用作IL‑12、IL‑23和/或IFNα响应的调节剂的烷基‑酰胺‑取代的吡啶化合物的制作方法

文档序号:11106693阅读:553来源:国知局

本发明涉及可通过作用于Tyk-2上以引起信号转导抑制用于调节IL-12、IL-23和/或IFNα的化合物。本申请提供烷基-酰胺-取代的吡啶化合物、包含此类化合物的组合物及其使用方法。本发明还涉及含有至少一种本发明化合物的药物组合物,所述化合物可用于治疗哺乳动物的与IL-12、IL-23和/或IFNα的调节相关的病症。



背景技术:

共有常见p40亚基的异源二聚细胞因子白介素(IL)-12和IL-23由经活化的抗原呈递细胞产生且在两种效应子T细胞谱系Th1和Th17细胞的分化和增殖中至关重要,其在自身免疫中起关键作用。IL-23是由p40亚基与独特的p19亚基一起构成。IL-23通过由IL-23R和IL-12Rβ1构成的异源二聚受体起作用,其是产生促炎性细胞因子诸如IL-17A、IL-17F、IL-6和TNF-α的Th17细胞的存活和扩增所必需的(McGeachy,M.J.et al.,"The link between IL-23 and Th17 cell-mediated immune pathologies",Semin.Immunol.,19:372-376(2007))。这些细胞因子在介导许多自身免疫性疾病的病理生物学中至关重要,所述自身免疫性疾病包括类风湿性关节炎、多发性硬化、炎性肠病和狼疮。除了与IL-23共同含有p40亚基之外,IL-12还含有p35并通过由IL-12Rβ1和IL-12Rβ2构成的异源二聚受体起作用。IL-12是Th1细胞发育和IFNγ分泌所必需的,所述IFNγ是通过刺激MHC表达、B细胞类别转换成IgG亚类及活化巨噬细胞在免疫性中起重要作用的细胞因子(Gracie,J.A.et al.,"Interleukin-12 induces interferon-gamma-dependent switching of IgG alloantibody subclass",Eur.J.Immunol.,26:1217-1221(1996);Schroder,K.et al.,"Interferon-gamma:an overview of signals,mechanisms and functions",J.Leukoc.Biol.,75(2):163-189(2004))。

含p40的细胞因子在自身免疫中的重要性可通过以下发现来证明:缺乏p40、p19或IL-23R的小鼠在多发性硬化、类风湿性关节炎、炎性肠病、狼疮和牛皮癣模型中得到了保护(Kyttaris,V.C.et al.,"Cutting edge:IL-23 receptor deficiency prevents the development of lupus nephritis in C57BL/6-lpr/lpr mice",J.Immunol.,184:4605-4609(2010);Hong,K.et al.,"IL-12,independently of IFN-gamma,plays a crucial role in the pathogenesis of a murine psoriasis like skin disorder",J.Immunol.,162:7480-7491(1999);Hue,S.et al.,"Interleukin-23 drives innate and T cell-mediated intestinal inflammation",J.Exp.Med.,203:2473-2483(2006);Cua,D.J.et al.,"Interleukin-23 rather than interleukin-12is the critical cytokine for autoimmune inflammation of the brain",Nature,421:744-748(2003);Murphy,C.A.et al.,"Divergent pro-and anti-inflammatory roles for IL-23 and IL-12 in joint autoimmune inflammation",J.Exp.Med.,198:1951-1957(2003))。

在人类疾病中,已在牛皮癣病灶中测量到p40和p19的高表达,并且已在MS患者脑中的活跃病灶和克罗恩病的肠粘膜中鉴别出Th17细胞(Lee,E.et al.,"Increased expression of interleukin 23 p19 and p40 in lesional skin of patients with psoriasis vulgaris",J.Exp.Med.,199:125-130(2004);Tzartos,J.S.et al.,"Interleukin-17 production in central nervous system infiltrating T cells and glial cells is associated with active disease in multiple sclerosis",Am.J.Pathol.,172:146-155(2008))。还显示,p19、p40和p35在活跃SLE患者中的mRNA水平显著高于不活跃SLE患者中的那些(Huang,X.et al.,"Dysregulated expression of interleukin-23 and interleukin-12subunits in systemic lupus erythematosus patients",Mod.Rheumatol.,17:220-223(2007)),且来自狼疮患者的T细胞具有占优势的Th1表型(Tucci,M.et al.,"Overexpression of interleukin-12 and T helper 1 predominance in lupus nephritis",Clin.Exp.Immunol.,154:247-254(2008))。

此外,全基因组关联研究已鉴别出许多与慢性炎性疾病或自身免疫性疾病相关的基因座(loci),所述基因座编码在IL-23和IL-12途径中发挥作用的因子。这些基因包括IL23A、IL12A、IL12B、IL12RB1、IL12RB2、IL23R、JAK2、TYK2、STAT3和STAT4(Lees,C.W.et al.,"New IBD genetics:common pathways with other diseases",Gut,60:1739-1753(2011);Tao,J.H.et al.,"Meta-analysis of TYK2 gene polymorphisms association with susceptibility to autoimmune and inflammatory diseases",Mol.Biol.Rep.,38:4663-4672(2011);Cho,J.H.et al.,"Recent insights into the genetics of inflammatory bowel disease",Gastroenterology,140:1704-1712(2011))。

实际上,抑制IL-12和IL-23两者的抗-p40治疗以及IL-23-特异性抗-p19疗法已显示可有效治疗包括牛皮癣、克罗恩病和牛皮癣性关节炎的疾病中的自身免疫(Leonardi,C.L.et al.,"PHOENIX 1 study investigators.Efficacy and safety of ustekinumab,a human interleukin-12/23 monoclonal antibody,in patients with psoriasis:76-week results from a randomized,double-blind,placebo-controlled trial(PHOENIX 1)",Lancet,371:1665-1674(2008);Sandborn,W.J.et al.,"Ustekinumab Crohn's Disease Study Group.A randomized trial of Ustekinumab,a human interleukin-12/23 monoclonal antibody,in patients with moderate-to-severe Crohn's disease",Gastroenterology,135:1130-1141(2008);Gottlieb,A.et al.,"Ustekinumab,a human interleukin 12/23 monoclonal antibody,for psoriatic arthritis:randomized,double-blind,placebo-controlled,crossover trial",Lancet,373:633-640(2009))。因此,预计抑制IL-12和IL-23作用的药剂在人类自身免疫性病症中具有治疗益处。

I型干扰素(IFN)组(包括IFNα成员以及IFNβ、IFNε、IFNκ和IFNω)通过异源二聚体IFNα/β受体(IFNAR)起作用。I型IFN对先天性和适应性免疫系统两者具有多重效应,包括活化细胞和体液免疫响应两者以及增强自身抗原的表达和释放(Hall,J.C.et al.,"Type I interferons:crucial participants in disease amplification in autoimmunity",Nat.Rev.Rheumatol.,6:40-49(2010))。

在患有可能致命的自身免疫性疾病系统性红斑狼疮(SLE)的患者中,已在大多数患者中证明周围血单核细胞和受影响器官中的干扰素(IFN)α(I型干扰素)的血清水平增加或I型IFN-调控的基因的表达增加(所谓的IFNα标记(signature))(Bennett,L.et al.,"Interferon and granulopoiesis signatures in systemic lupus erythematosus blood",J.Exp.Med.,197:711-723(2003);Peterson,K.S.et al.,"Characterization of heterogeneity in the molecular pathogenesis of lupus nephritis from transcriptional profiles of laser-captured glomeruli",J.Clin.Invest.,113:1722-1733(2004)),且若干研究已显示,血清IFNα水平与疾病活性和严重度两者相关(Bengtsson,A.A.et al.,"Activation of type I interferon system in systemic lupus erythematosus correlates with disease activity but not with antiretroviral antibodies",Lupus,9:664-671(2000))。IFNα在狼疮病理生物学中的直接作用可通过向患有恶性或病毒性疾病的患者给予IFNα可诱导狼疮样综合征的观察结果来证明。此外,易患狼疮小鼠中IFNAR的缺失可为免受自身免疫、疾病严重度和死亡方面提供高度保护(Santiago-Raber,M.L.et al.,"Type-I interferon receptor deficiency reduces lupus-like disease in NZB mice",J.Exp.Med.,197:777-788(2003)),且全基因关联研究已鉴别出与狼疮相关的基因座,所述基因组编码在I型干扰素途径中发挥作用的因子,包括IRF5、IKBKE、TYK2和STAT4(Deng,Y.et al.,"Genetic susceptibility to systemic lupus erythematosus in the genomic era",Nat.Rev.Rheumatol.,6:683-692(2010);Sandling,J.K.et al.,"A candidate gene study of the type I interferon pathway implicates IKBKE and IL8as risk loci for SLE",Eur.J.Hum.Genet.,19:479-484(2011))。除了狼疮以外,有证据表明,I型干扰素介导的途径的异常活化在其它自身免疫性疾病诸如舍格伦综合征(syndrome)和硬皮病的病理生物学中也是重要的(U.et al.,"Activation of the type I interferon system in primarysyndrome:a possible etiopathogenic mechanism",Arthritis Rheum.,52:1185-1195(2005);Kim,D.et al.,"Induction of interferon-alpha by scleroderma sera containing autoantibodies to topoisomerase I:association of higher interferon-alpha activity with lung fibrosis",Arthritis Rheum.,58:2163-2173(2008))。因此,可预计抑制I型干扰素响应的作用的药剂在人类自身免疫性病症中具有治疗益处。

酪氨酸激酶2(Tyk2)为非受体酪氨酸激酶的Janus激酶(JAK)家族的成员且已在小鼠(Ishizaki,M.et al.,"Involvement of Tyrosine Kinase-2 in Both the IL-12/Th1 and IL-23/Th17 Axes In vivo",J.Immunol.,187:181-189(2011);Prchal-Murphy,M.et al.,"TYK2 kinase activity is required for functional type I interferon responses in vivo",PLoS One,7:e39141(2012))和人类(Minegishi,Y.et al.,"Human tyrosine kinase 2 deficiency reveals its requisite roles in multiple cytokine signals involved in innate and acquired immunity",Immunity,25:745-755(2006))两者中显示在IL-12、IL-23和I型干扰素受体下游的调控信号转导级联中至关重要。Tyk2介导受体诱导的STAT转录因子家族成员的磷酸化,其为导致STAT蛋白质的二聚化和STAT依赖性促炎性基因的转录的必需信号。Tyk2-缺乏小鼠抵抗结肠炎、牛皮癣和多发性硬化的实验模型,从而证明Tyk2-介导的信号传导在自身免疫和相关病症中的重要性(Ishizaki,M.et al.,"Involvement of Tyrosine Kinase-2 in Both the IL-12/Th1 and IL-23/Th17 Axes In vivo",J.Immunol.,187:181-189(2011);Oyamada,A.et al.,"Tyrosine kinase 2 plays critical roles in the pathogenic CD4 T cell responses for the development of experimental autoimmune encephalomyelitis",J.Immunol.183:7539-7546(2009))。

在人类中,保护表达Tyk2的无活性变体的个体免受多发性硬化和可能的其它自身免疫性病症(Couturier,N.et al.,"Tyrosine kinase 2 variant influences T lymphocyte polarization and multiple sclerosis susceptibility",Brain 134:693-703(2011))。全基因组关联研究已显示,Tyk2的其它变体与自身免疫性病症诸如克罗恩病、牛皮癣、系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎相关,从而进一步证明Tyk2在自身免疫中的重要性(Ellinghaus,D.et al.,"Combined Analysis of Genome-wide Association Studies for Crohn Disease and Psoriasis Identifies Seven Shared Susceptibility Loci",Am.J.Hum.Genet.90:636-647(2012);Graham,D.et al.,"Association of polymorphisms across the tyrosine kinase gene,TYK2in UK SLE families",Rheumatology(Oxford)46:927-930(2007);Eyre,S.et al.,"High-density genetic mapping identifies new susceptibility loci for rheumatoid arthritis",Nat.Genet.44:1336-1340(2012))。

鉴于可通过涉及调节细胞因子和/或干扰素的治疗而获益的病症,能够调节细胞因子和/或干扰素诸如IL-12、IL-23和/或IFNα的新化合物以及使用这些化合物的方法可向众多有此需要的患者提供实质性治疗益处。



技术实现要素:

本发明涉及下文式I化合物,其可通过抑制Tyk2-介导的信号转导用作IL-12、IL-23和/或IFNα的调节剂。

本发明还提供了用于制备本发明化合物的方法和中间体。

本发明还提供了包含药学上可接受的载体和至少一种本发明化合物的药物组合物。

本发明还提供了通过抑制Tyk-2-介导的信号转导用于调节IL-12、IL-23和/或IFNα的方法,其包括向需要此种治疗的宿主给药治疗有效量的至少一种本发明化合物。

本发明还提供了治疗增殖性、代谢性、过敏性、自身免疫性和炎性疾病的方法,其包括向需要此种治疗的宿主给予治疗有效量的至少一种本发明化合物。

优选的实施方案为用于治疗炎性和自身免疫性疾病或病症的方法。处于本发明的目的,炎性和自身免疫性疾病或病症包括具有炎性或自身免疫性组分的任意疾病。

可选择的优选实施方案为治疗代谢性疾病(包括2型糖尿病和动脉粥样硬化)的方法。

本发明还提供了本发明化合物用于制备用于治疗癌症的药物的用途。

本发明还提供了本发明化合物,其用于疗法。

随着本公开的继续以展开形式阐述本发明的这些和其它特征。

发明实施方案的详细描述

本申请提供了至少一种选自式I化合物的化学实体或或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药:

其中:

R1为任选地经0-7个R1a取代的C1-3烷基;

R1a在每次出现时独立地为氢、氘、F、Cl、Br、CF3或CN;

R2为取代有0-4个R2a的C1-6烷基;取代有0-4个R2a的C3-6环烷基;取代有0-4个R2a的C6-10芳基;取代有0-4个R2a的5-14元杂环,所述杂环含有1-4个选自N、O和S的杂原子;NR6R6;或ORb

R2a在每次出现时独立地为氢、=O、卤素、OCF3、CN、NO2、-(CH2)rORb、-(CH2)rSRb、-(CH2)rC(O)Rb、-(CH2)rC(O)ORb、-(CH2)rOC(O)Rb、(CH2)rNR11R11、-(CH2)rC(O)NR11R11、-(CH2)rNRbC(O)Rc、-(CH2)rNRbC(O)ORc、-NRbC(O)NR11R11、-S(O)pNR11R11、-NRbS(O)pRc、-S(O)pRc、取代有0-3个Ra的C1-6烷基、C1-6卤代烷基、取代有0-1个Ra的-(CH2)r-3-14元碳环或取代有0-2个Ra的-(CH2)r-5-7元杂环,所述杂环包含碳原子和1-4个选自N、O和S(O)p的杂原子;

或者一个R2a和另一个R2a,与它们所连接的原子一起,组合形成稠合的5-6元环,其中所述稠合环可取代有0-2个Ra

R3为取代有0-5个R3a的-(CH2)r-3-14元碳环;

R3a在每次出现时独立地为氢、=O、卤素(F)、OCF3、CF3、CHF2、CN、NO2、-(CH2)rORb、-(CH2)rSRb、-(CH2)rC(O)Rb、-(CH2)rC(O)ORb、-(CH2)rOC(O)Rb、-(CH2)rNR11R11、-(CH2)rC(O)NR11R11、-(CH2)rNRbC(O)Rc、-(CH2)rNRbC(O)ORc、-NRbC(O)NR11R11、-S(O)pNR11R11、-NRbS(O)pRc、-S(O)pRc、取代有0-3个Ra的C1-6烷基、C1-6卤代烷基、取代有0-3个Ra的-(CH2)r-3-14元碳环或取代有0-3个Ra的-(CH2)r-5-10元杂环,所述杂环包含碳原子和1-4个选自N、O和S(O)p的杂原子;

或者两个R3a,与它们所连接的原子一起,组合形成稠合环,其中所述环选自苯基和包含碳原子和1-4个选自N、S或O的杂原子的5-7元杂环,所述稠合环进一步经Ra取代;

R4和R5独立地为氢、取代有0-1个Rf的C1-4烷基、取代有0-3个Rd的(CH2)r-苯基或包含碳原子和1-4个选自N、O和S(O)p的杂原子的-(CH2)-5-7元杂环;

R6和R11在每次出现时独立地为氢、取代有0-3个Rf的C1-4烷基、CF3、取代有0-1个Rf的C3-10环烷基、取代有0-3个Rd的(CH)r-苯基或取代有0-3个Rd的-(CH2)r-5-7元杂环,所述杂环包含碳原子和1-4个选自N、O和S(O)p的杂原子;

Ra在每次出现时为氢、F、Cl、Br、OCF3、CF3、CHF2、CN、NO2、-(CH2)rORb、-(CH2)rSRb、-(CH2)rC(O)Rb、-(CH2)rC(O)ORb、-(CH2)rOC(O)Rb、-(CH2)rNR11R11、-(CH2)rC(O)NR11R11、-(CH2)rNRbC(O)Rc、-(CH2)rNRbC(O)ORc、-NRbC(O)NR11R11、-S(O)pNR11R11、-NRbS(O)pRc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc、取代有0-3个Rf的C1-6烷基、C1-6卤代烷基、-(CH2)r-3-14元碳环或取代有0-3个Rf的-(CH2)r-5-7元杂环,所述杂环包含碳原子和1-4个选自N、O和S(O)p的杂原子;

Rb在每次出现时为氢;取代有0-3个Rd的C1-6烷基;C1-6卤代烷基;取代有0-2个0-2Rd的C3-6环烷基;取代有0-3个Rf的-(CH2)r-5-7元杂环,所述杂环包含碳原子和1-4个选自N、O和S(O)p的杂原子;或取代有0-3个Rd的(CH2)r-苯基;

Rc为取代有0-3个Rf的C1-6烷基、取代有0-3个Rf的(CH2)r-C3-6环烷基或取代有0-3个Rf的(CH2)r-苯基;

Rd在每次出现时独立地为氢、F、Cl、Br、OCF3、CF3、CN、NO2、-ORe、-(CH2)rC(O)Rc、-NReRe、-NReC(O)ORc、取代有0-3个Rf的C1-6烷基或(CH2)r-苯基;

Re在每次出现时独立地选自氢、取代有0-3个Rf的C1-6烷基、C3-6环烷基和(CH2)r-苯基;

Rf在每次出现时独立地为氢、卤素、CN、NH2、OH、C3-6环烷基、CF3,O(C1-6烷基)或-(CH2)r-5-7元杂芳基,所述杂芳基包含碳原子和1-4个选自N、O和S(O)p的杂原子;

p为0、1或2;且

r为0、1、2、3或4。

在另一实施方案中提供了式I化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中R2为甲基、乙基、丙基、呋喃基、吡喃基、环丙基、环丁基、环己基、环戊基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、喹啉基或吡咯并吡啶基,各基团在化合价容许时经0-4个选自R2a的基团取代;或者R2为NR6R6或ORb

在另一实施方案中提供了式I化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中R3为C3-6环烷基或C6-10芳基,各基团取代有0-5个R3a。在更优选的实施方案中,R3优选为取代有0-5个R3a的苯基。

在另一实施方案中提供了式I化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中R4和R5两者均为氢。

在另一实施方案中提供了式I化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,

其中:

