)，1.77(m，2H)1.59(s，9H)，and 1.38(t，3H)；FABMSm/z 943(M+).
向二保护的中间体(240mg，0.25mmol)在7ml 1-甲基-2-吡咯烷酮中的混悬液中加入甲磺酸(0.07ml)和水(0.16ml)。反应混合物在80-85℃下加热50-58小时。溶液然后冷却至室温，缓慢加入14ml二氯甲烷。所得悬液在室温下搅拌2天，然后过滤。固体在减压下干燥，得到110mg粗产物。粗固体用3ml二氯甲烷/甲醇(1∶1)研制4小时，然后过滤。固体在45℃真空下干燥，得到式III化合物的甲磺酸盐(105mg，45％产率)。熔点大于230℃；在三氟乙酸中记录的1H NMR显示，不存在BOC和乙基酯保护基团，其结构与式III化合物一致；FABMSm/z 815(M-CH3SO3H)。
权利要求
1.纯化式I化合物的方法，
该方法包括用一种疏水性树脂处理含有一定量所述式I化合物和弱极性杂质的不纯反应产物。
2.根据权利要求1的方法，其中所述弱极性杂质的保留时间为约2.1至约30分钟。
3.根据权利要求1的方法，其中所述弱极性杂质的保留时间为约9至约12分钟。
4.根据权利要求1的方法，其中所述弱极性杂质之一具有式II结构。
5.根据权利要求1的方法，其中处理后所述杂质的含量相对于纯产物总重的约60ppm以下。
6.根据权利要求1的方法，其中处理后所述杂质的含量相对于纯产物总重的约20ppm以下。
7.根据权利要求1的方法，其中所述疏水性树脂是一种交联的聚苯乙烯树脂。
8.根据权利要求1的方法，其中所述疏水性树脂是Diaion HP-20或Amberchrom CG-161。
9.根据权利要求3的方法，其中所述疏水性树脂是Diaion HP-20或Amberchrom CG-161。
10.基本上不含弱极性杂质的式I化合物。
11.根据权利要求10的化合物，其中所述式I化合物基本上不含式II化合物。
12.胃肠外用的组合物，包含抗菌有效量的基本上不含弱极性杂质的式I化合物或其药学上可接受的盐和一种药学上可接受的载体。
13.胃肠外用的组合物，包含抗菌有效量的基本上不含式II化合物的式I化合物或其药学上可接受的盐和一种药学上可接受的载体。
14.根据权利要求10的胃肠外用的组合物，包含式I化合物和水。
15.根据权利要求10的胃肠外用的组合物，其中式I化合物是冻干产物。
16.根据权利要求11的胃肠外用的组合物，其中式I化合物在单位剂量容器中包含约10mg至约700mg化合物。
17.根据权利要求11的胃肠外用的组合物，其中式I化合物在单位剂量容器中包含约275mg至约500mg化合物。
18.根据权利要求10的胃肠外用的组合物，其中式I化合物在单位剂量容器中包含约10mg至约700mg化合物。
19.根据权利要求10的胃肠外用的组合物，其中式I化合物在单位剂量容器中包含约275mg至约500mg化合物。
20.式II化合物。
21.药物组合物，包含抗菌有效量的根据权利要求20的化合物或其药学上可接受的盐。
22.治疗细菌感染的方法，包括将抗菌有效量的根据权利要求20的化合物对细菌感染患者给药。
23.式III化合物。
24.药物组合物，包含抗菌有效量的根据权利要求23的化合物或其药学上可接受的盐。
25.治疗细菌感染的方法，包括将抗菌有效量的根据权利要求23的化合物对细菌感染患者给药。
全文摘要
本发明涉及基本上不含弱极性杂质的丙氟沙星甲磺酸盐、丙氟沙星甲磺酸盐的胃肠外用的组合物和纯化丙氟沙星甲磺酸盐的方法。
文档编号C07K5/062GK1265671SQ98807829
公开日2000年9月6日 申请日期1998年7月23日 优先权日1997年8月1日
发明者罗伯特·M·吉恩, 约翰·F·兰伯特, 萨布拉玛尼恩·S·古汉, 斯坦利·W·瓦林斯基 申请人:辉瑞产品公司