本公开文本公开了取代的噁唑衍生物，所述衍生物选择性地调整、调节和/或抑制由某些天然和/或突变的蛋白激酶介导的信号转导，所述蛋白激酶与多种人和动物的疾病(如细胞增殖病症、代谢病症、自身免疫病症、变应性病症(allergic disorders)和退行性病症)有关。尤其是，这些化合物中的数种为强效的选择性脾酪氨酸激酶(Syk)抑制剂。
背景技术：
蛋白激酶是受体型或非受体型蛋白，将ATP的末端磷酸根转移到蛋白的氨基酸残基上(如酪氨酸残基、苏氨酸残基、丝氨酸残基)，由此使信号转导通路活化或失活。已知这些蛋白参与许多在被破坏的情况下导致病症(如异常的细胞增殖和迁移以及炎症)的细胞机制。
迄今为止，已知的蛋白激酶超过了500种。所包括在内的有众所周知的Abl、Akt1、Akt2、Akt3、ALK、Alk5、A-Raf、Axl、B-Raf、Brk、Btk、Cdk2、Cdk4、Cdk5、Cdk6、CHK1、c-Raf-1、Csk、EGFR、EphA1、EphA2、EphB2、EphB4、Erk2、Fak、Fes、Fer、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、Flt-3、Fms、Frk、Fyn、Gsk3α、Gsk3β、HCK、Her2/Erbb2、Her4/Erbb4、IGF1R、IKKβ、Irak4、Itk、Jak1、Jak2、Jak3、Jnk1、Jnk2、Jnk3、KDR、Kit、Lck、Lyn、MAP2K1、MAP2K2、MAP4K4、MAPKAPK2、Met、Mer、MNK1、MLK1、mTOR、p38、PDGFRα、PDGFRβ、PDPK1、PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ、PI3Kγ、Pim1、Pim2、Pim3、PKCα、PKCβ、PKCθ、Plk1、Pyk2、Ret、ROCK1、ROCK2、RON、Src、Stk6、Syk、TEC、Tie2、TrkA、TrkB、Tyk2、VEGFR1/Flt-1、VEGFR2/Kdr、VEGFR3/Flt-4、Yes和Zap70。
脾酪氨酸激酶(Syk)(胞内蛋白酪氨酸激酶)是包括B细胞、肥大细胞、巨噬细胞和中性粒细胞在内的许多炎性细胞中的免疫受体信号的关键介导体(Wong Br等，(2004)，Expert Opin Investig Drugs，13，743-762)。Syk还在非造血细胞样成纤维细胞、乳腺癌细胞、结肠癌细胞、肝细胞、神经元细胞和血管内皮细胞中广泛表达(Okamura S等，(1999)，Oncol Res，11，281-285)。起初，Syk被认为主要在免疫受体(如Fc受体(FcR)和B细胞受体(BCR))的信号发出(signaling)中起作用。然而，近期研究显示出了Syk在多种细胞刺激物(包括IL-1、肿瘤坏死因子-α(TNFα)、脂多糖、和β1-整合素)的细胞信号发出中的关键角色(Yamada T等，(2001)，J Immunol，167，283-288)。例如，Syk可被TNFα活化，引起造血细胞系中的MAKP磷酸化和NF-κB转位(Takada Y和Aggarwal BB(2004)，J Immunol，173，1066-1077)。鼻息肉成纤维细胞中产生IL-1诱发的趋化因子也通过Syk活化而介导(Yamada T等，(2001)，J Immunol，167，283-288)。Syk已成为用于治疗变应性病症和自身免疫病症的潜在治疗靶点。
技术实现要素：
对于蛋白激酶有活性的现有化合物并不总是具有令人满意的特性，例如效力和选择性。另外，对于蛋白激酶有活性的现有化合物并不总是具有令人满意的体内生物利用度。本公开文本公开了对于野生型和/或突变的蛋白激酶、尤其是野生型和/或突变的酪氨酸激酶、更尤其是Syk显示出强效的选择性抑制活性的化合物。尤其是，本公开文本公开了用于选择性地调整、调节和/或抑制由某些天然和/或突变的蛋白激酶、尤其是酪氨酸激酶介导的信号转导的方法和化合物，所述蛋白激酶与多种人和动物的疾病(如细胞增殖病症、代谢病症、自身免疫病症、变应性病症和退行性病症)有关。更尤其是，这些化合物为强效的选择性Syk抑制剂。更尤其是，本发明人已发现了在噁唑衍生物中具有特定取代的化合物是强效的选择性Syk酪氨酸激酶抑制剂。
在第一方面，本公开文本涉及式(I)的化合物，所述式(I)的化合物可代表物质的游离碱形式或其药学上可接受的盐：
其中：
R1，R2，R3和R4各自独立地选自于：
氢、
氰基、
CF3、
卤素(选自于F、Cl、Br或I)、
任选取代有杂环的烷基基团、
任选取代有杂环的烷氧基基团、
增溶基团、
杂环、
-CO-NRR'、
-SO2-NRR'、
-NRR'、
-NR-CO-R'以及