R1为经0-7个氘原子取代的C1-3烷基;

R2为甲基、乙基、丙基、呋喃基、吡喃基、环丙基、环丁基、环己基、环戊基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、喹啉基或吡咯并吡啶基,各基团在化合价容许时经0-4个选自R2a的基团取代;

或者R2为NR6R6或ORb

R2a在每次出现时独立地为氢;-(CH2)rORb;(CH2)rNR11R11;C1-6卤代烷基(CF3);取代有0-1个Ra的-(CH2)r-3-14元碳环(苯基);取代有0-2个Ra的-(CH2)r-5-7元杂环(吡啶基),所述杂环包含碳原子和1-4个选自N、O和S(O)p的杂原子;

或者一个R2a和另一个R2a,与它们所连接的原子一起,组合形成稠合的5-6元环(苯基),其中所述稠合环可取代有0-2个Ra

R3为C3-6环烷基或C6-10芳基,各基团取代有0-5个R3a(R3优选为取代有0-5个R3a的苯基);

R3a在每次出现时独立地为氢、卤素(F)、-(CH2)rORb或-S(O)pRc

R6在每次出现时独立地为氢或取代有0-3个Rf的C1-6烷基(甲基);

R11在每次出现时为氢;

Ra在每次出现时独立地为氢、-(CH2)rORb或取代有0-3个Rf的C1-6烷基(甲基);

Rb在每次出现时独立地为氢或取代有0-3个Rd的C1-6烷基(优选Rb为甲基);

Rc为取代有0-3个Rf的C1-6烷基(优选Rc为甲基);

Rd在每次出现时独立地为氢、卤素(优选卤素为F)或-OH;

Rf在每次出现时独立地为氢、卤素、CN、OH或O(C1-6烷基);

p为0、1或2;且

r为0、1或2。

在另一优选的实施方案中提供了式I化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中:

或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中:

R1为经0-7个氘原子取代的C1-3烷基;

R2为甲基、乙基、丙基、呋喃基、吡喃基、环丙基、环丁基、环己基、环戊基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、喹啉基或吡咯并吡啶基,各基团在化合价容许时经0-4个选自R2a的基团取代;

或者R2为NR6R6或ORb

R2a在每次出现时独立地为氢、-(CH2)rORb、(CH2)rNR11R11、C1-6卤代烷基(CF3)、取代有0-1个Ra的-(CH2)r-3-14元碳环、取代有0-2个Ra的-(CH2)r-5-7元杂环,所述杂环包含碳原子和1-4个选自N、O和S(O)p的杂原子;

或者一个R2a和另一个R2a,与它们所连接的原子一起,组合形成稠合的5-6元环,其中所述稠合环可取代有0-2个Ra

R3a在每次出现时独立地为氢;卤素(F);-(CH2)rORb;取代有0-3个Ra的-(CH2)r-5-7元杂环,所述包含杂环碳原子和1-4个选自N、O和S(O)p的杂原子;或-S(O)pRc

R6在每次出现时独立地为氢、苯基或取代有0-3个Rf的C1-6烷基;

R11在每次出现时独立地为氢、环丙基或取代有0-1个Rf的C1-4烷基;

Ra在每次出现时为氢、卤素、-(CH2)rORb或取代有0-3个Rf的C1-6烷基;

Rb在每次出现时为氢或取代有0-3个Rd的C1-6烷基;

Rc为取代有0-3个Rf的C1-6烷基(甲基);

Rd在每次出现时独立地为氢、卤素或-OH;

Rf在每次出现时独立地为氢、卤素、CN、OH或O(C1-6烷基);

p为0、1或2;且

r为0、1或2。

在可选择的实施方案中提供了式I化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中R2为甲基、乙基、丙基(正丙基和异丙基)、呋喃基、吡喃基、环丙基、吡啶基、环丁基或环己基,各基团经0-4个选自R2a的基团取代。在优选的实施方案中,R2为经0-4个选自R2a的基团取代的环丙基。

在另一实施方案中提供了化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中R2为NR6R6

在另一实施方案中提供了化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中R2为ORb

在更优选的实施方案中提供了式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中R2选自:

在另一更优选的实施方案中提供了式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中:

R3a在每次出现时独立地为氢、Ph、CN、NH2、OCF3、ORb、卤素、环烷基、C(O)NR11R11、S(O)2NR11R11、C(O)Rb、SOpRc、NRbSOpRc、NRbC(O)Rc、卤代烷基(CF3)、CN;取代有0-3个Ra的5-7元杂环,所述杂环包含碳原子和1-3个选自N、S或O的杂原子;或取代有0-3个Ra的C1-6烷基;或者一个R3a和另一个R3a与它们所连接的原子一起组合形成稠合环,其中所述环为苯基或包含碳原子和1-4个选自N、S或O的杂原子的5-7元杂环;

R11为氢、环丙基或取代有0-1个Rf的C1-4烷基;

Ra在每次出现时独立地为卤素或ORb

Rb在每次出现时独立地为氢、取代有0-3个Rf的包含碳原子和1-4个选自N、S或O的杂原子的5-7元杂环或取代有0-3个Rd的C1-6烷基;

Rd在每次出现时独立地为卤素(优选F)或OH;

Rc在每次出现时独立地为取代有0-3个Rf的C1-6烷基;

Rf在每次出现时独立地为氢、卤素或OH;且

p为2。

在另一更优选的实施方案中提供了式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中R3具有其可接受的盐,其中R3具有式

其中:

R3aa为取代有0-3个Ra2的C1-6烷基、S(O)pRc2或ORb2

R3ab、R3ac或R3ad独立地为氢、Cl、F或Br;

或者R3ab、R3ac或R3ad独立地为吡唑基、噻唑基或噁二唑基,各基团取代有0-3个Ra2

R11在每次出现时独立地为氢;

Ra2在每次出现时独立地为卤素、OH或取代有0-3个Rf2的C1-6烷基;

Rb2为氢或取代有0-2个Rd2的C1-6烷基;

Rc2为取代有0-3个Rf2的C1-6烷基;

Rd2在每次出现时独立地为F或OH;

Rf2为卤素、CN或OH;且

p为0-2。

在另一实施方案中提供了式I化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中R3aa为S(O)pCH3或OCH3。优选p为1或2,更优选为2。

在更优选的实施方案中提供了式I化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中R3选自

在更优选的实施方案中提供了式I化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药,其中R1为CH3、C2H5、CD3或CD2CD3(优选CH3或CD3)。

在另一实施方案中提供了药物组合物,其包含一种或多种式I化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

本发明还涉及用于治疗与IL-12、IL-23和/或IFNα的调节相关的疾病的药物组合物,其包含式I化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明还涉及治疗与IL-12、IL-23和/或IFNα的调节相关的疾病的方法,其包括向需要此种治疗的患者给予治疗有效量的式I化合物。

本发明还提供了制备本发明化合物的方法和中间体。

本发明还提供了治疗增殖性、代谢性、过敏性、自身免疫性和炎性疾病的方法(或本发明化合物在制备用于治疗这些疾病的药物中的用途),其包括向需要此种治疗的宿主给予治疗有效量的至少一种本发明化合物。

本发明还提供了治疗炎性疾病或自身免疫性疾病的方法(或本发明化合物在制备用于治疗这些疾病的药物中的用途),其包括向需要此种治疗的患者给予治疗有效量的式I化合物。

本发明还提供了治疗疾病的方法(或本发明化合物在制备用于治疗这些疾病的药物中的用途),其包括向需要此种治疗的患者给予治疗有效量的式I化合物,其中所述疾病是类风湿关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮(SLE)、狼疮肾炎、皮肤狼疮、炎性肠病、牛皮癣、克罗恩病、牛皮癣性关节炎、舍格伦综合征、系统性硬皮病、溃疡性结肠炎、格雷夫斯病,盘状红斑狼疮、成人发作性斯蒂尔病(adult onset Stills)、全身发作性幼年特发性关节炎、痛风、痛风性关节炎、1型糖尿病、胰岛素依赖型糖尿病、脓毒症、脓毒性休克、志贺菌病(Shigellosis)、胰腺炎(急性或慢性)、肾小球肾炎、自身免疫性胃炎、糖尿病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性中性粒细胞减少症、血小板减少症、特应性皮炎、重症肌无力、胰腺炎(急性或慢性)、强直性脊柱炎、寻常天疱疮、古德帕斯彻病(Goodpasture's disease)、抗磷脂综合征、特发性血小板减少症、ANCA相关性血管炎、天疱疮、川崎病、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、皮肌炎、多发性肌炎、葡萄膜炎、格林-巴利综合征、自身免疫性肺部炎症、自身免疫性甲状腺炎、自身免疫性炎性眼病以及慢性脱髓鞘性多发性神经病。

本发明还提供了治疗炎性疾病或自身免疫性疾病的方法(或本发明化合物在制备用于治疗这些疾病的药物中的用途),其包括向需要此种治疗的患者给予治疗有效量的式I化合物,其中所述疾病选自系统性红斑狼疮(SLE)、狼疮肾炎、皮肤狼疮、克罗恩病、溃疡性结肠炎、I型糖尿病、牛皮癣、类风湿性关节炎、全身发作性幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎和多发性硬化。

本发明还提供了治疗类风湿性关节炎的方法(或本发明化合物在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途),其包括向需要此种治疗的患者给予治疗有效量的式I化合物。

此外,本发明还提供了治疗病症的方法(或本发明化合物在制备用于治疗这些病症的药物中的用途),其包括向需要此种治疗的患者给予治疗有效量的式I化合物,其中所述病症选自急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、转移性黑素瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤、实体瘤、眼部新血管生成、以及婴儿血管瘤、B细胞淋巴瘤、系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎选、多发性血管炎、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、重症肌无力、过敏性鼻炎、多发性硬化(MS)、移植排斥、I型糖尿病、膜性肾炎、炎性肠病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性甲状腺炎、冷暖凝集素病、伊文氏综合征、溶血性尿毒症综合征/血栓性血小板减少性紫癜(HUS/TTP)、结节病、舍格伦综合征、周围神经病、寻常型天疱疮和哮喘。

本发明还提供了治疗IL-12、IL-23和/或IFNα介导的疾病的方法(或本发明化合物在制备用于治疗这些疾病的药物中的用途),其包括向需要此种治疗的患者给予治疗有效量的式I化合物。

本发明还提供了治疗IL-12、IL-23和/或IFNα介导的疾病(或本发明化合物在制备用于治疗这些疾病的药物中的用途),其包括向需要此种治疗的患者给予治疗有效量的式I化合物,其中所述IL-12、IL-23和/或IFNα介导的疾病为由IL-12、IL-23和/或IFNα调节的疾病。

本发明还提供了治疗疾病的方法,其包括向需要此种治疗的患者给予治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐以及其它治疗剂。

本发明还提供了本发明化合物,其用于疗法。

在另一实施方案中,式I化合物选自示例性化合物或示例性化合物的组合或本申请的其它实施方案。

另一实施方案为在至少一种下述测定中具有IC50<1000nM的化合物。

本发明可以其它具体形式实施,而并不背离其精神或必要特征。本发明涵盖本申请所提及的本发明的优选方面和/或实施方案的所有组合。应当理解的是,本发明任一和所有实施方案可结合任一其它实施方案或多个实施方案来描述其它更优选的实施方案。还应当理解的是,优选实施方案中的每一单独要素为其自身独立的优选实施方案。此外,实施方案的任一要素意欲与任一实施方案的任一和所有其它要素组合以描述其它实施方案。

具体实施方式

以下是本说明书和所附权利要求书中使用的术语的定义。除非另有说明,否则在整个说明书和权利要求书中,为本申请的基团或术语提供的初始定义单独或作为另一基团的一部分,适用于该基团或术语。

本发明化合物可具有一个或多个不对称中心。除非另外指明,否则本发明化合物的所有手性(对映异构体和非对映异构体)和外消旋形式均包括在本发明内。所述化合物中还可存在烯烃、C=N双键等的许多几何异构体,且所有此类稳定异构体均涵盖于本发明内。本发明描述了本发明化合物的顺式和反式几何异构体,且其可分离成异构体的混合物或分开的异构体形式。本发明化合物可以光学活性或外消旋形式加以分离。本领域公知如何制备光学活性形式,诸如通过拆分外消旋形式或通过从光学活性起始物质合成。除非具体指明特定的立体化学或异构体形式,否则本发明意欲包括一种结构的所有手性(对映异构体和非对映异构体)和外消旋形式以及所有几何异构形式。

当任一变量(例如,R3)在化合物的任一组成或式中出现超过一次时,其在每次出现时的定义独立于其在每次其它出现时的定义。因此,例如,如果显示基团取代有0-2个R3,则所述基团可任选地取代有最多两个R3基团且R3在每次出现时独立地选自R3的定义。此外,只要此类组合产生稳定的化合物,则取代基和/或变量的组合是可允许的。

当显示与取代基连接的键跨越连接环中两个原子的键时,则该取代基可键合至环上的任何原子。当列出取代基而没有指明该取代基经由其键合到具有给定式的化合物的其余部分的原子时,则该取代基可经由该取代基中的任何原子键合。只要此类组合产生稳定的化合物,则取代基和/或变量的组合是可允许的。

在其中本发明化合物上有氮原子(例如,胺)的情况下,可通过用氧化剂(例如,MCPBA和/或过氧化氢)处理将这些化合物转化成N-氧化物,得到本发明的其它化合物。因此,所有示出和要求保护的氮原子被认为包括示出的氮及其N-氧化物(N→O)衍生物两者。

按照本领域中所使用的惯例,在本申请结构式中使用用于描绘所述部分或取代基与母核或骨架结构的连接点。

不在两个字母或符号之间的破折号“-”用于指示取代基的连接点。例如,-CONH2通过碳原子连接。

提及式I化合物的特定基团(例如,任选取代的杂芳基)的术语“任选取代的”是指具有0、1、2或多个取代基的部分。例如,“任选取代的烷基”包括如下所定义的“烷基”和“经取代的烷基”。本领域技术人员应当理解的是,对于含有一个或多个取代基的任何基团,此类基团不意欲引入空间上不实际的、合成上不可行的和/或本质上不稳定的任何取代或取代模式。

本申请所用的术语“至少一种化学实体”可与术语“化合物”互换。

本申请所用的术语“烷基”或“亚烷基”意欲包括具有指定碳原子数的支链和直链饱和脂族烃基团。例如,“C1-10烷基”(或亚烷基)意欲包括C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9和C10烷基。另外,“C1-C6烷基”表示具有1至6个碳原子的烷基。烷基可为未取代的或取代的,由此一个或多个氢被另一化学基团替代。烷基的实例包括,但不限于,甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如,正丙基和异丙基)、丁基(例如,正丁基、异丁基、叔丁基)和戊基(例如,正戊基、异戊基、新戊基)等。

“烯基”或“亚烯基”意欲包括具有直链或支链构型且具有一个或多个碳-碳双键(其可存在于沿链的任一稳定点处)的烃链。例如,“C2-6烯基”(或亚烯基)意欲包括C2、C3、C4、C5和C6烯基。烯基的实例包括,但不限于,乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、2-甲基-2-丙烯基和4-甲基-3-戊烯基等。

“炔基”或“亚炔基”意欲包括具有直链或支链构型且具有一个或多个碳-碳三键(其可存在于沿链的任一稳定点处)的烃链。例如,“C2-6炔基”(或亚炔基)意欲包括C2、C3、C4、C5和C6炔基;诸如乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。

本领域技术人员应当理解的是,当在本申请中使用名称"CO2"时,其意欲指基团

当术语“烷基”与另一基团一起使用时,诸如在“芳基烷基”中,该联合以更多的特异性限定至少一个所述经取代的烷基将会含有的取代基。例如,“芳基烷基”是指如上文所定义的经取代的烷基,其中至少一个取代基是芳基,诸如苄基。因此,术语芳基(C0-4)烷基包括具有至少一个芳基取代基的经取代的低级烷基,并且还包括直接键合至另一基团的芳基,即芳基(C0)烷基。术语“杂芳基烷基”是指如上文所定义的经取代的烷基,其中至少一个取代基为杂芳基。

当提及经取代的烯基、炔基、亚烷基、亚烯基或亚炔基时,这些基团取代有1-3个如上文针对经取代的烷基所定义的取代基。

术语“烷氧基”是指经如本申请定义的烷基或经取代的烷基取代的氧原子。例如,术语“烷氧基”包括基团-O-C1-6烷基,诸如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、2-戊基氧基、异戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基、3-甲基戊氧基等。“低级烷氧基”是指具有1-4个碳的烷氧基。

应当理解的是,对于所有基团(包括例如,烷氧基、硫代烷基和氨基烷基)的选择将由本领域技术人员作出,以得到稳定的化合物。

本申请所用的术语“经取代的”是指指定原子或基团上的任何一个或多个氢被替换为来自指定基团的选择,条件是不超过指定原子的正常化合价。当取代基为氧代或酮基(即=O)时,则该原子上的2个氢被替换。酮取代基不存在于芳族部分。除非另外指明,否则将取代基命名到该母核结构中。例如,应当理解的是,当(环烷基)烷基作为可能的取代基被列出时,该取代基与母核结构的连接点位于烷基部分。本申请所用的环双键是两个相邻的环原子之间形成的双键(例如,C=C、C=N或N=N)。

取代基和/或变量的组合是允许的,只要此类组合产生稳定的化合物或有用的合成中间体。稳定的化合物或者稳定的结构意指这样的化合物:该化合物是足够坚固的,能经受从反应混合物中分离至有用的纯度以及随后配制成有效的治疗剂。优选的是本发明化合物不含有N-卤代、S(O)2H或S(O)H基团。

术语“环烷基”是指环状烷基,其包括单环、二环或多环系统。C3-7环烷基意欲包括C3、C4、C5、C6和C7环烷基。环烷基实例包括,但不限于,环丙基、环丁基、环戊基、环己基、降莰烷基等。本申请所用的“碳环”或“碳环残基”意欲指任何稳定的3元、4元、5元、6元或7元单环或二环或者7元、8元、9元、10元、11元、12元或13元二环或三环,其中任一者可为饱和的、部分不饱和的、不饱和的或芳族的。此类碳环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环戊烯基、环己基、环庚烯基、环庚基、环庚烯基、金刚烷基、环辛基、环辛烯基、环辛二烯基、[3.3.0]二环辛烷、[4.3.0]二环壬烷、[4.4.0]二环癸烷、[2.2.2]二环辛烷、芴基、苯基、萘基、茚满基、金刚烷基、蒽基和四氢萘基(四氢萘)。如上文所示,桥接环也包括在碳环的定义内(例如,[2.2.2]二环辛烷)。除非另外指定,否则优选的碳环为环丙基、环丁基、环戊基、环己基和苯基。当使用术语“碳环”时,其意欲包括“芳基”。当一个或多个碳原子连接两个非相邻碳原子时,则产生桥接环。优选的桥为一个或两个碳原子。应当注意的是,桥通常将单环转化成二环。当环桥接时,针对环所列举的取代基还可存在于桥上。

术语“芳基”是指在环部分具有6至12个碳原子的单环或二环芳族烃基,诸如苯基和萘基,其每一个可为经取代的。

因此,在式I化合物中,术语“环烷基”包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、二环辛基等,以及以下环体系:

