专利名称：一种治疗Ⅱ型糖尿病的黄连多糖及其制备方法
技术领域：
本发明涉及治疗II型糖尿病的药物。
背景技术：
糖尿病(diabetes mellitus, DM)是与遗传因素有关,又与多种环境因素相关的慢 性全身性多发病，是因胰岛素分泌不足或利用不足而引起糖、脂肪、蛋白质代谢紊乱的综合症，中医中属于“消渴病”的范畴。我国糖尿病患病率正逐年上升，尤以II型糖尿病急剧上升为主，但目前国内外还没有理想的治疗药物。而中医药具有易于接受、毒副作用小、适合对糖尿病长期控制等特点，在有效预防和缓解糖尿病及其并发症、提高胰岛素敏感性方面具有较大的优势，引起医学界的越来越多的关注。II型糖尿病是一种终身性疾病，目前国内外的药物疗效不佳。西药治疗不彻底、毒副作用大、易产生耐受性不适合长期服用；传统中药效果不理想。黄连是应用最为广泛的中药之一，它具有包括抗糖尿病，抗炎，抗癌等多样的药理作用，早期的研究表明生物碱为其抗糖尿病的活性成分。Fu等的报道证实黄连水煎剂能够比生物碱产生更为明显的降血糖活性，Li等也证实非生物碱类提取物能显著的促进培养的脂肪细胞3T3-L1对葡萄糖的摄取能力。这些结果表明，有其他的成分对糖尿病和其并发症有作用。近年来，多糖的抗糖尿病作用被广泛报道。本领域呈现出糖尿病药物和功能食品研发的巨大潜力。国内外学者对人参、绿茶、枸杞、南瓜、黄芪、麦冬、红景天、桑叶、木耳、虫草、香菇、灵芝等近20种中药或天然药物中多糖进行了研究，表明这些植物多糖具有不同程度的降血糖活性。
发明内容
本发明的任务是提供一种治疗II型糖尿病的药物，使其具有疗效显著，无毒副作用、患者易于接受、适合对疾病长期控制等特点。本发明的技术方案是本发明提供的这种治疗II型糖尿病的药物是黄连多糖。本发明的黄连多糖的制备方法包括以下步骤(I)取黄连多糖干燥根茎，粉碎成粗粉；(2)取步骤⑴中制得的粗粉I份，加10倍量药材重量的水，煎煮3次，第一次加4倍量水,第二次加4倍量水，第三次加2倍量水，每次煮沸I小时,合并水煎液；(3)磷酸盐缓冲液调节步骤(2)制得的水煎液的pH值至6，加入O. 01倍药材重量的活性为12U/mg的木瓜蛋白酶，在45°C条件下水解I小时，然后立即煮沸5分钟，4°C静置12小时以上，抽滤去沉淀，将滤液装入分子量为1000的透析袋，用自来水透析I天，蒸馏水再透析I天，袋内多糖液浓缩成1.5g/mL，加无水乙醇至乙醇体积分数为80%，4°C静置12小时以上，倾去上清液，沉淀减压干燥得黄连多糖，得率约为7. 8%。本发明就黄连多糖对II型糖尿病的治疗作用做了研究，结果表明黄连多糖具有显著的降血糖、降低胰岛素抵抗、降血脂作用，黄连多糖能作为治疗II型糖尿病的有效药物。实验资料1.实验材料1.1仪器与试药DZX-3型真空干燥箱,透析袋(美国Spectrum), JPs_5型手持式快速全血糖测试仪(北京怡成生物电子技术有限公司)，紫外可见分光光度计(岛津国际贸易有限公司)，酶标仪(TECAN)，组织匀浆机(上海天呈科技有限公司)，GC-2100型、放射免疫仪(中国科大中佳公司)。黄连购买于本地药材市场，经本院韩东教授鉴定为真品。木瓜蛋白酶(12U/mg，广州杰沃利生物公司)，血糖试剂盒(北京康化试剂公司)，葡萄糖(北京化学试剂厂)，链脲 佐菌素(STZ) (Sigma公司)，胰岛素试剂盒(天津九鼎生物技术有限公司)，TG检测试剂盒(长春汇力生物技术有限公司)，总胆固醇试剂盒(北京北化康泰临床试剂有限公司)。1. 2 动物ICR小鼠，雄性，体重18 22g，购自吉林大学基础医学院实验动物中心。小鼠分笼饲养，保持正常昼夜循环。小鼠饲料购自吉林大学基础医学院实验动物中心。正常饲料含有53 %碳水化合物，5 %脂肪，23 %蛋白，总热量在25kJ/kg ;高脂饲料含有48 %碳水化合物，22 %脂肪，20 %蛋白，总热量在44. 