-NR-SO2R'基团，
其中，R和R'各自独立地为氢或烷基基团；
W是芳基或杂芳基基团，其为未取代的或由一个或多个(例如1至4个，如1个或2个或3个，如1个)取代基取代，上述取代基选自于：
氰基、
CF3、
卤素(选自于F、Cl、Br或I)、
任选取代有杂环的烷基基团、
环烷基基团、
任选取代有杂环的烷氧基基团、
芳基基团、
杂芳基基团、
杂环烷基基团、
增溶基团、
-CO-NRR'、
-SO2-NRR'、
-NRR'、
-NR-CO-R'以及
-NR-SO2R'基团，
其中，R和R'各自独立地为氢或烷基基团；
X选自于O、S、N(R5)、N[C(＝O)R6]和(CH2)n，其中，n为0、1或2，R5和R6各自独立地为H或C1-4烷基基团；
Y为(CH2)m，其中，m为1、2、3或4；
Z为(CH2)p，其中，p为1或2。
本公开文本公开了下述化合物，其中，X可为(CH2)n，n可为0、1或2，m和p可为1。例如，n为0，m和p为1(从而得到环丙基)。或者，n为1，m和p为1(从而得到环丁基)。或者，n为2，m和p为1(从而得到环戊基)。
本公开文本公开了下述化合物，其中，W可以是取代的(如单取代)杂芳基或取代的(如单取代)芳基。例如，W为单取代的杂芳基。
当W为杂芳基时，杂芳基可为5-8元单环。该环可包含至少一个(例如1至3个，如1个或2个)氮原子。例如，杂芳基为嘧啶，如嘧啶-2-基。W的实例为4-取代的嘧啶-2-基。
本公开文本公开了下述化合物，其中，W取代基可各自独立地选自于由以下基团所组成的组：氰基、CF3、卤素、任选取代有杂环的烷基基团(例如未取代的C1-C3烷基，如甲基、乙基、丙基)、环烷基基团、任选取代有杂环的烷氧基基团、芳基基团(如苯基)、杂芳基基团(如噻吩或吡啶)以及杂环烷基基团(如吗啉)。例如，W取代基可各自独立地选自于由以下基团所组成的组：氰基、CF3、任选取代有杂环的烷基基团(例如未取代的C1-C3烷基，如甲基、乙基、丙基)、芳基基团(如苯基)、杂芳基基团(如噻吩或吡啶)以及杂环烷基基团(如吗啉)。例如，W取代基可各自独立地为任选取代有杂环的烷基基团(例如未取代的C1-C3烷基，如甲基、乙基、丙基)。W的实例是4-(C1-3)烷基嘧啶-2-基。
本公开文本公开了下述化合物，其中，R1、R2、R3和R4可各自独立地选自于由以下基团所组成的组：氢、卤素、任选取代有杂环的烷基基团、任选取代有杂环的烷氧基基团以及增溶基团。例如，R1、R2、R3和R4中的至少三个为氢。例如，R3和R4为氢，R1和R2的其中一个为氢，另一个选自于由以下基团所组成的组：氢、卤素、任选取代有杂环的烷基基团、任选取代有杂环的烷氧基基团。例如，R1、R2、R3和R4全部为氢。
本公开文本公开了如下式(II)的化合物或其药学上的盐：
其中，W、R1、R2、R3、R4和X如上所定义。例如，W、R1、R2、R3、R4如上所定义，X为(CH2)n，n为0、1或2(如0)。例如，在式(II)的化合物中，R1至R4中的至少三个为氢，例如R1至R4均为氢，W是单取代的芳基或单取代的杂芳基(如单取代的杂芳基)，X为(CH2)n，n为0、1或2(如0)。
本公开文本公开了如下式(III)的化合物或其药学上的盐：
其中，R1、R2、R3、R4和X如上所定义，R7选自于由以下基团所组成的组：
氢、
氰基、
CF3、
卤素(选自于F、Cl、Br或I)、
烷基基团、
环烷基基团、
烷氧基基团、
芳基基团、
杂芳基基团、
杂环烷基基团、
增溶基团以及
-NRR'基团，其中，R和R'各自独立地选自于氢或烷基基团。
例如，在式(III)的化合物中，R1至R4和R7如上所定义，X为(CH2)n，n为0、1或2(如0)。例如，R1至R4如上所定义，R7为烷基(例如C1-C3烷基，如甲基、乙基或丙基)，X为(CH2)n，n为0、1或2(如0)。例如，R3和R4为氢，R1和R2的其中一个为氢，另一个选自于由以下基团所组成的组：氢、卤素、任选取代有杂环的烷基基团、任选取代有杂环的烷氧基基团，X为(CH2)n，n为0、1或2(如0)，R7为C1-C3烷基(如甲基、乙基或丙基)。
除非另有规定，本文所使用的下列术语定义如下。
本文所使用的术语“烷基”或“烷基基团”意味着饱和直链或支链非环状烃。除非另有说明，烷基基团可具有1至10个、例如1至6个或1至4个碳原子、例如1至3个碳原子。具有代表性的饱和直链烷基包括甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基；而饱和支链烷基包括异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基丁基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基戊基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、2-甲基-4-乙基戊基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2-甲基-4-乙基己基、2,2-二乙基戊基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基以及3,3-二乙基己基。包含在本发明化合物中的烷基可以是未取代的，或取代有一个或多个(例如1至5个、如1个)取代基。任选的取代基可以是增溶基团。
