精细粒度的真菌提取物几丁质-葡聚糖的制作方法

文档序号:3671311阅读:789来源:国知局

专利名称::精细粒度的真菌提取物几丁质-葡聚糖的制作方法
技术领域
:本发明涉及具有4青细的可控粒度(颗粒尺寸)、特别是具有相^细粒度的4分末形式的几丁质-葡聚糖共聚物,其尤其可以用于化妆品领域中,本发明特别涉及几丁质/P-葡聚糖共聚物在预防或减少皮肤老化4正兆中的应用。本发明还涉及多孔材料形式的这种聚合物,特别是其在组织工禾呈学中的应用。
背景技术
:已知某些多糖能够发挥相对于表皮上层的水合作用,或者甚至使得可以预防或减少皮肤老化的某些征兆。具体而言,基于p-葡聚糖、裂褶多糖(施佐菲兰,schizophyllan)、木葡聚辟唐(xyloglucan)、透明质酸、半乳甘露聚^f唐和几丁质的成分通常用于化妆护理产品中。这些多糖不同于a-羟酸型成分(其通过4吏表皮脱落而发挥作用),其促进细胞迅速再生,但是可能损伤表皮下层。大多数抗老化成分,于皮l夫细l包或月交原的再生起作用。目前,月交原再生的才几理在与化妆产品方面的立法的相容性上存在着问题,对于化妆产品,经皮渗透是不能要求保护的。治疗皮肤老化的征兆超越了皱紋和细胞再生的概念,而今4艮难找到以全面且确实有效的方式解决该问题的可用的活性剂。6在具有"抗老化"功效的多糖中,源于酵母菌、真菌、谷物或植物的P-葡聚糖是一类由通过P-型键接彼此连接的D-葡萄糖单元组成的纯多糖,所连接的碳根据提取它们的物种而不同,具有或多或少的支链结详勾源于酵母菌西良酒酵母(Sacc/^raw^cescere"Ww'ae)的p葡聚冲唐为卩(1,3)(1,6);源于真菌裂命習菌(5"c/^o//^〃wwicommw"e)的裂褶多糖主《连为p(1,3)(在p(l,6)位分支有短链);源于谷物如燕麦、大麦或小麦的|3-葡聚糖为卩(1,4);源于植物的木葡聚并唐主链为p(1,4)(在p(l,6)位分支有短链)。p-葡聚糖在含水介质中的溶解性耳又决于其结构、大分子l连的长度以及4连的三维构造。在化妆品工业中p-葡聚;f唐由于其新生(再生恢复,revitalize)和抗炎作用、UV辐射防护作用、纟爰和、免疫刺^L、抗老4匕、抗皱紋和抗粉刺作用等(根据所考虑的分子不同,发挥的功效不同)而被认为是有益的,这些作用可以导致皮肤老化或粉刺的症状改善。在化妆品中所需的P-葡聚糖一般是水溶性的,使得它们能够被并入到乳液的水相中,这限制了对于能够用于化妆品中的分子的选择。实际上,不溶性的p-葡聚糖具有非常有利的化妆和皮肤科特性,但是因为它们是坚硬、刺激性等的颗粒形式而不能被并入到化妆制剂中。很少有能够用于化妆品中的水溶性p-葡聚糖以富含p-葡聚糖的提取物或溶液形式4是供。此外,几丁质水溶性衍生物(主要是羧甲基几丁质和壳聚糖)的化妆应用是已知的,例如用于护理霜中,作为成膜剂、<呆湿剂、改善成脂肪团的皮肤外观的制剂,例如,或者还用于微球的制备。然而,用于化妆应用的几丁质、及其书于生物在工业上是乂人甲壳类动物-奸、蟹-的壳中获得的,曱壳类动物是造成过敏反应的主要起因之一。而且,对包含几丁质衍生物的霜剂过每文的病例已经公开(CleenewerckMB,MartinP,LaurentD.Allergiccontactdermatitisduetoamoisturizingbodycreamwithchitin.ContactDermatitis31,196,1994;PereiraF,PereiraC,LacerdaMH.Contactdermatitisduetoacreamcontainingchitinandacarbitol.ContactDermatitis38,290,1998)。就本发明发明人所知,由曱壳类动物的壳开始或由微藻(microscopicalgae)开始而获得的几丁质(由N-乙酰基-D-葡糖胺单元构成的聚合物),还未知能够预防或减少皮"夫老化的岁文应。壳聚糖是衍生于几丁质的聚合物,带有阳离子电荷,由D-葡糖胺ZN-乙酰基-D-葡糖胺单元构成,其衍生物(琥珀酰胺)及其盐(例如,乳酸盐、抗坏血酸盐、羟乙酸盐、琥珀酸盐),都因为其显著的成膜性、水合性、抗菌性和抗老化特性、改进脂肪团外观的特性、以及改进制剂触感的特性,而用于化妆品工业中。本发明发明人已经证实,从真菌中分离和纯化由两种类型的链几丁质[聚(N-乙酰基-D-葡糖胺)]和P-葡聚糖[聚(D-葡萄糖)]构成的共聚物是可能的。某些真菌如黑曲霉(As^e《z7/Rsm'gw)(子嚢菌类)菌丝体的细胞壁由三维网络中相互共^f介连接的两种多糖构成,称之为"几丁质-葡聚糖"。现在,这种几丁质-葡聚糖共聚物能够借助于连续步骤的工艺、以高纯度和可获利的方式而有利地生产,如专利EP1483299B1(US2005/130273Al或WO03/068824Al)所描述的。所获得的精纟田白色无味的粉末中,几丁质-葡聚糖共聚物含量大于90%。这种粉末不溶于任何溶剂,无论是含水溶剂还是有机溶剂,经推理这损害了其在化妆品工业中的应用。各种应用描述于专利申i青FR0507066和FR0651415中。基于含几丁质和p-葡聚^唐的真菌l是取物的组合物的医学应用,尤其是作为伤口愈合活性剂,先前已经进行了描述。然而,这些各种应用(例如,以^:料(dressing)形式)经推理并不适用于化妆制剂。
发明内容本发明的主要目的是解决以适用于化妆应用(并且尤其是在皮肤化妆或皮月夫病学中),和/或适用于医学或药学应用,和/或适合用作人或动物的食品补充剂的形式提供几丁质-葡聚糖共聚物所构成的新的4支术问题。本发明的一个目的还是解决以悬浮液、乳液或分散体形式,尤其是能够用于化妆品领域、特别是皮肤化妆或皮肤病学领域的形式提供几丁质-葡聚糖共聚物所构成的新的技术问题。本发明的一个目的特别是才是供一种用于身体和/或面部护理,如水合(吸t]C,hydrating)、紧致(firming)、防护、抗皱(具体通过轮廓测量术(profilometry)进行的皮肤外形评价而进行描述)或抗老4匕护理的皮"夫^1妆组合物。本发明的一个目的还是通过提供一种表现为无害性、皮肤和眼睛耐受性、以及非常好的〗氐变应原性(hypoallergenicity),同时又质来解决以上4是及的^支术问题。本发明的一个目的还是优化食品补充组合物而使之能够易于口服给药,并提高生物利用率和几丁质-葡聚糖共聚物对健康的功效。本发明的一个目的还是提供一种几丁质-葡聚寿唐粉末,该几丁质-葡聚糖粉末使得能够根据所设想的用途例如皮肤化妆和皮肤病学组合物、食品补充组合物、功能性食物组合物、用于饮料处理的工艺助剂(technologicalaid)或用于医疗器才才的《且合物如伤愈产品,而调节和〗尤4b其物理〗t学性质和生物'I"生质。本发明的一个目的还是4是供一种非动物来源并具有优良纯度的天然物质,其显著特征在于通过可确保重复性和可溯性的生产工艺而获得。本发明的一个目的还是提供一种多糖类天然物质,其作为粉末和在悬浮液中是稳、定的,易于配制,与所有最常用的成分相容,而JU吏得可以制备稳定的化妆制剂,其特4正是才及佳地适用于其应用(例如与均匀度极佳的织物),且其感官质量(sensoryquality)(粘度、质地、触感)都是优异的。本发明的一个目的是提供一种化妆活性剂,用于预防或降低皮肤老化效应,以持久方式水合皮肤,赋予皮肤弹性和/或紧致皮肤,贝武予皮月夫均匀和平滑的夕卜7见,降4氐皮月夫多鳞状态(squamousstate),保护皮肤免受外界侵袭如干燥和/或重金属污染,以及使皮肤恢复其屏障功能。本发明的一个目的还是提供一种具有保水能力和相当强的粘度改性能力的化妆成分。本发明的一个目的还是提供一种能够用于例如组织工程学或细胞培养中、或者能够用作化妆品或制药工业原料的多孔材料。为了解决以上提及的技术问题,本发明发明人从人们已知晓的P-葡聚并唐型物质在化妆品工业中的作用开始。然而,在获得的4分末(例如才艮据PCT专利申请WO03068824描述的方法)为不溶于水相或有才几相的范围内,任何基于几丁质-葡聚糖共聚物的组合物经推理则不可能是可利用的。然而本发明发明人已经意想不到地发现,通过使用具有极细且可控粒度的几丁质-葡聚糖共聚物粉末,可以解决以上提及的技术问题。这种解决方案完全是意想不到的,因为本领域的技术人员认为这种共聚物的精细研磨颗粒也是不可溶的,并且所述共聚物将与不溶性(3-葡聚糖形式相同,即为坚硬且对皮肤产生刺激作用的颗粒形式。首先,本发明发明人意想不到地可以制备几丁质-葡聚糖的稳定分散体和几丁质-葡聚糖的稳定悬浮液(尤其是在水中而无添加剂),其次,能够制备特别包含高浓度几丁质-葡聚糖的稳定乳液。对于术语"几丁质-葡聚糖",本发明发明人意指根据本发明的几丁质-葡聚糖共聚物。具体而言,本发明涉及一种主要包含几丁质-葡聚糖共聚物的真菌源多糖,所述多糖具有精细的粒度。本发明还涉及包含至少一种4青细研磨的几丁质-葡聚斗唐共聚物的真菌提取物的精细研磨粉末。有利地,具有精细粒度的颗粒由以重量计至少70%粒度小于50(H鼓米(pm)、优选小于355孩t米(pm)的颗4立构成。同样优选以重量计至少50%、优选60%的颗粒的粒度小于250樣吏米(|um)、并优选小于150孩i米(pm)。短语"小于X微米的粒度"意指所具有的粒度使得它们能够通过筛孔尺寸为X孩i米的筛网的颗粒。一个实施方式使得可以获得以重量计至少50%的颗粒,其粒度小于65目(约149pm)、优选小于100目(约230pm)。根据需要,通过选择(尤其是在筛分(screening)或分级(classification)后)具有特定粒度的部分(fraction),有利地控制粒度。在实施例中根据其通性提到的部分也以引用方式包含于本文中,尤其是关于共聚物的类型,其可以是本发明中描述的那些中的任何之一。有利地,几丁质-葡聚糖共聚物所包含的几丁质N-乙酰基-D画葡糖胺单元与P-葡聚糖的D-葡萄糖单元的比率为在95:5和15:85(m/m)之间。有利地,真菌来源的多糖包含以相对于真菌来源提取物总质量的质量计大于70%、优选大于85%的几丁质-葡聚糖共聚物。有利地,D-葡萄糖单元之间的键接主要是J3(l,3)型。优选真菌提取物源于子嚢菌类真菌(尤其是黑曲霉)、和/或担子菌类真菌(尤其是香菇(冬菇)和/或双孢蘑菇)的菌丝体。有利地,几丁质-葡聚糖共聚物几丁质部分的至少85。/。是N-乙酰基-D-葡糖胺单元,而至多15。/。是D-葡糖胺单元。具有微米粒度的真菌提取物优选是几丁质-葡聚糖共聚物的水解产物。有利地,几丁质与P-葡聚糖的比率为在90:10和30:70(m/m)之间。本发明还涉及包含才艮据以上限定的4青细粒度的多糖或真菌揭:取物的组合物,尤其是悬浮液、乳液或分散体形式的组合物。有利地,该组合物是化妆组合物,特别是皮力夫化妆或皮力夫病学组合物。优选地,按总组合物的重量计,具有精细粒度的多糖或真菌才是耳又物使用浓度为0.01%10%,且优选0.05%5%。妆或皮月夫病学护理中的应用,其特4正在于该护理选自身体或面部护理、尤其是以持久和显著方式改进皮肤水合作用、尤其是长期内提高皮肤的保水能力、改进皮肤屏障功能、发挥抗老化效应、改善皮肤外观、改善皮肤均勻性(尤其是通过使其更平滑、更均匀、更柔软、更健康)、改进皮肤紧致性和弹性、以及促进表皮对真皮的附着所构成的组中。短语"具有抗老化功效的产品"意指使得能够尤其是通过改进皮肤的保护和/或皮肤的防护活性、减少外来侵袭如辐射、空气干燥、寒冷、污染(尤其是重金属造成的污染)或释放自由基的侵袭、尤其是由UV辐射造成的4曼袭的影响,以及通过减少皮力夫皱紋而延i爰皮月夫老化的产品或组合物。本发明还涉及以上限定的组合物,其用于在减小铍故深度、或者延《爰或预防皱紋出现。化妆组合物有利地包含0.1%2%具有精细粒度的几丁质-葡聚糖共聚物。本发明还涉及以上限定的组合物作为食品补充剂组合物的应用,其优选用于获得选自抗氧化作用、降血液胆固醇或降血脂作用、对免疫系统的刺激作用、降血糖作用(尤其在糖尿病的情况下)构成的组中的作用,以及在于预防和/或治疗和/或4氐抗选自血脂异常症、动月永粥才羊石更4匕、月巴胖症、月巴胖才目关的疾病、心血管疾病、4戈i射综合征、糖尿病和高尿酸血症构成的组的病理学的作用。优选在这种食物补充组合物中,具有精细粒度的真菌l是耳又物共聚物用作活性成分。本发明还涉及包含如上所限定的至少一种真菌源共聚物或拔—取物作为活性成分的药物组合物。本发明尤其涉及由根据本发明的真菌源多糖或提取物获得的多孔材4牛在组织工程学中的应用,因此也涉及由^^艮据本发明的真菌源多糖或提取物获得的多孔材料。这种多孔材料具体而言可以通过冻干法获得。本发明还涉及至少一种如上限定的真菌源的多糖或4是耳又物,作为组合物、尤其是化妆组合物、优选皮肤病学或皮肤化妆组合物的贝武形剂的应用。本发明还涉及用于制备具有精细粒度的真菌提取物的方法,其包括a)从真菌生物质(biomass)中提取和纯化几丁质-葡聚糖共聚物,这种真菌提取物的所述共聚物在水中或有机溶剂中是不可溶的,b)乂人干燥或;容剂化的几丁质-葡聚糖开始,对颗冲立进行过滤、干燥、研磨以及分级,这些步骤同时或单独进行而与它们的次序无关,使得可以获得微米颗粒,其中以重量计至少70%、优选75%、更优选80%的颗粒具有小于500孩i米(pm)、优选小于355樣i米(fim)的粒度。优选地,用于制备具有精细粒度的真菌提取物的方法中的步骤b)使得能够获得以所获得的总颗粒重量计至少50%、优选60%、且更优选70%的粒度小于250孩£米、优选小于125^im的颗粒。因此在步骤b)中可以同时进行过滤、干燥和研磨步骤,然后进行单独的分级步骤。具体实施方式根据本发明的组合物使得可以获得具有愉悦的柔软触感、尤其是在化妆品领域中特别有利的制剂。