本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类2，3-二氢-2，3′-联吲哚化合物的制备方法，以及该类化合物作为一类新的抗肿瘤药物先导化合物的应用。
背景技术：
在医学上癌症是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是机体在各种致瘤因素作用下，局部组织细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控导致异常增生与分化而形成的新生物。新生物一旦形成，不受正常机体生理调节，破坏正常组织与器官，这一点在恶性肿瘤尤其明显。恶性肿瘤生长速度快，易发生出血、坏死、溃疡等，并常有远处转移，造成人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功能受损等，最终造成患者死亡。
肝癌指发生于肝脏的恶性肿瘤，肝癌可发生于2个月婴儿至80岁老人，最多发病年龄为40～49岁。男性多发，男女之比为6∶1。根据最新统计，全世界每年新发肝癌患者约六十万，居恶性肿瘤第五位，中国是乙肝大国，我国的肝癌多在乙肝肝硬化的基础上发展而来，丙肝病人也在逐渐增加，乙肝后也会发展为肝癌，目前我国发病人数约占全球的半数以上，每年死于肝癌约11万人，占全世界肝癌死亡人数的45％。肝癌已经成为严重威胁我国人民健康和生命的一大杀手，其危险性不容小视。治疗肝癌除了利用手术外，需要结合药物治疗，最近几年问世的新的新的分子靶向药物索拉非尼可以延缓肿瘤进展，能一定程度上延长生存期，此次通过国内外的临床试验结果表明，索拉菲尼可以延长患者生存时间达2-3个月，延缓疾病发展时间为73％，但该药物价格较为昂贵，同时可能会伴有腹泻、皮疹、高血压、手足综合征等较严重不良反应，效果还需进一步评价，因此仍需大力开发抗肝癌药物。
联吲哚骨架化合物是广泛存在于具有重要生理活性的药物分子及天然产物中，其生物活性如抗菌消炎、抗过敏等，代表性化合物如Asperazine、GliocladinA、MollenineA、Gliocladin B。在联吲哚化合物中，2，3-二氢-2，3′-联吲哚衍生物具有其独特的生物活性价值。2014年，Cherkasov小组报道了2，3-二氢-2，3′-联吲哚在雄激素受体抑制剂方面的应用以及潜在的治疗前列腺癌细胞的能力(Chemistry&Biology 2014，21，1476)。但是目前对于2，3-二氢-2，3′-联吲哚衍生物的合成研究仍然较少，仅仅涉及了最简单的2，3-二氢-2，3′-联吲哚(R＝H)，对于吲哚上有取代基尤其是吸电子基如Cl、F未见文献报道，而在药物分子中引入Cl、F等基团通常会增大其药物活性。设计合成新型的2，3-二氢-2，3′-联吲哚衍生物对研究新型抗肿瘤药物，开发自主知识产权药物具有重要意义。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种新的2，3-二氢-2，3′-联吲哚化合物，其特征在于，该类化合物具有如下所示结构，
其中R为不同取代位置、不同个数的烷基、芳基、羟基、烷氧基、芳氧基、酯基、卤素、三氟甲基和氰基中的至少一种。
通式中优选：R为不同位置的单取代的C1-C5的烷基、烷氧基、酯基、卤素、三氟甲基或多取代的卤素。
本发明的另一个目的在于提供一种2，3-二氢-2，3′-联吲哚化合物的制备方法，其特征在于：通过如下步骤实现：
有机溶剂中，加入多取代的吲哚和路易斯酸发生反应，得到目标产物。
所用的有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、甲苯中的一种，路易斯酸为BiCl3，反应温度在15℃-30℃，时间为6-12小时。
第三，本发明的再一个目的在于提供所述化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明，需要解释的是，此处说描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
一方面，本发明的目的是提供一种新的2，3-二氢-2，3′-联吲哚化合物，其特征在于，该类化合物具有如下所示结构，
其中R为不同取代位置、不同个数的烷基、芳基、羟基、烷氧基、芳氧基、酯基、卤素、三氟甲基和氰基中的至少一种。
本发明中，烷基优选为C1-C5的烷基，烷氧基优选为C1-C5的烷氧基，芳氧基优选为C6-C10的芳氧基，酯基优选为C1-C5的酯基。
本发明所述的2，3-二氢-2，3′-联吲哚化合物进一步优选为卤代化合物和双卤代化合物如下所示，其中R1、R2为不同取代位置的氟、氯、溴、碘。
另一方面，本方法提供了一种方便的合成2，3-二氢-2，3′-联吲哚化合物的方法。包括：
1将取代的吲哚和三氯化铋在二氯甲烷或氯仿中或甲苯搅拌，反应得到2，3-二氢-2，3′-联吲哚化合物。
2本发明方法中，步骤1除了使用三氯化铋外，使用三氯化铝、四氯化锡也可得到产物，但收率偏低。
3本发明方法中，步骤1反应条件包括，温度15-30℃，时间为6-12小时；所得产物经柱层析或者重结晶等提纯得到纯产品；重结晶所用溶剂为丙酮、乙醇、甲醇、乙酸乙酯中的一种或其中两种的混合物。