本文所使用的术语“芳基”或“芳基基团”意味着单环或多环芳香烃基团。除非另有说明，芳基基团可具有6至14个碳原子。合适的芳基基团的实例包括：苯基、甲苯基、蒽基、芴基、茚基、薁基和萘基；以及苯并稠合碳环部分，例如5,6,7,8-四氢萘基。芳基基团可以是未取代的，或取代有一个或多个(例如1至5个、例如1至4个、例如1个或2个或3个)取代基。任选的取代基可以是增溶基团。
术语“环烷基”或“环烷基基团”意味着饱和或部分不饱和的单环、稠合双环或桥连多环集合体(assembly)。这包括取代或未取代的环烷基基团。例如，环烷基基团可为C3-C10环烷基基团，如C3或C4环烷基基团、如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基基团。
本文所用术语“烷氧基”或“烷氧基基团”是指通过氧原子连接至另一部分的、如上所定义的烷基基团。烷氧基基团的实例包括甲氧基、异丙氧基、乙氧基和叔丁氧基。
本文所使用的术语“杂环”泛指杂环烷基基团和杂芳基基团。
本文所使用的术语“杂环烷基”或“杂环烷基基团”意味着具有至少一个(例如1至5个、如1个或2个或3个或4个)选自于O、N或S的杂原子的单环或多环基团，所述基团可以是饱和的或不饱和的，但不是芳香族的基团。杂环烷基可具有2至11个碳原子。杂环烷基基团的实例包括：哌啶基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、乙内酰脲基、戊内酰胺基、氧杂环丙烷基、氧杂环丁基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻喃基砜、四氢噻喃基亚砜、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜、1,3-二氧戊环、四氢呋喃基、二氢呋喃基-2-酮、四氢噻吩基以及四氢-1,1-二氧代噻吩基。通常，单环杂环烷基基团具有3至7个环原子。优选的3至7元单环杂环烷基基团具有5或6个环原子。杂原子上可以取代有本领域普通技术人员已知的保护基团，例如，氮上的氢可以被叔丁氧基羰基取代。此外，杂环烷基基团可以是未取代的，或取代有一个或多个(例如1至4个、如1个或2个)取代基。此外，杂环与另一基团的连接位点可以在杂环的碳原子或杂原子上。
本文所使用的术语“杂芳基”或“杂芳基基团”意味着单环或多环杂芳环，包括碳原子环成员以及一个或多个杂原子环成员(例如，如氧、硫或氮)。通常，杂芳基基团可具有5至14个、如5至8个环成员。通常，杂芳基基团具有1至5个、如1个或2个或3个或4个杂原子环成员。通常可具有1至约14个碳原子环成员。具有代表性的杂芳基基团包括吡啶基、1-氧代-吡啶基、呋喃基、苯并[1,3]二氧杂环戊烯基、苯并[1,4]二氧杂环己二烯基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、咪唑基、噻唑基、异噁唑基、喹啉基、吡唑基、异噻唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、三唑基、噻二唑基、异喹啉基、吲唑基、苯并噁唑基、苯并呋喃基、吲嗪基、咪唑并吡啶基、四唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并噁二唑基、吲哚基、四氢吲哚基、氮杂吲哚基、咪唑并吡啶基、喹唑啉基、嘌呤基、吡咯并[2,3]嘧啶基、吡唑并[3,4]嘧啶基、咪唑并[1,2-a]吡啶基以及苯并(b)噻吩基。杂原子上可以取代有本领域普通技术人员已知的保护基团，例如，氮上的氢可以被叔丁氧基羰基取代。杂芳基基团可以是未取代的，或取代有一个或多个取代基。此外，氮或硫杂原子环成员可以被氧化。杂芳环可以为5-8元单环杂芳环。杂芳环或杂芳香环与另一基团的连接位点可以在杂芳环或杂芳香环的碳原子或杂原子上。