具体而言,所获得的乳液或悬浮液的稳定性、质地、颜色、触感、粘度和流变才及佳地适用于生产面部或身体护理霜,包4舌婴儿的护理霜。最后,几丁质-葡聚糖共聚物优良的皮肤耐受性(人体体外和体内)和眼睛耐受性(体夕卜)以及低每文感测—验(人体体内,根据Maibach-Marzulli禾呈序)已经;得到i正实。本发明发明人提出的溶液全部是更加有利的,因为来源于真菌源,尤其但非排他地子嚢菌类的纯化的几丁质-葡聚糖共聚物可以作为工业副产品大量获得。特别优选^f吏用黑曲霉的菌丝体作为真菌源。根据本发明,从子嚢菌类真菌菌丝体提取的几丁质-葡聚糖共聚物,尽管是水不溶性的,但是能够容易地进行配制,尤其是以化妆组合物形式配制。本发明发明人已经意想不到地发现,当来源于真菌源的几丁质-葡聚糖化合物是具有精细粒度的粉末形式时,其完全适用于制备使得可以解决以上提及的技术问题的组合物。才艮才居PCT专矛J申i青WO03/068824或法国专矛J申ifrFR0507066中描述的方法而有利地获得的几丁质-葡聚糖粉末,以可获得精细的可控粒度的方式、尤其是通过过滤、研磨、干燥和/或颗粒分级方法进行制备。当需要精细粒度时,选择用于获得以重量计至少70%、优选75%、更优选80%的颗粒具有小于500孩t米(pm)、优选小于355微米(,)粒度的颗粒的方法。有利地,颗粒由以重量计至少50%、优选60%、更优选70%粒度小于25(H鼓米(fim)、优选小于150孩i米(pm)的颗粒组成。优选用于制备几丁质-葡聚糖粉末的方法以这样的方式实施,使得主要获得粒度小于250^im的颗粒。有利地,根据本发明的颗粒基本上由粒度小于125itim或者甚至小于90|iim的颗粒组成,而尤其是在分级之后获得从而获得專交窄分布。可以通过本领域^支术人员已知的任何一种技术实施制备该4分末的方法。选才^f吏4寻可以尽可能好地并且以明确方式控制冲立度的4支术,是有利的。术语"粒度"意指几丁质-葡聚糖粉末大致为球形的形状、粒度和粒度分布。表征了粉末化成分的该参数,首先影响了其能够进行配制的方式,即其能够被引入到固体或液体组合物如食品基质、化妆霜、饮食或化妆液体、或医疗或药物设备中的方式。根据所获得的粒度,尤其是根据所需的外观或最终形状,所获得的组合物将或多或少是均匀的。颗粒的粒度和粒度分布通过传统纟支术如光彩f射(例如,来自MalvernInstruments的Mastersizer2000;敫光书亍射系纟充)、4s4苗电子显微随后进行图像分析、或者在连续筛网上筛分随后进行重量测定而进行表征。有利地,本发明发明人已经意想不到地证实,通过调节粒度分布而获得小于125pm的粒度,可以获得包含几丁质-葡聚糖聚合物的均匀霜剂。这^f吏得尤其是在乳液形成后甚至以高浓度(例如2%)引入该共聚物,而实现完全均匀的质地成为可能,其感观质量(粘度、质地、触感)都很优良。颗粒中具有最小粒度的部分因此有利地被使用。当粒度4交大时,该成分就不再冲是供这些感观质量,当霜剂铺展时产品形成明显的颗^立(grain),和/或制剂随时间变4b而不3t、定,这在局部组合物的情况下、尤其是在护理霜中是不期望的。有利地,具有精细可控粒度的粉末能够用于制备"功能性"食品如饼干、软糖、糖果产品、食疗棒(dieteticbar)、面包、々欠品、黄油、人造黄油等。有利地,具有精细粒度的粉末能够以含水分散体形式使用,可以是医疗i殳备3口伤愈和/或止血系统的组合物部分。意想不到i也,具有精细粒度的几丁质-葡聚糖,通过本领域技术人员众所周知的致孔寸支术(porogenictechnique),能够以具有良好才几械稳、定性和大于80%、优选大于90%孔隙率的内聚性多孔材料形式进4亍使用。多孔材料能够起始于仅含几丁质-葡聚糖的软膏形式的浓缩含水分散体、或起始于几丁质-葡聚糖与其他不溶性可分散化合物的混合物的分散体、或起始于几丁质-葡聚糖在溶解有聚合物或另一种物质的水相中的分散体而进行制备。所获得物质的孔隙率测定和机械性能取决于制剂参数,尤其是几丁质-葡聚糖的粒度、混合物的组成、起始分散体的浓度,以及分散体实施参数。为了制备皮肤化妆和皮肤病学产品,具有精细粒度的几丁质-葡聚糖,粒度优选小于125pm,有利地对水相和油相中存在的组分均具有良好的亲和性,这能够促进并入工艺。具有精细粒度的几丁质-葡聚糖粉末能够根据各种方法进行工业生产,取决于所需要的粒度,从干粉形式的几丁质-葡聚糖开始,或从含水或有机介质中溶解的几丁质-葡聚糖开始,否则从并入到更复杂介质如水包油或油包水乳液中的几丁质-葡聚糖开始。对于"制备具有精细粒度粉末的方法",本发明发明人通过"用于制备具有精细粒度的粉末的方法",意指适用于固体、溶剂化固体和溶剂化复杂介质如乳液、胶状悬浮液等的任何过滤、干燥、研磨、均质化、粒度减小和颗粒分级的固-液和固-固过程。在以溶剂化几丁质-葡聚糖开始时,可以使用各种工业分离方法,例如采用锥形干燥器和Ntitsche过滤器、纟反式过滤器、带式过滤器、流化床干燥器和喷雾i殳备,以实现几丁质-葡聚糖完全或部分干火喿。这些方法可以直4妄施用于:;容剂^几丁质-葡聚#唐,或者在对溶剂化几丁质-葡聚糖研磨后施用。为获得具有4青细可控粒度的4分末,可向完全或部分干燥的产品、或溶剂化产品,施用各种工业破碎方法(fragmentationprocess),例如厄刀式研磨、4垂式研磨、4昆式研磨、切刀研磨、刀片研磨、盘式研磨和反向喷气研磨方法,以及石争裂法(disintegratingprocess),例如超声波法和樣史斗分4b法。能够4吏用用于分离粉末的各种工业方法以减小粒度分布宽度或选出特定的粒度,例如采用动态和静态筛分和分级i殳备。因此,本发明涉及用于获得水不可溶性或在有机溶剂中不可溶的、且具有精细粒度的真菌源几丁质-葡聚糖粉末的方法,用于制备在水溶液或有机溶液中稳定的几丁质-葡聚糖共聚物,尤其是用于制备悬浮液或乳液。用于获得具有精细粒度的粉末的步骤在乳液、悬浮液或分散体制备之前或之后实施。该悬浮液或分散体或乳液包含通常用于化妆品领域中的物质,有利地^使得可以配制化妆组合物。化妆组合物相对于总组合物的重量通常包含以重量计0.01%10%的^^艮据本发明的组合物,具体而言是以重量计0.01%~10%的悬浮液或乳液形式的根据本发明的组合物。通过"几丁质-葡聚糖共聚物的衍生物",本发明发明人意指根据物理、化学和酶促方法,通过物理或化学改造,起始于几丁质-葡聚糖而获得的所有化合物。本发明特别涉及包含含p-葡聚糖链的聚合物的真菌源多糖,所述p-葡聚糖链主要包含经由(1,3)位键接的D-葡萄糖单元连接,优选相对于(3-葡聚糖总质量百分数包含以质量计至少80。/。的p-葡聚糖链,其中D-葡萄糖键接处于(1,3)位置,尤其是用于化妆制剂的生产。几丁质-葡聚糖共聚物根据KitoZymeS.A.在2005年7月4日提交的PCT专利申请WO03/068824和法国专利申请FR0507066描述的方法能够有利地获得。该方法具体描述在申请FR0507066的第18页14^亍以及以下列等等。黑曲霉优选用作该方法中的真菌源。D画葡萄糖单元4建4妻和a(1,6)隱几丁质和|3-葡聚#唐链之间的比例决定于真菌和菌4朱。例如,本发明发明人已经i正明,黑曲霉菌丝体包含的几丁质-葡聚糖共聚物中几丁质与P-葡聚糖的质量比为在30:70和60:40之间,D-葡萄糖单元键>接主要是P(1,3)型。共聚物一般是白色粉末形式。无论温度和pH如何,都基本不溶于水和有才几溶剂中。这种共聚物是吸湿性的,一4殳能够在水中吸收约IO倍其质量(的水)。该几丁质-葡聚^f唐粉末例如能够通过工业度的产品。本发明涉及一种有利地进行纯化的真菌源、优选子嚢菌类真菌如黑曲霉的菌丝体的^是耳又物。纯化的揭JF又物的水解产物,即^f氐分子量的几丁质和P-葡聚糖共聚物,也是本发明的一部分。本发明也涵盖,在术语"几丁质-葡聚糖共聚物"或"几丁质-葡聚糖"范围内的,起始于几丁质-葡聚糖,根据物理、化学和酶促方法,通过物理或化学改造而获得的所有化合物,所要达到的程度是,几丁质-葡聚糖共聚物的性质仍保持为适用于所设想的应用,且共聚物在本发明的粒度范围内仍不溶于水和有机溶剂,但是能够以分散体、乳液或悬浮:液的形式配制。尤其是黑曲霉(其为食品和制药工业柠檬酸工业化生产的副产品)的可用性和质量,〗吏其成为用于4t妆品工业中的原物质之选。其他包含几丁质和p-葡聚糖多糖的真菌源也可以使用,例如担子菌类,尤其是真菌香菇(冬菇)和双孢蘑菇。对于"真菌源多糖",本发明发明人意指真菌细胞壁的纯化提取物,其主要包含共聚物形式的几丁质和P-葡聚糖多糖及其衍生物。纯化的才是耳又物相对于^是耳又物总质量优选包含以质量计大于70%的几丁质-葡聚糖含量,优选大于80%,优选大于85%且更优选大于卯%。对于"几丁质-葡聚糖",本发明发明人意指从真菌细胞壁提取的纯共聚物,.其包含N-乙酰基-D-葡糖胺单元连接,且可选地包含少部分的通过a-构象中的(1,6)-型键:接(几丁质连4妄)而;f皮》匕连接的D-葡糖胺单元,以及少部分的通过(3(1,3)、p(l,3)(l,6)或p(1,3)(1,4)型、优选卩(1,3)型键接(P-葡聚糖连接)而彼此连接的D-葡糖胺单元。人们普遍认为,真菌细胞壁多糖能够根据其在碱性介质中的溶解性而分成两类,而细胞壁骨架是不可溶的。人们也已经知道,不溶部分依赖于物种由各种比例的几丁质和P-葡聚糖聚合物构成,p-葡聚并唐单元通过各种结构的4建*接而连4妄,而几丁质和|3-葡聚斗唐连接之间的4建才妄是稳、定的,例如由Siestma&Wessels有关酿酒酵母(接合菌)、粗糙链孢霉(子嚢菌)、构巢曲霉(As^^^〃mmWw/aw)(子嚢菌)和灰盖鬼伞(Copn'm^cz'weww5)(担子菌)[SiestmaJH&WesselsJG.(1981)Solubilityof(1,3)國beta画D誦(l,6)画beta-D-glucaninfungalwalls:importanceofpresumedlinkagebetweenglucanandchitin.(1981)J.Gen.Microbiol.125:209]所示。人们已知,黑曲霉不;容性部分的几丁质和P-葡聚糖连接是;f皮此共1"介连4妄的,例如StaggCM和FeatherMS[Biochim.Biophys.(1973)Acta320:64]所^是及的。用于确定几丁质和P-葡聚3f唐连"t妄之间的共1^介连^妄性质的方法,例:^,已经由Fontaine等有关烟曲審[FontaineT,SimenelC,DubreucqG,AdamO,DelepierreM,LemoineJ,VorgiasCE,DiaquinM&Latg6JP.(2000)Molecularorganizationofthealkali-insolublefractionofy^e/^/〃"s/wmzga^scellwall,J.Bio.Chem.275:27594]和Kollar等有关酵母酿酒酵母[KollarR,PetrakovasE,AshwellG,RobbinsP&CabibE.(1995)Architectureoftheyeastcellwall,thelinkagebetweenchitinandbeta(l,3)glucan,J.Biol.Chem.270:1170]进行了描述。根据本发明的真菌提取物能够从各类真菌的菌丝体细胞壁获得,包括接合菌类、担子菌类、子嚢菌类(黑曲霉是其中的部分)和半知菌类,和/或其混合物。所述真菌源应该进4亍选择/人而4吏得可以进行如上和此后定义的多糖的提取。存在包含p-葡聚糖(但是这些单元特别地溶于水),或者不含或包含很少几丁质结构链的真菌源,因此这就使得不可能获得本发明的多糖。本发明涵盖了4吏得可能获得本申请中定义的几丁质-葡聚糖聚合物的所有真菌。几丁质与P-葡聚糖的比率为95:55:95,优选70:3010:90(m/m)。几丁质-葡聚糖共聚物的几丁质部分^尤选包含至少85。/o的N-乙酰基-D-葡糖胺单元和至多15%的D-葡糖胺单元,优选至少90%的N-乙酰基-D-葡糖胺单元和至多10%的D-葡糖胺单元。本发明尤其涉及包含溶剂和至少一种才艮据本发明的具有精细粒度的共聚物的悬浮液或分散体。这种悬浮液或分散体根据常用方法进行制备。该乳、液釆用7JC或油作为连续相^4居常用方法进4于制备。有利地,首先制备乳液,然后加入几丁质-葡聚糖共聚物。这使得能够特别地在用于在工业上制备其所通常应用的工业的温度条件下制备乳液,而无需寿义受共聚物降解的风险。才艮据本发明的化合物特别地以化妆或药物组合物的形式、优选局部形式进行制备。因此,对于这些组合物,赋形剂例如包含至少一种选自防腐剂、抗氧化剂、稳、定剂、调节剂、4呆湿剂、润月夫剂、乳化剂、表面活性剂、增稠剂、消光剂(mattingagent)、形成紋理剂(质构剂,texturingagent)、才是供光泽的试剂、成膜剂、增溶剂、颜料、染料、香味剂和遮光剂构成的组中的化合物。这些赋形剂优22选选自氨基酸及其衍生物、聚合甘油、酯、纤维素聚合物和衍生物、羊毛脂衍生物、磷酯、蔗糖基稳定剂、天然和合成蜡、植物油、甘油三酯、未皂化化合物、硅及其衍生物、蛋白水解产物、脂溶性/水溶性酯、甜菜^5咸、氧化胺、甘氨酸和对羟基苯甲酸酯组成的组。