一种酶解玉米蛋白粉制备抗氧化肽的方法与流程

本发明属于食品学检验领域。具体涉及抗氧化肽制备的方法。

背景技术：

二氧化钛（化学式：TiO），白色固体或粉末状的两性氧化物，分子量：79.87，是一种白色无机颜料，具有无毒、最佳的不透明性、最佳白度和光亮度，被认为是目前世界上性能最好的一种白色颜料。钛白的粘附力强，不易起化学变化，永远是雪白的。广泛应用于涂料、塑料、造纸、印刷油墨、化纤、橡胶、化妆品等工业。它的熔点很高，也被用来制造耐火玻璃，釉料，珐琅、陶土、耐高温的实验器皿等。同时，二氧化钛有较好的紫外线掩蔽作用，常作为防晒剂掺入纺织纤维中，超细的二氧化钛粉末也被加入进防晒霜膏中制成防晒化妆品。二氧化钛可由金红石用酸分解提取，或由四氯化钛分解得到。二氧化钛性质稳定，大量用作油漆中的白色颜料，它具有良好的遮盖能力，和铅白相似，但不像铅白会变黑；它又具有锌白一样的持久性。二氧化钛还用作搪瓷的消光剂，可以产生一种很光亮的、硬而耐酸的搪瓷釉罩面。

食品应用 ：美国食品药品管理局规定二氧化钛可以作为所有的食品白色素，最大的使用量为1g/kg Sec. 73.575二氧化钛。色素添加剂二氧化钛可以安全用于一般着色食品中，服从下列规定：

（1） 二氧化钛的数量不超过食物重量的1%；

（2） 按照法令的401条所公布的特殊标准，不得使用的着色食品，除非有类似的标准允许添加色素；

（3） 对于着色食品，食用的色素添加剂二氧化钛可以含有适当的稀释剂，作为安全的色素添加剂，如下：二氧化硅，作为分散助剂，含量不超过2%。

产品适应：凉果类、果冻、油炸食品、可可制品、巧克力、巧克力制品、硬制糖果、抛光糖果、胶基糖果、膨化食品、糖果巧克力制品包衣、蛋黄酱、沙拉酱、果酱、固体饮料、魔芋凝胶食品等。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种灵敏度高，速度快，结果准确。

为实现上述步骤目的，本发明提供了一种酶解玉米蛋白粉制备抗氧化肽的方法

，其特征在于，步骤为，

制备玉米抗氧化肽的工艺流程

玉米蛋白粉→粉碎→80目过筛→3%(w/v)悬浮液→热变性处理(90℃,10min) →调PH→加酶水解→灭酶（沸水溶5min）→离心（12000r/min）→取上清→分析测定。

测定方法

水解度的测定 pH-stat法；清除O^2-·能力测定 NBT法；清除·OH能力测定 脱氧核糖法。

附图说明

图1为时间与玉米肽消除自由基活性的关系。

图2为温度与玉米肽消除自由基活性的关系。

具体实施方式

下面将详细说明本发明的具体实施方式：

1.仪器与试剂：

玉米蛋白粉 由禾丰牧业饲料公司提供，蛋白含量为65.84%；2709碱性蛋白酶 北京房山酶制剂总厂，经测定酶活为88433U/g；其它试剂 均为国产分析纯。

pHS-25 数显pH仪 上海精密仪器厂；

高速冷冻离心机 日本立牌SCR20BC型；

721型分光光度计 上海第三分析仪器厂；

光照箱（光照度达,4500LUX） 自制hh-6型数显恒温水浴锅。

2.方法与结果

时间对酶解反应的影响

时间影响酶的催化反应。随着反应时间的延长，水解度逐渐增大，玉米肽对自由基清除率也随之增大，当底物的水解度超过了玉米肽清除自由基能力的最适水解度时，玉米肽对自由基的清除率下降，如图1。从图1可以看出，在[E]/[S]=9%，pH10.0温度50℃的条件下，以水解4h效果最佳。

温度对酶解反应的影响

各种催化反应都有最适的温度。在E]/[S]=9%，pH10.0，选择不同的温度水解4h，见图2。由图2可知，温度为45℃时清除率

开始上升，50℃达到较高水平，55℃以后开始下降，故50℃为该酶解反应最适作用温度

制备玉米抗氧化肽最佳酶解工艺条件的确定

在上述单因素实验中，每组实验只考察一个因素，而酶解反应的最佳条件并不是简单的将所有这些单因素实验的最佳结果叠加在一起，还必须通过正交实验考察多因素的叠加效果，故借助以上的单因素实验结果设计正交实验，结果表1。

从表1可以看出，对水解度而言，极差值反映出影响水解度的各因素排列顺序为：A>B>D>C，最佳酶解条件为A₁B₃C₃D₃，即pH9.5，[E]/[S]=12%时间5h，

温度60℃，在此条件下水解度可达35.31%；对清除自由基能力而言，极差值反映出影响对自由基清除能力的各因素的排列顺序为：A>B>C>D，最佳酶解条件为A₁B₂C₂D₂，即 pH9.5，[E]/[S]=10%时间4h，温度55℃，在此条件下玉米肽对 O^2-·和·OH的清除率分别为52.17%和80.26%。本实验的目的是制备抗氧化肽，故最佳的酶解条件应为：A₁B₂C₂D₂。

对表1的数据作进一步分析可以看出，底物的水解度与玉米肽对自由基的清除能力间并不存在线性关系，只有在特定的水解度（DH=34.92%）时，清除能力最强，超过或者低于这个水解度，清除能力下降。此外，玉米肽清除O^2-·能力与清除·OH能力间存在着显著的相关性关系（r=0.9531,p<0.01），说明在本实验中水解度对二者的影响是一致的。

表1