本文所使用的术语“取代基”或“取代的”意味着化合物或基团中的氢基团被替换为任何所期望的基团，所述所期望的基团以未受保护的形式或者在使用保护基团保护时，对于反应条件保持基本稳定。取代基的实例为见于本文所公开的示例性化合物和实施方式中出现的基团、以及卤素、如上所定义的烷基或芳基基团、羟基、如上所定义的烷氧基、硝基、巯基、杂环烷基基团、杂芳基基团、氰基、如上所定义的环烷基基团、以及增溶基团、-NRR'、-NR-CO-R'、-CONRR'、-SO2NRR'基团，其中，R和R'各自独立地为氢或如上所定义的烷基。取代基的实例是卤素、C1-C10未取代的烷基、C6-C14未取代的芳基、羟基、C1-C10未取代的烷氧基、硝基、巯基、未取代的3-7元杂环烷基、未取代的3-7元杂芳基、氰基、C1-C10的未取代环烷基、增溶基团、-NRR'、-NR-CO-R'、-CONRR'、-SO2NRR'基团，其中，R和R'各自独立地为氢或C1-C10未取代的烷基。
本文所使用的术语“增溶”基团意味着相比于不含有该基团的类似化合物，具有足够亲水特性以改善或增加含有该基团的化合物的水溶性的基团。所述亲水特性可以通过任何手段来实现，例如通过包含在使用条件下电离以形成带电荷部分的官能团(例如，羧酸、磺酸、磷酸和胺等)、含有永久电荷的基团(例如，季铵基团)和/或杂原子或杂原子基团。
“杂原子基团”的实例为N-(CH2)zR”、N-(CH2)z-C(O)R”、N-(CH2)z-C(O)OR”、N-(CH2)z-S(O)2R”、N-(CH2)z-S(O)2OR”、N-(CH2)z-C(O)NR”R”'，其中z是0至6的整数，例如0、1、2、3、4、5或6，R”和R”'各自独立地选自于由以下基团所组成的组：
氢；
C1-C10烷基基团，任选地取代有一个或多个杂原子、例如卤素(选自于F、Cl、Br或I)、氧和氮；
C1-C10烷氧基基团；
未取代的芳基；以及
未取代的杂芳基基团。
所述增溶基团可以是具有下列结构之一的部分：
其中，
L选自于由CH和N所组成的组；
M选自于由–CH(R”)-、-CH2-、-O-、-S-、-NH-、-N(-(CH2)z-R”)-、-N(-(CH2)z-C(O)R”)-、-N(-(CH2)z-C(O)OR”)-、-N(-(CH2)z-S(O)2R”)-、-N(-(CH2)z-S(O)2OR”)-和-N(-(CH2)z-C(O)NR”R”')-所组成的组，其中z是0至6的整数，R”和R”'各自独立地选自于：
氢；
C1-C10烷基基团，任选地取代有一个或多个杂原子、例如卤素(选自于F、Cl、Br或I)、氧和氮；
C1-C10烷氧基基团；
未取代的芳基；以及
未取代的杂芳基；
或者基团-NR”R”'为基团-NRR'基团，其中Ra和Rb各自独立地选自于氢或未取代的烷基；
但L和M不能同时分别为CH和CH2。
所述增溶基团的实例为：吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、N-(C1-C6)烷基哌啶基(尤其是N-甲基哌啶基和N-乙基哌啶基)、N-(4-哌啶基)哌啶基、4-(1-哌啶基)哌啶基、1-吡咯烷基哌啶基、4-吗啉基哌啶基、4-(N-甲基-1-哌嗪基)哌啶基、哌嗪基、N-(C1-C6)烷基哌嗪基(尤其是N-甲基哌嗪基和N-乙基哌嗪基)、N-(C3-C6)环烷基哌嗪基(尤其是N-环己基哌嗪基)、吡咯烷基、N-(C1-C6)烷基吡咯烷基(尤其是N-甲基吡咯烷基和N-乙基吡咯烷基)、二氮杂基、N-(C1-C6)烷基氮杂基(尤其是N-甲基氮杂基和N-乙基氮杂基)、高哌嗪基、N-甲基高哌嗪基、N-乙基高哌嗪基和咪唑基。
可将式(I)的化合物以衍生自药学上可接受的无机酸或有机酸的盐的形式使用。除非另有说明，“药学上可接受的盐”是指通过使式(I)的化合物与以下酸或碱结合而制备的盐：所述酸的阴离子或所述碱的阳离子通常认为适于人类服用。药学上可接受的盐作为本发明的产品特别有用，这是因为它们相对于母体化合物具有更大的水溶性。对于用于药物而言，本发明的化合物的盐是无毒的“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”中涵盖的盐是指通常通过使游离碱与合适的有机酸或无机酸反应来制备的本发明化合物的无毒盐。有可能的话，本发明化合物的合适的药学上可接受的酸加成盐包括衍生自以下酸的酸加成盐：无机酸，如盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硼酸、氟硼酸、磷酸、偏磷酸、硝酸、碳酸、磺酸和硫酸；以及有机酸，如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、乙醇酸、异硫羰(isothiotonic)酸、乳酸、乳糖酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、琥珀酸、甲苯磺酸、酒石酸以及三氟乙酸。合适的有机酸通常包括例如脂族类、环脂族类、芳族类、芳脂族类、杂环类、羧酸类和磺酸类的有机酸。