作为能够用于本发明组合物中的油,例如,可以^提及的有动物源的烃基油(hydrocarbon-basedoil),如全氪4b角鲨烯(异三十:院,perhydrosqualene);4直物源的烃基油,如含410碳原子的脂肪酸的液态甘油三酸酯,例如庚酸或辛酸的甘油三酸酯,或者可替换地例如葵花籽油、玉米油、豆油、鳗髓油(marrowoil)、葡萄籽油、芝麻油、4秦子油、杏々二油、澳大利亚坚果油、阿^立伯油(araraoil)、蓖麻油、鲟梨油、羊脂酸/羊蜡酸甘油三酸酯、荷荷芭油(希蒙得木油,jojobaoil)、牛油果油;合成酯和醚,尤其是脂肪酸的酯和醚,羟基化酯,多羟基酯;以及季戊四醇酯;线性或分支的无才几或合成源的烃,如挥发性或不挥发性的石蜡油,及其衍生物,液体矿脂;脂肪醇;部分烃基和/或硅基的氟化油(fluorooil);硅油如具有线性或环状硅链的挥发性或不挥发性的聚曱基硅氧烷(PDMS),其在室温下是液态或软膏状,尤其是环聚二曱基硅氧烷(环甲硅油);苯基硅;及其混合物。各种赋形剂在配制实施例中进行举例说明。其他可以存在于油相中的脂肪物质例如为包含830个石友原子的脂肪酸,如石更脂酸、月桂酸、棕榈酸和油酸;蜡,如羊毛脂、虫奪蜡、石蜡或微晶蜡、合成蜡;珪酮树脂;以及硅酮弹性体。有利地,以上提及的组合物以选自含水或油溶液、霜剂或水凝胶或油凝胶(尤其是在罐或管中),特别是洗浴凝II交、香波;乳状液;乳液,樣l乳液或纟内米乳液,尤其是水包油或油包水乳液、或复合乳液、或石圭基乳液;洗剂,尤其是在^皮璃或塑泮牛并瓦中或在量瓶或气溶月交中的洗剂;安咅瓦剂;液体皂;皮月夫病学清洁4奉(cleansingbar);油膏;泡沫;无水产品,优选液体、库欠膏或固体,例如条状形式,特别是唇膏形式构成的组中的形式进行配制。本发明还涉及口服给予人类或动物,优选哺乳动物的组合物,使得可获得选自抗氧性、降血液胆固醇或降血脂效应、对免疫系统的刺激效应、降血糖效应(尤其是糖尿病的情况下)构成的组的功效,以及预防和/或治疗和/或纟氏抗选自血脂异常症、动脉粥样^更化、月巴胖症、月巴胖才目关的疾病、心血管疾病、^i射综合;f正、斗唐尿病,口高尿酸血症组成的组的病理学的功效。控制几丁质-葡聚糖粉末的粒度,尤其是获得具有精细粒度的粉末,有利地使产品可具有更好的生物利用度。本发明还涉及如上所限定的包含至少一种多糖或真菌源提取物作为活性成分的药用或食品补充组合物。本发明还涉及处理、预防或抵抗病理学(尤其是以上所才是及的)的方法,其包4舌将有效量的包含至少一种以上和此后描述中限定的多糖的组合物口服给予需要该多糖的个体。本发明还涉及在人体或动物、4尤选哺乳动物中用于减少体重或预防或4氐抗体重增加的方法。这种方法尤其涉及美容护理(estheticcareX本发明还涉及化妆护理方法,尤其是针对身体或面部的化妆护理,这种护理有利地选自以上纟是及的护理类型。因此,本发明涉及本发明的产品在制造特别需要用于以上描述的方法之一的组合物中或发挥以上或此后描述的功效之一中的用途。本领域的那些技术人员易于通过传统方法确定将使用的本发明产品的有效量。在化妆或制药工业中,以总组合物的重量计,根据本发明0.01%10%有效量的真菌源多糖有利地被使用。优选使用以总组合物重量计0.05%~5%,更优选0.1%2%。当局部施用时,每天1次或两次施用是有利的。相对于以食物补充剂的形式给予的组合物的总重量,所利用的才艮据本发明的产品的有效量一般为以重量计0.001%100%。如果产品以凝胶胶嚢、粒剂或片剂形式给予,它们能够以纯的或以其他任何浓度4吏用,并伴随其他活性组分或赋形剂。如果它们,皮并入到食品中,则产品的浓度小于15%,优选小于10%。根据个体的体重,每天每个体给予130g根据本发明的产品是有利的。本发明还涵盖a)通过4吏用具有4青细可控粒度的颗粒形式的真菌提取物而获得的内聚性多孔固体材料,和b)包含合成的或天然源(动物或植物)的聚合物基质的内聚性多孔复合固体材料,其中分布具有精细可控粒度的颗4立形式的真菌纟是耳又物颗粒。较概括地,本发明的内聚性多孔材料通过采用具有精细可控粒度的颗粒形式的几丁质聚合物或几丁质-葡聚糖聚合物而获得。以及较具体地,本发明涵盖内聚性多孔复合材料,其基质是壳聚并唐且其中分布具有4青细可控粒度的颗粒形式的几丁质和/或几丁质-葡聚糖颗粒。对于本发明的目的,"复合"材冲牛是至少两种材一+的组装体(assembly)。对于本发明的目的,"内聚性"材料是特征为即使在外力和应力(压缩、拉伸、拉长等)作用下仍具有保持稳定和整体形式的能力的材料,这与脆性材料相反。因此,内聚性材料能够进行塑造而给出适用于其用途(例如,如具有特定解剖形状的移植物)的形状和大小。对于本发明的目的,"多孔"材料是特征为存在尺寸、数目、形态、互联性、各向同性/各向异性的程度等可调节且可控制的孔隙的材料。现有技术公开了许多与制备天然聚合物如壳聚糖或合成聚合物如聚氨酯、PLA(聚乳酸)、PGA(聚乙醇酸)、PLGA(乳酸和乙醇酸的共聚物)等的多孔材冲牛有关的文献。现有4支术也/>开了一些与制备富含包含几丁质或壳聚糖-葡聚糖的真菌提取物的组合物有关的文献。然而,还没有与乂人这些真菌提取物制备内聚性多孔固体材详牛有关的文献。例如,专利RU2086247^厶开了以制备阻燃系统为目的,起始于低级真菌(黑曲霉)的菌丝体而获得的包含壳聚糖-葡聚糖复合物的组合物。制备方法包括直接采用生物质进行冲洗和石咸处理的步骤,接着进行冻干步骤。然而,该文献并未提到以多孔材料形式获得的产品。多糖曱壳素(sacchachitin)是富含乂人真菌松杉灵芝(Gawfife/7wa实体才是取的几丁质的组合物,其对伤口愈合的作用已经由SHSu等(Developmentoffungalmyceliaasskinsubstitutes:effectsonwoundhealingandfibroblasts,Biomaterials20,61-68,1999;Fungalmyceliaasthesourceofchitinandpolysaccharidesandtheirapplicationsasskinsubstitutes,Biomaterials18,1169-1174,1997)和Hung等(CytotoxicityandimmunogenicityofSacchachitinandmechanismofactiononskinwoundhealing,JBiomedMaterRes56,93-100,2001)进行描述。JP2006273912/>开了一种由p-葡聚糖和壳聚糖构成的4莫制材料(moldedmaterial)。其并未7>开这些才才泮+是多孑L的。而且,它们并不包含其组合物中的几丁质-葡聚糖共聚物。26现有4支术因此并未7>开<壬^f可有关乂人真菌才是耳又物如几丁质或几丁质-葡聚糖共聚物获得的具有精细可控粒度的颗粒形式的内聚性多孔材并十的文献。包含壳聚糖和第二化合物的多孔材料已经广泛地进行描述。在第二化合物的许多实例中,可以才是及的有合成聚合物如PGA(Biomaterials,24(2003),1047-1057),或聚丙晞酸(MacromolecularBioscience,3(10),2003,540-545),天然聚合物如明月交(PolymerInternational,49(12),2000,1596-1599,CN1097980),胶原(WO0016817,KR2002017552,CN1406632,CN1387922,RU2254145),纤维素或丝(JP2000027027),氧4匕纤维素(US2006172000),无才;M匕合物如羟基石粦灰石(JournalofBiomaterialScience,Polymeredition,13(9),2002,1021-1032)。US2003190346涵盖用于制备由壳聚糖和几丁质水凝力交构成的复合海绵的方法,本发明的具体形式未被预见。CN1485097涵盖起始于壳聚并唐/几丁质来制备海绵的方法。该文献并未明确指出是否其是复合材料还是由壳聚糖或几丁质构成的材料。该文献的摘要公开了用于制备海绵的第一步骤在于溶解起始原料,其表明其涉及制备主要含壳聚糖的海绵,因为众所周知几丁质是不溶性的,除非在非常特殊的条件(二曱基乙酰胺-LiCl系统)下。没有文献公开包含壳聚糖和几丁质-葡聚糖共聚物的复合材料。实际上,本领域的技术人员熟知,无论溶剂是什么,几丁质-葡聚糖共聚物都是不溶的。人们也已熟知,用于制备复合材料尤其是生物可降解复合材料的方法包括,在以制备固体材料为目的移至去除溶剂的相之前,首先溶解并均勻混合溶解的化合物。因此,在制备固体(尤其是多孔的)几丁质或几丁质-葡聚糖材料或在制备由聚合物基质如可生物降解的材料作为第一化合物和几丁质或几丁质-葡聚糖材料作为第二化合物构成的固体(尤其是多孔的)复合材料中遇到的技术问题,是如何在第一步以使其与包含壳聚糖的溶液混合为目的溶解几丁质或几丁质-葡聚糖。本发明通过提出使用能够与作为基质的可生物降解聚合物的溶液混合的悬浮液、分散体或乳液形式的具有精细可控粒度的几丁质和/或几丁质-葡聚糖共聚物而提供了解决该问题的技术方案。类似地,本发明通过^^用包含具有精细可控粒度的几丁质和/或几丁质-葡聚糖共聚物的悬浮液、分散体或乳液而提供了制备多孔几丁质和/或几丁质-葡聚#唐固体的4支术方案。本发明的内聚性多孔材料涵盖a),人真菌纟是耳又物,优选具有精细可控粒度的颗粒形式的几丁质聚合物和/或几丁质-葡聚糖共聚物,更优选具有精细可控粒度的几丁质-葡聚糖共聚物而制备的内聚性多孔材料;b)包含一种聚合物作为基质,也称为分散剂和真菌提取物,优选具有4青细可控粒度的颗粒形式的几丁质聚合物或几丁质-葡聚斗唐聚合物作为第二4匕合物,也称为受分散剂(dispersedagent)的内聚性多孔复合材料。具体而言,本发明还涉及包含至少一种真菌提取物,优选粒度小于500樣t米(nm)颗粒形式的至少一种几丁质聚合物和/或一种几丁质-葡聚4唐共聚物的多孔材料。有利地,多孔材料包含以上限定的真菌提取物。28本发明还涉及用于制备多孔材料的方法,其特征在于包含以下步骤在溶剂中分散,或乳化,或悬浮粒度小于500微米()am)的颗冲立形式的至少一种真菌纟是耳又物,然后除去该溶剂而获得包含该真菌提取物的多孔材料。用于多孔材料'"'的几丁质聚合物和/或几丁质-葡聚糖共聚物颗粒的粒度小于250pm,更优选小于90nm,甚至更加优选小于63pm。优选使用具有该精细可控粒度的几丁质-葡聚糖共聚物颗粒。本发明还涉及包含基质和受分散剂的多孔复合材料,所述基质也称为分散剂,是至少一种类型的聚合物,而受分散剂是至少一种真菌提取物,优选为粒度小于500微米(|um)的颗粒形式的几丁质聚合物或几丁质-葡聚糖共聚物。有利地,多孔材^牛包含如上限定的真菌才是耳又物。多^复^"材料》,包含粒度小于250pm,更优选小于90jum,甚至更加优选小于63|um的本发明的几丁质或几丁质-葡聚糖颗粒。优选使用具有该精细可控粒度的几丁质-葡聚糖共聚物颗粒。本发明涵盖用于制备包含基质和分散于基质中的制剂的多孔复合材料的方法,其特征在于其包括(i)溶解能够形成多孔复合材料基质的聚合物的步骤,(ii)在聚合物的溶液中,分散、或乳化、或悬浮粒度小于500微米(|Lim)的颗粒形式的至少一种真菌纟是取物的步骤,(iii)从包含真菌提取物的聚合物溶液中除去该溶剂的步骤,(iv)获得包含形成基质的多孔聚合物和形成受分散剂的真菌提取物的复合材料。多孔材料或多孔复合材料能够形成一层或多层复合材料。多孔复合材料'b,的聚合物基质可以是天然、动物或植物源(细胞外基质(ECM)聚合物)的。具体而言,天然源的聚合物(也称为生物聚合物)可以选自糖胺聚糖(GAG),特别是透明质酸或透明质酸盐(酯)、-琉酸软骨素或肝素、骨胶原、海藻酸盐、葡聚糖、壳聚糖及其混合物构成的组。也可以选择选自聚氨酯、聚丙烯酸酯等,或者生物可降解的合成聚合物构成的组,尤其是选自合成的生物可降解的聚酯如基于乳酸、乙醇酸、s-己内酯和^"二氧环己酮的均聚物和共聚物,或者4壬何其他天然聚酯,如聚羟基4连烷酸酯族的那些材津牛,例如基于羟丁酸酯、羟戊酸酯、聚原酸酯等的均聚物和共聚物,或者书f生于其组合或天然聚合物和合成聚合物组合的聚合物基质构成的组的合成聚合物。优选基质是生物可降解的聚合物。优选生物可降解的聚合物基质是具有任何分子质量和任何程度乙酰化的壳聚糖。几丁质或几丁质-葡聚糖聚合物与壳聚糖聚合物(或生物可降解聚合物)的质量比为5:9595:5,优选为20:8080:20。优选的组合物所具有的质量比为40:6060:40,优选45:5555:45,且更优选约50:50。本发明的内聚性多孔材料具有任何形状、任何几何结构和任何尺寸,优选为多孔膜、三维多孔载体(如平面载体、多孔泡沫)的形式、多孔樣i载体或王朱粒形式、多孔纤维形式、多孔管等形式。内聚性多孔材料具有至少0.005g/cm3的密度。内聚性多孔复合材料的杨氏模量(其表示抗压强度)为至少0.05Mpa。该多孔材料的机械性能能够进行进行调节,特别是根据受分散剂颗粒的粒度、基质与受分散剂的质量比和制备方法,尤其是才艮据起始壳聚糖溶液的浓度进行调节。意想不到地,已经注意到壳聚糖与几丁质-葡聚糖共聚物的质量比为约50:50,具有最佳的抗压强度。本发明的材料涵盖了各种孔径和总孔隙率、各种形态(圆形、细长形、纤丝形等)、各种程度的互联,或孔隙各向同性或各向异性的程度、孔隙壁的各种粗^造程度等,作为几丁质或几丁质-葡聚糖颗粒悬浮液浓度、选自精细可控粒度的粒度、这些颗粒与聚合物基质的重量比和制备这些材料的方法的函数。本发明的内聚性多孔材料具有的优点是提供的几丁质和几丁质-葡聚糖材料能够容易地处理和调节并且能够在需要这些化合物的有益功效的化妆或药物应用中临时或永久(以绷带、垫料、移植物、贴片等形式)地进行《合予,或者与其4也活性剂组合(例如浸渍、吸附、吸收、嵌孔等)。类似地,本发明的多孔复合材料具有的优点是结合生物可降解聚合物基质和具有^"细可控粒度的几丁质和/或几丁质-葡聚糖共聚物的有益作用。