专利名称：一种从林蛙残皮制备胶原海绵的方法
技术领域：
本发明属于农产品综合利用领域，具体涉及一种从林蛙残皮制备胶原海绵的方法。
背景技术：
由于林蛙皮具有较强的修复能力和韧性，并且即使死亡也几十年不腐，因此引起了诸多学者的兴趣，研究认为这与林蛙皮含有大量抗菌活性物质和大量胶原蛋白有关，其中蛙皮胶原蛋白含量在26% -48%之间。多数研究集中于林蛙皮抗菌活性物质的研究，而关于蛙皮胶原蛋白的研究较少。胶原海绵是胶原液经发泡、固化、冻干和灭菌而制成的一种海绵状固体制剂，由于胶原具有优越的生物相容性和安全性、生物可降解性和弱抗原性，使得它成为最优越的生物医学材料。从林蛙残皮(提取完抗菌活性物质)制备胶原海绵可促进林蛙综合利用，提高林蛙附加值。
发明内容
本发明的目的是提供一种从林蛙残皮制备胶原海绵的方法。该方法工艺简单，适合工业化生产。所述方法包括干燥、酸酶提取、酶灭活、纯化和冻干。干燥经醇提处理的蛙皮残渣低温干燥。酸酶提取在冰醋酸提取缓冲液中加入蛋白酶和蛙皮残渣提取胶原蛋白。酶灭活加入EDTA灭活蛋白酶。纯化抽滤获得滤液，盐析沉淀，蒸馏水透析过夜。冻干将透析后的胶原蛋白溶液用紫外线辐射，冷冻干燥，获得胶原海绵。
具体实施例方式实施例I干燥经醇提处理的蛙皮残渣低温干燥(35 °C )。酸酶提取在50ml冰醋酸提取缓冲液中加入蛋白酶20mg和蛙皮残渣lg，37°C提取 48h。酶灭活加入20mM EDTA灭活蛋白酶。纯化抽滤获得滤液，加入硫酸铵5mg，蒸馏水透析过夜。冻干将透析后的胶原蛋白溶液用紫外线辐射254nm，工作距离5cm，辐照时间4h，冷冻温度-40°C冷冻干燥，获得胶原海绵。实施例2 干燥经醇提处理的蛙皮残渣低温干燥(40°C )。
酸酶提取在200ml冰醋酸提取缓冲液中加入蛋白酶80mg和蛙皮残渣4g，37°C提取
48h。
酶灭活加入20mM EDTA灭活蛋白酶。纯化抽滤获得滤液，加入硫酸铵20mg，蒸馏水透析过夜。
冻干将透析后的胶原蛋白溶液用紫外线辐射365nm，工作距离10cm，辐照时间3h，冷冻温度-40 V冷冻干燥，获得胶原海绵。
权利要求
1.本发明涉及一种从林蛙残皮制备胶原海绵的方法，其特征在于所述方法包括下述步骤 a)干燥将经醇提处理的蛙皮残渣低温干燥； b)酸酶提取在冰醋酸提取缓冲液中加入蛋白酶和蛙皮残渣； c)酶灭活加入EDTA灭活蛋白酶； d)纯化抽滤获得滤液，盐析沉淀，蒸馏水透析过夜； e)冻干将透析后的胶原蛋白溶液用紫外线辐射，冷冻干燥，获得胶原海绵。
2.根据权利要求Ia所述的干燥，其特征在于干燥温度低于40°C。
3.根据权利要求Ib所述的酸酶提取，其特征在于冰醋酸浓度0.5M，提取缓冲液蛋白酶蛙皮残渣=50 20 l(mL mg g)，37°C提取 48h。
4.根据权利要求Ic所述的酶灭活，其特征在于EDTA终浓度为20mM。
5.根据权利要求Id所述的纯化，其特征在于硫酸铵浓度为0.lg/L。
6.根据权利要求Ie所述的冻干，其特征在于紫外线波长254-365nm，工作距离5-lOcm，辐照时间l_4h，冷冻温度-40°C。
全文摘要
本发明公开了一种从林蛙残皮制备胶原海绵方法。该方法工艺简单，成本低，耗时短，适合工业化生产。所述方法包括干燥、酸酶提取、酶灭活、纯化和冻干，为林蛙残皮的综合利用和高值产品开发提供依据。
文档编号C08L89/00GK102634055SQ20121013228
公开日2012年8月15日 申请日期2012年5月3日 优先权日2012年5月3日
发明者关爽, 卢静, 李提提, 焦雪军, 王大成, 王振宁, 许琳莉, 邓旭明, 黄国任 申请人:吉林大学