3kJ/kg。2.实验方法与结果2.1黄连多糖的制备取黄连多糖根茎，粉碎成粗粉；加10倍量药材重量的水，煎煮3次，第一次加4倍量水，第二次加4倍量水，第三次加2倍量水，每次煮沸I小时，合并水煎液；用磷酸盐缓冲液调节PH值至6，加入O. 01倍药材重量的活性为12U/mg的木瓜蛋白酶，在45°C条件下水解I小时，然后立即煮沸5分钟，4°C静置12小时以上，抽滤去沉淀，将滤液装入分子量为1000的透析袋，用自来水透析I天，蒸馏水再透析I天，袋内多糖液浓缩成1. 5g/mL，加无水乙醇至乙醇体积分数为80%，4°C静置12小时以上，倾去上清液，沉淀减压干燥得黄连多糖，得率约为7. 8%。本发明采用木瓜蛋白酶酶解粗多糖，除去蛋白质类杂质，所得多糖的水溶液在260nm和280nm处无吸收峰，证实其除去蛋白彻底，且不含核酸。本发明制得的黄连多糖经苯酚-硫酸比色法测得其多糖含量达92%以上。2. 2黄连多糖对血糖的影响取40只II型糖尿病小鼠，按空腹血糖水平随机分成5组，每组8只，阳性对照组灌胃给予格列本脲5mg/kg体重(glibenclamide, DG组)；黄连多糖按200,100, 50mg/kg 3个剂量组(H组，M组，L组)给药；模型对照组(Diabetic control, DC组)，灌胃给予同体积O. 9%氯化钠溶液；另将8只正常小鼠设为空白组(Normal control，NC组)，灌胃给予同体积0. 9%氯化钠溶液。灌胃体积0. 2ml/10g，2次每天，即每天上午9:00和下午4:00各I次，连续给药28天后的小鼠禁食过夜,第二天上午9:00测定尾静脉血糖值(fasting bloodglucose, FBG)。采用t检验评价差异是否有显著性。实验证明，黄连多糖高、中、低剂量组糖尿病小鼠在给药28天后均有显著的降血糖作用，且具有剂量依赖性。结果见图1。
2. 3黄连多糖对胰岛素敏感指数的影响将2. 2项下给药28天后的II型糖尿病小鼠禁食过夜,尾静脉取血,离心取血清保存。血清胰岛素含量(fasting serum insulin, FINS)用商品化的放射免疫试剂盒进行测定，每次试验按照说明书上描述的方法进行。胰岛素敏感指数(insulin sensitivityindex, ISI)根据FBG和FINS的含量进行计算，计算公式如下ISI = Ln (FBG X FINS)实验证明，黄连多糖高、中、低剂量组糖尿病小鼠在给药28天后均有显著的提高胰岛素敏感指数，降低胰岛素抵抗 的作用，且具有剂量依赖性。结果见图2。2. 4黄连多糖对糖尿病小鼠糖耐量的影响口服葡萄糖耐受实验(oral glucose tolerance test, OGTT)在最后一周进行。12小时禁食后，实验动物口服2g/kg体重的葡萄糖溶液，按照试剂盒说明书用葡萄糖氧化酶法测量0，30，60，90和120分钟的血液葡萄糖水平。实验证明，黄连多糖高、中、低剂量组糖尿病小鼠在给药28天后均能显著提高糖耐量水平，且具有剂量依赖性。结果见表I。表I黄连多糖对II型糖尿病小鼠糖耐量的影响
GroupsGlucose (mmol/L)
O min30 min60 min90 min120 min
~NC5.15 土 0.62” 13.92 土 1·05” 8·52±0.49” 7.92 士 0.54” 7.52 士 0.44”~
DC17_51 士2.04 34.18土0.88 31.5± 0.71 28.91 士1.13 26.87土0.97
DG7.04 士0.89** 15.46土 1.39“ 12.33±0.96** 10.68士 0/75“ 9.72 土 0.61“
H8_55 士 1_27** 20.15 土 1.85** 14_03 士 1_24“ 1·77 士 0.98“ 10.06 士 0.96**