而且,几丁质和/或几丁质-葡聚糖的精细颗粒能够固定在聚合物基质的孔结构中,赋予其粗糙结构,而获得较高比表面的特征。这些特征能够构成一种优势,用来将这种材料应用到诸如细胞培养或组织重建的应用领域中,对于这些领域细胞粘附的风险專交高。用于制备内聚性多孔材料'a,和内聚性多孔复合材料'b,的方法包括的第一步为,以制备材津牛'a,为目的在水中或者以制备物质'b,为目的在聚合物基质的溶液中,悬浮、乳化或分散具有精细可控粒度的几丁质和/或几丁质-葡聚斗唐颗4立。在第二步中,才艮据本领域中技术人员已知的热解技术对混合物进行干燥或除去溶剂。在热解技术中,冻干、在超临界流体(超临界C02)中起泡沫、熔盐提取、浸渍-沉淀、静电纺丝和固体自由成形都适用于实施这个步骤。优选干燥步骤是冻干法。根据本发明对于制备,该方法包括的第一步(i)在于,根据质量比05:9530:70、优选05:9520:80,在水中悬浮具有精细可控粒度的本发明几丁质聚合物和/或几丁质-葡聚糖共聚物,接着均质化至少30min,以制备膏剂为目的。在第二步(ii)中,通过任^T冷冻方法,尤其是通过将该膏剂放置于-18。C的制冷机中,冷冻该膏剂。在第三步(iii)中,冷冻的混合物进行冻干而获得内聚性多孔材料。根据本发明的用于制备内聚性多孔复合材料的一个具体实施方式,该方法包含的第一步(i)为将生物可降解聚合物基质溶解于溶剂中,根据实-验条件4吏其能够完全溶解。优选壳聚糖以1%10%的比例溶解在浓度为0.5%5%,优选0.5%2%的稀酸溶液中。在能够用于这个步骤的酸中,无机酸如例如盐酸、氢氟酸、磷酸等,或有^/L酸如例如乙酸、曱酸、乳酸、乙醇酸、葡萄#唐酸、一宁4象酸、琥珀酸、谷氨酸等都是适合的。在第二步(ii)中,具有精细可控粒度的几丁质和/或几丁质-葡聚糖颗粒分散于包含聚合物基质的溶液中,均质化至少一分钟,然后倾倒于才艮据尺寸、几何结构和将要制备的多孔复合材料的性质而选择的制模中。基质聚合物与受分散剂的质量比为10:9090:10。在第三步(iii)中,混合物通过任何冷冻^支术进^f亍冷冻。在最后步-骤(iv)中,冷冻的混合物进行冻干。所获得的复合材料是多孔的。孔隙的密度、尺寸和形态,以及该物质的机械性能,尤其是抗压强度性能,根据本发明的这种实施方式,能够作为聚合物基质的浓度、聚合物基质与受分散剂的质量比、基质溶剂的性质、制模的类型、该制模的填充体积以及冷冻条件的函数进行调节。在附图中图1示出用于记录几丁质-葡聚并唐共聚物固相^友13核,兹共寺展(13C-NMR)谱图的条4牛。图2示出几丁质-葡聚糖共聚物固相"C-NMR谱图。图3示出才艮据本发明的几丁质-葡聚糖颗粒(批次L26),尤其是沣立度为100200|im的部分(部分100-200)、泮立度〈100pm的部分(部分<100)、4立度为5001000pm的部分(部分5001000)和冲立度为250500jum的部分(部分250-500)的四个扫描电子显孩i照片。图4示出根据本发明的颗粒(批次L32)通过喷雾工艺进行干燥后的扫描电子显《鼓照片(;故大倍凄tx750)。图5示出个体16周后获得的光学4仑廓测量图,显示作为皮月夫上距离的函数的皱紋高度(Rz)(左前臂几丁质-葡聚糖基霜剂T1.5;右前臂无效对照霜剂TO)。该图表明樣史4仑廓(microcontour)被显著降低(采用几丁质-葡聚糖的平均值Rz7.0|am而采用无效对照剂9.6pm)并且皮肤更加绷紧。图6示出多孔几丁质-葡聚糖物质的两幅扫描电子显樣i照片。图7示出纵截面上几丁质-葡聚糖和壳聚糖(几丁质-葡聚糖/壳聚糖10:90,m/m)的混合多孔材料的扫描电子显微照片。图8AC示出三种样品获得的几丁质-葡聚糖和壳聚糖的复合多孔材料的扫描电子显孩t照片(图8A:壳聚糖/几丁质-葡聚糖比例(m/m)25/75,图8B:壳聚糖/几丁质-葡聚糖比例(m/m)50/50,图8C:壳聚糖/几丁质-葡聚糖比例(m/m)75/25)。对于每一样品,33几丁质-葡聚糖颗粒的粒度都小于63|Lim。左边的照片示出纵截面,而右边的照片示出冲黄截面。图9A和9B示出采用粒度大于250|iim的几丁质-葡聚糖颗粒获得的四种样品所获得的几丁质-葡聚糖和壳聚糖的复合多孔材料的扫描电子显樣i照片。图9A左侧照片壳聚#唐/几丁质-葡聚并唐比例(m/m)25/75而粒度为250500,。图9A右侧照片壳聚糖/几丁质-葡聚糖比例(m/m)25/75而粒度为5001000拜。图9B左侧照片壳聚糖/几丁质-葡聚糖比例(m/m)50/50而粒度为250~500,。图9B右侧照片壳聚糖/几丁质-葡聚糖比例(m/m)50/50而粒度为5001000拜。基于阅读了参照4又4叉以举例i兌明的方式给出而不以任何方式限制本发明范围的实施例的解释性描述,本发明的其他目的、特征和优点对于本领域的技术人员将显而易见。实施例是本发明的组成部分,而基于其全文所作的描述(包括实施例),相对于任何现有技术似乎为新的任何特征,根据本发明功能和一^:性,都是本发明的组成部分。因此,每一实施例都具有一个普遍性的范围。而且,在这些实施例中,除非另外指明,所有百分凄t都以重量百分数给出;除非另外指明,温度都以摄氏度表示;除非另外指明,压力都为大气压。实施例获得以下获耳又的几丁质-葡聚斗唐共聚物的方法在专利申请WO03/068824和FR05.07066中进行了描述。实施例'A,系列关于几丁质-葡聚糖共聚物及其具有各种可控粒度的颗粒的制备实施例A1:从黑曲霉菌丝体制备几丁质-葡聚糖共聚物将一团50kg(干重)的湿黑曲霉菌丝体悬浮于0.5N的盐酸溶液中,然后过滤。然后将固体物质悬浮于1N的氢氧化钠溶液中,然后过滤。固体物质用水沖洗4次,然后采用压滤才几过滤并用锥形干燥器干燥。随后将其悬浮于乙醇中,然后过滤,干燥。获得约15kg的几丁质-葡聚糖(水匕次L25)。根据这种方法获得的8批次的几丁质-葡聚糖的分子特性和组成在表1中症合出。几丁质/葡聚糖质量比是才艮据以下简单描述的方法由图1所示的条件下记录的固相碳13核磁共振(NMR)谱图计算得到的。几丁质-葡聚糖化合物(批次L28)的谱图如图2所示。(3-葡聚糖的比例是由以下四个共l展带的面积确定的104ppm(几丁质和(3-葡聚#唐的碳1),23ppm(几丁质的CH3碳),55ppm(几丁质的碳2)和61ppm(几丁质和p-葡聚外唐的石友6),以纯几丁质作为参照。例如,可以根据式l进行计算,其中I,是碳信号的面积,而其中[]cg是指所分析的几丁质-葡聚糖比值,[]c是参照几丁质的值。Cl是几丁质和p-葡聚糖的碳l,C2是几丁质的碳2。所4苗述的。D匪葡4唐胺单元的比例通过用氬氧化钠在盐酸过量的悬浮液中进行电位滴定而进行测定。几丁质-葡聚糖(批次L26)的微生物质量和搜索病原体的结果在表2中乡会出。几丁质-葡聚糖粉末(批次L25)的粒度分布在表3中给出。表Al.l-各批次几丁质-葡聚糖共聚物的分子特性和组成<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>*7L7"资-萄果」凝^辦四个^岸潜果的^^库媒i/为、^f^,f^厚合爭岸f沐法^^€教產^艰(5.J/7pm;表AL2-几丁质-葡聚糖批次(L26)的孩i生物质量<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>因此由上表可以理解,才艮据本发明的共聚物具有高纯度。表AL3-几丁质-葡聚糖批次(L25)的粒度分布<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>由该表可理解,根据实施例1的方法获得的颗粒的粒度分布非常广。实施例A2:遞J2^f,新备具省—吝^^t凌的儿T^~-蓊覆潜為、启为了以可控的可变方式减小粒度,将根据实施例1获得的15kg几丁质-葡聚糖(批次L25)在装有各种几4可形状并具有20100目筛网尺寸的过滤器的锤式粉碎机(Fitzmill型号D,Fitzpatrick)中进行研磨(表l中标号A、B、C、D)。由此获得四批次的几丁质画葡聚糖粉末,其粒度分布通过在校准的筛网上进行筛分和重量分析进4亍测定,如表1中所示。表A2.1:采用各种类型的篩网通过研磨获得的几丁质-葡聚糖批次的粒度分布几丁质-葡^t批次^p磨筛网分布Om)%(m/m)L25D100目500-100019%250-50025%200-2501%100-20028%<10027%L25A65目500-100025%250-50041%100-25025%<1007%L25C40目250-50044%200-25014%100-20029%<10011%L25B20目500-100025%250-50040%200-25010%100-20017%<1007%由该表可以理解,小粒度的颗粒,例如小于200pm,通过采用精细筛网(例如100或65目)研磨几丁质-葡聚糖粉末可容易地获得。采用各种筛网研磨的各批次几丁质-葡聚糖,通过在校准的筛网上筛分,进4亍部分的组合,4分末在铂金属4b之后通过扫描电子显微术进行观察(图4)。在对每种样品中约100个颗粒进行分析后计算颗粒的长度和宽度(表A2.2)。表A2.2:通过SEM观察研磨的几丁质-葡聚糖(批次L25)部分的尺寸38<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>由该表可以理解,正如图4中扫描电子显微观察所示,锤式粉碎4支术产生卵形的非J求形颗4立。批次L25的100200ium部分是用于制备实施例C.l的试一验霜剂(才示号T1.5)的产品。实施例A3:制备通过喷雾溶剂化的几丁质-葡聚糖而获得的具有4青细可控粒度的几丁质-葡聚糖4分末为了获得具有精细粒度的为球形颗粒的几丁质-葡聚糖粉末,采用混合机在3.75升水中制备包含0.15kg几丁质-葡聚糖(批次L25)的膏剂。该膏剂在200。C的温度下喷雾干燥。获得0.15kg粉末,其累积粒度分布在表A3.1中给出。图5中的照片示出通过扫描电子显樣i术观察到的颗冲立。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>从该结果可理解,溶剂化几丁质-葡聚糖喷雾技术使得可以主要是其中73%的颗粒具有小于125pm的直径的精细均匀粒度。实施例A4:制备通过在Niitsche过滤器中干燥溶剂化的几丁质-葡聚糖而获得的具有精细可控粒度的几丁质-葡聚糖粉末为了获得精细的几丁质-葡聚糖粉末,将乙醇中溶剂化的包含50kg几丁质-葡聚糖的膏剂在温度为60。C的Niitsche过滤器中干燥12h。获得50kg几丁质-葡聚糖粉末(批次L16),累积粒度分布在表A4.1中给出。由此获得的几丁质-葡聚糖粉末的堆积(或填充)密度,才艮才居欧洲药典(EuropeanPharmacopeia)2.9.15的方法测定,为0.71g/cm3。表A4.1:干燥后的几丁质-葡聚糖批次(批次L16)的粒度分布<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>从该结果可以理解,采用在乙醇中溶剂化的几丁质-葡聚糖通过Ntitsche过滤器干燥几丁质-葡聚3f唐的4支术,-使得可以主要获得其中60%的颗粒具有小于125nm的直径的4青细的均匀粒度。获得的粉末通过筛分进行分级(或分离,fractionate)以致从中选出粒度小于90pm的颗粒。这部分用于制备实施例1420的制剂。粒度小于90pm的这部分,通过扫描电子显微术观察,表现出经图<象分才斤而测定的43±18jam的平均尺寸。4立度小于90pm的部分的堆积密度,才艮据欧洲药典2.9.15的方法测定,为0.61g/cm3。实施例A5:通过研磨和筛分制备粒度小于125um的几丁质-葡聚糖粉末为了获得粒度小于125pm的粉末,在盘式粉碎机中研磨干燥的几丁质-葡聚糖批次[L07073CG],然后在引入到工业筛分设备中的筛网尺寸等于125|am(或120目)的校准筛网上进行筛分。每一研磨循环后获得的粒度分布在表A5.1中给出。表A5.1:研磨前几丁质-葡聚糖粉末的粒度分布直径研磨前的累积第一研磨循环后的第二研磨循环后的比例(%,m/m)累^、比例(%,m/m)累积、比例(%,m/m)小于1000pm100%100%100%小于250pm27%97%100%小于180nm14%87%94%小于125nm3%52%73%小于90|xm0%34%53%小于50拜0%14%27%通过这些表可以理解研磨和筛分步骤对于增加颗粒获耳又产量的重要性和功效。第一次研磨后获得比例高得多的粒度小于125pm的粉末。在第二次研磨后这个比例进一步增加。这个实施例表明高比例(大于50。/。m/m)的颗粒具有小于90pm的粒度,甚至大比例(超过25%m/m)的颗粒具有小于50pm的粒度。实施例B系列旨在用于耐受性研究的几丁质-葡聚糖基简单霜剂的制备实施例和几丁质-葡聚糖耐受性研究的结果这些实施例的目的具体地是表明颗粒(无论其粒度如4可)形式的几丁质-葡聚糖共聚物的无害性。这些简单组合物局限为以耐受性研究为目的、用于将几丁质-葡聚糖共聚物涂散在皮肤上的载体(support)。实施例Bl:旨在用于耐受性研究的几丁质-葡聚糖基简单霜剂的制备基于几丁质-葡聚糖(批次L31)制备乳液型霜剂,将几丁质-葡聚糖51入到水相中,将获得的膏剂采用切碎机(Ultraturax,10000rpm)均质化约lh:简单乳液包含02.5%各种浓度(表Bl.l)的几丁质-41葡聚糖。空白对照制剂(对照co)在相同条件下进行制备,不含几丁质-葡聚糖。表B1.1:基于几丁质-葡聚糖浓度为X。/。