等,

其任选地可在所述环的任何可用原子处取代。优选的环烷基包括环丙基、环戊基、环己基和

术语“卤代”或“卤素”是指氯、溴、氟和碘。

术语“卤代烷基”意指具有一个或多个卤素取代基的经取代的烷基。例如,“卤代烷基”包括单、双和三氟甲基。

术语“卤代烷氧基”意指具有一个或多个卤素取代基的烷氧基。例如,“卤代烷氧基”包括OCF3

因此,芳基的实例包括:

(芴基)等,其任选地可在任何可用的碳或氮原子处取代。优选的芳基为任选取代的苯基。

术语“杂环(heterocycle)”、“杂环烷基(heterocycloalkyl)”、“杂环(heterocyclo)”、“杂环的(heterocyclic)”或“杂环基(heterocyclyl)”可互换使用且是指经取代和未经取代的3元至7元单环基团、7元至11元二环基团和10元至15元三环基团,其中至少一个所述环具有至少一个杂原子(O、S或N),所述含杂原子的环优选具有1、2或3个选自O、S和N的杂原子。含有杂原子的此类基团的每个环可含有一个或两个氧或硫原子和/或一至四个氮原子,条件是每个环中的杂原子的总数为四个或更少,且进一步的条件是所述环含有至少一个碳原子。氮和硫原子可任选被氧化且氮原子可任选被季铵化。包含二环和三环基团的稠合环可仅含有碳原子,并且可为饱和的、部分饱和的或完全不饱和的。所述杂环基团可在任何可用的氮或碳原子处连接。本申请所用的术语“杂环”、“杂环烷基”、“杂环”、“杂环的”和“杂环基”包括如下定义的“杂芳基”。

除了下面描述的杂芳基,示例性单环杂环基包括氮杂环丁烷基、吡咯烷基、氧杂环丁烷基、咪唑啉基、噁唑烷基、异噁唑啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂基、氮杂基、1-吡啶酮基、4-哌啶酮基、四氢吡喃基、吗啉基、硫吗啉基、硫吗啉基亚砜、硫吗啉基砜、1,3-二氧杂环戊烷和四氢-1,1-二氧代噻吩基等。示例性二环杂环基包括奎宁环。其它单环杂环基团包括

术语“杂芳基”是指经取代的和未经取代的芳族5元或6元单环基团,9元或10元二环基团和11元至14元三环基团,其在所述环中的至少一个环中具有至少一个杂原子(O、S或N),所述含有杂原子的环优选具有1、2或3个选自O、S和N的杂原子。含有杂原子的杂芳基中的每个环可含有一个或两个氧或硫原子和/或一至四个氮原子,条件是每个环中的杂原子的总数为四个或更少且每个环具有至少一个碳原子。包含二环和三环基团的稠合环可仅含有碳原子,且可为饱和的、部分饱和的或不饱和的。氮和硫原子可任选地被氧化,且氮原子可任选地被季铵化。杂芳基(二环的或三环的)必须包含至少一个完全芳族的环,但其它一个或多个稠合环可为芳族的或非芳族的。杂芳基可在任何环的任何可用的氮或碳原子处连接。当化合价允许时,若所述另一个环为环烷基或杂环,其可另外任选地取代有=O(氧代)。

示例性单环杂芳基包括吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基等。

示例性二环杂芳基包括吲哚基、苯并噻唑基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲嗪基、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、二氢异吲哚基、四氢喹啉基第。

示例性的三环杂芳基包括咔唑基、苯并吲哚基、菲咯啉基、吖啶基、菲啶基、呫吨基等。

在式I化合物中,优选的杂芳基包括

等,其任选地可在任何可用的碳或氮原子处取代。

除非另外指明,否则当提及一个具体命名的芳基(例如,苯基)、环烷基(例如,环己基)、杂环(例如,吡咯烷基、哌啶基和吗啉基)或杂芳基(例如,四唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、噻唑基和呋喃基)时,所述引用意在包括具有0至3个,优选0至2个取代基的环,所述取代基选自适当时上述针对芳基、环烷基、杂环基和/或杂芳基所列举的那些。

术语“碳环基”或“碳环”是指其中所有环的所有原子都是碳的饱和的或不饱和的单环或二环。因此,该术语包括环烷基和芳基环。单环碳环具有3至6个环原子,更通常为5或6个环原子。二环碳环具有7至12个环原子(例如,排列为二环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]体系),或者9或10个环原子(排列为[5,6]或[6,6]系统)。单环和二环碳环的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、苯基和萘基。碳环可为经取代的,在这种情况下,取代基选自上述针对环烷基和芳基所列举的那些。

术语“杂原子”应包括氧、硫和氮。

当在本申请中使用时,术语“不饱和的”是指环或基团,所述环或基团可为完全不饱和的或部分不饱和的。

在整个说明书中,基团及其取代基可由本领域技术人员选择以得到稳定的部分和化合物以及用作药学上可接受的化合物的化合物和/或用于制备药学上可接受的化合物的中间体化合物。

式I化合物可以游离形式(无电离)存在,或者可形成也在本发明的范围内的盐。除非另外指明,否则提及本发明化合物被理解为包括提及它们的游离形式和盐。术语“盐”表示与无机和/或有机酸和碱形成的酸性和/或碱性盐。此外,术语“盐”可包括两性离子(内盐),例如,当式I化合物含有碱性部分(诸如胺或吡啶或咪唑环)和酸性部分(诸如羧酸)两者时。药学上可接受的(即,无毒的、生理学上可接受)盐是优选的,诸如,例如,可接受的金属盐和胺盐,其中阳离子不明显有助于所述盐的毒性或生物活性。然而,其它盐可以是有用的,例如,在可在制备过程中采用的分离或纯化步骤中,并因此涵盖于本发明的范围内。式I化合物的盐可通过以下方式形成:例如,使式I化合物与一定量(诸如等当量)的酸或碱在介质(诸如盐在其中析出的介质)中或含水介质中反应,接着进行冷冻干燥。

示例性酸加成盐包括乙酸盐(诸如与乙酸或三卤代乙酸例如三氟乙酸形成的盐)、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐,苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐(与盐酸形成)、氢溴酸盐(与氢溴酸形成)、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐(与马来酸形成)、甲磺酸盐(与甲磺酸形成)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(诸如与硫酸形成的盐)、磺酸盐(诸如本申请提及的盐)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐诸如甲苯磺酸盐、十一酸盐等。

示例性碱性盐包括铵盐;碱金属盐诸如钠、锂和钾盐;碱土金属盐诸如钙和镁盐;钡、锌和铝盐;与有机碱的盐(例如,有机胺),所述有机碱诸如三烷基胺诸如三乙胺、普鲁卡因、二苄胺、N-苄基-β-苯乙胺、1-二苯羟甲胺、N,N′-二苄基乙二胺、脱氢枞胺、N-乙基哌啶、苄胺、二环己基胺或类似的药学上可接受的胺;以及与氨基酸的盐,所述氨基酸诸如精氨酸、赖氨酸等。碱性含氮基团可用试剂季铵化,所述试剂诸如低级烷基卤化物(例如,甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如,二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯)、长链卤化物(例如,癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如,苄基和苯乙基溴化物)及其它。优选的盐包括单盐酸盐、硫酸氢盐、甲磺酸盐、磷酸盐或硝酸盐。

短语“药学上可接受的”在本申请中用来指这样的化合物、材料、组合物和/或剂型:其在合理的医学判断范围内,适用于与人类和动物的组织接触的而没有过度的毒性、刺激、过敏响应,或其它问题或并发症,与合理的益处/风险比相称。

本申请所用的“药学上可接受的盐”是指其中母体化合物通过制备其酸或碱盐来修饰所公开的化合物的衍生物。药学上可接受的盐的实例包括,但不限于,碱性基团(诸如胺)的无机或有机酸盐;以及酸性基团(诸如羧酸)的碱性或有机盐。所述药学上可接受的盐包括例如由无毒无机酸或有机酸所形成母体化合物的常规无毒盐或季铵盐。例如,此类常规无毒盐包括由无机酸衍生的盐,所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸;和由有机酸制备的盐,所述有机酸诸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙磺酸等。

本发明的药学上可接受的盐通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物来合成。一般而言,此类盐可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当碱或酸在水或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备;一般而言,优选非水介质如乙醚(ether)、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。合适的盐的列表参见Remington's Pharmaceutical Sciences,18th Edition,Mack Publishing Company,Easton,PA(1990),由此通过引用其公开内容并入。

本发明的化合物的所有立体异构体意欲涵盖混合物或纯的或基本上纯的形式。立体异构体可包括通过拥有一个或多个手性原子而为光学异构体的化合物,以及凭借关于一个或多个键有限转动而为光学异构体(阻转异构体)的化合物。本发明化合物的定义涵盖所有可能的立体异构体及其混合物。它非常具体地包括外消旋形式和具有特定酶活性的分离的光学异构体。外消旋形式可通过物理方法拆分,诸如,例如,分步结晶,非对映异构体衍生物的分离或结晶或通过手性柱色谱法的分离。单独光学异构体可由常规的方法从外消旋体获得,诸如,例如,与光学活性酸形成盐,接着进行结晶。

本发明意欲包括本发明化合物中出现的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子数但具有不同质量数的那些原子。通过一般实例而非限制的方式,氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括13C和14C。本发明的同位素标记的化合物通常可通过以下方式制备:本领域技术人员公知的常规技术或与本申请所述方法类似的方法,使用适当的同位素标记的试剂替代以其它方式所用的非标记的试剂。

本发明还涵盖本发明化合物的前药和溶剂化物。术语“前药”表示这样的化合物,其在向给受试者给药后,通过代谢或化学过程经历化学转化得到式I化合物和/或其盐和/或溶剂化物。将在体内转化得到生物活性剂(即,式I化合物)的任何化合物是在本发明的范围和精神内的前药。例如,含有羧基的化合物可形成作为前药的生理学上可水解的酯,其可通过在体内被水解,得到式I化合物本身。此类前药优选口服给药,因为在许多情况中在消化酶的影响下主要发生水解。当酯本身是有活性的或在血液中发生水解的那些情况下可使用肠胃外给药。式I化合物的生理学上可水解的酯的实例包括C1-6烷基苄基、4-甲氧基苄基、茚满基、邻苯二甲酰基、甲氧基甲基、C1-6烷酰基氧基-C1-6烷基(例如,乙酰氧甲基、新戊酰氧基或丙酰基甲基)、C1-6烷氧基羰基氧基-C1-6烷基(例如,甲氧基羰基-氧基甲基或乙氧基羰羰基氧基甲基、甘氨酸基氧基甲基、苯基甘氨酸基氧基甲基、(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)-甲基)和其它公知的生理学上可水解的酯(例如,在青霉素和头孢菌素领域中使用的)。此类酯可通过本领域中已知的常规技术来制备。

前药的各种形式式本领域公知的。对于此类前药衍生物的实例,可参见:

a)Bundgaard,H.,ed.,Design of Prodrugs,Elsevier(1985),and Widder,K.et al.,eds.,Methods in Enzymology,112:309-396,Academic Press(1985);

b)Bundgaard,H.,Chapter 5,"Design and Application of Prodrugs",Krosgaard-Larsen,P.et al.,eds.,A Textbook of Drug Design and Development,pp.113-191,Harwood Academic Publishers(1991);和

c)Bundgaard,H.,Adv.Drug Deliv.Rev.,8:1-38(1992),

通过引用的方式将其各自并入。

式I化合物及其盐可以其互变异构形式存在,其中氢原子被转移到分子的其它部分且分子中原子之间的化学键因此重排。应当理解的是,所有互变异构形式,只要它们可能存在,就包括在本发明内。此外,本发明化合物可具有反式和顺式异构体。

还应当理解的是,式I化合物的溶剂化物(例如,水合物)也在本发明的范围内。溶剂化的方法在本领域中通常是公知的。

效用

本发明的化合物调节IL-23刺激和IFNα刺激的细胞功能,包括基因转录。可通过本发明化合物调节的其它类型的细胞功能包括,但不限于,IL-12刺激的响应。

因此,式I化合物通过作用与Tyk2以介导信号转导在治疗与IL-23或IFNα的功能的调节并且具体为IL-23、IL-12或IFNα的功能的选择性抑制相关的病症中具有效用。此类条件包括IL-23-、IL-12-或IFNα相关的疾病,其中致病机制由这些细胞因子介导。

本申请中所用的术语“治疗("treating"或"treatment")”包括治疗哺乳动物,特别是人类的疾病状态,并且包括:(a)预防或延迟哺乳动物的疾病状态的发生,具体而言,当该哺乳动物易患该疾病状态但尚未被诊断为患有该疾病状态时;(b)抑制该疾病状态,即,阻止其发展;和/或(c)实现症状或疾病状态的完全或部分减小,和/或缓解、改善、减轻或治愈疾病或病症和/或其症状。

鉴于式I化合物作为IL-23、IL-12和IFNα刺激的细胞响应的调节剂的活性,式I化合物可用于治疗IL-23、IL-12或IFNα相关的疾病,所述疾病分别包括,但不限于,炎性疾病诸如克罗恩病、溃疡性结肠炎、哮喘、移植物抗宿主病、同种异体移植排斥、慢性阻塞性肺疾病;自身免疫疾病诸如格雷夫斯病、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、皮肤狼疮、狼疮性肾炎、盘状红斑狼疮、牛皮癣;自身炎症性疾病,包括CAPS、TRAPS、FMF、成人发作性斯蒂尔病、全身发作性幼年特发性关节炎、痛风、痛风性关节炎;代谢性疾病、包括2型糖尿病、动脉粥样硬化、心肌梗死;破坏性骨病,诸如骨吸收疾病、骨关节炎、骨质疏松症、多发性骨髓瘤相关性骨病;增殖性疾病,诸如急性骨髓性白血病、慢性髓细胞性白血病;血管生成障碍,诸如血管生成障碍,包括实体瘤、眼部新血管生成和婴儿血管瘤;感染性疾病,诸如败血症、感染性休克、志贺菌病;神经变性疾病,诸如阿尔茨海默病、帕金森病、脑缺血或由创伤损伤引起的神经变性疾病;肿瘤疾病和病毒疾病,诸如黑色素瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤,及HIV感染和CMV视网膜炎、AIDS。

更具体地说,可用本发明化合物治疗的具体病症或疾病包括治疗,但不限于,胰腺炎(急性或慢性)、哮喘、过敏症、成人呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺病、肾小球肾炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、皮肤狼疮、狼疮性肾炎、盘状红斑狼疮、硬皮病、慢性甲状腺炎、格雷夫斯病、自身免疫性胃炎、糖尿病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性中性粒细胞减少症、血小板减少症、特应性皮炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、多发性硬化、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、牛皮癣、移植物抗宿主病、内毒素炎引起的炎症反应、结核病、动脉粥样硬化、肌肉变性、恶病质、牛皮癣性关节、莱特尔氏综合征、痛风、创伤性关节炎、风疹性关节炎、急性滑膜炎、胰腺β-细胞病;特征在于大量中性粒细胞浸润的疾病;类风湿性脊椎炎、痛风性关节炎和其它关节炎病症、脑型疟、慢性肺部炎性疾病、硅肺、肺结节病、骨吸收病、同种异体移植排斥、发烧和由感染所致的肌痛、感染继发性恶病质、瘢痕瘤形成、瘢痕组织形成、溃疡性结肠炎、热症(pyresis)、流行性感冒、骨质疏松症、骨关节炎、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、转移性黑素瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤、败血症、感染性休克和志贺菌病;阿尔茨海默病、帕金森病、脑缺血或由创伤性损伤引起的神经变性疾病;血管生成疾病,包括实体瘤、眼部新血管生成和婴儿血管瘤;病毒疾病,包括急性肝炎感染(包括甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎)、HIV感染和CMV视网膜炎、AIDS、ARC或恶性肿瘤和疱疹;中风、心肌缺血、中风心脏病发作中的缺血、器官缺氧(organ hyposia)[此处应为缺氧(hypoxia)]、血管增生、心脏和肾脏再灌注损伤、血栓形成、心脏肥大、凝血酶诱导的血小板聚集、内毒素血症和/或中毒性休克综合征、与前列腺素内过氧化酶合成酶-2相关的病症和寻常性天疱疮。优选的治疗方法是其中病症选自克罗恩病、溃疡性结肠炎、移植排斥、类风湿关节炎、牛皮癣、强直性脊柱炎、牛皮癣性关节炎和寻常性天疱疮的那些。可替代的优选的治疗方法是其中病症选自缺血再灌注损伤(包括由中风引起的心肌缺血再灌注损伤和由心肌梗塞引起的脑缺血再灌注损伤)的那些。另一种优选的治疗方法是其中所述病症是多发性骨髓瘤的方法。

当在本申请中使用术语“IL-23、IL-12或IFNα相关病症”或“IL-23、IL-12或IFNα相关疾病或病症”时,每个意欲涵盖上文所鉴别的所有病症(如同再详细重复一遍),以及受IL-23、IL-12或IFNα影响的任何其它病症。

因此,本发明提供了治疗此类疾病的方法,其包括向有此需要的受试者给予治疗有效量的至少一种式I化合物或其盐。“治疗有效量”意欲包括当单独或组合给药时有效抑制IL-23、IL-12或IFNα功能和/或治疗疾病的本发明化合物的量。

治疗IL-23、IL-12或IFNα相关病症的方法可包括单独或与彼此和/或可用于治疗此类病症的其它合适的治疗剂组合给予式I化合物。因此,“治疗有效量”还意欲包括有效抑制IL-23、IL-12或IFNα功能和/或治疗与IL-23,IL-12或IFNα相关疾病的要求保护的化合物的组合的量。

此类其它治疗剂的示例包括皮质类固醇、咯利普兰(rolipram)、卡弗他丁(calphostin)、细胞因子抑制性抗炎药(CSAID)、白介素-10、糖皮质激素、水杨酸盐、一氧化氮和其它免疫抑制剂;核转位抑制剂,诸如脱氧精胍菌素(DSG);非类固醇抗炎药(NSAID),诸如布洛芬、塞来考昔和罗非考昔;类固醇,诸如泼尼松或地塞米松;抗病毒剂,诸如阿巴卡韦;抗增殖剂,诸如甲氨喋呤、来氟米特、FK506(他克莫司,);抗疟药,诸如羟氯喹;细胞毒性药物,诸如硫唑嘌呤(azathiprine)和环磷酰胺;TNF-α抑制剂,诸如替尼达普,抗-TNF抗体或可溶性TNF受体和雷帕霉素(西罗莫司或)或其衍生物。

上述其它治疗剂,当与本发明化合物组合使用时,可例如以Physicians'Desk Reference(PDR)中所指示的量或由本领域普通技术人员以其它方式确定的量使用。在本发明的方法中,此类其它治疗剂给药本发明化合物之前、与其同时或在其之后给药。如上文所述,本发明还提供了药物组合物能够通过抑制Tyk2介导的信号转导治疗IL-23、IL-12或IFNα相关病症(包括IL-23、IL-12或IFNα介导的疾病)。

本发明组合物可含有如上所述的其它治疗剂,并且可例如通过采用常规固体或液体媒介物或稀释剂,以及适于期望给药模式的类型的药物添加剂(例如,赋形剂,粘合剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂等)根据技术(诸如药物制剂领域公知的技术)来配制。