合适的有机酸的具体实例包括：乙酸盐、三氟乙酸盐、甲酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、二葡糖酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、葡糖醛酸盐、马来酸盐、富马酸盐、丙酮酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐、苯甲酸盐、邻氨基苯甲酸、硬脂酸盐、水杨酸盐、对羟基苯甲酸盐、苯基乙酸盐、扁桃酸盐、双羟萘酸盐(扑酸盐)、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、泛酸盐、甲苯磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、磺胺酸盐、环己基氨基磺酸盐、β-羟基丁酸盐、半乳糖二酸盐(galactarate)、半乳糖醛酸盐、己二酸盐、藻酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、十二烷基硫酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、庚酸盐、己酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑酸盐(palmoate)、果胶酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、硫氰酸盐以及十一烷酸盐。另外，在本发明的化合物带有酸性部分的情况中，其合适的药学上可接受的盐可以包括：碱金属盐，即钠盐或钾盐；碱土金属盐，例如钙盐或镁盐；以及与合适的有机配体形成的盐，例如季铵盐。在另一实施方式中，碱盐由形成无毒盐的碱形成，包括铝盐、精氨酸盐、苄星(benzathine)盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、葡甲胺盐、乙醇胺盐、氨丁三醇盐和锌盐。有机盐可以由仲胺盐、叔胺盐或季胺盐制成，例如氨丁三醇、二乙胺、N,N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因。碱性含氮基团可以用以下试剂进行季铵化，例如：低级烷基(C1-C6)卤化物(例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、二烷基硫酸盐(例如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸盐)、长链卤化物(例如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如苄基和苯乙基的溴化物)等。还可形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。
除非另有说明，语句“式(I)的化合物”包括式I化合物的所有形式，包括其水合物、溶剂合物、异构体、结晶及非结晶形式、同晶型体、多晶型物以及代谢物。例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可以以未溶剂化和溶剂化的形式存在。当溶剂或水被紧密结合时，复合物将具有与湿度无关的明确定义的化学计量。然而，当溶剂或水被弱结合时(正如在通道溶剂合物(channel solvates)和吸湿性化合物中)，水/溶剂的含量将取决于湿度和干燥条件。在这类情况中，非化学计量将是正常情况。式(I)的化合物的立体异构体包括：本发明化合物的顺式和反式异构体、光学异构体(如R和S对映体)、非对映体、几何异构体、旋转异构体、构象异构体、互变体，包括表现出多于一种异构现象的化合物；以及它们的混合物(如外消旋体和非对映体对)。除非另有说明，语句“式(I)的化合物”包括化合物的互变形式。在结构异构体可经由低能垒互相转化的情况中，可发生互变异构(“互变现象”)。这可在含有例如亚氨基、酮基或肟基基团的本发明化合物中采取质子互变现象的形式，或在含有芳香族部分的化合物中采取所谓的价态互变现象的形式。这遵循了单一化合物可表现出多于一种类型的异构现象。处于固体和液体形式的互变体的不同比例取决于分子上的不同取代基以及用于分离化合物的具体结晶技术。
可使用如下通用的实验方案来制备本发明化合物：
通用合成步骤
本发明的化合物可通过多种方法(包括方案1-4中所概述的方法)来制备，其中，除非进一步指明，取代基如上述式(I)所定义。以下描述的合成方法仅仅是示例性的，本发明的化合物可通过本领域普通技术人员所明了的替代路线来合成。