的(标号CX)筒单化妆霜剂的组成<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>由J:匕,制备出C0、C0.5、Cl.O、C1.5、C2.0和C2.5。实施例B2:基于几丁质-葡聚糖的各种浓度的简单霜剂的皮肤耐受性和水合能力(hvdratingcapacity)的研究方案一系列的四种水包油乳液型霜剂,包含0.5%2%的几丁质-葡聚糖浓度,其组成在实施例Bl中给出,通过将其施用到13位志愿者的前臂上进行试-验,这些志愿者平均年龄46岁(从32-61岁),他们的皮肤在该部位是4文感的。这些霜剂与无几丁质-葡聚糖的无效对照霜剂(标号CO)进行比4交。产品在每一前臂上限定的区域(6.25cm2的三个区域)每天施用两次。每2周进行三种类型的生物度量学测试,共进4于6周,以研究这些产品的耐受性和有岁支性。初始临床^r测显示,在4壬4可个体中都;殳有异常。在最后一次施用产品之后,间隔至少10小时,在上午进行评价。生物度量学(biometrological)测试-过有象角质仪(corneometry)、通过测量才艮才居CIE才示准L*a*b*(MinoltaChromaMeterCR200)"^H古的反射比色法(reflectancecolorimetry)纟会出的参数a^来寻找任何可能的红斑、刺激征兆。通过测定以g/m2/hr计的经表皮水分流失(TEWL,transepidermalwaterloss)(Tewameter,C+KElectronic)寻找屏障功能的任何损害。对于正常皮月夫,TEWL为57g/m2/hr,而只于于干火喿皮月夫,则为1520g/m2/hr。测定阻塞(occlusion)下的角质层的水分渗透动力学。"水分累积速率"(RWA)每过30秒周期(RWA30)通过在T30s和T0s时的值之差与在TOs时的值的比值进行评价。该值越高,角质层就越干燥,水分就越易于;参透,佳J寻其可以渗漏而不会将其吸收,这与TEWL是等价的。统i十在每一;平<介时间,通过Friedman非参IM企马全随后是Dunn才企验进行产品间的比4交。对于每一产品,才艮据相同的方法随时间进4亍比4交。对于每一参lt,通过Friedman非参凄t配对^r-睑随后是Dunn才全验找寻不同时间获得的值之间的显著差异。结果a*、TEWL和RWA30的值,在5种霜剂于0、2、4和6周施用后至少10h进4亍测定,列于表B2.1中。高达所研究几丁质-葡聚糖的最大浓度,其为2.0%,在6周的周期内没有观察到红斑、刺激或皮肤屏障受损的征兆,如由没有增加的&*和TEWL值所证实的。另一方面,也i正实了,在阻塞下的角质表面的水分累积速率(RWA30),在施用几丁质-葡聚糖基霜剂后显著降低,这表明皮肤在表面具有更好的保水能力。对于浓度1.5%和2.0%,乂人施用的第二周开始,对于浓度0.5%和1.0%,乂人第四周开始,?见察到这种效应。43表B2.1-反射比色法(a"、经皮月夫的水分流失(TEWL)和水々渗透动力学(RWA30,每30秒周期的水分累积速率)的结果<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>带有不同上标数字的值,在同时间测定的系列中,相互之间显著不同(p〈0.02)。实施例B3:通过体外在角质层上进行角膜磨镶术(corneoxenometrv)研究对基于几丁质-葡聚糖的各种浓度的简单霜剂的耐受性方案从15个健康的志愿者的前臂获取氰基丙烯酸酯表面活组织切片,以对角质层取样。包含0%2%的各种浓度的几丁质-葡聚糖的霜剂是实施例5(0.5%2.5%)中的那些。它们用水稀释至50:50(v/v),使得能够保证产品与角质层之间的紧密接触。将溶液沉积到角质层样品上2h。在该4妄触过程结束时,样品用水彻底漂洗。干燥后,用碱性品红和甲苯胺蓝的醇溶液对它们染色lmin。用水漂洗并干燥后,每样品的颜色通过反射比色法L"口ChromaC"莫式测定。L氺和C^的差l直对应于温和度(mildness)的色度学指凄t(CIM)。CIM大于40表示产品^"皮力夫是非常温和的。结果5种霜剂计算的CIM值列于表3.1中。无论所施用的制剂中几丁质-葡聚糖浓度如何,这些值都大于70,并且它们反映出6种产品的优异耐受性。表B3.1:角质层与包含几丁质-葡聚糖基霜剂的2倍稀释的溶液接触2h后的温和度色度学指数(CIM=L*-C*)N=15标号COC0.5C1.0C1.5C2.0平均CIM78.679.374.078.477.6标准偏差6.74.38.35.47.1中值CIM75.080.875.080.078.1实施例B4.'几丁质-葡聚糖刺激性和敏化潜力(sensitizingpotential)的临床;平^介对具有正常皮力夫的50名志愿者(37±2岁),才艮据Maibach-Marzulli方案,进行6周的几丁质-葡聚糖的每文化潜力和低变应原性(hypoallergenicity)的临床评价。通过将几丁质-葡聚糖(L25)分散于水中制备浓度为10%的膏剂。该膏剂通过FinnChambe,封闭贴(occlusionpatch)施用到皮肤上。7见察红斑、浮肿、干燥和起泡外观的可能征兆,以1更辨别出产品的刺激潜势(诱导相,inductionphase)禾口壽文叶匕;昝力(;敫发^目,challengephase)。从所有的观察结果考虑,可以认为几丁质-葡聚糖是非刺激性的和非过敏性的。因此,其能够适用于权利要求"低变应原性的"。实施例B5z对志愿者进行几丁质-葡聚糖原发性皮肤刺激的体内研究45通过施用10%含7^膏剂(如实施例B4中)形式的几丁质-葡聚糖(L25)24h(采用FinnChamber⑧封闭贴将其施用到皮肤),评价几丁质-葡聚糖在皮肤上的原发性刺激(primaryirritation)。对10个个体进行该研究。在皮肤病学控制下,在粘附贴片后30min和24h进行观察,旨在一企测皮肤的红斑、浮肿和结构改变的征兆。该研究的所有结果表明,几丁质-葡聚糖(以10%分散于水中)能够分类为对皮肤无刺激性。实施例B6:几丁质-葡聚糖的眼睛刺激(体外,HET-CAM方法)才艮据Luepke等[FdChemToxic23,287,1985](作为动物试验(OJof26/12/1996)的一种替代由官方i人可的),通过HET-CAM测试在受孕的母鸡的卵绒毛膜尿嚢膜(母鸡卵测试-绒毛膜尿嚢膜)上对几丁质-葡聚糖(L25)的眼睛刺激进行评价。以5%的浓度分散于水中的几丁质-葡聚并唐在力莫表面沉*积而4吏之4妾触20秒。i式马全在四个卵上重复进行。5%几丁质-葡聚糖获得最低分,这就将其归类于实际上对母鸡卯绒毛膜尿嚢膜是非刺激性的。实施例C系列基于具有精细可控粒度的几丁质-葡聚糖的悬浮液、分散体和乳液的制备实施例Clz几丁质-葡聚糖基日霜,旨在用于研究对老年志愿者的性能表C1.1:对照试验霜剂(标号TO)与基于几丁质-葡聚糖(批次L25)的浓度为1.5%的试验霜剂(标号T1.5)的比较相成分INCI功能浓度(%)A水水溶液适量Fucogel1000PP生物糖胶-l保湿剂甘油甘油冷稳定剂2RiceNS触感1NeocareCG90棕榈葡萄糖苷乳化剂0.2KeltrolT黄原胶防乳化0.1VeegumHS5。/。溶液水溶液,硅酸铝镁防乳化20EuxylK300苯氧乙醇、对羟基笨曱酸甲酯、对幾基苯曱酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯曱酸丁酯防腐剂0.8BInutecSpl菊粉氨基甲酸月桂酯稳定剂0.3SabonalC161850/50棕榈醇增稠剂3.5牛油树脂牛油树润肤剂1.5硬脂酸硬脂酸消光剂2Antiox_cos大豆甘氨酸(soyaglycine)、维生素E、抗坏血酸一宗榈酸酯、卵-畴脂抗氧化剂0.5荷荷巴油荷荷巴油润肤剂4琉璃苣油琉璃苣润肤剂澳洲坚果油澳洲胡杉k润肤剂NeodermCSO鲸蜡硬脂基辛酸酯改进适用性1NeodermCSN异壬酸十六烷酯改进适用性1NeodermPTC季戊四醇四辛酸g旨/癸酸酯变形效应1.5VelvesilDM二曱基硅氧烷、鯨蜡硬脂基聚二曱基硅氧烷交联聚合物触感4SF1256环戊硅氧烷、环己硅氧烷施用时防止皮月夫漂白1C几丁质-葡聚糖(L25部分100-200—几丁质、p-葡聚糖活性剂Xx=o(标号TO)或1.5(标号T1.5)DCoolWoman341992-N香精香精0.5试验霜剂(标号T1.5)的制备工序相A的成分在80。C下混合,然后在75。C下混合相B的成分。将相B加到相A中,混合物用混合器进4亍均质化,然后冷却。最后在40。C下加入成分C和S。47<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>实施例C2:几丁质-葡聚糖粒度对包含各种粒度的几丁质-葡聚糖的几丁质-葡聚糖基化妆霜剂的制备和感觉特性的影响含具有各种粒度的各批次几丁质-葡聚糖的日霜,以浓度为1.5%根据实施例Cl的相同方案制备1个未研磨、未筛分批次(L25),以及实施例A2的3个研磨和分级的批次(L25)。所获得霜剂的配制方便性和特性列于表C2.1中。表C2.1:用具有各种粒度的几丁质-葡聚糖(L25)粉末制备的霜剂特'I"生;感觉a犬况(浮见觉4犬况和触感)分成15类,分i"直5乂于应于最佳感觉印象。配制方便性分成05类,分值1对应于配制最方便。<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>由该表易于理解,粒度越精细,将几丁质-葡聚糖引入化妆霜剂就越容易,感觉印象就越佳。也可以看出,引入精细研磨的几丁质-葡聚糖,尤其是采用部分5090pm,使得可以赋予霜剂相当大的粘度,这对于配方设计师是非常有利的。实施例C3:几丁质-葡聚糖粉末的粒度对唇膏的制备和特性的影响采用4种不同粒度的几丁质-葡聚糖粉末和表C3.1中的成分制备唇膏制剂。粒度小于125、90、50和30pm的粉末根据实施例A5的方法以1.5%的浓度生产。直径小于30|Lim的粒度部分在使用喷气粉碎机进行附加微粉化步骤后获得。表C3.1成份INCI名称%A蜂蜡白蜂蜡7豆角月旨(carobbutter)辛基十二烷醇、巴西棕榈树(巴西棕榈)蜡14.25椰子油可可椰子26可可脂可可树14.25杏仁油普通杏树15舌甘扁杉匕油甜扁冲兆12ZeniglossUPH蓖麻异硬脂酸琥珀酸酯、氢化蓖麻油10B几丁质-葡聚糖;直径<125nm;<90nm;<50,几丁质,(3葡聚糖1.5天然杏香料H1504辛酸/癸酸甘油三酯,杏0.2香草精H1202辛酸/癸酸甘油三酯,香果兰0.1沙棘油俄罗斯大果沙棘0.1方案相A的成分在60°C下混合,然后混合物冷却到45°C。相B的成分与相A混合并将混合物搅拌23min。立即将混合物引入到最后的包装中,凝固点约40。C。获得的唇膏的感觉特性列于表C3,2中。表C3.2:作为几丁质-葡聚糖粒度的函数的唇膏感觉特性几丁质-葡聚4唐颗并立直径<125|nm<90|xm<50|am<30|nm感觉#见觉^1大况*1123感觉触感、鳴b唇上的感觉承5555*感觉状况(#见觉状况和触感)分成16类,分值6对应于最佳感觉印象。由该实施例可以看出,为了能够获4寻专业品质、均勻外7见和唇上具有愉悦触感的唇膏,有必要4吏用直径小于30pm的几丁质-葡聚糖粉末。采用直径大于30pm的4分末,唇膏就会显得不均匀,并且几丁质-葡聚糖颗粒就会明显可见并能够;陂感受到。49实施例C4.防晒乳液的制备"油包水"型防晒乳液釆用几丁质-葡聚糖(1.5%)和表C4.1中的成分制备。使用根据实施例A5制备的具有三种不同粒度的几丁质-葡聚糖粉末<125拜,〈90拜和〈50fim。表C4.1<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>表C4.2:作为几丁质-葡聚糖粒度的函数的防晒乳液特性几丁质-葡聚糖的直径<125<90nm<50|iun商己制方<更性*感觉#见觉^1犬况*244感觉触感*444*感觉状况(视觉状况和触感)分成15类,分值5对应于最佳感觉印象。配制方便性分成05类,分值5对应于配制最方便性。由该实施例可以看出,对于象这种防晒乳液的油包水乳液型制剂,优选使用直径小于90|um的几丁质-葡聚糖粉末以确保视觉状况与厂商的要求一致。才艮据其他试一验,具有直径小于125|um的颗粒的共聚物适用于油包水乳液。实施侈'JC5-滋润溶液(tonicsolution)的制备含水滋润溶液釆用几丁质-葡聚糖(1.5%)和表5.1中的成分制备。使用的几丁质-葡聚糖粉末具有两种不同的粒度<30|Lim和<10pm。该粉末按照实施例C3进行制备。表C5.1成分INCI名称%AIsoceteth-20Isoceteth-200.4Sensiva-SC50乙基己基甘油0.1NsocareP3C聚甘油-3癸酸酯0.2EuxylK500山梨酸钾、苯甲酸钠、咪唑啉基脲0.6MPDIOL曱基丙二醇4水水溶液90.2F腳gel1000PP生物糖胶-13B乳酸至pH5.0~6.0着色剂CI470510.1C几丁质-葡聚4唐<30nm几丁质,|3-葡聚4唐1.551方案相A的成分按序混合。緩慢加入水。用B调节pH至56,加入几丁质-葡聚糖并混合几分钟。表C5,2:作为几丁质-葡聚糖粒度的函数的滋润溶液的特性<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>*配制方<更性和感觉状况(4见觉状况和触感)分成1~5类,分值5《于应于最佳感觉印象。配制方便性分成0~5类,分值5对应于制剂最方便性。