4本发明方法可应用于克级以上规模制备。
再一方面，本发明提供了如上述2，3-二氢-2，3′-联吲哚化合物在体外抗肿瘤活性评价测试结果，对于A549肺癌细胞，SMMC7721肝癌，MGC803胃癌，MDAMB231乳腺癌具有明显抑制作用，其中化合物1体外抗肿瘤活性明显优于5-氟脲嘧啶，可作为进一步开发的候选或者先导化合物，应用于制备抗肿瘤药物。
方法举例如下：
制备如下化合物：
化合物1(5，5′-二氯-2，3-二氢-2，3′-联吲哚)
5-氯吲哚(2g，13mmol)、三氯化铋(4.1g，13mmol)和50mL二氯甲烷于100mL烧瓶中室温下搅拌反应10小时，随后减压蒸出大部分二氯甲烷，加入50mL乙酸乙酯，依次采用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩、柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝1∶4)得到淡黄色固体1.6g，总收率80％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.13(dd，J＝15.6，8.8Hz，1H)，3.41(dd，J＝15.6，9.2Hz，1H)，5.19(t，J＝8.8Hz，1H)，6.56(d，J＝8.4Hz，1H)，7.01(dd，J＝8.4，2.4Hz，1H)，7.08-7.16(m，3H)，7.27(d，J＝8.4Hz，1H)，7.56(d，J＝2.0Hz，1H)，8.1(s，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ37.7，56.8，110.0，112.5，118.9，119.1，122.7，122.9，123.5，125.0，125.6，126.9，127.4， 130.7，135.2，149.5
化合物2(6，6′-二氟-2，3-二氢-2，3′-联吲哚)
合成方法同化合物1，黄色泡沫状固体，产率25％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.13(dd，J＝15.2，8.0Hz，1H)，3.41(dd，J＝15.6，9.2Hz，1H)，5.25(t，J＝8.4Hz，1H)，6.34(dd，J＝9.6，2.0Hz，1H)，6.38-6.43(m，1H)，6.82-6.87(m，1H)，6.99-7.06(m，2H)，7.13(d，J＝2.4Hz，1H)，7.45(dd，J＝8.4，5.2Hz，1H)，8.0(s，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ37.0，57.3，96.8，97.9，104.6，108.8，119.4，120.4，120.5，121.6，122.3，124.0，125.0，125.1，136.9，152.4，161.4，162.2，164.6.HRMS for C16H13F2N2+(M++H)：calcd.271.1047，found 271.1042
化合物3(4，4′-二氰基-2，3-二氢-2，3′-联吲哚)
合成方法同化合物1，黄色液体，产率38％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.10(dd，J＝16.0，7.6Hz，1H)，3.67(dd，J＝16.0，9.2Hz，1H)，5.56(t，J＝8.0Hz，1H)，6.62(d，J＝0.8Hz，1H)，6.85(d，J＝7.6Hz，1H)，6.90(d，J＝7.2Hz，1H)，7.14(t，J＝7.6Hz，1H)，7.27(d，J＝7.6Hz，1H)，7.54-7.56(m，2H)，7.75(d，J＝7.2Hz，1H)，11.6(s，1H).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ38.1，54.5，100.3，107.5，112.0，117.2，117.3，117.9，119.3，119.5，121.2，124.6，125.6，125.8，128.7，131.9，137.0，152.3
化合物4(4，4′-二(甲酸甲酯基)-2，3-二氢-2，3′-联吲哚)
合成方法同化合物1，黄色液体，产率40％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.45(dd，J＝17.2，7.2Hz，1H)，3.77(dd，J＝17.6，8.8Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.97(s，3H)，5.53(t，J＝8.0Hz，1H)，6.79(d，J＝7.2Hz，1H)，7.10(t，J＝7.6Hz，1H)，7.18(t，J＝7.6Hz，1H)，7.28(d，J＝2.8Hz，1H)，7.35(dd，J＝8.0，1.2Hz，1H)，7.47(dd，J＝7.6，1.2Hz，1H)，7.72(dd，J＝7.6，0.8Hz，1H)，8.62(s，1H). 13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ38.4，51.8，52.3，56.4，113.1，116.0，119.7，119.8，121.2，123.5， 123.6，124.0，124.3，126.7，127.5，131.9，138.0，152.1，167.9，169.3