使用A.Benjahad等(Tetrahedron Letters，(1994)，9545-9548)所述的方法，使乙二胺与2-溴酯(1)反应来制备哌嗪酮(2)(方案1)。
方案1
可替代性地根据方案2中概述的实验方案经由N-对硝基苯磺酰基氮丙啶(4)来制备哌嗪酮(2)。使用改编自Iwaki等的方法(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters，(2012)，2798-2802)来制备中间体N-对硝基苯磺酰基氮丙啶(4)：首先通过使2-氯乙胺盐酸盐与对硝基磺酰氯反应，以得到N-对硝基苯磺酰胺(3)，随后用氢氧化钾将其环化以获得(4)。如Maligres等(Tetrahedron Letters，(1997)，5253-5256)所述，用氨基酸乙酯盐酸盐(5)开环得到无环氨基酯(6)，再在2个步骤中将其环化：用苯硫酚进行N-脱保护，然后加热以获得哌嗪酮(2)。
方案2
使用Van Leusen等(Tetrahedron Letters，(1972)，2369-2372)的方法，使芳香醛(7)与对甲苯磺酰基甲基异腈(TosMIC)反应，制备相应的5-芳基取代的噁唑(8)(方案3)。使用文献方法制备非商品化的醛(7)。通过合适的有机碱(如六甲基二硅基氨基锂，LiHMDS)将噁唑部分(8)去质子化，随后用亲电氯化来制备2-氯噁唑化合物(9)。这使得能通过取代的哌嗪酮(2)将氯取代来获得化合物(10)。这一取代在溶剂(如异丙醇)的存在下加热进行，或在无溶剂的条件下加热进行。在一些情况中，在溶剂的存在下，可通过使用酸(如盐酸)来获得化合物(10)。将硝基化合物(10)还原以形成相应的苯胺(11)。优选地，还原反应在氢气的存在下用催化剂(如钯碳(10wt％))进行。在合适的溶剂(如醇)的存在下并在高温中加热，用化合物(11)通过直接的亲核取代反应来制备式(I)的进一步类似物(12)，其中W-X的X可以为F、I、Br或Cl。对于推动反应完成或获得提高的产率而言，酸(如盐酸)的存在可以是必需的或非必需的。在一些情况中，可通过使用已知的金属催化的N-芳基化的实验方案，用配体和无机碱的适当组合来获得化合物(12)。
方案3
根据方案4描述的反应方案，通过使用上述相同的实验方案获得式(I)的化合物(12)。
方案4
在第二方面，本公开文本公开了药物组合物，所述药物组合物包含如上所定义的式(I)化合物(如式(II)或式(III)化合物)或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂和/或载体。在药物组合物中，式(I)化合物可以是唯一的药学活性成分，或者式(I)化合物可以与一种或多种不同的药学活性成分组合。
合适的载体和赋形剂在本领域中是公知的，通常用于例如促进将活性化合物加工成可在药学上使用的制剂。关于制剂和给药技术的进一步细节可见于最新版的Remington's Pharmaceutical Sciences(Maack Publishing Co.，Easton，Pa.)。
取决于所期望的给予模式可使用各种形式的赋形剂，这些形式中的某些可促进或调整活性化合物的有效性，例如通过促进释放性能(release profile)使得这一活性化合物整体上对于所期望的治疗来说更有效。本发明的药物组合物适于以各种形式、例如可注射形式、可粉化形式或可摄取形式进行给予，例如通过肌内途径、静脉内途径、皮下途径、皮内途径、口服途径、局部途径、直肠途径、阴道途径、眼部途径、鼻部途径、经皮途径或胃肠外途径。
本文所公开的药物组合物可旨在用于口服给予。在该情况中，可将所述组合物配制成如下制剂用于患者摄取：片剂、丸剂、糖衣剂(dragees)、胶囊剂、液体剂、凝胶剂、糖浆剂、膏剂(slurries)和悬浮液剂等。
本文所公开的组合物可以是药物组合物或化妆品组合物。所述组合物可旨在用于局部给予。此类组合物可以如下形式呈现：凝胶剂；糊剂；软膏剂(ointment)；霜剂；乳液剂；液态悬浮剂；水醇溶液或者油性溶液；或者精华型或乳液剂的分散剂；或者无水凝胶剂或亲脂凝胶剂；或者通过将脂相分散入水相中(或反之)得到的、奶型(milk type)的液态或半固态稠度的乳剂；或者霜剂或凝胶型的、软质半固体稠度的乳剂或悬浮液剂；或者可选地，针对离子型和/或非离子型的囊泡分散剂(vesicular dispersions)、微颗粒剂、微胶囊剂或微乳剂。根据标准方法制备这些组合物。