爿t人该实施例看出,为了制备具有可^妾受外观的滋润溶液并且为了4吏几丁质-葡聚糖颗粒{呆持在稳定的悬浮液内,颗粒的直径必须小于10,。实施例C6:含BDIH-可i人证成分的晚霜的制备"油包水"乳液型晚霜采用几丁质-葡聚糖(1.5%)和表C6.1中的成分制备。这些成分满足制造药品、营养品、食品补充剂与身体护理产品的德国商业及工业联合会(BDIH)的认证要求。该霜剂能够获得BDIH标识,表明其已经净皮该联合会认证。使用根据实施例C3制备的具有三种不同粒度的几丁质-葡聚糖粉末<125,,<90jum和〈50ium。表C6.1<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>表C6.2:作为几丁质-葡聚糖粒度的函数的晚霜特性<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>*感觉状况(视觉状况和触感)分成1~5类,分值5对应于最佳感觉印象。配制方^吏性分成0~5类,分值5对应于配制最方4更性。由该实施例可以看出,为了配制油包水乳液型护理产品,如这种晚霜,优选使用直径小于90^im的几丁质-葡聚糖粉末以确保视觉状况与厂商的要求一致。实施例C7:"硅包水(water-in-silicon)"乳液型护理制剂的制备采用浓度1.5%几丁质-葡聚糖和表C7.1a和C7.1b中的成分制备两种"硅包水"乳液型护理制剂。表C7.1a:制剂1的成分成分INCI名称%ABY-11-030环戊石圭氧》克,PEG/PPG-19/19二曱硅油8DC245环戊-圭氧步克20B水水溶液适量NaCl氯化钠2防腐剂适量C几丁质-葡聚糖<125nm几丁质,(3-葡聚并唐1.5DDC9701聚二曱基硅氧烷/乙烯基聚二甲硅氧烷交联聚合物,氧化硅2表C7.1b:制剂2的成分成分INCI名称%ADC5225环戊珪氧烷,PEG/PPG-18/18二曱珪油8DC245环戊-圭氧步克20B水水溶液适量NaCl氯化钠2防腐剂适量C几丁质-葡聚糖〈125nm几丁质,p-葡聚辟唐1.5DDC9701聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二曱硅氧烷交联聚合物,氧化硅2方案在50-60°C的温度下混合相A的成分。向相A中加入相B的成分,混合物均质化。搅拌下加入C,并将混合物均质化直至达到完全结合。加入D,并将混合物均质4b直至达到完全结合。实施例C8.*日间护理产品的配制包含1.5%几丁质-葡聚糖的日间护理产品,例如能够根据CI中描述的配方进行制备。实施例C9:身体护理乳的配制以下描述了不采用几丁质-葡聚糖(a)和采用几丁质-葡聚#唐(b)的两种身体护理乳配方。54<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>成分INCI功能%A水水溶液37.55EUXYLK300苯氧乙醇、对羟基苯曱酸曱酯、对羟基苯曱酸丁酯、对羟基苯曱酸乙酯、对羟基苯曱酸丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯防腐剂0.9甘油甘油稳定剂RICENS二甲基咪唑酮大米淀沣分触感2VeegumHS5%石圭酸铝4美稳定剂10KeltrolT黄原胶0.15C1216蔗糖月桂酸酯助乳〗匕剂0.2BSF1256环戊硅氧烷,环己硅氧烷4军发性硅油9乳木果油牛油果树处理12橄榄油油橄榄处理10NeodermIPP棕榈酸异丙酯铺展6NeodermPTC季戊四醇四辛酸酯/癸酸酯濡湿效应(dampereffect)1.5SabonalCI61850/50棕榈醇粘度调节剂3NeowaxFL65硬脂酸甘油酯,PEG-100硬脂酸酯助稳、定剂2米蜡7K稻硬度0.2InutecSP1菊粉氨基曱酸月桂酯稳定剂0.8CGingerychee506340香精0.5几丁质-葡聚糖(L16,部分<90,)几丁质,(3-葡聚糖紧肤剂1.5DCaroblend(0.05%CaroquestMCT)99.95%(PPG-15硬脂基醚),0.05%(类胡萝卜素,辛S吏/癸酸甘油三酯)着色剂0.2禾呈序相A的成分在80°C下混合,然后在85°C下混合相B的成分。4夺相B力o入才目A中,并以lOOOOrpm均质4匕';昆合物5min,然后冷却至40°C。在搅拌下向乳液中加入相C和D的成分。实施例C11/身体护理乳的制备例如,能够才艮据以下配方制备包含1.5%几丁质-葡聚糖的身体护J里孝L。56<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>程序在75°C下混合相A的成分,然后在80°C下混合相B的成分。将相A力口入相B中,并以lOOOOrpm均质4匕混合物3分4中,然后冷却至40。C。搅:4半下向乳液中加入相C和D的成分,然后以lOOOOrpm使混合物均质化1分钟。加入几丁质-葡聚糖粉末(E),整个混合物搅拌60分钟(最终量为200g)。实施例C12:手霜的配制包含1.5%几丁质-葡聚糖的手霜例如可以根据以下所述配方制备。成分INCI功能%A水水溶液适量甘油甘油寒冷条件下的稳定性3EuxylK300苯氧乙醇、对羟基苯曱酸乙酯、对羟基苯曱酸曱酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯曱酸丁酯、对羟基苯曱酸异丁酯防腐剂0.8KeltrolT黄原胶抗乳化0.1N60csrsOlive橄榄油水解小麦蛋白,棕榈醇,油酸甘油酯,-更脂酸甘油酯,氢氧化钠乳化剂4InutecSP1菊粉氨基曱酸月桂酯助稳-定剂0.3二甲,圭油M350二曱硅油防白化(nti-whitening)5B乳木果油牛油果树植物油3SF1214环戊硅氧烷,二甲硅油硅树脂1NeodermPTC季戊四醇癸酸酯/辛酸酯抑制效应2NeodermTCC癸酸甘油三酸酯酯/辛酸甘油三酸酯酯中性油3杏仁油普通杏才直物油3SabonalCI61850/50棕榈醇稳定剂3几丁质-葡聚糖(L16,部分<90—几丁质,(3-葡聚糖保护和再生剂1.5C泛醇再生剂1香精香料香精0.2方案将相A的成分在65°C下进行混合,然后将相B的成分在65。C进4亍混合。3夺相A力a入相B,以lOOOOrpm一夸混合物进4亍均质化3分钟,然后冷却到40°C。将成分C加入到乳液中,冷却混合物,然后混合至少30分钟。实施例C13:抗粉刺洗剂的配制包含1.5%几丁质-葡聚糖的抗粉刺洗剂,例如可根据以下所述配方进4于制备。58成分INCI功能%ANeodermISN异壬酸异壬酯感官知觉Neoderm105新戊酸异癸酯改进涂散NeodermABC12-15苯曱酸烷基酯干燥感荷荷巴油荷荷巴叶提取物才直物油1InutecSP1菊粉氨基曱酸月桂酯稳-定乳-液0.2茶树油茶树精油香精油2PemulenTR2丙烯酸酯/C10-30丙蜂酸烷基酯交联聚合物乳化剂0.3B水水溶液46.1EuxylK300苯氧乙醇、对羟基苯曱酸曱酯、对羟基苯曱酸丁酯、对羟基苯曱酸乙酯、S于羟基苯曱酸丙酯、对羟基苯曱酸异丁酯防腐剂0.9CarbopolEDT20202%丙烯酸酯/C10-30丙烯酸烷基酯交联聚合物增稠剂20WalocelHM4000'2%羟丙基曱基纤维素增稠剂10几丁质-葡聚糖(LI6,部分<卯—几丁质,p-葡聚沣唐净化剂1.5CornP04二淀4分磷酸酯保湿剂3程序将相A的成分进行混合。将相B的成分进行混合。将相A加入相B,以lOOOOrpm将混合物进行均质化3分钟(最终量200g)。实施例C14::坑牛皮癣护-里产品的配制包含1.5%几丁质-葡聚糖的抗牛皮裤护理产品例如可以根据以下所述配方进4于制备。成分INCI功能%A水水溶液38.2AvicelPC591微晶纤维素,纤维素胶增稠剂,稳定剂1几丁质-葡聚糖(L16,部分<90,)几丁质,P-葡聚糖-抗牛皮裤活性剂1.5BNeocareP3C聚甘油-3辛酸酯抗菌溶剂1Centapowder雷公根粉调节细l包增殖0.1香精香料0.2C琉璃苣油琉璃苣(积雪草)4直物油30玫瑰精油麝香玫瑰才直物油20澳洲坚果油澳洲胡冲兆才直物油SabonalC161850/50棕榈醇稳定剂,感官知觉2InutecSP1菊粉氨基甲酸月桂酯稳-定乳液1.2考呈序混合相A的成分。混合相C的成分,并将相C升温到75。C。搅拌下将相C力a入到相A中,并以lOOOOrpm均质化混合物593分4f,然后冷却至40。C。混合相B的成分,然后3夺相B力口入到C/A乳液中。混合物然后以lOOOOrpm均质化lmin(最终量为400g)。实施例'D,系列几丁质-葡聚糖基化妆霜的定期施用对皮月夫特性的影响实施例D1.'每日施用基于浓度为1.5%的几丁质-葡聚糖的日霜达4个月对老年个体皮月夫生物测定参凄t的影响该实施例举例i兌明了实施例Cl描述的包含1.5%的几丁质-葡聚糖的霜剂(标号T1.5)对皮肤各种特性的影响,尤其是在皮肤老化的情况下,霜剂和其对照剂应用于老年个体前臂4个月的周期。由于对照霜剂是本身具有强水合性的制剂,该研究明显地证明了研磨的几丁质-葡聚糖的作用。方案该研究在20位年龄为58±4岁的男性志愿者上进行,任意地分别在他们的一只前臂上以每日两次的频率施用几丁质-葡聚糖基霜剂(T1.5)和对照霜剂达4个月。在每一个^M介时间,通过Friedman非参数4企-睑随后是Dunn4企-验进行产品间比4交。对于每一产品,根据相同的方法随时间进行比较。对于每一参数,在不同时间获得的值之间的显著差异通过Friedman非参数配对检验然后是Dunn才企-验进4亍寻找(p^直)。结果-1.通过squamometryX"^H^Hjt皮J3^^面结构SquamometryX是从角质层表面通过在测力计提供的在110g/cm2压力下施用透明自粘盘(transparentself-adhesivedisk)约10秒、来进4亍取才羊。角质层样品用甲苯胺蓝和石咸性品红溶液染色。通过反射比色法(Minolta色度仪)测定的色度(^*定义的颜色评价干燥症的状态。"正常"皮肤是光滑和良好水合的,所具有的squamometry指数。*约57。该值越高,角质层越厚,而皮肤就越粗糙和千燥。在研究开始(MO)时,将要接受试验制剂的两个部位具有相等的squamometry指数值。随后获得的色度CM直列于表Dl.l中。对于制剂TO,在处理1个月后(Ml)(p<0.05),以及随后的几个月(pO.001)都观察到显著降低。对于制剂T1.5,改进非常显著且从处理第2个月(M2)以来就存在(p0.001)。在第一和第三个月(M3)(pO.Ol),以及第一和第四个月(M4)(p〈0連)也是这种情况。两种制剂的效能之间的比较显示,T1.5从处理的第一个月末和随后的几个月内是显著4交好的(pO.OOl)。表Dl.l-显示皮月夫鳞片状态的Squamometry指数(色度C*)时间C*C*产品间比较(月)霜剂T1.5对照TOM011.95±2.2611.82±2.27NSMl8.79±2.310.49±2.59p<0.001M27.3±2.69.81±3.56p<0.0001M36.62±2.29.54±3.21p<0.0001M45.8±1.89.22±3.46p<0.0001时间之间的比4支(p)对照TOMlM2M3M4MOp<0.05p<0.001p<0.001p<0.001MlNSNSNSM2NSNSM3NS霜剂T1.5MlM2M3M4MONSp<0.001p<0.001p<0.001MlNSp<0.01p<0.001M2NSNSM3NSNS:值没有显著差异;MO表示O月等。2.通过紫外光增强的可视化作用(ULEV)评价肤色的不均匀性ULEV法(Visioscan)是非侵害性方法,其展示皮肤的鳞片状61态,尤其是正发生脱离的精细鳞片,并表征角质层角质细胞(corneocyte)的内聚性。测定^直表示为受该方法影响的皮肤表面的百分数。当皮肤是光滑的而角质层是内聚性的,ULEV百分数则低,达5%~6%的数值。在研究中的开始时间(thetimeofinclusion)(MO),以及处理一个月之后(Ml),受脱鳞过程(desquamationprocess)影响的皮肤表面的百分数在两个处理部位相似,约8-9%。随后获得的值列于表D1.2中。对照制剂TOvMv第一个月就提供了显著改进(p<0.001),而研究的剩余时间所述改进持续存在,在第四个月达到7.4%的值。制剂T1.5也提供了显著的改进,这从第一个月就能看到(p<0.01),在随后的几个月期间变得更强烈(p<0.001)。这能够通过第一和第四个月之间(p<0.01)以及第二和第四个月之间(p<0.05)的改进看出。相乂于于对照霜剂,所处理的两个部4立之间的比较显示出制剂T1.5在第二个月(p<0.01)以及在第三个月和第四个月(pO.001)的伊O异寸生。表Dl.2:受脱鳞过程影响的皮肤表面的百分数(通过ULEV"紫外光增强的可浮见化作用",Visioscan测定)<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>NS:^f直没有显著差异;M0表示0月等。3.通过光学轮廓测量术(opticalprofilometry)评价皮肤的形貌(relief):皮肤的形貌通过光学4仑廓仪(Hitachi照相4几)进4亍非侵害性观察,分析4仑廓测量照片以计算皮肤粗糙的平均深度,Rz(|im)。在研究中的开始时间(M0),两个吾IM立的RzUJ殳有显著差异。随后获得的平均深度值列于表D1.3中。制剂T0在处理的第四个月末Rz值显著降低(pO.Ol)。制剂T1.5从处理的第二个月直至研究结束Rz值高度显著降低(p0.001)。