因此,本发明进一步包括组合物,其包含一种或多种式I化合物和药学上可接受的载体。

“药学上可接受的载体”是指本领域中普遍接受的用于向动物(具体为哺乳动物)递送生物活性剂的介质。根据本领域普通技术人员范围内的多个因素配制药学上可接受的载体。这些包括但不限于所配制的活性剂的类型和性质;将向其给予含有药剂的组合物的受试者;组合物的预定给药途径;以及所靶向的治疗适应症。药学上可接受的载体包括水性和非水性液体介质,以及各种固体和半固体剂型。除活性剂之外,此类载体可包括多种不同的成分和添加剂,出于本领域普通技术人员公知的原因,此类其它成分包括在制剂中,例如,活性剂、粘合剂的稳定化等。合适的药学上可接受的载体和涉及它们的选择的因素的描述可见于多个容易获得的来源,诸如,例如,Remington's Pharmaceutical Sciences,17th Edition(1985),通过引用的方式将其整体并入本申请。

式I的化合物可通过任何适于待治疗疾病的手段来给药,这可取决于位点特异性治疗需要的或待递送药物的量。局部给药通常优选用于皮肤相关疾病,而全身性治疗优选用于癌性或癌前疾病,尽管其它递送模式是可预期的。例如,该化合物可口服递送,诸如以片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉末剂或液体制剂(包括糖浆剂)的形式;局部沸点,诸如以溶液、悬浮液、凝胶或软膏的形式;舌下递送;含服递送:肠胃外递送,诸如通过皮下、静脉内、肌内或胸骨内注射或输注技术(例如,如无菌可注射水溶液或非水溶液的溶液或悬浮液);经鼻递送,诸如通过吸入喷雾;局部递送,诸如以乳膏或软膏的形式;经直肠递送,诸如以栓剂的形式;或脂质体递送。可给予含有无毒的、药学上可接受的媒介物或稀释剂的剂量单位制剂。该化合物可以适于立即释放或延长释放的形式给药。立即释放或延长释放可用合适的药物组合物来实现,或者特别是在延长释放的情况下,用装置诸如皮下植入物或渗透泵来实现。

用于局部给药的示例性组合物包括局部载体,诸如(用聚乙烯凝胶化的矿物油)。

用于口服给药的示例性组合物包括悬浮液,其可含有:例如,用于赋予体积的微晶纤维素,作为悬浮剂的藻酸或藻酸钠,作为粘度增强剂的甲基纤维素,和增甜剂或矫味剂诸如本领域已知的那些;和立即释放片剂,其可含有:例如,微晶纤维素、磷酸二钙、淀粉、硬脂酸镁和/或乳糖和/或其它赋形剂、粘合剂、增容剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂诸如本领域已知的那些。本发明化合物也可通过舌下和/或含服给药口服递送,例如,用模制、压缩或冷冻干燥的片剂。示例性组合物可包括快速溶解的稀释剂,诸如甘露醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精。还包含在此类制剂可为高分子量赋形剂诸如纤维素或聚乙二醇(PEG);辅助粘膜粘附的赋形剂,诸如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)和/或马来酸酐共聚物(例如,);和用于控制释放的试剂,诸如聚丙烯共聚物(例如,CARBOPOL)。还可加入润滑剂、助流剂、矫味剂、着色剂和稳定剂以易于制造和使用。

用于鼻气雾剂或吸入给药的示例性组合物包括这样的溶液,其可含有例如苄醇或其它合适的防腐剂、吸收促进剂以提高吸收和/或生物利用度,和/或其它增溶剂或分散剂,诸如本领域已知的那些。

用于肠胃外给药的示例性组合物包括可注射溶液或悬浮液,其可含有例如合适的无毒、肠胃外可接受的稀释剂或溶剂,诸如甘露醇、1,3-丁二醇、水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液或其它合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂(包括合成的单或二甘油酯),和脂肪酸(包括油酸)。

用于直肠给药的示例性组合物包括栓剂,其可含有例如合适的无刺激性赋形剂,诸如可可脂、合成性甘油酯或聚乙二醇,它们在常温是固体,但在直肠腔中液化和/或溶解释放药物。

治疗有效量的本发明化合物可由本领域普通技术人员确定,并且包括用于哺乳动物的示例性剂量:约0.05至1000mg活性化合物/kg体重/天;1-1000mg活性化合物/kg体重/天;1-50mg活性化合物/kg体重/天;5-250mg活性化合物/kg体重/天;250-1000mg活性化合物/kg体重/天,其可以单一剂量形式或以个别分开的剂量形式给药,诸如每天1至4次。应当理解的是,对于任何特定受试者的具体剂量水平和剂量频率可以变化,并且将取决于多种因素,包括所用具体化合物的活性,该化合物的代谢稳定性和作用时间,受试者的物种、年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食,给药模式和时间,排泄速率,药物组合,以及具体病症的严重度。优选用于治疗的受试者包括动物,最优选哺乳动物物种诸如人,以及家畜诸如犬、猫、马等。因此,当在本申请中使用术语“患者”时,该术语意欲包括所有受IL-23、IL-12和/或IFNα介导的功能的调节影响的受试者,最优选哺乳动物物种。

生物学测定

探针置换测定

如下进行探针置换测定:在385孔板中,在室温将2.5nM受试化合物与重组表达His-标签的蛋白质(对应于人类Tyk2的氨基酸575-869)(序列示于下文)、40nM((R)-N-(1-(3-(8-甲基-5-(甲基氨基)-8H-咪唑并[4,5-d]噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)苯基)乙基)-2-([3H]甲基磺酰基)苯甲酰胺)(制备述于下文)和80μg/mL铜His-标签闪烁迫近测定珠粒(Perkin Elmer,Catalog#RPNQ0095)在含有100μg/mL牛血清白蛋白和5%DMSO的50mM HEPES,pH 7.5中温育30分钟。然后通过闪烁计数定量结合至Tyk2的放射标记的探针(制备述于下文preparation described below),并通过由与无抑制剂(0%抑制)或无Tyk2(100%抑制)的孔比较来计算受试化合物的抑制作用。The IC50值定义为使放射标记的探针结合抑制50%所需的受试化合物的浓度。

重组的代Hig-标签的的蛋白质序列(575-869):

MGSSHHHHHH SSGETVRFQG HMNLSQLSFH RVDQKEITQL SHLGQGTRTN VYEGRLRVEG SGDPEEGKMDDEDPLVPGRD RGQELRVVLK VLDPSHHDIA LAFYETASLM SQVSHTHLAF VHGVCVRGPE NIMVTEYVEHGPLDVWLRRE RGHVPMAWKM VVAQQLASAL SYLENKNLVH GNVCGRNILL ARLGLAEGTS PFIKLSDPGVGLGALSREER VERIPWLAPE CLPGGANSLS TAMDKWGFGA TLLEICFDGE APLQSRSPSE KEHFYQRQHRLPEPSCPQLA TLTSQCLTYE PTQRPSFRTI LRDLTRL。

如下文所述进行放射标记的探针(R)-N-(1-(3-(8-甲基-5-(甲基氨基)-8H-咪唑并[4,5-d]噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)苯基)乙基)-2-([3H]甲基磺酰基)苯甲酰胺的制备:

2-([3H]甲基磺酰基)苯甲酸:将2-巯基苯甲酸(2.3mg,0.015mmol)和碳酸铯(2mg,0.006mmol)加至5mL圆底烧瓶中。将烧瓶连接至配有排气口的玻璃真空管线并伴随机械搅拌引入无水DMF(0.5mL)。将一安瓿氚代碘甲烷(200mCi,Perkin-Elmer lot 3643419)加至反应烧瓶中并在室温(rt)维持搅拌3h。通过用真正标准(authentic standard)比较使用放射剂量检测进行过程中HPLC(In-process HPLC)分析指示80%转化成期望产物。未经纯化,使粗产物与预先溶于CH2Cl2(1mL)中的mCPBA(10mg,0.058mmol)在室温伴随搅拌反应。将反应混合物搅拌7h并加入额外的mCPBA(10mg,0.058mmol)。将反应混合物搅拌约24h且HPLC分析指示35-40%转化成期望的磺酸盐产物。通过半制备型HPLC(Luna 5μm C18(10x250cm);A:MeOH/H2O=15/85(0.1%TFA);B:MeOH;270nm;0-8min 0%B 1ml/min;8-10min 0%B 1-3ml/min;10-55min 0%B 3ml/min;55-65min 0-10%B 3ml/min;65-75min 10-50%B 3ml/min;75-80min 50-100%B 3ml/min)纯化粗产物,得到81mCi(40%放射化学产率)2-([3H]甲基磺酰基)苯甲酸产物,该产物通过与真正标准进行HPLC共洗脱来鉴别。通过HPLC测量放射化学纯度为99%(Luna 5μ C18(4.6x150cm);A:H2O(0.1%TFA);B:MeOH;1.2ml/min;270nm;0-10min 20%B;10-15min 20-100%B;15-25min 100%B)。将产物溶于无水乙腈中,得到最终溶液活度为5.8mCi/mL。

(R)-N-(1-(3-(8-甲基-5-(甲基氨基)-8H-咪唑并[4,5-d]噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)苯基)乙基)-2-([3H]甲基磺酰基)苯甲酰胺:将2-([3H]甲基磺酰基)苯甲酸(23.2mCi)在乙腈中的溶液加至5mL圆底烧瓶中,然后将圆底烧瓶连接至真空管线并小心地蒸发至干。将溶于无水DMF(1.5mL)中的(R)-2-(3-(1-氨基乙基)苯基)-N,8-二甲基-8H-咪唑并[4,5-d]噻唑并[5,4-b]吡啶-5-胺(如WO 2004/106293和Dyckman et al.,Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,383-386(2011)中所述制备)(1.1mg,0.0033mmol)和PyBOP(2mg,0.0053mmol)加至烧瓶中,接着加入N,N-二异丙基乙基胺(0.010mL)。将所得澄清溶液在室温搅拌18h。通过与非放射标记的(R)-N-(1-(3-(8-甲基-5-(甲基氨基)-8H-咪唑并[4,5-d]噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)苯基)乙基)-2-(甲基磺酰基)苯甲酰胺的样品进行保留时间比较,HPLC分析(Luna 5μC18(4.6x150cm);A:H2O(0.1%TFA);B:MeOH;1.2ml/min;335nm;0-20min 50%B;20-25min50-100%B;25-30min 100%B)指示约20%转化成期望产物。通过半制备型HPLC(Luna 5μC18(10x250cm);A:MeOH/H2O=50/50(0.1%TFA);B:MeOH;335nm;0-40min 0%B 3ml/min;40-45min 0-100%B 3ml/min)纯化粗反应混合物。再次进行常规纯化,得到总计1.7mCi(7%放射化学产率)放射化学纯度为99.9%的期望产物。使用氚代产物的质谱分析(m/z M+H 527.33)确定在80.6Ci/mmol的比放射性(specific activity)。

Kit225T细胞测定

将具有稳定整合的STAT依赖性荧光素酶受体报道蛋白的Kit225T细胞置于含有10%经热灭活的FBS(Gibco)和100U/mL PenStrep(Gibco)的RPMI(Gibco)。然后用20ng/mL人重组IL-23或200U/mL人重组IFNα(PBL InterferonSource)将细胞刺激5-6小时。根据厂商说明书使用荧光素酶测定系统(Promega)测量荧光素酶表达。通过与0%抑制的无抑制剂对照孔和100%抑制的未经刺激对照进行比较计算抑制数据。产生剂量响应曲线以确定抑制50%细胞响应所需的浓度(IC50),如通过非线性回归分析所推导。

测定数据

制备方法

本发明化合物可通过有机化学领域技术人员可用的多种方法来合成。用于制备本发明化合物的一般合成方案如下文所述。这些方案是说明性的,并不意在限制本领域技术人员可用于制备本申请公开的化合物的可能技术。制备本发明化合物的不同方法对于本领域技术人员将是显而易见的。另外,合成中的各步骤可以交替次序进行,以得到所需的一种或多种化合物。通过一般方案中所述的方法制备的本发明化合物的实例在下文所述制备和实施例部分中给出。几种所述化合物是手性的,一些被制备成外消旋混合物,而另一些制备成单一对映异构体。在每种情况下,纯手性实施例的制备,或相反对映异构体的制备,可通过本领域技术人员已知的技术来进行。例如,纯手性化合物可通过由手性相制备型HPLC分离外消旋产物来制备。可选择地,实施例化合物可通过已知方法得到对映异构体富集产物来制备。这些包括,但不限于,手性助剂官能团掺入其中用于控制转换的非对映异构体选择性的外消旋中间体,其经裂解手性助剂后得到对映体富集的产物。

方案1.卤代-吡啶II与酰胺III的偶联

方案1图示说明由中间体卤代吡啶(II)和酰胺/脲(III)制备本发明的标题化合物(I)。该偶联可通过多种已知的方式进行,实现用此类基团替换2-卤代-吡啶。这包括但不限于钯催化的酰胺的N-芳基化。多种钯源可用于进行偶联,包括钯(II)盐(例如二乙酸钯)以及中性钯(诸如四三苯基膦钯或三(二亚苄基丙酮)二钯)。许多催化剂配体适于该转换,包括双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(Xantphos)和2-(二环己基膦基)-3,6-二甲氧基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯(BrettPhos)以及合成化学中熟悉的常用的多种其它配体(参见Surry,D.S.et al.,XXXVII.Chem.Sci.,2:27-50(2011))。可采用多种碱(诸如碳酸钾、叔丁醇钠、碳酸铯等)以及多种溶剂(诸如1,4-二噁烷、甲苯和二甲基乙酰胺等)。可选择地,6-氨基-烟酰胺(IV)可与羧酸酯衍生物(V)或异氰酸酯(VI)偶联制备I(方案2)。IV与V偶联生成I可通过多种已知制备羧酰胺的方式完成。例如,酸(V,X=OH)与胺(IV)的缩合可如下进行:用活化试剂(诸如水溶性碳二亚胺(EDC))在N-羟基三唑(HOAt或HOBt等),和胺(IV)在碱(优选三乙胺、二异丙基乙基胺等)存在下在极性非质子性溶剂(N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、二氯甲烷等)存在下处理V。可选择的组合试剂,即组合活性试剂和羟基三唑的试剂,诸如O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)或(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)鏻鎓六氟磷酸盐(BOP)可在碱存在下使用。可选择地,然后酰卤(V,X=F,Cl)或异氰酸酯(VI)与胺IV的缩合(通常在碱诸如吡啶或三乙胺存在下在非质子性溶剂中进行)可得到所需产物I。

方案2.氨基-烟酰胺IV与V/VI的偶联

方案3.卤代-吡啶II与VII的偶联

方案3图示说明6-氨基-烟酰胺IV的合成。虽然正在开发新的直接的氨的偶联(参见例如:Lundgren,R.J.et al.,Angew.Chem.Int.Ed.,49:4071-4074(2010)),但传统上使用两步骤操作完成该合成,由此,当量氨与氯化物偶联,然后在单独的步骤中除去保护或活化基团以显露伯胺。许多用于组装-NH2基团的多步骤策略是已知的,但大都采用钯催化交叉偶联和经保护的胺。这些条件常采用基团诸如二苯甲酮亚胺作为氨源(参见:Wolfe,J.P.et al.,Tetrahedron Lett.,38:6367-6370(1997)),但可使用多种其它胺,包括4-甲氧基苄基胺(以与方案1类似的方式偶联且在质子酸存在下在极性溶剂中除去)。

方案4.卤代-吡啶VIII与胺IX的偶联

方案4图示说明用胺IX选择性替换VIII的4-氯基团得到中间体II。二卤化物的替换大都在碱诸如双(三甲基甲硅烷基)氨基钠或N,N-二异丙基乙基胺或相关碱存在下完成,但还可以想到该替换可在高温条件下在没有催化剂存在下或在酸催化剂存在下完成。在所有情况下,许多溶剂是合适的,包括四氢呋喃、二甲基甲酰胺和N-甲基-2-吡咯烷酮。由于4,6-二氯烟酰胺的4-位相对于6-位反应性增加,有理由认为化学合成领域的技术人员还可想到替换策略。

方案5.羧酸X与胺XI的偶联

]方案5图示说明由市售的(或遵循Platts,M.Y.et al.,Tetrahedron Lett.,52:512-514(2011)由1,3-丙酮二甲酸二乙酯制备的)羧酸X制备中间体VIII。酰胺VIII可由X通过多种已知用于制备羧酰胺的方式通过羧酸和胺的脱水缩合制备。例如,酸X与胺(NH2R1,XI,其中处于此类目的将R1限于CH3、CD3、CH2CH3和CD2CD3)的缩合可如下进行:用活化试剂(诸如水溶性碳二亚胺(EDC))在N-羟基三唑(HOAt或HOBt等)存在下,和胺在碱(优选三乙胺、二异丙基乙基胺等)存在下在适当极性非质子性溶剂溶剂(N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、二氯甲烷等)中处理X。可选择的组合试剂,诸如HATU或BOP可在碱存在下使用。也可通过用适当氯化剂(亚硫酰氯、草酰氯等)处理将羧酸X转化成酰氯。类似地,经暴露于氟化剂(诸如氰尿酰氟(cyanuric fluoride))可将X转化成酰氟。然后酰卤(酰氯或酰氟)与胺XI(通常在碱诸如吡啶或三乙胺存在下在非质子性溶剂中进行)的偶联可得到酰胺VIII。

方案6.侧向(pendant)硫化物XII向砜和亚砜的氧化

方案6图示说明可如何将侧向硫化物氧化成相应的砜或亚砜,虽然未图示说明,但可能在II上进行此类氧化,然后如方案1中所示在C6位进行官能化。可使用氧化剂诸如钨酸钠或3-氯过苯甲酸在有机溶剂诸如二氯甲烷或乙酸中将硫化物(XII)氧化成砜(XIIIa)。向亚砜(XIIIb)的部分氧化通常需要更温和的条件诸如过氧化氢/乙酸;然而,如果在适当时间淬灭反应混合物,则可使用与目标为砜时相同的条件。

方案7.苯胺IX的合成

方案4中所采用的许多苯胺是市售的;然而,一些不是市售的。合成许多非市售苯胺的策略述于方案7中。可使用Williamson醚合成将市售XIV转化成醚XV。Williamson醚形成是合成醚的常用实验方案,该反应由包括:醇和碱(诸如碳酸钾、氢化钠、三乙胺或其它)组合;接着加入相容性亲电体,诸如特征在于离去基团的脂族、苄基或烯丙基官能团,最常见是加入卤化物,但甲磺酸酯/甲苯磺酸酯和其它基团也是相容性的。该反应通常在急性非质子性溶剂诸如四氢呋喃或二甲基甲酰胺中进行。然后使用非均相催化剂诸如钯、锌或铁和氢源诸如氢气(气体)、氯化铵或盐酸将XI的硝基还原成胺(XVI),此类反应通常在醇性溶剂中进行。芳基溴化物的硼基化可使用钯催化(参见Ishiyama,T.et al.,J.Org.Chem.,60:7508(1995))完成;然而,另一种常见的途径是金属卤素交换接着与亲电硼烷反应。可经由偶联使用多种不同的催化剂、配体、碱和溶剂将硼酸酯(XVII)偶联至宽范围的芳基卤化物和杂芳基卤化物。一种常见的试剂组合是1,1′-双(二叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯作为催化剂,磷酸钾(于水中)作为碱,使用二噁烷作为溶剂与芳基溴化物反应;然而,存在许多潜在的组合,对于部分描述参见:Barder,T.E.et al.,J.Am.Chem.Soc.,127:4685-4696(2005);and Miyaura,N.et al.,Chem.Rev.,95:2457-2483(1995)。