化合物5(5，5′-二甲氧基-2，3-二氢-2，3′-联吲哚)
合成方法同化合物1，黄色液体，产率70％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ2.95(dd，J＝15.6，8.0Hz，1H)，3.35(dd，J＝15.6，8.8Hz，1H)，3.65(s，3H)，3.65(s，3H)，5.04(t，J＝8.8Hz，1H)，5.48(s，1H)，6.47-6.57(m，2H)，6.69-6.75(m，2H)，6.91(s，1H)，7.20-7.24(m，2H)，10.7(s，1H).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ37.6，55.2，55.5，56.2，101.2，108.5，111.1，111.2，112.0，112.1，118.2，122.7，125.9，129.9，131.9，146.1，152.0，152.8
化合物6(4，4′-二甲氧基-2，3-二氢-2，3′-联吲哚)
合成方法同化合物1，黄色固体，产率90％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.09(dd，J＝16.0，7.6Hz，1H)，3.56(dd，J＝16.0，8.8Hz，1H)，4.42(s，1H)，5.69(t，J＝8.4Hz，1H)，6.49(d，J＝7.6Hz，1H)，6.69(d，J＝8.0Hz，1H)，6.95(t，J＝8.0Hz，1H)，7.05-7.10(m，3H)，7.14(dd，J＝7.6，1.2Hz，1H)，8.34(s，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ37.2，56.6，107.3，110.3，118.7，119.1，120.7，122.3，122.9，123.4，125.6，127.0，129.0，130.8，138.2，152.0
化合物7(5，5′-二甲氧基-2，3-二氢-2，3′-联吲哚)
合成方法同化合物1，黄色固体，产率85％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.13(dd，J＝15.6，8.8Hz，1H)，3.41(dd，J＝15.6，8.8Hz，1H)，5.18(t，J＝8.8Hz，1H)，6.52(d，J＝8.0Hz，1H)，7.13-7.17(m，2H)，7.21-7.29(m，3H)，7.22(d，J＝1.6Hz，1H)，8.1(s，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ37.7，56.8，110.4，110.6，112.9，113.1，118.7，122.2，122.5，125.4，127.6，127.8，130.3，131.2，135.5，150.0
测试例
选取上述得到的化合物1、化合物2、化合物6、化合物7进行如下活性测定
实验材料：
1 人癌细胞株：均购自中科院上海细胞库。
2 受试药物：用DMSO溶解后，配置成10000微克每毫升最初浓度，备用。
3 0.9％生理盐水：批号201521112，规格250mL：2.25g，郑州永和制药有限公司产品。
4 5-氟尿嘧啶注射液(5-Fu)，批号140107，规格10mL：0.25g/支，上海旭东海普药业有限公司产品。
实验方法
细胞常规接种于完全培养基中，经37℃，5％的CO2饱和湿度培养、扩增。细胞用0.25％胰蛋白酶消化后，加培养液稀释成1×105个/mL瘤细胞悬液(胎盼蓝染色，活细胞数均＞95％)，供试验用。于96孔无菌培养板上设阴性对照孔和阳性对照孔、供试品不同浓度孔，浓度设定为64、32、16、8、4、2、1、0.5微克每毫升，同时每个浓度设3个复孔。将制备好的细胞悬液接种于96孔无菌培养板，培养24h后加入不同浓度的化合物。阴性对照孔内加入等量的培养液，置入培养箱中培养。分别于72h后取出，每孔加入MTT 20μL，继续培养4h，取出后离心，吸弃上清。每孔加入DMSO150μL，震荡使紫蓝色甲瓒结晶完全溶解。用酶标仪测定各孔的OD值，通过SPSS计算其IC50。
实验结果
上述化合物对四种人类肿瘤细胞的抗肿瘤活性评价数据
实验结果表明：这几种化合物表现出优良的抗肿瘤活性，尤其是对SMMC7721肝癌细胞，化合物1表现出了优异的活性，同时表现出了广谱抗肿瘤活性，对前三种肿瘤细胞的活性均优于5-氟脲嘧啶，可作为进一步开发的候选或者先导化合物，应用于制备抗癌药物。