在处理的第一个月和第三个月之间改进也显著(p<0.05),在处理的第一个月和第四个月之间(p<0.001)以及第二个月和第四个月之间(p<0.05)改进也显著。与对照霜剂相比,发现制剂T1.5从第一个月(p<0.01)以及在随后几个月中(p<0.001)更为有岁支。图5示出了施用T1.5霜剂和TO霜剂16周之后一个个体的两前臂上获得的轮廓测量照片。表D1.3:通过光学4&廓测量术测定的皮力夫^l4造度的平均深度<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>NS:^t没有显著差异;MO表示0月等。4.通过测定皮肤中的共振运行时间评价皮肤的张紧性/弹性在皮月夫中的共l展运4亍时间(RRTM,4壬意^f直)通过弹性纤维组织测试#笨头(Reviscometer)在皮肤上贴附的两个条带之间进4亍测定。RRTM是皮肤固有张力和张紧性的良好指标,因为皮肤张紧性和绷紧性越强,其形成凸起的皱褶就越少,超声波传播就越迅速。因此,RRTM越短,构成皮肤的部分就越绷紧。RRTM也受到角质层状态、其内聚力的影响;角质层越正常,RRTM就越短。研究开始时和实-睑一个月后,两个部位之间RRTM值是相似的。随后获得的值如表D1.4所示。制剂TO在处理期间对RRTM值并未带来4壬<可改变。制剂T1.5在三个月(p<0.01)和四个月(p<O.OOl)后i秀导RRTM显著降^f氐,第一个月与第二个月之间(p<0.01)、第三个月和第四个月之间(p<0.001)也分别显著降低。与对照制剂相比较,霜剂T1.5在两个月和三个月后(p<0.01)以及四个月后(p<O.OOl)也显著地更为有效。表D1.4:共振运行时间测定(RRT1VH壬意单位,弹性纤维组织测试纟笨头)时间(月)霜剂T1.5对照TO产品间比较MO326士64327±61NSMl329±58329±54NSM2306±68329士60p<0.01M3302±60322±52p<0.01M4291±59322±56p<0.0001时间之间的比较(p)对照TOMlM2M3M4M0NSNSNSNSMlNSNSNSM2NSNSM3NS霜剂T1.5MlM2M3M4MONSNSp<0.01p<0.001Mlp<0.01p<0.001p<0.001M2NSNSM3NSNS:值没有显著差异;MO表示O月等。5.通过测定电容评价角质层水合作用角质层的水合作用通过采用角质层含水量测试议(Corneometer)测定电容(任意值)进行评价。皮肤的电容与皮肤含水量和角质层的角质细胞的水合状态成比例。良好的水合皮肤电容为65,非常干燥的皮肤为3040。在研究开始时两部位上电容值相似。随后获得的值如表D1.5中所示。3十照制剂T0在一个月(p〈0.05)和四个月(p<0.001)之后4吏《寻可能显著增加电容。在两个月和三个月的中间时间内,施65用霜剂没有观察到对电容测定值的影响。制剂T1.54吏得在第一个月后(p<0.05),以及在第二个月和第四个月(p<0.001)电容值可显著增大。在第一个月和第四个月之间也观察到电容显著增加(p<0.05)。在一个月之后(p<0.05)霜剂T1.5比对照霜剂显著更为有效,而在2和4月(p〈0.001)甚至更加显著有效。表DL5:通过皮肤电容的测定(角质层含水量测试议)评价角质层的水合作用时间(月)霜剂T1.5对照TO产品间比较M057.7士4.054.8±3.1Ml61.3±3.057.3士13.1p<0.05M262.9±2.757.2士12.9p<0.001M363.5±1.857.2±12.6p<0.001M464.6士1.958.0±12.5p<0.001时间之间的比较(p)对照TO1234M0t><0.05NSb<0.001MlNSM2NSM3霜剂T1.51234MOp<0.05p<0.001p<0.001p<0.001MlNSNSp<0.05M2NSNSM3NSNS:值没有显著差异;MO表示O月等。结论种生物测定参数都表示出几丁质-葡聚糖基霜剂(T1.5)与包含除了几丁质-葡聚糖之外的相同成分的对照霜剂(TO)相比的优越性。老年皮肤更加光滑、鳞片更少、更加水合、更加紧致和干燥特征更弱。结果表明几丁质-葡聚糖基霜剂发挥了一系列作用,使得皮肤可重荻其弹性,而由此表现得更加光滑,少起伏形貌,更加容光煥发,使得可以将其描述成抗老化成分。该结果可以部分地通过相当强的持久水合效果得以解释,正如通过有象角质4义和电容测试所指示的,但是其他更深的持久作用机理也被涉及,其使得皮肤可恢复其屏障功能而具有其激发的代谢和防护活性。66实施例D2:每日施用基于浓度为1.5%的几丁质-葡聚糖的日霜达4个月对在老年个体的眼部区域的皮肤的皱紋和表面局部拓朴学(surfacetopology)的影响研究该实施例举例说明了基于浓度为1.5%的几丁质-葡聚糖的霜剂对皮肤各种特性的影响,特别是在皮肤老化的情况下,将测试霜剂和其对照霜剂每日施用到老年个体眼角的区域,达4个月的周期。日霜是采用表D2.1中的成分、根据实施例A5生产的粒度小于125jmi的几丁质-葡聚糖颗粒而制备的水包油型乳液,而对照霜剂不含几丁质-葡聚糖。表D2.1:包含粒度<125jam的几丁质-葡聚糖的日霜(测试)和不含几丁质-葡聚^f唐的霜剂(对照)<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>方案在21个59±1岁(52~65岁)女性志愿者上实施单盲、个体内研究(single-blind,intra-individualstudy),这些志愿者都有深度鱼尾紋,她们向眼角区域的皮肤(鱼尾紋)以每天两次施用几丁质-葡聚糖基霜剂(测试霜剂)和不含几丁质-葡聚糖的霜剂(对照)4个月。在研究开始和随后在应用1、2、3和4个月之后,皮肤形貌(relief)参数釆用皮肤成像分析仪(SkinImageAnalyser)所分析的SilFlo⑧凝胶中的皮肤印迹的照片进行表征。照片以35°角拍才聂以1更可以^使阴影区i或可一见4匕(或显<象,visualization)。Quantirides⑧图像分析软件给出总的皱紋表面积,所有具有0.03mm2最小表面积的皱紋都被^r测到。由此给出皱紋的数量和平均深度,尤其是皮肤的微形貌的皱紋。参数上的变化随后通过以下比较进行计算比较时间t时所有志愿者的参数平均值与时间零时的参数平均值(△1)比较时间t时所有志愿者用包含几丁质-葡聚糖的测试霜剂处理的区域的参数平均值与采用对照霜剂处理的区域的参数平均值(A2)才艮才居以下^式Al(o/o)=Xt-Xt。100△2=()CTt—XTt0)—(Xpt—Xpt0)和△2(%)=^——;2y、100ATt0+^ipt—A附J其中Xt和Xto是采用测试霜剂或对照霜剂在时间t和tO时获得的参数X的平均值;Xit和XTt。是釆用测试霜剂(包含几丁质-葡聚糖)在时间t和t0时获得的参数X的平均值;Xpt和Xpt。是采用对照霜剂(无几丁质-葡聚糖)在时间t和to时获得的参数X的平均值。统计通过Friedman非参数配对试验接着采用Dunn检验寻找两种参数(时间t对时间0,或测试霜剂对对照霜剂)之间的显著差异。结果表D2,2:对于包含几丁质-葡聚糖霜剂(测试)和不含儿丁质-葡聚糖的霜剂(对照)在时间t时与时间0时比较皮肤形貌(skinrelief)参数平均值的变化<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>NS:差异不显著表D2.3:采用包含几丁质-葡聚糖的测试霜剂处理的区域,与用对照霜剂处理的区域的参数平均值变化相比,在时间t时所有志愿者皮跌形貌参数平均值的变化<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>从该实施例能够推断,包含1.5%粒度小于125pm的几丁质、葡聚糖的水包油乳液型霜剂使得能够使鱼尾紋区域的皮肤表面光滑,明显减少皱紋的数量和深度,尤其是^f敖形貌的皱褶。皮肤的形貌通过以下进4亍表;f正与时间零(Al)和使用对照霜剂(A2)比较,从使用几丁质-葡聚糖基霜剂3个月以来总起皱表面积显著降低;与时间零(Al)和使用对照霜剂(A2)比较,使用几丁质-葡聚糖基霜剂4个月以后,微形貌的皱褶深度和数目显著降低实施例'D3,有精细可控粒度的几丁质-葡聚糖的组合物的抗老化效应。在几丁质-葡聚糖存在下的重构人体表皮和人体成纤维细胞共培养模型中原骨胶原I产生的研究所使用的生物模型包含源于正常人体表皮(PF2,第八代)的人体表皮(0.5cm5天)和成纤维细胞,其放置于24孔板中(每孑L一种重构表皮和120000成纤维细月包),在DMEM/HAMF12补充的共培养基中培养。采用表D3.1中的成分、粒度小于125(am的几丁质-葡聚糖(批次L25)制备的水包油乳液型简单制剂,局部施用于表皮(5mg/cm2)。进行两个研究细胞毒性研究(表皮和成纤维细胞的细胞存活力),和在培养基中对原骨胶原I产生的研究。表D3.成分INCI名称%A水水溶液适量甘油甘油35%乳酸适量(至pH4.5)适量BNeodermTCC姿酸/辛酸甘油三酸酯5SimulgelEPG丙烯酸钠/丙烯酰二曱基牛磺酸酯共聚物,聚异丁烯,辛基/癸基葡糖苷2.8C几丁质-葡聚糖<125nm;<90|im;<50|im几丁质,P-葡聚糖1.570细胞毒性在局部施用测试霜剂之后,与成纤维细l包共i咅养的表皮用5%C02在37。C下培养48小时。成纤维细胞和表皮的细胞存活力通过用MTT(溴化3-(4,5-二甲基噢唑-2-基)-2,5-二苯基四唑)对活细胞进行比色标记,以及通过对成纤维细胞形态学进行一见觉评价,来进行评估。用测试霜剂处理的培养物的细胞存活力与未处理的培养物(对照)的细胞存活力进行比4交。对每个处理类型中三个培养物进4亍。结果如表D3.2中所示。表D32-局部施用含1.5%几丁质-葡聚糖的霜剂在48小时4妄触时间后对成纤维细胞共J备养物中重构表皮和成纤维细胞的存活力的影响局部处理表皮的存活力(%)成纤维细胞的存活力(%)无(对照)100100包含1.5%几丁质-葡聚4唐的测i式霜剂94100原骨胶原I的产生-表皮/成纤维细胞共培养物置于3种不同条件下-局部施用包含1.5%几丁质-葡聚糖的测试霜剂;-未处理(对照);画添力口TGF-(3和抗坏血酸的)容液以补充;咅养基并Y吏成纤维细胞导致的骨胶原产生最大化(参照)。每种条件下3个培养物用5%C02在37°C下温育48小时。培养基中溶液的原骨a交原I的浓度通过ELISA分析(原骨力交原I型C-肽EIA试剂盒,BioWhittakerMK101)进4亍测定。各组的结果之间的比丰支通过采用Dunnett多重比4交4企-险的方差分析(ANOVA)进行计算(表D3.3)。71表D3.3:霜剂局部施用几丁质-葡聚糖基霜剂对表皮/成纤维细胞共培养基(n=3)中原骨胶原I型产生的影响与对照组比较为参数p<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>由该实施例可以4寻^口,与未处J里的只t照纟且相比,向成纤纟,细月包共培养的重构表皮局部施用基于浓度为1.5%的粒度小于125(am的几丁质-葡聚糖的霜剂,对于表皮和成纤维细胞是无毒的,这也非常显著地促进了培养基中原骨胶原I型的产生(其由表皮细胞和/或成纤维细胞分泌)。基于浓度为1.5%的粒度小于125(^m的几丁质-葡聚糖的霜剂因此对皮肤发挥了抗老化作用,原骨胶原I型是骨月交原的前体,它是真皮细胞外基质的主要成分。实施例'D4,含具有精细可控粒度的几丁质-葡聚糖的组合物的抗老化作用。几丁质-葡聚糖对暴露于UVB辐射的人体细胞活组织中郎才各汉斯细月包(Langerhanscell)的保护作用的评4介方案朗格汉斯细胞是主要位于表皮最深层中的树突细胞。它们不含黑色素并且对诸如暴露于UV辐射的外界侵袭非常敏感。在外应力的情况下,它们倾向于从表皮迁移到真皮,然后激发淋巴细胞的活化。存在于表皮中的健康朗格汉斯细胞的数目因此用作应力相关和老化相关的皮肤损伤的指示。所用^t型是源于活;险组织的皮肤外才直体(4cm2),在6-孔一反上在培养基(DMEM,2mML-谷氨酸,50IU/ml-50ng/ml青霉素-《连霉素)、10%胎牛血清中于37。C(95%空气和5%(:02)培养。对以下3种处理的效果进行比较-无局部施用的?寸照;-局部施用5mg/cm2才艮据实施例29制备的含1.5%粒度小于125|am的几丁质-葡聚糖的霜剂;-局部施用5mg/crtf具有保护因子20的防晒霜(参照)。进行两种研究细胞毒性研究,以及研究几丁质-葡聚糖基霜剂对受到或未受到UVB辐射照射的外植体中朗格汉斯细胞数目的影响。细胞辜性通过处理后24h的外植体细胞的细胞存活力(通过如实施例29中的MTT试-验的方式进行可一见化)进行表征。结果列于表D4.1中。表D4.1:在表皮上局部施用含1.5。/。几丁质-葡聚糖的霜剂在48h接触时间后对皮肤外植体的存活力的影响局部处理表皮的存活力(%)无(^j"照)100包含1.5%几丁质-葡聚糖的霜剂94UVB辐射对外植体中存在的使泉朗格汉斯细胞数目的影响执行第一次局部施用,夕卜植体培养24h,然后,第二次局部施用后lh,在UVB+组中用UVB辐射(0.75J/cm2)照射外4直体,而在UVB誦组中不进行照射。然后对外植体培养16h。每组使用两个外植体。免疫组织化学冷冻外植体,将每个外植体的三个部分固定于丙酮/曱醇混合物中,然后用抗-CDla-FITC抗体((AbCysLO-CDla-F05)培养并进行Hoechst细胞核染色lh。通过荧光显《鼓术7见察这些部分。对<叉4又具有标记荧光和通过树突的存在而i正实的"正常,,形态学的朗格汉斯细胞进行计数。