方案8.可选择的I的制备

方案8图示说明借助于此可在合成序列后期引入R9(I)处的多样性的手段。在该策略中,遵循方案4中所述相同的操作,VIII和XVI可进行偶联。可经由加入经保护的胺(经由热或选择性钯催化的N-芳基化条件)接着脱保护将中间体XVIII转化成伯胺,例如可在严格的热条件下接着用质子酸(诸如三氟乙酸)脱保护引入4-(甲氧基苯基)甲胺,得到XIX。可使用方案2中所述相同的技术完成向游离胺中加入V/VI。可使用如方案7中所述的偶联反应以及其它交叉偶联策略诸如Stille和Negishi交叉偶联(参见:Stanforth,S.P.,Tetrahedron.,54:263-303(1998))完成向I的转化。

方案9.可选择的苯胺IX的合成

方案9图示说明可自羰基官能团直接建立一些杂环得到苯胺IX,而不使用过渡金属催化的偶联反应。可经由方案7中所述的技术将市售XXI转化成醚XXII,类似地可将XXIII转化成XXIV。可通过以下方式将XXII转化成酰胺XXV:直接使用氨和氢氧化铵/甲醇,或者经由使用碱水溶液与极性有机共溶剂如四氢呋喃和醇共溶剂如甲醇完成的皂化,以及酰胺形成(述于方案5)。可通过以下方式将酰胺XXV转化成三唑:使用试剂诸如N,N-二甲基乙酰胺二甲基乙缩醛或N,N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛形成脒,接着在乙酸存在下暴露于肼。可选择地,可通过与三叠氮基氯硅烷(由四氯硅烷和叠氮化钠原位生成,参见:El-Ahl,A-A.S.et al.,Tetrahedron Lett.,38:1257-1260(1997))反应由XXV制备四唑XXVII。经由与原甲酸酯或原乙酸酯在热或酸催化条件下的缩合反应(常使用原甲酸酯/原乙酸酯作为溶剂)将酰肼XXVIII转化成噁二唑。可选择地,可通过以下方式将酰肼XXVIII的乙酰变体(aceto variant)转化成噻唑:暴露于磺化试剂诸如Lawesson试剂,然后在热条件下缩合,通常在极性非质子性溶剂诸如二噁烷中。可通过以下方式将酮XXIV转化成吡唑XXXI:与N,N-二甲基乙酰胺二甲基乙缩醛or N,N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(或相关试剂)缩合,接着与肼在乙酸存在下反应。在XXVI、XXVII和XXXI的情况下,杂环可进一步与亲电体诸如有机卤化物、环氧化物或活化的羰基物种(在碱性条件下使用无机碱诸如碳酸钾、叔胺诸如三乙胺,或强碱诸如氢化钠)或与乙烯基醚诸如乙氧基乙烯(在酸性条件下)反应。其它亲电体诸如甲硅烷基卤化物若作为潜在选择性钯催化N-芳基化也可成功。最后可经由使用与方案7中所述类似的条件的反应将硝基化合物转化成苯胺IX。该名单远非可从羰基部分及其衍生物(诸如氰化物)的常见官能团操作中得到的杂环的详尽收集,参见:Caron,S.,Practical Synthetic Organic Chemistry,609-647(2011)以及其中的参考文献。

方案10.硫代苯胺XXXVI的合成

方案10图示说明IX的硫代变体的合成。自市售酸XXXIII起始,所述酸可通过以下方式转化成酯:在质子酸存在下与甲醇加热,以及通过任意数量的可由酸合成酯的技术,诸如形成酰卤(述于方案5)接着与甲醇反应。替换氯化物得到XXXV可经由使用甲硫醇钠的亲核加成完成。转化成官能化的苯胺XXXVI遵循方案9中所述图示和所述相同的技术。另外,可使用方案6中所述的氧化条件将最终硫化物产物氧化成砜。

方案11.最终化合物XLII的合成

方案11图示说明最终化合物I的另一种形式。在该策略中使用来自方案4的技术将苯胺XXXVII(经由与方案7类似的方法还原硝基化合物XXII制备)加至二氯化物VIII中。可使用与方案1中所述相同的技术完成向XXXIX的转化。皂化甲酯(XXXIX)得到酸XL通常在含水条件下完成:采用强水溶性碱诸如氢氧化钾、氢氧化锂或氢氧化钠,使用四氢呋喃和醇共溶剂。使用方案9中所述的技术可将酸XL转化成各种杂环,或者将其与胺偶联生成酰胺XLII,其为方案5中所述的最终产物。

方案12.苯胺XLV(IX的变体)的合成

方案12图示说明另一种IX的变体,其中苯胺已经由碳-氮键取代有杂环。自市售XIV起始,可使用Ullmann缩合(对于最近的综述可参见:Mannier,F.et al.,Angew.Chem.Int.Ed.,48:6954-6971(2009))。该反应通常在铜盐(诸如氧化亚铜(I))、无机碱(诸如碳酸铯)和通常配体(尽管一些溶剂诸如DMF可发挥配体的作用)存在下进行。如方案7所述使用Williamson醚条件可将酚XLIII转化成醚XLIV。通过如方案7所述还原硝基完成向苯胺(XLV)的转化。

方案13.苯胺XLVI和XLIX(IX的变体)的合成

方案13描述了苯胺XLVI和XLIX的合成。可使用XXVIII/XV与乙炔基三甲基硅烷的偶联,接着使用温和碱(诸如碳酸钾在质子性溶剂诸如甲醇中)或氟化物源(诸如四丁基氟化铵或氟化钾)除去甲硅烷基,得到末端炔XLVI和XLVII。使用以下条件进行Sonogashira偶联:钯催化剂(诸如四三苯基膦钯)、铜催化剂诸如碘化亚铜(I),以及碱(通常为胺碱诸如三乙胺或而异丙基胺),使用碱作为溶剂或极性溶剂诸如二甲基甲酰胺;然而,已经完成大量工作用不同配体和添加剂甚至在没有催化剂存在下进行反应,参见:Chinchilla,R.,Chem.Rev.,107:874-923(2007);Chinchilla,R.,Chem.Soc.Rev.,40:5084-5121(2011)。如方案4所述可将苯胺XLVI与VIII偶联,然后如方案1所述转化成目标配体I或使用针对XLVIII所述的技术进一步详述(以便遵循)。使用Huisgen环加成(或"点击化学(Click chemistry)")可将XLVII转化成1,2,3-三唑。该反应在炔和叠氮化物之间使用铜催化剂(常见的为硫酸铜(II))、还原剂(诸如抗坏血酸钠)进行,该反应可在许多溶剂/共溶剂(包括水、叔丁醇、四氢呋喃和甲苯)中进行。已完成大量工作描述该环加成的种类和多用途性,对于综述可参见:Kolb,H.C.et al.,Angew.Chem.Int.Ed.,40:2004-2021(2001)和Meldal,M.et al.,Chem.Rev.,108:2952-3015(2008)。如果用可除去的基团诸如特戊酸甲酯进行Huisgen环加成,则可将其除去并如方案9所述将三唑烷基化。以其它方式可如方案7所述还原硝基且如方案4所述将XLIX向前进行与VIII反应。

方案14.LII的合成

方案14图示说明倒数第二个化合物LII(使用方案1中所述的偶联操作转化成目标配体)的合成。使用与腈氧化物(由N-羟基亚氨氯(N-hydroxyimidoyl chloride)与温和的非亲核性碱原位形成)的[3+2]环加成可将中间体L(使用方案13和方案4中所述的技术制备)转化成异噁唑LII。反应可在非质子性溶剂(诸如二氯甲烷)中热运行,但最近的工作一描述催化剂在反应中的效用,参见:Grecian,S.et al.,Angew.Chem.Int.Ed.,47:8285-8287(2008)。

方案15.LVIII的合成

方案15图示说明目标化合物LVII和LVIII的合成。遵循方案7中概述的策略可将市售LIII转化成苯胺LV。遵循方案4中所述的技术向VIII中加入LV,得到LVI,其可遵循方案1中所述的策略与III偶联。含氰基的LVII向噁二唑LVIII的转化可通过如下完成:经由羟基胺向氰化物的亲核加成,在碱性条件下通常在极性质子性溶剂诸如水或醇中进行,接着进行酰化和与乙酸酐的缩合,通过与乙酸酐在极性非质子性溶剂中加热完成。

实施例

式I化合物和用于制备式I化合物的中间体,可使用以下实施例和相关操作中所示的方法制备。这些实施例中使用的方法和条件,以及这些实施例中制备的实际化合物,并不意在是限制性的,而是意在说明如何制备式I化合物。这些实施例中使用的起始材料和试剂,当不通过本申请所述的方法制备时,一般是市售的,或者化学文献中报道的,或者可通过使用化学文献中描述的方法制备。

在给定的实施例中,短语“干燥并浓缩”通常是指经硫酸钠或硫酸镁干燥在有机溶剂中的溶液,接着过滤并从滤液中除去溶剂(通常在减压下并在适于所制备材料的稳定性的温度)。如下进行柱色谱:用预填装的硅胶筒,使用Isco中压色谱装置(Teledyne Corporation),用所指示的溶剂或溶剂混合物洗脱。使用ChemDraw Ultra,version 9.0.5(CambridgeSoft)确定化学名称。使用下列缩写:

NaHCO3(aq)=饱和碳酸氢钠水溶液

盐水=饱和氯化钠水溶液

DCM=二氯甲烷

DIEA=N,N-二异丙基乙基胺

DMAP=4-(N,N-二甲基氨基)吡啶

DMF=N,N-二甲基甲酰胺

DMSO=二甲基亚砜

EDC=N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐

EtOAc=乙酸乙酯

HOAT=1-羟基-7-氮杂苯并三唑

HOBT=1-羟基苯并三唑水合物

rt=环境室温(通常为约20-25℃)

TEA=三乙胺

TFA=三氟乙酸

THF=四氢呋喃

制备

下文所列的制备是用于合成未从商业来源获得并用于制备本发明式I化合物的试剂。除非另有指明,否则表和方案中的所有手性化合物均为外消旋的。

采用使用YMC S5 ODS柱(20x100,20x250,或30x250毫米("mm"))的Shimadzu 8A液相色谱进行反相制备型高效液相色谱("HPLC")。用甲醇("MeOH")/水混合物在0.1%三氟乙酸("TFA")存在下进行梯度洗脱。

表征实施例所采用的分析型HPLC方法

使用下列方法在Shimadzu LC10AS液相色谱上进行分析型HPLC:

方法A(除非另有指明,否则用于所有情况):

0至100%溶剂B的线性梯度历时4分钟("min"),其中在100%B保持1分钟("min")。

在220纳米("nm")紫外("UV")可见

柱:YMC S5 ODS Ballistic 4.6x50mm

流速:4毫升("mL")/min

溶剂A:0.2%磷酸,90%水,10%甲醇

溶剂B:0.2%磷酸,90%甲醇,10%水

方法B:

柱:Luna C18(2),4.6x50mmx5μm

流动相:(A)10:90甲醇:水;(B)90:10甲醇:水

缓冲液:0.1%TFA

梯度范围:0-100%B

梯度时间:4min

流速:4mL/min

分析时间:5min

检测:

检测器1:UV在220nm

检测器2:MS(ESI+)

检测器3:ELSD

方法C:

柱:Waters SunFire C18,4.6x50mmx5μm

流动相:(A)10:90甲醇:水;(B)90:10甲醇:水

缓冲液:0.1%TFA

梯度范围:0-100%B

梯度时间:4min

流速:4mL/min

分析时间:5min

检测:

检测器1:UV在220nm

检测器2:MS(ESI+)

检测器3:ELSD

方法D:

柱:Luna C18(2),4.6x50mmx5μm

流动相:(A)10:90甲醇:水;(B)90:10甲醇:水

缓冲液:0.1%TFA

梯度范围:0-100%B

梯度时间:4min

流速:4mL/min

分析时间:5min

检测:

检测器1:UV在220nm

检测器2:MS(ESI+)

检测器3:ELSD

方法E:

柱:Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x50mm,1.7μm颗粒

流动相:(A)5:95乙腈:水;(B)95:5乙腈:水

缓冲液:10mM乙酸铵

梯度范围:0-100%B

梯度时间:3min

流速:1.11mL/min

分析时间:4min

检测:

检测器1:UV在220nm

检测器2:MS(ESI+)

检测器3:ELSD

方法F:

柱:Waters SunFire C18(4.6x150mm),3.5μm

流动相:(A)5:95乙腈:水;(B)95:5乙腈:水

缓冲液:0.1%TFA

梯度范围:0-100%B

梯度时间:12min

流速:4mL/min

分析时间:15min

检测:

检测器1:UV在220nm

检测器2:UV在254nm

方法G:

柱:Waters Acquity UPLC BEH C18,2.1x50mm,1.7μm颗粒

流动相:(A)5:95乙腈:水;(B)95:5乙腈:水

缓冲液:0.05%TFA

梯度范围:0-100%B

梯度时间:3min

流速:1.11mL/min

分析时间:4min

检测:

检测器1:UV在220nm

检测器2:MS(ESI+)

检测器3:ELSD

方法H:

柱:(LCMS)Ascentis Express C18,4.6x50mm,2.7μm颗粒

流动相:(A)5:95乙腈:水;(B)95:5乙腈:水

缓冲液:10mM乙酸铵

梯度范围:0-100%B

梯度时间:4min

流速:4mL/min

分析时间:5min

检测:

检测器1:UV在220nm

检测器2:MS(ESI+)

方法I:

柱:Waters XBridge C18,4.6x50mm,5μm颗粒

流动相:(A)5:95乙腈:水;(B)95:5乙腈:水

缓冲液:0.05%TFA

梯度范围:0-100%B

梯度时间:4min

流速:4mL/min

分析时间:5min

检测:

检测器1:UV在220nm

检测器2:MS(ESI+)

方法J:

柱:(LCMS)BEH C18,2.1x50mm,1.7μm颗粒

流动相:(A)水;(B)乙腈

缓冲液:0.05%TFA

梯度范围:2%-98%B(0至1min)98%B(至1.5min)98%-2%B(至1.6min)

梯度时间:1.6min

流速:0.8mL/min

分析时间:2.2min

检测:

检测器1:UV在254nm

检测器2:MS(ESI+)

方法K:

柱:(LCMS)BEH C18,3.0x50mm,1.7μm颗粒

流动相:(A)5:95乙腈:水;(B)95:5乙腈:水

缓冲液:10mM乙酸铵

梯度范围:0-100%B

梯度时间:1.8min

流速:1.2mL/min

分析时间:4min

检测:

检测器1:UV在220nm

检测器2:MS(ESI+)

方法L:

柱:(LCMS)SunFire C18 2.1x30mm,2.5μm颗粒

流动相:(A)10:90甲醇:水;(B)90:10甲醇:水

缓冲液:0.1%TFA

梯度范围:0-100%B

梯度时间:2min

流速:1mL/min

分析时间:3min

检测:

检测器1:UV在220nm

检测器2:MS(ESI+)

方法M:

柱:(LCMS)SunFire C18 2.1x30mm,3.5μm颗粒

流动相:(A)10:90甲醇:水;(B)90:10甲醇:水

缓冲液:0.1%TFA

梯度范围:0-100%B

梯度时间:4min

流速:1mL/min

分析时间:5min

检测:

检测器1:UV在220nm

检测器2:MS(ESI+)

方法N:

柱:YMC ProC18ODS,4.6x50mm

流动相:(A)10:90MeOH:水;(B)90:10MeOH:水

缓冲液:0.2%H3PO4

梯度范围:0-100%B

梯度时间:4min

流速:4mL/min

分析时间:4min

检测:220nm

制备1

步骤1

向含有4,6-二氯烟酸(60g,313mmol)的圆底烧瓶中加入氯仿(500mL)和一滴N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。将反应混合物冷却至0℃,随后历时5分钟加入草酰氯(82mL,938mmol)。将反应混合物在0℃保持1小时,然后减压浓缩。向反应容器中装入氯仿并再浓缩,再重复一次该操作,得到棕色油状物。将油状物溶于氯仿(500mL)中并冷却至0℃。以渐进方式向冰冷的反应容器中加入甲胺(2M于THF中,390mL,780mmol)。在0℃保持搅拌1小时,然后经由加入水淬灭反应混合物。用氯仿萃取产物并用水和盐水(饱和氯化钠水溶液)洗涤合并的有机层,然后经硫酸钠干燥,过滤并浓缩。将粗产物(52g)与另一批次粗物质(27g)合并,然后使用以40-50%乙酸乙酯/石油醚洗脱的快速色谱纯化,得到73g产物中间体1(Int1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6);δ8.60(bm,1H),δ8.47(s,1H),δ7.89(s,1H),δ2.78(d,J=4.6Hz,3H)。LC保留时间1.25min[A]。质谱("MS")(E+)m/z:205(MH+)。

步骤2

先后向中间体1(1.8g,8.78mmol)在四氢呋喃(THF,68mL)中的溶液中加入2-(甲基硫基)苯胺(1.83g,13.2mmol)和双(三甲基甲硅烷基)氨基钠溶液(NaHMDS,1M于THF中,61mL,61mmol)。将反应混合物在室温搅拌30分钟,然后用水淬灭。用乙酸乙酯萃取粗产物,经硫酸钠干燥,浓缩并通过自动色谱(0-100%EtOAc/己烷)纯化,得到中间体2(2.16g,80%产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),8.77(d,J=4.4Hz,1H),8.51(s,1H),7.44-7.22(m,4H),6.51(s,1H),2.80(d,J=4.6Hz,3H),2.43(s,3H)。LC保留时间0.86min[J]。MS(E+)m/z:308(MH+)。

步骤3

将中间体2(900mg,2.92mmol)悬浮于乙酸(AcOH,9.7mL)中,随后加入过氧化氢(30%水溶液,6.0mL,58.5mmol)和钨酸钠二水合物(964mg,2.92mmol)。30分钟后反应完成,然后用水和乙酸乙酯稀释。将两层分开并用乙酸乙酯萃取水层一次。将合并的有机相用饱和亚硫酸氢钠洗涤一次并用水洗涤一次。然后将合并的有机层以硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩并用自动硅胶色谱(0-100%EtOAc/己烷)纯化,得到砜产物中间体3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),8.79(d,J=4.0Hz,1H),8.57(s,1H),7.96(dd,J=7.9,1.5Hz,1H),7.79-7.73(m,1H),7.70-7.66(m,1H),7.46(t,J=7.6Hz,1H),6.97(s,1H),3.17(s,3H),2.79(d,J=4.4Hz,3H)。LC保留时间0.72min[J]。MS(E+)m/z:339(MH+)。

