一种冬凌草甲素的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于天然药物化学领域，特别涉及一种利用色谱法从冬凌草中提取纯化冬凌草甲素的方法。
【背景技术】
[0002]冬凌草为唇形科植物碎米極[Rabdosiarubescens (Hamst) C.Y.ffu.et Hsuan]的干燥地上部分，主要分布于我国黄河流域及其以南各地区，主产于河南太行山南麓各地。冬凌草具清热解表消炎止痛健胃活血等功效，在抗肿瘤方面有较强的活性。冬凌草甲素为冬凌草的有效活性成分，它对各种移植性肿瘤细胞具有较大的杀伤、抑制增殖能力，临床上主要用来治疗胃癌、食道癌等症。冬凌草甲素目前主要从冬凌草植物中分离纯化得到，提取方法主要为乙醚提取法、乙醇提取法及中压柱色谱法等，但这些提取工艺操作周期长，条件不易控制，得到的冬凌草甲素的含量低。冬凌草甲素在癌症治疗中的作用已引起了人们的重视，现已发现其对肺癌、前列腺癌、乳腺癌等多种细胞株均有抑制作用。冬凌草为唇形科香茶属多年生草本或亚灌木。冬凌草具有清热解毒、消炎止痛、健胃活血之效。
[0003]冬凌草甲素又叫冬凌草素、延命草宁，四环二萜类物质，分子式C20H2806，分子量364.43，熔点248°C _250°C，微溶于水，溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。
[0004]本发明采用乙醇加热回流提取，柱色谱法分离纯化了冬凌草甲素，分离工艺简单，提取率高，所得产品纯度高，无污染，为进一步工业化纯化冬凌草甲素提供了基础。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种从冬凌草中提取并用动态轴向压缩柱分离纯化冬凌草甲素的生产方法，属于天然产物的提取分离纯化领域，包括醇提取、动态轴向压缩柱分离、浓缩以及成品的纯度检测。
[0006]本发明为实现上述发明目的采用如下步骤:
a、冬凌草甲素粗品的制备:将冬凌草干草粉末加热回流提取，80%乙醇为溶剂，回流30min，提取2-3次，合并提取液，减压浓缩成稠膏状；
b、样品的溶解:将冬凌草甲素粗品用低浓度的乙醇水溶液溶解，过滤，上大孔吸附树脂梯度洗脱；
C、上柱洗脱:用乙醇水溶液梯度洗脱,收集60-80%乙醇水洗脱液；
d、浓缩:对收集到的目标组分进行浓缩处理；
e、将上述浓缩液与适量的硅胶拌样，干法上样，用石油醚、丙酮混合溶剂梯度洗脱。
【具体实施方式】
[0007]实施方案一
1、提取:将粉末过60目筛后称取10g置于提取器中，用600mL80%乙醇提取，加热回流30min，提取2-3次，合并提取液，减压浓缩成膏； 2、样品的溶解:浓缩物用低浓度的乙醇液溶解分散，备用；
3、上柱洗脱:用乙醇水溶液梯度洗脱,收集60-80%乙醇水洗脱液；
4、浓缩:对收集到的目标组分进行浓缩处理；
5、将上述浓缩液与适量的硅胶拌样，干法上样，用石油醚、丙酮混合溶剂梯度洗脱，收集石油醚:丙酮=10:7部位；
6、浓缩:将收集到的目标组分进行浓缩处理，得到冬凌草甲素粗品，得冬凌草甲素
9.5g，重结晶，纯度约95.2%。
[0008]实施方案二
1、提取:将粉末过60目筛后称取10g置于提取器中，用600mL80%乙醇提取，加热回流30min，提取2-3次，合并提取液，减压浓缩成膏；
2、样品的溶解:浓缩物用低浓度的乙醇液溶解分散，备用；
3、上柱洗脱:用乙醇水溶液梯度洗脱,收集60-80%乙醇水洗脱液；
4、浓缩:对收集到的目标组分进行浓缩处理；
5、将上述浓缩液与适量的硅胶拌样，干法上样，用石油醚、丙酮混合溶剂梯度洗脱，收集石油醚:丙酮=10:5部位；
6、浓缩:将收集到的目标组分进行浓缩处理，得到冬凌草甲素粗品，重结晶，得冬凌草甲素6.5g，纯度约94.2%。
[0009]实施方案三
1、提取:将粉末过60目筛后称取10g置于提取器中，用600mL80%乙醇提取，加热回流30min，提取2-3次，合并提取液，减压浓缩成膏；
2、样品的溶解:浓缩物用低浓度的乙醇液溶解分散，备用；
3、上柱洗脱:用乙醇水溶液梯度洗脱,收集60-80%乙醇水洗脱液；
4、浓缩:对收集到的目标组分进行浓缩处理；
5、将上述浓缩液与适量的硅胶拌样，干法上样，用石油醚、丙酮混合溶剂梯度洗脱，收集石油醚:丙酮=10:8部位；
6、浓缩:将收集到的目标组分进行浓缩处理，得到冬凌草甲素粗品，重结晶，得冬凌草甲素4.5g，纯度约91.2%。
【主权项】
1.一种制备冬凌草甲素的方法，包括: a、冬凌草甲素粗品的制备:将冬凌草干草粉末加热回流提取，80%乙醇为溶剂，回流30min，提取2-3次，合并提取液，减压浓缩成稠膏状； b、样品的溶解:将冬凌草甲素粗品用低浓度的乙醇水溶液溶解，过滤，上大孔吸附树脂梯度洗脱； C、上柱洗脱:用乙醇水溶液梯度洗脱,收集60-80%乙醇水洗脱液； d、浓缩:对收集到的目标组分进行浓缩处理； e、将上述浓缩液与适量的硅胶拌样，干法上样，用石油醚、丙酮混合溶剂梯度洗脱。2.根据权利要求1所述的方法，其特征是a步骤中每次回流所用80%乙醇的用量为冬凌草干草粉末的6~12倍量。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤b的大孔吸附树脂为D101、D201、AB-8、HP20、AB8型大孔吸附树脂的一种。4.如权利要求1所述的从冬凌草中制备冬凌草甲素的方法，其特征在于步骤e所述的石油醚、丙酮混合溶液比例为10:7。5.如权利要求1所述的从冬凌草中制备冬凌草甲素的方法，其特征在于步骤e所述的硅胶为100-200目。
【专利摘要】本发明涉及一种天然产物的提纯方法，具体来说，本发明涉及一种制备高纯度冬凌草甲素的方法及其工艺。采用反相硅胶或大空吸附树脂柱填料，分离工艺简单，成本低，无污染，先进、安全、适用的特点，提取率高，所得产品纯度高，无污染，为进一步工业化分离纯化冬凌草甲素提供了基础。
【IPC分类】C07D493/08
【公开号】CN105713006
【申请号】CN201410730340
【发明人】米文珍, 郑晔
【申请人】鲁艳清