目前所定义的组合物可包含任何通常用于皮肤病学和化妆品中的成分。该组合物可包含选自如下成分中的至少一种：亲水胶凝剂或亲脂胶凝剂、亲水活化剂或亲脂活化剂、防腐剂、软化剂、粘度增强聚合物、保湿剂、表面活性剂、防腐剂、抗氧化剂、溶剂、香料、填料、掩蔽剂、杀菌剂、吸味剂和着色剂。作为可用于本发明中的油可提及：矿物油(液体石蜡)、植物油(牛油树脂的液体部分、葵花油)、动物油、合成油、硅油(环甲硅油)和氟化油。还可将脂肪醇、脂肪酸(硬脂酸)和蜡(石蜡、棕榈蜡(carnauba)、蜂蜡)用作脂类物质。可用于本发明的乳化剂包括例如硬脂酸甘油酯、聚山梨酯60和PEG-6/PEG-32/硬脂酸乙二醇酯混合物。可用于本发明的亲水胶凝剂包括例如羧乙烯聚合物(卡波姆)、丙烯酸共聚物(如丙烯酸酯/烷基丙烯酸酯共聚物)、聚丙烯酰胺、多糖(如羟丙基纤维素)、粘土和天然胶，可用于本发明的亲脂胶凝剂包括例如改性粘土(如有机皂土)、脂肪酸的金属盐(如硬脂酸铝)和疏水性二氧化硅、或者乙基纤维素和聚乙烯。作为亲水活化剂可使用：蛋白或蛋白水解物、氨基酸、多元醇、尿素、尿囊素、糖和糖衍生物、维生素、淀粉和植物提取物(尤其是芦荟(Aloe vera)的提取物)。作为亲脂活化剂可使用：视黄醇(维生素A)及其衍生物、生育酚(维生素E)及其衍生物、必需脂肪酸、神经酰胺和精油(essential oil)。这些试剂在使用时增添了额外的保湿或软化皮肤的特征。此外，组合物中可包含表面活性剂，以便对能够去除肥大细胞的化合物(如酪氨酸激酶抑制剂)提供更深的穿透(penetration)。在所考虑的成分中，可选择：穿透增强剂，选自例如由矿物油、水、乙醇、三醋精、甘油和丙二醇所组成的组；凝聚剂(cohesion agent)，选自例如由聚异丁烯、聚乙酸乙烯酯和聚乙烯醇组成的组；以及增稠剂。增强药物局部吸收的化学方法是本领域公知的。例如，具有穿透增强特性的化合物包括十二烷基硫酸钠(Dugard,P.H.和Sheuplein,R.J.，"Effects of Ionic Surfactants on the Permeability of Human Epidermis:An Electrometric Study"，J.Ivest.Dermatol.，V.60，(1973)，pp.263-69)、十二烷基胺氧化物(Johnson等，US 4,411,893)、氮酮(Rajadhyaksha，US 4,405,616和3,989,816)和癸甲基亚砜(Sekura,D.L.和Scala,J.，"The Percutaneous Absorption of Alkylmethyl Sulfides"，Pharmacology of the Skin，Advances In Biolocy of Skin，(Appleton-Century Craft)V.12，(1972)，pp.257-69)。已观察到，提高两性分子中头部基团的极性使其穿透增强特性增加，但要以增加其皮肤刺激特性为代价(Cooper,E.R.和Berner,B.，"Interaction of Surfactants with Epidermal Tissues:Physiochemical Aspects"，Surfactant Science Series，V.16，Reiger,M.M.编著，(Marcel Dekker,Inc.)，(1987)，pp.195-210)。化学增强剂还可以是共溶剂。这些材料相对易于通过各种机制进行局部吸收，对于一些药物而言实现渗透增强。在显示出使得各种化合物的吸收得以增强的能力方面，乙醇(Gale等，美国专利号4,615,699和Campbell等，美国专利号4,460,372和4,379,454)、二甲亚砜(US 3,740,420和US 3,743,727以及US 4,575,515)和甘油衍生物(US 4,322,433)为这类化合物的几个实例。
本文所公开的药物组合物还可旨在用于以气雾制剂给予至患者呼吸道的目标区域。在US 5,906,202中公开了用于递送药物制剂气雾喷射(aerosolized bursts)的装置和方法学。制剂优选为溶液，例如水溶液、乙醇溶液、水/乙醇溶液、盐水溶液、胶态悬浮液和微晶悬浮液。例如，气雾颗粒包含上文所述活性成分和载体(例如，药学上活性的呼吸药物和载体)，所述气雾颗粒通过推动制剂通过喷嘴而形成，所述喷嘴优选为柔性多孔膜的形式。所述颗粒具有足够小的尺寸，使得颗粒形成时仍然在空气中悬浮足够长的时间，从而使患者可将颗粒吸入患者的肺内。例如在US 5,556,611中探讨了用于将本发明化合物给予至患者呼吸道的合适的装置：
-液态气体体系(将液化气体用作推进气体，例如低沸点的FCHC或丙烷、丁烷，其处于压力容器中)；
-悬浮气雾剂(活性物质颗粒以固态形式悬浮在液态推进相中)；
-加压的气体体系(使用压缩气体，如氮气、二氧化碳、一氧化二氮或空气)。
因此，本文所公开的药物组合物通过如下方式制成：将活性物质溶于或分散在合适的无毒介质中，并将所述溶液或分散液雾化成气雾剂，即，极其细微地分布在载气中。这在技术上是可行的，例如为如下形式：气雾剂推进气体包；泵送气雾剂；或本身已知用于液体成雾和固体雾化的其它装置，尤其是允许精确个体用量的装置。因此，本公开文本还公开了包含如上所定义的化合物和此类制剂的气雾剂装置，优选具有计量的给药阀。