实施例1

将环丙烷甲酰胺(22.5mg,0.26mmol)与中间体3(30mg,0.088mmol)组合。先后向容器中加入二甲基乙酰胺(DMA,0.6mL)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2dba3,8.1mg,0.0088mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(Xantphos,10mg,0.018mmol)和碳酸铯(115mg,0.35mmol)。然后将容器抽真空并用氮气回填三次,然后加热至145℃且保持1小时。将反应混合物冷却至室温,然后用乙酸乙酯(EtOAc,约250mL)稀释。将该溶液用水洗涤两次,经硫酸钠(Na2SO4)干燥,浓缩并使用制备型HPLC纯化。收集作为TFA盐的产物,然后溶于约15mL水中,向其中加入浓缩的(c.)100mL饱和碳酸氢钠(NaHCO3,水溶液)并搅拌10分钟。使用二氯甲烷(DCM)从浆液中萃取(x3)产物,经硫酸钠干燥,过滤,浓缩并收集,得到16.3mg 1(48%产率)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.42(s,1H),8.12(dd,J=7.9,1.5Hz,1H),7.80(td,J=7.7,1.5Hz,1H),7.67(d,J=7.4Hz,1H),7.53(t,J=7.7Hz,1H),7.30(s,1H),3.16(s,3H),2.96(s,3H),1.84-1.70(m,1H),1.10-1.05(m,2H),0.98(dq,J=7.4,4.0Hz,2H)。LC保留时间1.11min[E]。MS(E+)m/z:389(MH+)。

以与实施例1的产物类似方式制备下列实施例

制备2

在室温先后向中间体1(250mg,1.22mmol)的经搅拌溶液中加入3,4-二氟-2-甲氧基苯胺(194mg,1.22mmol)和NaHMDS(1M in THF,8.5mL,8.5mmol)。反应进行2小时,然后加入1N HCl水溶液以调节pH至约5。滤出浆液并用水洗涤,收集作为纯产物的残余固体。将滤液用DCM萃取,用水洗涤3次(3x),经硫酸钠干燥,过滤,浓缩并通过自动色谱(0%-100%EtOAc/己烷)纯化。将纯级分与过滤中收集的固体合并,得到中间体4(400mg,100%产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ10.05(br.s.,1H),8.34(s,1H),7.02(ddd,J=9.0,5.2,2.1Hz,1H),6.97-6.87(m,1H),6.78(s,1H),6.38(br.s.,1H),4.00(d,J=2.2Hz,3H),3.04(d,J=4.8Hz,3H)。LC保留时间0.90min[J]。MS(E+)m/z:328(MH+)。

实施例23

将2-甲氧基乙酰胺(37mg,0.42mmol)与中间体4(100mg,0.305mmol)合并。先后向容器中加入二甲基乙酰胺(1mL)和Pd2dba3(27mg,0.030mmol)、Xantphos(35mg,0.061mmol)和碳酸铯(297mg,0.92mmol)。然后将容器抽真空并用氮气回填三次,然后加热至145℃且保持2小时。将粗产物用DMF稀释并过滤,然后使用制备型HPLC纯化,得到28mg(24%产率)23。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.52(s,1H),9.93(s,1H),8.63(m,1H),8.51(s,1H),7.81(s,1H),7.23(m,2H),4.01(s,2H),3.89(s,3H),2.79(d,J=4.8Hz,3H)。LC保留时间6.14min[F]。MS(E+)m/z:381(MH+)。

以与实施例23的产物类似的方式制备下列实施例

制备3

将2-氰基乙酰胺(11mg,0.13mmol)与中间体3(30mg,0.088mmol)合并。先后向容器中加入二甲基乙酰胺(DMA,0.6mL)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2dba3,8.1mg,0.0088mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(Xantphos,10mg,0.018mmol)和碳酸铯(58mg,0.18mmol)。然后将容器抽真空并用氮气回填三次,然后加热至145℃且保持1小时。未形成期望产物;然而通过LCMS观察到中间体5,随后如下收集:使反应混合物冷却至室温,将粗溶液吸收在硅胶上并通过自动色谱(0-100%MeOH/DCM)纯化。LC保留时间0.55min[J]。MS(E+)m/z:321(MH+)。

实施例27

将中间体5(40mg,0.125mmol)与苯异氰酸酯(isocyanatobenzene)(15mg,0.125mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中合并且将反应混合物搅拌过夜。用DMF稀释粗溶液,过滤并使用制备型HPLC纯化,得到27(15.8mg,27%)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.46(s,1H),8.04(d,J=7.9Hz,1H),7.71(d,J=3.5Hz,2H),7.47(d,J=7.4Hz,2H),7.44-7.40(m,1H),7.35(dt,J=8.1,4.1Hz,1H),7.34-7.26(m,3H),7.19(br.s.,1H),7.07(t,J=7.4Hz,1H),3.14(s,3H),2.95(s,3H)。LC保留时间1.39min[E]。MS(E+)m/z:440(MH+)。

制备4

步骤1

在室温,先后向2-羟基-3-硝基苯甲酸甲酯(10g,50.7mmol)在DMF(100mL)中的溶液中加入碳酸钾(14.02g,101mmol)和碘甲烷(6.34mL,101mmol)并将所得橙色混合物加热至60℃且保持1h。此时LCMS分析显示完全且干净地转化成与期望产物一致的主要产物(实测MH+212)。冷却至室温并先后加入碎冰(约100mL)和水至总体积为约400mL,使得漂亮的黄色固体从溶液中结晶。搅拌几分钟得到漂亮的浆液,然后经真空过滤收集固体并用额外的水(约100mL)淋洗所得初始为黄色的固体直至将所有黄色淋洗至滤液中,在漏斗中得到近乎白色的固体。然后将漏斗中部分风干的固体转移至圆底烧瓶中并进一步真空干燥过夜,得到10.5g(98%)黄色固体,其为2-羟基-3-硝基苯甲酸甲酯。LCMS MH+212。

步骤2

在75℃,将2-羟基-3-硝基苯甲酸甲酯(2.85g,13.50mmol)溶于热甲醇(10mL)中得到澄清溶液并滴加1N氢氧化钠水溶液(28.3mL,28.3mmol)。将混合物回流加热15min,此时HPLC分析指示完全转化成极性更大的产物。将反应混合物冷却至室温,浓缩除去甲醇并将所得水溶液在冰浴中冷却且通过滴加1M HCl(40mL)直至pH为约1使其变酸。将所得析出的固体经由过滤收集,用水淋洗,且在滤器上干燥,得到产物2-甲氧基-3-硝基苯甲酸(2.48g,12.58mmol,93%产率),其为白色固体。HPLC(方法N)RT=1.57min。

步骤3

将4,6-二氯-N-甲基烟酰胺(中间体1,150mg,0.732mmol)和3-氨基-2-甲氧基苯甲酸(159mg,0.951mmol)溶于DMA(2mL)中并在室温历时约5min经由注射器滴加双(三甲基甲硅烷基)氨基钠(1.0M于THF中)(2.93mL,2.93mmol),引起轻微放热。使反应混合物在室温搅拌30min,然后加入碎冰淬灭反应混合物。搅拌约30min后,用1N HCl水溶液调节混合物的pH至约1并经真空过滤收集已析出的所得固体,用水淋洗并在滤器上干燥,得到制备4,3-((2-氯-5-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基)氨基)-2-甲氧基苯甲酸(156mg,0.465mmol,63.5%产率),其为黄褐色固体。HPLC RT(方法N)=2.57min。LCMS MH+336.1。

制备5

在室温,先后向4,6-二氯烟酸(3g,15.63mmol)在二氯甲烷(90mL)中的浆液中加入草酰氯(1.778mL,20.31mmol)和3滴DMF,引起一些冒泡(effervescence)。将混合物在室温搅拌约1.5h,此时混合物变成近乎澄清的溶液。取出小的等分试样,浓缩至干并溶于MeOH中且通过LCMS分析,由此指示酸起始物质的完全转化,得到甲酯,其指示已经发生酸向所需酰氯的完全转化。浓缩反应混合物并经残余物溶于二氯甲烷(约20mL)中并再浓缩且重复该过程以确保除去过量草酰氯。将所得粗酰氯溶于二氯甲烷(约100mL)中并加入甲基-d3-氯化铵(methyl-d3-ammonium chloride)(1.433g,20.31mmol)且将混合物在冰浴中冷却,此时经注射器滴加许尼希碱(Hunig's base)(8.19mL,46.9mmol)。加入完成后,移开冰浴并将所得混合物温热至室温且搅拌。在室温搅拌过夜后,LCMS分析指示完全且干净地转换成所需CD3-酰胺产物(实测MH+208)。用二氯甲烷(约100mL)稀释混合物并先后用1N HCl水溶液(3x100mL)和盐水洗涤,然后以无水硫酸钠干燥,倾析并真空浓缩。得到2.7g灰白色固体,通过使用EtOAc/己烷作为洗脱剂的制备型硅胶快速色谱纯化。手机含有主要uv活性产物的级分并真空浓缩,得到2.42g(74%)白色固体,其为纯产物(制备5)。LCMS MH+209.2。

制备6

步骤1

将2-甲氧基-3-硝基苯甲酸甲酯(from步骤1in制备4,11g,52.1mmol)溶于氨在甲醇中的冷溶液(7N,250mL)中并加入浓缩氢氧化铵水溶液(100mL)。塞住烧瓶并将所得溶液在室温轻柔地搅拌过夜(约17h)。LCMS分析指示完全转化成与所需酰胺产物一致的极性更大的产物(实测MH+197)。使用微温水浴在旋转蒸发仪(rotovap)上浓缩反应混合物,得到产物的含水浆液。用额外的水(约300mL)稀释该浆液并短暂超声,然后经真空过滤收集固体并用额外的水(约100mL)淋洗所得黄色固体。将固体在漏斗中风干,然后真空干燥,得到7.12g黄色固体,其为纯产物2-甲氧基-3-硝基苯甲酰胺。通过以下方式获得第二产量产物:用EtOAc(3x100mL)萃取滤液,接着用盐水洗涤萃取物,经无水硫酸钠干燥,倾析并真空浓缩,得到1.67g额外的产物,其为黄色固体(86%总合并产率)。LCMS实测MH+197。

步骤2

将来自步骤1的2-甲氧基-3-硝基苯甲酰胺(7.1g,36.2mmol)在DMF-DMA(48.5mL,362mmol)中浆化并将混合物加热至95℃,得到澄清的淡黄色溶液。在该温度加热约30min后,LCMS指示起始物质近乎完全转化,得到极性稍小的组分(表观MH+为225的主要组分)其与作为DMF-DMA反应的期望中间体的甲酰化产物一致。将反应混合物冷却并在旋转蒸发仪上浓缩且将所得黄色油状物与DCE(40mL份)共沸蒸馏2次(2x),确保完全除去任何残余的DMF-DMA。将由此获得的粗油状物立即溶于35mL乙醇中并立即用于下一步骤中。

在单独烧瓶中制备乙醇(150mL)和AcOH(35mL)的混合物并将所得溶液在冰浴中冷却。冷却后,滴加水合肼(17.59mL,362mmol)。此时,历时约15min经由套管将含上文制备的底物的粗DMF-DMA的溶液滴加转移至先前制备的搅拌均匀的冰冷的含肼混合物中。加入后,溶液中形成淡黄色固体。加入完成后,将所得混浊黄色混合物温热至室温并搅拌约4h。此时LCMS分析主要显示作为主要产物的所需三唑(实测MH+221)。此时在旋转蒸发仪上浓缩反应混合物除去一些乙醇,用额外的水稀释并过滤收集固体。用另一份水洗涤该固体,在漏斗中风干,然后真空干燥,得到5.5g(69%)淡黄色固体,其为所需产物。LCMS实测MH+221。

步骤3

将来自步骤2的3-(2-甲氧基-3-硝基苯基)-4H-1,2,4-三唑(2.23g,10.13mmol)溶于DMF(20mL)中并加入碳酸钾(4.20g,30.4mmol)。将所得混合物在冰浴中冷却后,历时2min经由注射器慢慢滴加碘甲烷(0.855mL,13.67mmol)在DMF(5mL)中的溶液。加入完成后,移开冰浴并将反应混合物温热至室温。在室温搅拌约4h后,LCMS分析指示完全且干净地分别转化成约2:1比率的区域异构体混合物。将反应混合物在冰浴中冷却并用水(约50mL)稀释且用EtOAc(3x40mL)萃取该溶液,先后用10%LiCl水溶液(2x20mL)、水(20mL)和盐水洗涤合并的萃取物,然后浓缩得到2.17g(91%)黄色油状物,其为粗产物,静置后固化成黄色固体。LCMS分析指示作为区域异构体的混合物(约2:1)的相对纯的产物。LCMS实测MH+235。将该粗物质与来自先前相似反应的另一批额外的粗产物(约0.45g)合并并通过SFC色谱纯化该物质以解析所述异构体(条件:柱=Chiral IC 3x25cm,5μm;柱温=35℃;流速=200mL/min;流动相=CO2/MeOH=80/20;注射程序=堆积的(2.3min/周期),2.5ml/注射;采样器浓度(mg/mL):60mg/mL;检测器波长=220nm),得到1.87g(65%)主要异构体,其为淡黄色固体。LCMS MH+235。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.54(s,1H),8.15(dd,J=7.9,1.8Hz,1H),7.89(dd,J=8.1,1.8Hz,1H),7.42(t,J=7.9Hz,1H),4.07(s,3H),3.87(s,3H)。

步骤4

将来自步骤3的3-(2-甲氧基-3-硝基苯基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑(1.87g,7.98mmol)溶于乙醇(50mL)中并将溶液用氮气吹扫几分钟,然后加入5%Pd-C(0.850g,0.399mmol),接着用来自气球的氢气吹扫几分钟,然后将混合物在氢气气球下在室温搅拌1.5h。此时LCMS分析指示起始物质完全且干净地转化成与期望苯胺产物一致的单一的极性更大的产物(实测MH+205)。然后用氮气吹扫混合物使催化剂失活并经用额外量的EtOH洗涤的垫过滤混合物且将含产物的所得澄清无色滤液真空浓缩,得到无色油状物。将该物质与两份无水甲苯(每份约25mL)共沸,得到灰白色固体,将其进一步真空干燥,得到1.5g(92%)自由流动的白色固体,其为纯产物。LCMS MH+为205。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.54-8.41(m,1H),7.12(dd,J=7.6,1.7Hz,1H),7.02-6.96(m,1H),6.94-6.89(m,1H),4.03(s,3H),3.69(s,3H)。

制备7

步骤1

在室温,向2-羟基-3-硝基苯甲酸甲酯(10g,50.7mmol)在DMF(100mL)中溶液中加入碳酸钾(14.02g,101mmol),接着加入碘甲烷(6.34mL,101mmol)并将所得橙色混合物加热至60℃且保持1h。此时LCMS分析显示完全且干净地转化成与期望产物一致的主要产物(实测MH+212)。冷却至室温并加入碎冰(约100mL),接着加入水至总体积为约400mL,使得从溶液中结晶出漂亮的黄色固体。搅拌几分钟得到漂亮的浆液,然后经由真空过滤收集固体并用额外的水(约100mL)淋洗所得初始为黄色的固体直至将所有黄色淋洗至滤液中,在漏斗中得到近乎白色的固体。在漏斗中部分风干固体,然后转移至圆底烧瓶中并进一步真空干燥,得到10.5g(98%)黄色固体,其为2-羟基-3-硝基苯甲酸甲酯。LCMS MH+212。

制备8

步骤1

将1-(2-羟基-3-硝基苯基)乙酮(1.00g,5.52mmol)和碳酸钾(3.05g,22.08mmol)在DMF(20mL)中的浆液在室温搅拌30min,然后滴加碘甲烷(1.338mL,16.56mmol)并将所得混合物在室温搅拌过夜。LCMS指示仍然存在以下未反应的起始物质,由此加入额外的碘甲烷(1.338mL,16.56mmol)并历时2天将混合物温热至50℃。通过加入水淬灭反应混合物,得到溶液,接着用1N HCl调节pH至约7。用EtOAc(80mLx3)萃取所得溶液并用盐水洗涤合并的有机萃取物,经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩,得到产物,1-(2-甲氧基-3-硝基苯基)乙酮(1.05g,5.38mmol,97%产率),其为黄褐色油状物。HPLC(方法N)RT=1.86min。

步骤2

将1-(2-甲氧基-3-硝基苯基)乙酮(450mg,2.306mmol)在DMF-DMA(8.148g,68.4mmol)中的浆液加热至80℃,得到澄清溶液。在该温度搅拌约30min后,将反应混合物冷却,用100mL EtOAc稀释,先后用水(3x)和盐水洗涤,以Na2SO4干燥,过滤并浓缩,得到黄褐色油状物,其为粗中间体(432mg)。向该物质中加入乙醇(4.0mL),得到均质的黄褐色溶液,接着在冰浴中冷却。此时,伴随均匀搅拌经由注射器慢慢滴加水合肼(0.217mL,6.92mmol)。加入完成后,将反应混合物温热至室温,然后加热至80℃且保持1h,然后冷却至室温并在室温搅拌过夜。浓缩所得混合物除去乙醇,用100mL EtOAc稀释,用水洗涤3次,然后用盐水洗涤,经硫酸钠干燥,过滤并浓缩,得到黄褐色半固体,其为粗吡唑中间体。向该中间体中加入4mL丙酮和碳酸钾(956mg,6.92mmol),并将所得混合物在室温搅拌10min,然后加入碘甲烷(0.577mL,9.22mmol)。在室温搅拌过夜后,浓缩反应混合物并在EtOAc与水之间分配。将两层分开并用水(3x)洗涤有机部分,经硫酸钠干燥,过滤并真空浓缩,得到黄褐色油状物,其为粗产物。通过使用己烷/EtOAc混合物作为洗脱剂的快速硅胶色谱纯化该物质。将含有主要uv活性组分的级分合并且真空浓缩,得到155mg(29%总产率)黄褐色油状物,其被确定为作为区域异构体的混合物(约4-5:1)的所需产物。HPLC(方法N)RT=2.50min(未分离的区域异构体)。LCMS(m+1)=235。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.07(dd,J=7.9,1.5Hz,1H),7.76(dd,J=8.0,1.7Hz,1H),7.72(d,J=2.4Hz,1H),7.36(t,J=7.9Hz,1H),6.80(d,J=2.2Hz,1H),4.01(s,3H),3.77(s,3H)。

步骤3

向来自步骤2的产物(0.15g,0.643mmol)在EtOH(10mL)中的澄清溶液中加入Pd/C(10%于碳上)(0.021g,0.019mmol)。将烧瓶抽真空并用来自气球的氢气填充3h。移开氢气球并用氮气冲洗反应混合物,加入50mL EtOH,并将反应混合物过滤且浓缩滤液,得到2-甲氧基-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)苯胺(120mg,0.590mmol,92%产率),其为制备8,含有约20%次要区域异构体。HPLC(方法N)RT=0.96min.(主要的)和1.12min(次要的)。LCMS(m+1)=204。

制备9

步骤1

在室温,以一份向1H-吡唑(10g,147mmol)在水(150mL)中的浆液中加入NBS(26.1g,147mmol)(注意:放热),混合物变成乳白色且在室温搅拌过夜。然后用EtOAc(2x100mL)萃取反应混合物。用Na2S2O3水溶液和盐水洗涤合并的有机萃取物,经无水硫酸钠干燥,并减压浓缩,得到所需产物,4-溴-1H-吡唑(21.5g,146mmol,100%产率),其初始为油状物,经静置后固化。HPLC(方法N)RT=0.87min。