M10.47±1.34“ 23_13士1.21·* 15.03 士 1.04“ 13.98 土 0.05" 12.07±1.08**
L11.94±1.15** 24.07±0.73** 18.62土 0.76“ 15.44 士 1.34“ 13.99±0.87****Ρ < 0. 01 vs DC 组(η = 8)2. 5黄连多糖对血脂含量的影响口服葡萄糖耐受实验完成24小时后，小鼠被处死，尾静脉收集血液，用商品化的试剂盒对各组动物的血脂含量进行测定。实验证明，黄连多糖高、中、低剂量组糖尿病小鼠在给药28天后均能显著降低甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量，且具有剂量依赖性。结果见图3。
图1黄连多糖对II型糖尿病小鼠血糖的影响.呷< 0. 01 vs DC组(η = 8)图2黄连多糖对II型糖尿病小鼠胰岛素敏感指数的影响.**Ρ < 0. 01 vs DC组(η=8)图3黄连多糖对II型糖尿病小鼠血脂含量的影响· *Ρ < O. 05，**Ρ < 0· 01 vs DC组(η = 8)
具体实施方式
实施例1黄连多糖的制备取黄连干燥根茎10kg，粉碎成粗粉，加水煮3次，第一次加水40L，第二次加水40L，第三次加水20L，每次煮沸I小时，合并水煎液，用磷酸盐缓冲液调pH值至6，加入IOOg活性为12U/mg的木瓜蛋白酶，在45°C条件下水解I小时，然后立即煮沸5分钟，4°C静置12小时以上，抽滤去沉淀，将滤液装入分子量为1000的透析袋，用自来水透析I天，蒸馏水再透析I天，袋内多糖液浓缩成1. 5g/mL，加无水乙醇至乙醇体积分数为80%，4°C静置12小时以上，倾去上清液，沉淀减压干燥得黄连多糖，780g。实施例2黄连多糖药物胶囊的制备在实施例1中所得的780g黄连多糖粉末中加入24g微晶纤维素，混匀，过筛，干燥后，制得药物胶囊的药用原料。药用原料填充入2436个胶囊中，制得每个胶囊含O. 33g黄连多糖的药物胶囊，相当于每个胶囊含黄连生药材4. llg。建议的用法用量成人每天服用 黄连多糖胶囊两次，早晚饭前各一次，每次一粒，连续服用4周以上。
权利要求
1.黄连多糖在制备用于治疗II型糖尿病药物中的应用。
2.一种黄连多糖的制备方法是，包括以下步骤 (1)取黄连多糖干燥根茎，粉碎成粗粉； (2)取步骤(I)中制得的粗粉I份，加10倍量药材重量的水，煎煮3次，第一次加4倍量水,第二次加4倍量水，第三次加2倍量水，每次煮沸I小时,合并水煎液； (3)用磷酸盐缓冲液调节步骤(2)制得的水煎液的pH值至6，加入O.01倍药材重量的活性为12U/mg的木瓜蛋白酶，在45°C条件下水解I小时，然后立即煮沸5分钟，4°C静置12小时以上，抽滤去沉淀，将滤液装入分子量为1000的透析袋，用自来水透析I天，蒸馏水再透析I天，袋内多糖液浓缩成1. 5g/mL，加无水乙醇至乙醇体积分数为80%，4°C静置12小时以上，倾去上清液，沉淀减压干燥得黄连多糖。
全文摘要
本发明提供了一种治疗II型糖尿病的黄连多糖及其制备方法，黄连为常用中药材，药用其干燥根茎，本发明实验证实黄连多糖具有降低胰岛素抵抗及显著的降血糖作用，对II型糖尿病的糖耐量有明显的改善作用，黄连多糖作为II型糖尿病的药物，具有疗效显著、无毒副作用，患者易于接受、适合对疾病长期控制等特点。
文档编号C08B37/00GK103006685SQ20121059347
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月22日 优先权日2012年12月22日
发明者姜爽, 杜培革, 苑广信, 李洪宇, 安丽萍, 韩笑, 赵南晰 申请人:北华大学