与未进行UVB照射的对照相比的保护程度根据以下7>式进行计算-.°LC对照w.-LC对照uv十其中-LC处理uv+是暴露于UVB辐射的处理外植体中朗格汉斯细胞的数目。-LC对照uv+是暴露于UVB辐射的未处理外植体中朗格汉斯细月包的凄t目。-LC对照uv-是未暴露于UVB辐射的未处理外植体中朗格汉斯细月包的凄史目。结果列于表D4.2中。表D4,2:与未处王里的^t照和用因子-20防晒霜处J里的参照相比,用几丁质-葡聚糖基霜剂处理并暴露(UVB+)或未暴露(UVB-)于UVB辐射的皮力夫外才直体的表皮中用抗CDla抗体标记的朗才各汉斯细胞(LC)的数目;保护程度<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>从该实施例推断,局部施用基于浓度为1.5%的粒度小于125pm的几丁质-葡聚糖的霜剂,使得可以在暴露于UVB辐射的皮肤外植体的表皮中维持大部分的朗格汉斯细胞。计算得出对UVB暴露相关性损伤的保护程度为51%,因子-20防晒霜的保护程度为100%。这种抗UVB辐射的<呆护作用有助于几丁质-葡聚糖化合物的抗老化功效。实施例'E,口服给予粒度小于500um的几丁质-葡聚糖粉末对于表征人体中心血管危险的参数的影响该实施例旨在证实口月良给予人体粒度小于500um的几丁质-葡聚糖的抗动脉粥样硬化、抗氧化、降血液胆固醇和降血脂功效所4吏用的才莫型是具有正常体重或体重稍樣支超重、且具有在标准々大食后为1.32.5g/L的胆固醇血症的人。粒度小于500pm的几丁质-葡聚糖(根据实施例A5的方法获得)以4.5g/天的速率,在主食前30min分3次摄取。在4个星期的周期内研究功效。对照组接受4.5g/天当量的对照。所述对照是内用的药物级的重高岭土。30位2050岁的男性个体,体重指凄t为1828kg/m2,胆固醇血症1.32.5g/L,将他们随机、单盲地分成两组(10个对照/20个进行处理)。对研究考量的血液参数进行医学咨询和测试,并且在挑选个体过程中填写食物问巻调查。食物消耗、生化和抗氧化参数和人体测量参数在研究过程中测定3次(开始时、第二周时和研究结束时)。血样使得可以分析表E1中重申的生化和抗氧化参数。人体测量测定涉及体重监控、身高测定、腰围测定(waistmeasurement)、围测定、大腿围和动月永压测定。定期消耗具有可控粒度的粉末形式的植物多糖,如几丁质-葡聚#唐,对代j射疾病如高月旦固醇血、心血管疾病或广义地,代j射综合症和肥胖症发挥预防功效。表E1:在对人体试—睑过程中监控的生化和抗氧化参凄史75<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>应该注意到,口服才聂取粒度小于500pm的几丁质-葡聚糖,显著地改进了人体内脂质和抗氧化剂分布和相关参数。这4吏得能够推断,定期消耗几丁质-葡聚糖对于预防动脉硬化症以及广义地关于有关病理学是有益的。实施例'F,系列至少包含具有精细可控粒度的几丁质-葡聚糖的多孔内聚性物质实施例F1:多孔材料形式的几丁质-葡聚糖的应用通过均质化lOOg具有精细粒度的几丁质-葡聚糖粉末(L25,部分〈卯jum)和900g水至少1小时而制备几丁质-葡聚糖膏剂。将该膏剂在-18。C下冷冻,然后冻干。获得具有良好机械强度的内聚性多孔材料。通过扫描电子显樣吏术观察(图6),显示出非常通气的、各向同性的原纤结构。实施例F2z内聚性多孔复合材料形式的几丁质-葡聚糖和壳聚糖的应用制备2%壳聚糖在1%乙酸中的溶液。将具有精细粒度的几丁质-葡聚糖粉末(乙16,部分<90ium)分散于其中,分散体均质化2分钟。将分散体在-18。C下冷冻然后冻干。获得具有良好机械强度的内聚性多孔材料。通过扫描电镜显《效术观察(图7,纵截面),显示出非原纤性互联多孔结构,孔道呈现出一定方向。实施例F3:具有壳聚糖作为聚合物基质以及几丁质-葡聚糖共聚物颗粒作为受分散剂的多孔复合材料的制备粒度对机械和形态学特性的影响根据实施例A5的方法制备各种几丁质-葡聚糖粒度。颗粒直径小于63pm的部分和直径为125250pm、250500pm以及500~1000pm的部分通过筛分进行分离。分子质量42K(通过毛细管测粘法测定分子质量)和11%乙酰化程度的壳聚糖溶解于乙酸(1%)中乂人而形成浓度等于2%(m/m)77的溶液。将给定重量的具有可控粒度的几丁质-葡聚冲唐加入到纟合定体积的该溶液中。通过f兹力搅拌2-3min使4mL体积的悬浮液均质化,随后倾倒于模(菱形)中并冷冻。然后将样品放置于冻干器架上从而通过在真空下升华48h而除去溶剂。通过改变壳聚糖和几丁质-葡聚糖的重量比例以及几丁质-葡聚糖粉末的粒度而制备具有各种组成的内聚性多孔复合材料。通过改变模的尺寸来生产具有各种规格的泡沫形式的复合材料-实施例六边形聚苯乙烯称量船,小规格4mL溶液;大规格15mL溶液。所制备的泡沫的配制参数在以下表F3.1中重申。表F3.1:壳聚糖/几丁质-葡聚糖混合物和内聚性多孔复合材料的性能标号壳聚糖/几丁质-葡聚糖的比例(m/m)几丁质-葡聚糖部分密度(g/cm3)杨氏模量(MPa)A225/75<63(^m0.1040.16±0.02B250/50<63IlUti0.0520.47±0.15C275/25<63|am0.0380.14±0.09A325/75125-250nm0.1140.23±0.01B350/50125-250ium0.0600.07±0.01C375/25125-250pm0.0370.15±0.05A525/75500-1000iam0.1140.06±0.02B550/50500-1000nm0.0600.25土0.06C575/25500-1000nm0,0390.31±0.01通过冻干获得的泡沫形式的复合材料根据通过扫描电子显微术(SEM)在微结构方面进行表征。泡沫的抗压强度通过杨氏模量表示,在装酉己低测力计(forcecell)的Instron5566拉伸-压缩试-睑机上通过轴向压缩试验进行测定。样品岸义受0.03N的预加负荷,以0.2mm/min的速度变形。乂人应力/应变曲线的初始线性区域测定杨氏模量。密度通过重量分析(泡沫的体积/质量)进行测定。结果报告于表F3.1中。SEM显樣吏照片3口图8所示。78由此,/人表F3.1可以理解,泡沫的密度随着几丁质-葡聚糖比例的增加而增加。令人惊讶的是,可以注意到对于相等的壳聚糖/几丁质-葡聚糖比例(50/50),杨氏4莫量最高,而对于比例75/25和25/75却显著较低。由此,约50%几丁质-葡聚糖颗粒的比例构成用于改进泡沫机械强度、以及在这一点上的轴向抗压强度的最佳比例。并且通过图8可注意到,几丁质-葡聚糖颗粒均匀分布于泡沫的厚度,其密度随着其初始比例逻辑性地增加。各处发if见的颗粒都处于孔道中并且经常正好固定于孔道壁上。通过SEM对才羊品A5和B5(几丁质-葡聚并唐4立度为5001000)am)以及样品A4和B4(粒度250500|Lim)获得的图<象记录(图9)显示,不再存在结构均匀性。冻干后样品的下半部中颗粒尺寸及沉积物过大且集中。该实施例证实,以在多孔复合材料中应用几丁质-葡聚糖共聚物为目的,该共聚物应该具有精细的可控粒度。权利要求1.一种包含至少一种几丁质-葡聚糖共聚物的真菌提取物,所述几丁质-葡聚糖共聚物为微米颗粒形式,其中以重量计至少70%的所述颗粒具有小于500微米(μm)的粒度。2.根据权利要求1所述的真菌纟是取物,其特征在于,以重量计至少70%的所述几丁质-葡聚并唐共聚物颗粒具有小于355孩吏米(pm)的粒度。3.根据权利要求1或2所述的真菌提取物,其特征在于所述几丁质-葡聚糖共聚物包含比率为95:515:85(m/m)的所述几丁质的N-乙酰基-D-葡糖胺单元与P-葡聚糖的D-葡萄糖单元。4.根据权利要求13中任一项所述的真菌提取物,其特征在于,相对于所述真菌源才是耳又物的总质量,所述真菌源的多辟唐包含以质量计大于70%的几丁质-葡聚糖共聚物。5.根据权利要求14中任一项所述的真菌提取物,其特征在于,其来源于选自由子嚢菌类真菌、黑曲霉类真菌、担子菌类真菌、香菇(冬菇)类真菌和双孢蘑菇(草菇)类真菌及它们的任意混合物构成的组中的真菌。6.根据权利要求15中任一项所述的真菌提取物,其特征在于,所述真菌提取物是所述几丁质-葡聚糖共聚物的水解产物。7.根据权利要求16中任一项所述的真菌提取物,其特征在于,所述孩i:米颗^立由以重量计至少50%的粒度小于250孩克米(卩m)的颗粒构成。8.根据权利要求16中任一项所述的真菌提取物,其特征在于,所述纟鼓米颗粒具有小于125(im,优选在50樣t米(pm)和90微米(|um)之间的粒度。9.根据权利要求16中任一项所述的真菌提取物,其特征在于,所述孩吏米颗粒具有小于90樣支米((am)的粒度。10.—种包含根据权利要求19中任一项所限定的真菌提取物的组合物。11.根据权利要求10所述的组合物,其特征在于,所述组合物是化妆组合物。12.根据权利要求10或11所述的组合物,其特征在于,所述多糖或所述真菌提取物以总体组合物的按重量计0.01%~10%的浓度使用。13.—种悬液、乳液或分散体形式的组合物,包含溶剂和至少一种根据权利要求19中任一项所限定的真菌提取物。14.一种根据权利要求1013中任一项所限定的组合物在实施化妆、皮肤化妆或皮肤病学护理中的应用,其特征在于,所述护理选自由用于改善皮肤的水合、提高皮肤的保水能力、改善皮肤的屏障功能、改善皮肤保护和/或皮肤的防护活性、发挥抗老化功效、改善皮肤外观、改善皮肤的均匀度、改善皮肤的紧致性和皮肤的张紧性、以及改善表皮对真皮的附着的身体或面部护理构成的组。15.根据权利要求1013中任一项所限定的组合物在减少皱紋或者延纟爰或预防铍乡丈出现中的应用。16.根据权利要求1013中任一项所限定的组合物作为食品补充剂组合物的应用,优选用于获得选自抗氧化、降低血液胆固醇或降低血脂作用、对免疫系统的刺激作用、尤其是在糖尿病的情况下的降血糖作用构成的组中的作用,以及在预防和/或4氐抗选自血脂异常症、动月永粥才羊石更4b、月巴胖症、月巴胖相关疾病、心血管疾病、代^射综合;f正、^f唐尿病和高尿酸血症构成的组中的病理学的〗乍用。17.—种食品补充剂组合物,包含根据权利要求1~9中任一项所限定的至少一种真菌源纟是取物作为活性成分。18.—种药物组合物,包含根据权利要求19中任一项所限定的至少一种真菌源纟是取物作为活性成分。19.根据权利要求19中任一项所限定的真菌源提取物或者根据权利要求1013中任一项所限定的组合物作为组合物的赋形剂的应用。20.—种用于制备真菌提耳又物的方法,包括a)从真菌生物质中提取和纯化几丁质-葡聚糖共聚物,这种真菌才是取物中的所述聚合物不溶于水或有冲几溶剂,b)乂人干燥的或溶解的几丁质-葡聚糖开始,进4于过滤、干燥、研磨以及对研磨后获得的颗粒分级的步骤,这些步骤同时或单独进4亍,并且与它们的次序无关,4吏;彈可以获4寻其中以重量计至少70%的颗粒粒度小于500微米((am)的孩丈米颗粒。21.—种多孔材料,包含粒度小于500微米(|Lim)的颗粒形式的至少一种真菌提取物,优选至少一种几丁质聚合物和/或一种几丁质-葡聚糖共聚物。22.才艮据权利要求21所述的多孔材料,其特征在于,所述多孔材料包含根据权利要求1~9中任一项所限定的真菌提取物。23.根据权利要求21或22所述的多孔材料,其特征在于,所述真菌提取物具有小于250微米、优选小于90微米、更优选小于63微米的粒度。24.—种用于制备多孔材料的方法,其特征在于,包括以下步骤在溶剂中分散或乳化或悬浮至少一种粒度小于500孩t米的颗粒形式的真菌才是取物,然后除去这种溶剂并获得包含所述真菌提取物的多孔材料。25.—种包含基质和被分散剂的多孔复合材料,所述基质,也称为分散剂,是至少一种类型的聚合物,而所述被分散剂是粒度'J、于500微米(pm)的颗粒形式的至少一种真菌提取物,优选几丁质聚合物或几丁质-葡聚糖共聚物。26.根据权利要求25所述的多孔复合材料,其特征在于,所述多孔材料包含根据权利要求1~9中任一项所限定的真菌提取物。27.根据权利要求25或26所述的多孔复合材料,其特征在于,所述真菌提取物具有小于250微米、优选小于90微米、更优选小于63微米的粒度。28.—种用于制备包含基质和分散在所述基质中的试剂的多孔复合材料的方法,其特征在于,包括(i)溶解能够形成所述多孔复合材料的所述基质的聚合物的步骤,(ii)将至少一种粒度小于500微米的颗粒形式的真菌提取物分散、或乳化、或悬浮在所述聚合物的溶液中的步骤,(iii)从包含所述真菌提取物的所述聚合物的溶液中除去所述溶剂的步骤,(iv)获得包含形成所述基质的所述多孔聚合物和形成所述被分散剂的所述真菌提取物的复合材料。全文摘要本发明涉及一种微米颗粒形式的几丁质-葡聚糖共聚物。本发明具体而言提供了一种用于制备化妆组合物、特别是皮肤病学或皮肤化妆组合物的包含微米颗粒形式的几丁质-葡聚糖的共聚物。具体而言,本发明涉及一种用于面部或身体护理,例如使皮肤水合、紧致或光滑、以及发挥抗老化功效包括抗皱效应的化妆组合物。本发明的目的也是提供一种例如能够用于组织工程或细胞培养中或者能够用作化妆品或制药工业中的原料的多孔材料。文档编号C08B37/08GK101583630SQ200780049901公开日2009年11月18日申请日期2007年11月20日优先权日2006年11月20日发明者山德里内·戈蒂埃,让-米歇尔·布吕耶尔,韦罗妮克·马凯申请人:基多塞米股份公司
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1