步骤2

向来自步骤1的4-溴-1H-吡唑(21.6g,147mmol)在二氯甲烷(400mL)中的溶液中加入HCl的溶液(4N于二噁烷中)(2.204mL,8.82mmol)和乙烯基乙醚(ethoxyethene)(12.72g,176mmol)。在室温搅拌该混合物30min后,用NaHCO3水溶液(30mL)淬灭反应混合物,在室温搅拌1h,并将获得的两层分开。将有机层用水洗涤,以无水硫酸钠干燥,并减压浓缩,得到28g粗产物。通过使用己烷/乙酸乙酯混合物作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化该物质。将含有主要uv活性产物的级分合并且真空浓缩,得到13.2g(41%)澄清油状物,其为所需产物。HPLC(方法N)RT=2.34min。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.61(s,1H),7.47(s,1H),5.48(q,J=5.9Hz,1H),3.53-3.41(m,1H),3.35(dq,J=9.5,7.0Hz,1H),1.68-1.62(m,3H),1.21-1.12(m,3H)。

步骤3

在室温,向烘箱干燥的小瓶中加入异丙基氯化镁-氯化锂络合物的溶(1.0M于THF中)(6.32ml,8.22mmol),并滴加来自步骤2的4-溴-1-(1-乙氧基乙基)-1H-吡唑(1.00g,4.56mmol)且将所得混合物在室温搅拌过夜。然后将所得溶液冷却至-20℃并经由注射器滴加2-甲氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.731g,10.95mmol)。加入完成后,将反应混合物慢慢加热至室温并在室温搅拌2h。此时通过加入饱和NH4Cl水溶液(15mL)淬灭反应混合物,其引起白色析出物形成。加入水(20mL)并用己烷(140mLx2)萃取混合物。将合并的萃取物用饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤,然后经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩,得到1.20g(99%),其为作为无色油状物的所需产物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.91(s,1H),7.79(s,1H),5.55(q,J=5.9Hz,1H),3.51-3.39(m,1H),3.37-3.25(m,1H),1.67(d,J=5.9Hz,3H),1.37-1.30(m,12H),1.15(t,J=7.0Hz,3H)。

步骤4

在室温,向2-氨基-6-溴苯酚(4.00g,21.27mmol)在甲醇(2.152mL,53.2mmol)和THF(10mL)加入三苯基膦(11.16g,42.5mmol)。搅拌几分钟后,历时约5min(放热)经由注射器滴加DIAD(12.41mL,63.8mmol)。加入完成后,将由于放热反应乙腈温热的反应混合物在室温搅拌约1h。然后将所得混合物浓缩除去挥发物并通过使用己烷/乙酸乙酯作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化所得残余物。将含有主要uv活性产物的级分合并且真空浓缩,得到2.35g(55%)暗棕色油状物,其为所需产物。HPLC(方法N)RT=1.33min。LCMS MH+202/204(实测溴化物同位素模式)。

步骤5

向装有来自步骤4的3-溴-2-甲氧基苯胺(0.30g,1.485mmol)和来自步骤3的1-(1-乙氧基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑(0.435g,1.633mmol)在二噁烷(2ml)中的溶液的反应小瓶中加入磷酸钾水溶液(2.0M)(1.485ml,2.97mmol)。通过使氩气鼓泡经过混合物约5min将所得混合物除去氧气。然后加入PdCl2(dppf)(0.033g,0.045mmol)并将混合物在110℃加热,然后冷却至室温。将所得混合物用EtOAc(100mL)稀释,用水、盐水洗涤,经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩,得到黑色油状物,其为粗产物混合物。通过使用己烷/乙酸乙酯混合物作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化该物质。将含有主要uv活性组分的级分合并,然后真空浓缩,得到所需产物,制备9(355mg,1.358mmol,91%产率),其为油状物,经静置后固化。HPLC(方法N)RT=1.58min。LCMS(m+1)=262.1。

制备10

向装有3-溴-2-甲氧基苯胺(来自制备9的步骤4,1.12g,5.54mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吡唑(1.499g,7.21mmol)在二噁烷(6mL)中的溶液的反应小瓶中加入磷酸钾水溶液(2.0M)(5.54ml,11.09mmol)。通过使氩气鼓泡经过混合物约5min将所得混合物除去氧气。然后加入PdCl2(dppf)(0.122g,0.166mmol)并将混合物在110℃加热2h。将反应混合物冷却,用EtOAc(200mL)稀释,用水、盐水洗涤,经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩,得到黄褐色油状物,其为粗产物混合物。通过使用己烷/乙酸乙酯混合物作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化该物质。收集含有所需产物的级分,合并,且真空浓缩,得到0.87g(77%)所需产物(制备10),其为油状物,经静置后固化。HPLC(方法N)=0.89min。LCMS MH+204.1。

制备11

步骤1

在室温,将叠氮化钠(1.193g,18.35mmol)悬浮于乙腈(10.0mL)中并加入四氯化硅(0.772mL,6.73mmol),使得反应混合物变成乳白色,此时,加入作为固体的来自制备6的步骤1的2-甲氧基-3-硝基苯甲酰胺(1.20g,6.12mmol)并将混合物在75℃加热4h。将反应混合物冷却至室温,加入水(50mL)得到浆液,将该浆液超声处理并经由真空过滤收集已经形成的所得固体,用水淋洗,并在滤器上干燥,得到产物,5-(2-甲氧基-3-硝基苯基)-2H-四唑(1.20g,5.43mmol,89%产率),其为黄色固体。HPLC(方法N)RT=1.57min。LCMS MH+222.1。

步骤2

向来自步骤1的5-(2-甲氧基-3-硝基苯基)-2H-四唑(1.20g,5.43mmol)在DMF(6.0mL)中的溶液中加入于1mL DMF中的碘甲烷(0.679mL,10.85mmol)并将所得混合物在室温搅拌3h。将反应混合物在冰浴中冷却并用水(约100mL)稀释且用EtOAc(3x100mL)萃取该溶液,先后用10%LiCl(2x40mL)、水(40mL)和盐水洗涤合并的萃取物,并经无水硫酸钠干燥,然后浓缩,得到1.30g黄色油状物,其为粗产物,通过HPLC分析为区域异构体的混合物(约2:1)。为了解析异构体,通过使用以下条件的SFC色谱纯化该物质-柱:Cell 45x25cm,5μm;柱温40℃;流速:200mL/min;流动相:CO2/MEOH=80/20;注射程序:堆积的(2.5min/周期),3.5ml/注射;采样器浓度(mg/mL):30mg/mL;检测器波长:220nm。得到0.735g(58%)黄褐色固体,将其归属为主要异构体5-(2-甲氧基-3-硝基苯基)-2-甲基-2H-四唑,以及0.334g(26%)黄褐色固体,将其归属为次要异构体5-(2-甲氧基-3-硝基苯基)-1-甲基-1H-四唑。

主要异构体:HPLC(方法N)RT=2.14min。LCMS MH+236.1。

次要异构体:HPLC(方法N)RT=1.57min。LCMS MH+236.1。

步骤3

将来自步骤2的5-(2-甲氧基-3-硝基苯基)-2-甲基-2H-四唑from(0.73g,3.10mmol)在EtOH(20mL)中的溶液用氮气吹扫几分钟,然后加入5%Pd-C(0.165g,0.155mmol),接着用来自气球的氢气吹扫几分钟,然后将混合物在氢气气球下在室温搅拌1.5h。此时LCMS分析指示起始物质完全且干净地转化成与期望苯胺产物一致的单一的极性更大的产物(实测MH+206)。然后用氮气吹扫混合物使催化剂失活并使混合物过滤通过用额外量EtOH洗涤的微孔45μ滤器且将含有产物的所得澄清无水滤液真空浓缩,得到无色油状物。将该物质与两份无水甲苯(每份约25mL)共沸,然后进一步真空干燥,初始得到无色油状物,其最终固化得到作为产物的白色固体(制备11),2-甲氧基-3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)苯胺(630mg,3.07mmol,99%产率)。HPLC(方法N)RT=0.74min。LCMS(m+1)=206.1。

制备12

步骤1

向2-溴-6-硝基苯酚(5g,22.94mmol)在DMF(18ml)中的溶液中加入碳酸钾(9.51g,68.8mmol)并将所得混合物搅拌15min,然后加入碘甲烷(2.87ml,45.9mmol)。将所得混合物在室温搅拌过夜。HPLC和LCMS指示完全转化成产物。加入冷水(75mL),搅拌/超声处理,经由过滤收集固体。然后将该物质溶于EtOAc(150mL)中。将该溶液用1x10%LiCl、1x盐水洗涤。经硫酸钠干燥,然后过滤并浓缩。装载至120g硅胶管柱中,然后通过用0-50%EtOAc/己烷洗脱的快速色谱纯化。将含产物的级分浓缩,得到淡黄色固体,其为产物1-溴-2-甲氧基-3-硝基苯(4.997g,20.46mmol,89%产率)。LCMS给出非常弱的MH+。

步骤2

将来自步骤1的1-溴-2-甲氧基-3-硝基苯(3g,11.64mmol)、金属锌(7.61g,116mmol)和氯化铵(6.22g,116mmol)在EtOH(50mL)和水(7.14mL)中的混合物在室温搅拌过夜。然后用二氯甲烷(200mL)稀释反应混合物,并过滤。用水(50mL)洗涤滤液,干燥(硫酸钠),并浓缩。将该物质再溶于二氯甲烷中,装载至80g硅胶柱上以通过用0-100%EtOAc/己烷洗脱的快速色谱纯化。得到3-溴-2-甲氧基苯胺(2.11g,9.92mmol,85%产率),其为无色油状物。

步骤3

将来自步骤2的3-溴-2-甲氧基苯胺(1.94g,9.60mmol)、4,4,4′,4′,5,5,5′,5′-八甲基-2,2′-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(3.66g,14.40mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2络合物(0.392g,0.480mmol)和乙酸钾(2.83g,28.8mmol)在二噁烷(32mL)中溶液在烧瓶中加热至回流(约100℃)过夜,然后冷却至室温,经真空浓缩。通过使用以0-50%乙酸乙酯/己烷洗脱的120g硅胶柱(固体载量)的快速色谱纯化该粗产物。收集适当级分(接近25%EtOAc/己烷洗脱)并真空浓缩,得到2-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯胺(1.47g,5.78mmol,60.2%产率),其为结晶性灰白色固体。LCMS MH+250.1。

步骤4

通过使氮气鼓泡经过混合物5分钟将4-溴-2-甲基噻唑(128mg,0.719mmol)、来自步骤3的2-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯胺(197mg,0.791mmol)和1,1′-双(二叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(14.06mg,0.022mmol)在二噁烷(4mL)中的经搅拌混合物脱气。快速加入2M磷酸氢二钾水溶液(1.078mL,2.157mmol)并将反应混合物在100℃加热1小时。LC-MS显示完全转化成所需产物质量。将反应混合物冷却至室温,然后用EtOAc(75mL)稀释。然后将该溶液经硫酸钠干燥,过滤,浓缩并通过用0-100%EtOAc/己烷洗脱的快速色谱纯化。得到2-甲氧基-3-(2-甲基噻唑-4-基)苯胺(制备12,122mg,0.543mmol,75%产率),其为黄色油状物。LCMS MH+221.1。

实施例28

步骤1

将制备4(300mg,0.894mmol)、肼基甲酸叔丁酯(142mg,1.072mmol)和二异丙基乙基胺(0.187mL,1.072mmol)溶于DMF(3mL)并搅拌几分钟,然后加入BOP试剂(435mg,0.983mmol)。在室温搅拌约30min后,加入冷水使得固体析出。将浆液短暂超声处理并金钩过滤收集固体且在滤器上干燥,得到产物,2-(3-((2-氯-5-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基)氨基)-2-甲氧基苯甲酰基)肼基甲酸叔丁酯(356mg,0.791mmol,89%产率)。HPLC(方法N)RT=2.81min.LCMS(m+1)=450/452。

步骤2

向来自步骤1的产物(356mg,0.791mmol)在DCM(2mL)中的浆液中加入TFA(0.610mL,7.91mmol),得到澄清溶液,接着在室温搅拌1h。然后浓缩所得混合物除去DCM和TFA,并加入DCM(10mL)且将混合物再次浓缩至干,接着再重复该操作一次。用乙醚(30mLx2)研磨所得淡黄色油状物,得到近乎白色的固体,其为假设的最终产物6-氯-4-((3-(肼基羰基)-2-甲氧基苯基)氨基)-N-甲基烟酰胺的TFA盐(356mg,0.768mmol,97%产率)。HPLC(方法N)RT=1.81min。LCMS(m+1)=350。

步骤3

将来自步骤2的产物(356mg,0.768mmol)在1,1,1-三甲氧基乙烷(1844mg,15.35mmol)中溶液在90℃加热4h,然后冷却下来并浓缩除去过量1,1,1-三甲氧基乙烷。在将残余物在冰浴中冷却后,加入饱和碳酸氢钠水溶液(4mL)并将混合物超声处理得到浆液且经由真空过滤收集固体,用水淋洗,在滤器上干燥,得到产物,其为黄褐色固体(186mg,0.498mmol,64.8%产率)。HPLC(方法N)RT=2.81min.LCMS(m+1)=375。

步骤4

将来自步骤3的产物(15mg,0.040mmol)、环己基甲酰胺(6.83mg,0.080mmol)、Xantphos(4.64mg,8.03μmol)、4A粉状分子筛(20mg)和碳酸铯(26.1mg,0.080mmol)在二噁烷(0.5mL)中的混合物用氮气吹扫5min,然后加入Pd2(dba)3(7.35mg,8.03μmol)并将反应混合物置于预加热的105℃加热块中。在该温度搅拌4h后,将反应混合物冷却至室温,用DMF稀释,过滤并通过用以下条件的反相制备型LCMS纯化:柱:Waters XBridge C18,19x200mm,5-μm颗粒;流动相A:含10-mM乙酸铵的5:95乙腈:水;流动相B:含10-mM乙酸铵的95:5乙腈:水;梯度:0-100%B历经20分钟,然后在100%B保持5分钟;流速:20mL/min。将含有所需产物的级分合并且经由离心蒸发干燥。产物(实施例28)的产量为6.9mg(41%)。HPLC(方法E)RT=1.17min。HPLC(方法G)RT=0.91min。LCMS实测MH+=423.2。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.81(s,1H),10.77(s,1H),8.66(d,J=4.9Hz,1H),8.54(s,1H),8.05(s,1H),7.66(d,J=7.9Hz,1H),7.59(d,J=7.3Hz,1H),7.34(t,J=7.9Hz,1H),3.76(s,3H),2.79(d,J=4.3Hz,3H),2.60(s,3H),2.07-1.85(m,1H),0.78(d,J=6.1Hz,4H)。

实施例29

步骤1

在室温,将制备4(1.09g,3.25mmol)、许尼希碱(1.701mL,9.74mmol)和氯化铵(0.347g,6.49mmol)在DMF(4mL)中混合几分钟,然后向所得浆液中加入BOP(1.867g,4.22mmol)。在室温搅拌浆液1h,然后向反应混合物中加入碎冰并将所得悬浮液短暂超声处理,然后经由真空过滤收集析出的固体并在漏斗中风干,得到产物,4-((3-氨甲酰基-2-甲氧基苯基)氨基)-6-氯-N-甲基烟酰胺(1.07g,3.20mmol,98%产率),其为浅黄褐色固体。HPLC(方法N)RT=2.24min。LCMS(m+1)=335。

步骤2

将来自步骤1的产物(300mg,0.896mmol)在DMF-DMA(2.400mL,17.93mmol)中的浆液加热至110℃,得到澄清溶液。在该温度加热3h后,将反应混合物冷却并浓缩除去DMF-DMA且将所得半固体残余物溶于乙醇(0.7mL)和乙酸(3.50mL)中,得到澄清溶液,将其立即在盐水/冰浴中冷却至-10℃,伴随均匀搅拌经由注射器向其中慢慢滴加水合肼(0.281mL,8.96mmol)。加入完成后,将所得浆液温热至室温并搅拌过夜。浓缩该混合物除去大部分乙醇和乙酸并用水稀释所得含水浆液,经由真空过滤收集固体,用额外的水淋洗,并在滤器上干燥,得到产物,6-氯-4-((2-甲氧基-3-(4H-1,2,4-三唑-3-基)苯基)氨基)-N-甲基烟酰胺(280mg,0.780mmol,87%产率)。HPLC(方法N)RT=2.51min。LCMS(m+1)=359/361。

步骤3

向反应小瓶中加入来自步骤2的产物(20mg,0.056mmol)、环丙基甲酰胺(4.74mg,0.056mmol)和BrettPhos(3.59mg,6.69μmol)并用氮气吹扫该内容物,然后加入DMA(0.10mL)和二噁烷(0.20mL)。将所得浆液再用氮气吹扫1分钟,然后相继加入Pd2(dba)3(5.10mg,5.57μmol)和LiHMDS(1M in THF)(0.139mL,0.139mmol)并在氮气下盖上反应小瓶且置于预加热的110℃加热块中,将混合物在该温度搅拌1.5h。冷却后,用淬灭反应混合物,浓缩除去挥发物,并通过用以下条件的反相制备型LCMS纯化:柱:Waters XBridge C18,19x200mm,5-μm颗粒;流动相A:含有0.1%三氟乙酸的5:95乙腈:水;流动相B:含有0.1%三氟乙酸的95:5乙腈:水;梯度:0-100%B历经20分钟,然后在100%B保持5分钟;流速:20mL/min。将含有所需产物的级分合并且经由离心蒸发干燥。产物(实施例29)的产量为15.4mg(49%)。HPLC(方法E)RT=0.98min。HPLC(方法G)RT=0.76min。LCMS实测MH+=408.2。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.11(br.s.,1H),10.82(br.s.,1H),8.79(br.s.,1H),8.49(s,1H),7.75(d,J=6.7Hz,1H),7.54(d,J=7.9Hz,1H),7.38-7.27(m,1H),3.69(s,3H),2.81(d,J=4.3Hz,3H),1.91(br.s.,1H),0.90-0.78(m,4H)。

实施例30

步骤1

在室温,向来自实施例SW50的步骤2的产物(80mg,0.223mmol)和碳酸钾(61.6mg,0.446mmol)在DMF(0.5mL)中的浆液中加入0.3mL碘甲烷的溶液(240mg于2mL乙腈中)。将所得混合物在室温搅拌30min,然后用冷水淬灭。将所得浆液短暂超声处理并真空过滤,得到固体,将其用水淋洗并干燥,得到39mg(47%)产物,其为灰白色固体。HPLC(方法N)RT=2.61min。LCMS(m+1)=373。

步骤2

使用先前述于实施例28的步骤4中的条件自步骤1的产物制备实施例30,得到呈黄褐色固体形式的实施例30(8%)。HPLC(方法N)RT=2.05min。LCMS MH+422.2。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.54(s,1H),8.38(s,1H),7.83(dd,J=7.9,1.5Hz,1H),7.59(dd,J=7.9,1.5Hz,1H),7.38(t,J=7.9Hz,1H),6.94(br.s.,1H),4.06(d,J=0.4Hz,3H),3.75(s,3H),2.98(s,3H),1.87-1.76(m,1H),1.15-1.07(m,2H),1.06-0.97(m,2H)。

实施例31

步骤1

向制备5(150mg,0.721mmol)和制备6(155mg,0.757mmol)在THF(2.50ml)中的澄清溶液中滴加1M双(三甲基甲硅烷基)氨基锂在THF中的溶液(2.52ml,2.52mmol),得到暗琥珀色溶液。在室温搅拌约40min后,将反应混合物在冰浴中冷却并通过加入1N HCl水溶液(2.5mL)淬灭。然后将混合物浓缩除去大部分THF,用15mL水稀释,短暂超声处理,然后搅拌约1h,得到细分散的浆液。经由真空过滤收集固体,用水淋洗,并干燥,得到256mg(94%)所需产物,其为灰白色固体。HPLC(方法N)RT=2.65min。LCMS(m+1)=376.3。

步骤2

将来自步骤1的产物(30mg,0.080mmol)、环丙基甲酰胺(13.59mg,0.160mmol)、Xantphos(9.24mg,0.016mmol)和碳酸铯(78mg,0.239mmol)在二噁烷(0.8mL)中的混合物用氮气吹扫5min,然后加入Pd2(dba)3(7.31mg,7.98μmol)并将反应混合物置于预加热的130℃加热块中且保持1h。然后将反应混合物冷却并用DMSO稀释且通过用以下条件的反相制备型LCMS纯化:柱:Waters XBridge C18,19x200mm,5-μm颗粒;流动相A:含有10-mM乙酸铵的5:95乙腈:水;流动相B:含有10-mM乙酸铵的95:5乙腈:水;梯度:0-100%B历经20分钟,然后在100%B保持0分钟;流速:20mL/min。将含有所需产物的级分合并且经由离心蒸发干燥。产物的产量为26.3mg(69%)。HPLC(方法E)RT=1.09min。HPLC(方法G)RT=0.89min。LCMS实测MH+=425.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.71(br.s.,1H),10.61(br.s.,1H),8.58(br.s.,1H),8.52(br.s.,1H),8.48(br.s.,1H),8.03(br.s.,1H),7.62-7.42(m,2H),7.22(t,J=7.4Hz,1H),3.93(br.s.,3H),3.69(br.s.,3H),2.01-1.88(m,1H),0.85-0.69(m,J=4.4Hz,4H)。

实施例32和实施例33

步骤1

将4,6-二氯-N-甲基烟酰胺(中间体1,110mg,0.536mmol)和制备8(其为区域异构体的混合物)(120mg,0.590mmol)溶于DMA(1mL)中并历时约5min在室温经由注射器滴加LiHMDS(1M于THF中)(1.341mL,1.341mmol),引起轻微放热形成澄清的暗琥珀色溶液。使反应混合物在室温搅拌30min,然后加入额外的LHMDS(1M in THF)(0.6mL,0.6mmol)。在室温再搅拌30分钟后,将所得混合物在冰浴中冷却并加入水形成澄清溶液。真空浓缩该溶液除去挥发物并通过滴加1N HCl将所得含水部分调至pH为约4,导致固体析出。将所得浆液用水稀释至体积为约40mL,搅拌1h,经由真空过滤收集固体并干燥,得到所需产物,6-氯-4-((2-甲氧基-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)苯基)氨基)-N-甲基烟酰胺(155mg,0.417mmol,78%产率),其为黄褐色固体。HPLC分析(方法N)指示为约4-5:1区域异构体的混合物(RT=3.04,主要的异构体,以及3.12min,次要的异构体)。LCMS MH+=372。

步骤2

将来自步骤1的区域异构体产物(25mg,0.067mmol)、环丙基甲酰胺(11.44mg,0.134mmol)、Xantphos(7.78mg,0.013mmol)和碳酸铯(43.8mg,0.134mmol)在二噁烷(0.5mL)中用氮气吹扫5min,然后加入Pd2(dba)3(12.31mg,0.013mmol)并将反应混合物置于预加热的110℃加热块中。在该温度搅拌1h后,将反应混合物冷却室温,用DMSO稀释,并经受通过用以下条件的反相制备型LCMS纯化:柱:Waters XBridge C18,19x200mm,5-μm颗粒;流动相A:含有10-mM乙酸铵的5:95乙腈:水;流动相B:含有10-mM乙酸铵的95:5乙腈:水;梯度:5-100%B历经20分钟,然后在100%B保持5分钟;流速:20mL/min。

将含有主要产物的级分合并且经由离心蒸发干燥,得到14.9mg(51%)实施例32。HPLC(方法E)RT=1.35min。HPLC(方法G)RT=1.12min。LCMS实测MH+=421.2。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),10.66(s,1H),8.61(d,J=4.9Hz,1H),8.50(s,1H),8.06(s,1H),7.76(d,J=1.8Hz,1H),7.65-7.55(m,1H),7.35(d,J=7.3Hz,1H),7.16(t,J=7.9Hz,1H),6.72(d,J=1.8Hz,1H),3.93-3.85(m,3H),3.58(s,3H),2.79(d,J=4.3Hz,3H),2.09-1.83(m,1H),0.87-0.67(m,4H)。

将含有次要产物的级分合并且经由离心蒸发干燥,得到5.3mg(17%)实施例33。HPLC(方法E)RT=1.35min。HPLC(方法G)RT=1.05min。LCMS实测MH+=421.2。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.78(s,1H),10.68(s,1H),8.62(d,J=4.3Hz,1H),8.51(s,1H),8.04(s,1H),7.57-7.46(m,2H),7.25(t,J=7.6Hz,1H),7.07(d,J=7.3Hz,1H),6.37(d,J=1.8Hz,1H),3.68(s,3H),3.36(br.s.,3H),2.78(d,J=4.3Hz,3H),1.98(quin,J=6.1Hz,1H),0.83-0.72(m,4H)。

实施例34和实施例35

使用针对制备实施例32和实施例33所述的操作并通过用制备实施例32和实施例33的步骤1中的制备5替换中间体1来制备实施例34和实施例35。得到3.9mg(11%)实施例33。HPLC(方法E)RT=1.30min。HPLC(方法G)RT=1.07min。LCMS实测MH+=424.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),10.64(s,1H),8.59(s,1H),8.49(s,1H),8.04(s,1H),7.76(d,J=1.8Hz,1H),7.59(d,J=6.1Hz,1H),7.35(d,J=7.3Hz,1H),7.16(t,J=7.9Hz,1H),6.72(d,J=2.4Hz,1H),3.90(s,3H),3.58(s,3H),2.02-1.91(m,1H),0.77(d,J=6.1Hz,4H)。

还得到10.8mg(30%)实施例35。HPLC(方法E)RT=1.35min。HPLC(方法G)RT=1.04min。LCMS实测MH+=424.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),10.64(s,1H),8.59(s,1H),8.50(s,1H),8.02(s,1H),7.55-7.48(m,2H),7.25(t,J=7.6Hz,1H),7.07(d,J=6.7Hz,1H),6.37(d,J=1.8Hz,1H),3.67(s,3H),3.35(s,3H),2.02-1.91(m,1H),0.82-0.73(m,4H)。

实施例36

步骤1

在室温,将3-(1-(1-乙氧基乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-甲氧基苯胺(制备9,500mg,1.913mmol)和4,6-二氯-N-d3-甲基烟酰胺(制备5,379mg,1.822mmol)溶于THF(10mL)中并将所得溶液在冰浴中冷却,历时1min经由注射器向其中滴加LiHMDS(1M于THF中,4.56mL)。此时,用几滴MeOH淬灭反应混合物并将反应混合物浓缩且通过使用己烷/乙酸乙酯溶剂混合物作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化所得固体。将含有所需产物的级分合并,浓缩,并真空干燥,得到720mg中等褐色固体,其为所需产物。HPLC(方法N)RT=2.65min。LCMS MH+433.3/435.3(实测的氯化物同位素模式)。

步骤2

使用步骤1的产物,使用与实施例31的步骤2中所述类似的操作剂型上述反应。以86%产率得到期望产物,其为淡黄色固体。LCMS MH+482.4。

步骤3

向步骤2的产物(335mg,0.696mmol)中加入EtOH(5mL),得到细浆液。在室温向该混合物中加入HCl(2.5M in EtOH)(2.78mL,6.96mmol),得到澄清黄色溶液。在室温搅拌总计约3后,LCMS分析显示完全且干净地转化成与所需产物一致的极性更大的产物。将所得浆液真空浓缩除去大部分EtOH,加入水(约10mL),接着伴随搅拌慢慢滴加饱和碳酸氢钠水溶液,直至获得pH为约7。将浆液搅拌过夜,然后经由真空过滤收集固体,用额外的水淋洗并在漏斗中风干,得到稍微潮湿的固体滤饼。将该湿固体转移至圆底烧瓶中并在MeOH浆化,浓缩并真空干燥,得到251mg(88%)灰白色固体,其为所需产物。HPLC(方法N)RT=2.23min。LCMS MH+410.4。

步骤4

在室温,向来自步骤3的产物(25mg,0.061mmol)和碳酸钾(25.3mg,0.183mmol)在DMF(0.3mL)中的混合物中加入2-溴-1,1-二氟乙烷(13.27mg,0.092mmol)并将混合物在室温搅拌过夜(约16h)。此时LCMS显示仅约30%转化,因此加入额外的碳酸钾(25.3mg,0.183mmol)和2-溴-1,1-二氟乙烷(13.27mg,0.092mmol)并再继续反应2h。此时LCMS指示大部分转化成产物(LCMS实测MH+474)。冷却,用DMSO稀释,过滤并使用以下列条件的反相制备型LCMS纯化:柱:Waters XBridge C18,19x200mm,5-μm颗粒;流动相A:含10-mM乙酸铵的5:95乙腈:水;流动相B:含10-mM乙酸铵的95:5乙腈:水;梯度:10-100%B历经15分钟,然后在100%B保持5分钟;流速:20mL/min。将含有主要所需产物的级分合并且经由离心蒸发干燥。产物(实施例36)的产量为13.9mg(48%)。HPLC(方法E)RT=1.52min。HPLC(方法G)RT=1.27min。LCMS实测MH+=474.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.75(br.s.,1H),10.65(s,1H),8.60(s,1H),8.49(s,1H),8.01(br.s.,1H),7.87(s,1H),7.60(d,J=7.9Hz,1H),7.38(d,J=7.3Hz,1H),7.19(t,J=7.9Hz,1H),6.79(d,J=1.8Hz,1H),6.55-6.26(m,1H),4.76-4.60(m,2H),3.58(s,3H),2.00-1.91(m,1H),0.77(d,J=6.1Hz,4H)。

实施例37和实施例38

使用来自实施例36的步骤3的产物,使用与实施例36的步骤4中所述类似的操作并用碘甲烷替换2-溴-1,1-二氟乙烷作为烷化试剂制备实施例37和实施例38。得到13.5mg(51%)实施例37和8.2mg(31%)实施例38。

实施例37:HPLC(方法E)RT=1.45min。HPLC(方法G)RT=1.20min。LCMS实测MH+=438.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.65-11.27(m,1H),11.08-10.78(m,1H),9.08-8.75(m,1H),8.63-8.23(m,1H),7.82(d,J=1.8Hz,1H),7.76(d,J=7.3Hz,1H),7.37(d,J=7.9Hz,1H),7.31-7.21(m,2H),6.72(d,J=2.4Hz,1H),4.19(q,J=7.3Hz,2H),3.60(br.s.,3H),1.92-1.80(m,1H),1.42(t,J=7.3Hz,3H),0.98-0.78(m,4H)。

实施例38:HPLC(方法E)RT=1.44min。HPLC(方法G)RT=1.13min。LCMS实测MH+=438.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.25(br.s.,1H),10.82(s,1H),8.79(s,1H),8.46(s,1H),7.58-7.45(m,3H),7.30(t,J=7.6Hz,1H),7.21-7.11(m,1H),6.35(s,1H),3.95(q,J=6.9Hz,2H),3.37(s,3H),1.91(d,J=4.3Hz,1H),1.25(t,J=7.3Hz,3H),0.96-0.76(m,4H)。

实施例39

使用来自实施例36的步骤3的产物,使用与实施例36的步骤4中所述类似的操作并用2-溴-1,1,1-三氟乙烷替换2-溴-1,1-二氟乙烷作为烷化试剂制备实施例39。得到5.2mg(17%)实施例39。HPLC(方法E)RT=1.58min。HPLC(方法G)RT=1.38min。LCMS实测MH+=492.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),10.67(s,1H),8.59(s,1H),8.51(s,1H),8.06(s,1H),7.94(d,J=1.8Hz,1H),7.57(dd,J=7.9,1.2Hz,1H),7.40(d,J=6.7Hz,1H),7.20(t,J=7.9Hz,1H),6.84(d,J=1.8Hz,1H),5.20(q,J=9.2Hz,2H),3.59(s,3H),2.03-1.90(m,1H),0.88-0.69(m,4H)。

实施例40

将来自实施例36的步骤4的产物(20mg,0.049mmol)和碳酸铯(47.7mg,0.147mmol)在DMF(0.2mL)中混合物并加入2,2-二甲基氧杂环丙烷(7.04mg,0.098mmol),接着在60℃加热所得混合物过夜(约16h)。将反应混合物冷却并直接经受通过用以下条件的反相制备型LCMS纯化:柱:Waters XBridge C18,19x200mm,5-μm颗粒;流动相A:含有10-mM乙酸铵的5:95乙腈:水;流动相B:含有10-mM乙酸铵的95:5乙腈:水;梯度:0-100%B历经19分钟,然后在100%B保持5分钟;流速:20mL/min。将含有所需产物的级分合并且经由离心蒸发干燥。产物(实施例40)的产量为13.3mg(56%)。HPLC(方法E)RT=1.32min。HPLC(方法G)RT=1.11min。LCMS实测MH+=482.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.72(br.s.,1H),10.63(br.s.,1H),8.58(s,1H),8.49(s,1H),8.04(s,1H),7.74(s,1H),7.56(d,J=7.9Hz,1H),7.35(d,J=7.9Hz,1H),7.17(t,J=7.6Hz,1H),6.71(s,1H),4.81(br.s.,1H),4.07(s,2H),3.57(s,3H),2.04-1.84(m,1H),1.09(s,6H),0.77(d,J=6.1Hz,4H)。

实施例41

将来自实施例36的步骤4的产物(20mg,0.049mmol)在乙腈(0.2mL)中混合物得到浆液并先后加入DBU(8.10μl,0.054mmol)和丙烯腈(2.236μl,0.059mmol),将所得浆液在室温搅拌约1h,然后温热至60℃过夜(约15h)。将反应混合物冷却并直接经受通过用以下条件的反相制备型LCMS纯化:柱:Waters XBridge C18,19x200mm,5-μm颗粒;流动相A:含有10-mM乙酸铵的5:95乙腈:水;流动相B:含有10-mM乙酸铵的95:5乙腈:水;梯度:0-100%B历经19分钟,然后在100%B保持5分钟;流速:20mL/min。将含有所需产物的级分合并且经由离心蒸发干燥。产物(实施例40)的产量为14.6mg(65%)。HPLC(方法E)RT=1.33min。HPLC(方法G)RT=1.11min。LCMS实测MH+=463.2。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),10.66(s,1H),8.59(s,1H),8.50(s,1H),8.04(s,1H),7.89(d,J=1.8Hz,1H),7.60(d,J=7.3Hz,1H),7.38(d,J=7.9Hz,1H),7.19(t,J=7.6Hz,1H),6.76(d,J=1.8Hz,1H),4.46(t,J=6.4Hz,2H),3.59(s,3H),3.11(t,J=6.4Hz,2H),2.05-1.92(m,1H),0.77(d,J=5.5Hz,4H)。

实施例42

步骤1

使用如制备实施例32和实施例33的步骤1中所述的操作实施步骤1,得到82%产率的所需产物,其为黄褐色固体。HPLC(方法N)RT=3.04min。LCMS MH+372。

步骤2

使用如制备实施例32和实施例33的步骤2中所述的操作实施步骤2,得到79%产率的所需产物(实施例42)。HPLC(方法E)RT=1.33min。HPLC(方法G)RT=1.08min。LCMS实测MH+=421.2。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),10.64(s,1H),8.61(d,J=4.3Hz,1H),8.50(s,1H),8.15(s,1H),8.04(s,1H),7.90(s,1H),7.34(d,J=6.7Hz,1H),7.26(d,J=7.3Hz,1H),7.18-7.10(m,1H),3.89(s,3H),3.58(s,3H),2.79(d,J=4.3Hz,3H),2.02-1.93(m,1H),0.77(d,J=6.1Hz,4H)。

实施例43

步骤1

使用如制备实施例32和实施例33的步骤1中所述的操作实施步骤1,得到81%产率的所需产物,其为淡黄色固体。LCMS MH+375。

步骤2

使用如制备实施例31的步骤2中所述的操作实施步骤2,得到67%产率的所需产物(实施例43)。HPLC(方法E)RT=1.35min。HPLC(方法G)RT=1.03min。LCMS实测MH+=424.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),10.02(s,1H),8.54(s,1H),8.50(s,1H),8.16(s,1H),8.13(br.s.,1H),7.91(s,1H),7.44(d,J=7.9Hz,1H),7.36(d,J=7.9Hz,1H),7.18(t,J=7.9Hz,1H),7.05(br.s.,1H),3.89(s,3H),3.60(s,3H),2.37(s,3H),2.27(s,3H)。

实施例44

步骤1

使用如制备实施例32和实施例33的步骤1中所述的操作实施步骤1,得到84%产率的所需产物,其为中等棕色固体。HPLC(方法N)RT=2.88min。LCMS MH+377.3。

步骤2

使用如制备实施例31的步骤2中所述的操作实施步骤2,得到69%产率的所需产物(实施例44)。HPLC(方法E)RT=1.31min。HPLC(方法G)RT=1.16min。LCMS实测MH+=426.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.78(br.s.,1H),10.72(br.s.,1H),8.61(br.s.,1H),8.52(s,1H),8.06(s,1H),7.60(d,J=7.4Hz,2H),7.32(t,J=7.7Hz,1H),4.45(s,3H),3.73(s,3H),1.97(br.s.,1H),0.77(d,J=5.0Hz,4H)。

实施例45

步骤1

使用如制备实施例32和实施例33的步骤1中所述的操作实施步骤1,得到81%产率的所需产物,其为灰白色固体。LCMS MH+392.1。

步骤2

使用如制备实施例31的步骤2中所述的操作实施步骤2,得到67%产率的所需产物(实施例45)。HPLC(方法E)RT=1.63min。HPLC(方法G)RT=1.27min。LCMS实测MH+=441.3。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.87(br.s.,1H),10.73(s,1H),8.66(br.s.,1H),8.51(s,1H),7.98(s,1H),7.92(br.s.,1H),7.83(d,J=7.4Hz,1H),7.41(d,J=7.1Hz,1H),7.25(t,J=7.9Hz,1H),3.64(s,3H),2.73(s,3H),1.99-1.92(m,1H),0.80(d,J=5.7Hz,4H)。

实施例46

利用来自制备12的操作(在步骤4中使用2-氯-5-氟嘧啶替代4-溴-2-甲基噻唑)和针对实施例45所概述的操作制备实施例46。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.78(br.s.,1H),10.66(s,1H),9.03(d,J=0.9Hz,1H),8.59(s,1H),8.52(s,1H),8.14-7.93(m,1H),7.56(dd,J=7.9,1.5Hz,1H),7.43(dd,J=7.7,1.3Hz,1H),7.33-7.20(m,1H),3.67(s,3H),2.08-1.88(m,1H),0.83-0.72(m,4H)。LC保留时间0.68min[J]。MS(E+)m/z:440(MH+)。

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