本文所公开的药物组合物还可旨在用于鼻内给予。关于这一点，本领域普通技术人员将容易地明白用于向鼻粘膜表面给予化合物的药学上可接受的载体。在Remington’s Pharmaceutical Sciences，第16版，(1980)，Arthur Osol编著中描述了这些载体，以引用的方式将其公开文本并入本文。
为了通过上呼吸道进行给予，可将所述组合物配制成溶液，例如，缓冲或无缓冲的水或等渗盐水；或配制成悬浮液，以滴剂或喷雾剂用于鼻内给予。优选地，此类溶液或悬浮液相对于鼻部分泌物而言是等渗的、并且具有相同的pH，例如约pH 4.0-约pH 7.4或pH 6.0-pH 7.0。缓冲液应该是生理上相容的，仅举一例来说包括磷酸盐缓冲液。例如，代表性的鼻减充血剂描述为缓冲至pH约6.2(Remington’s，同前，第1445页)。当然，对于鼻部和/或上呼吸道给予而言，本领域普通技术人员能够容易地确定无害的水性载体合适的pH和盐水含量。还可将粘度例如约10cps-约3000cps或约2500cps-6500cps以上的常见鼻内载体(包括鼻部凝胶剂、霜剂、糊剂或软膏剂)用于提供与鼻粘膜表面的更持久接触。仅以举例的方式来说，此类载体粘性制剂可基于本领域公知烷基纤维素和/或其它高粘度的生物相容载体(参见例如，上文所引用的Remington’s)。优选烷基纤维素例如，浓度为每100ml载体约5mg-约1000mg的甲基纤维素。仅以举例的方式来说，更优选的甲基纤维素浓度是每100ml载体约25mg-大约150mg。还可包含其它成分对制剂提供额外的粘度、保湿性和合意的质地和气味，所述其它成分例如已知的防腐剂、着色剂、润滑或粘性的矿物油或植物油、香料、天然或合成的植物提取物(例如芳香油)、以及保湿剂和粘度增强剂(例如甘油)。对于溶液或悬浮液的鼻部给予，可利用本领域用于生成液滴(drops)、雾滴(droplets)和喷雾(sprays)的各种装置。
将含有滴量器(dropper)或喷雾装置的预先测定单位剂量分配器制成包含一个或多个剂量的待给予药物，所述滴量器或喷雾装置含有作为液滴或作为喷雾进行递送的溶液或悬浮液。还公开了准备通过加入适量水制成溶液或悬浮液的试剂盒，所述试剂盒含有一个或多个单位脱水剂量的本文所公开的式(I)化合物以及任何所需的盐和/或缓冲剂、防腐剂和着色剂等。
本公开文本的另一方面针对如上所定义的式(I)化合物(如式(II)或式(III)化合物)或其药学上可接受的盐，将其作为药物使用。
本文所公开的式(I)化合物或其药学上可接受的盐(也被共同称为“式(I)化合物”)具有Syk酪氨酸激酶抑制活性。尤其是，所述化合物能够抑制(从而调节)由Syk介导的信号转导。
因此，本公开文本的一个方面公开了用于对与Syk活性不受调控或失调(unregulated or deregulated)相关的疾病或病症进行治疗的方法，所述方法包括向需要该治疗的受试者(例如人或动物受试者)给予有效量的式(I)化合物。例如，本公开文本公开了用于对与Syk介导的信号转导相关的疾病或病症进行治疗的方法，本公开文本还公开了用于治疗相关疾病或病症的方法。
对于每天每千克体重而言，通常以0.1mg至2g化合物的量包含有效量的式(I)化合物。
另一方面，本公开文本公开了用于在细胞中调整、调节和/或抑制由Syk蛋白激酶介导的信号转导的方法。所述方法包括向细胞给予至少一种如上所定义的式(I)化合物(如式(II)或式(III)化合物)、或其药学上可接受的盐。
本公开文本公开了至少一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于体外或体内选择性抑制Syk的用途。
本发明公开的方法可用于在患者中治疗血液疾病或病症、炎性疾病或病症、自身免疫疾病或病症、增殖疾病或病症、代谢疾病或病症、变应性疾病或病症和/或退行性疾病或病症。
在一个实施方式中，所述受试者或患者已被诊断患有血液病症、变应性病症、代谢病症、炎性病症、自身免疫病症和/或增殖病症。
已知与Syk介导的信号转导不受调控或失调相关的疾病和病症例如：
-血液病症，如非霍奇金淋巴瘤和白血病，包括弥漫性大B-细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、B细胞慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)/小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、Waldenstrom巨球蛋白血症(WM)、边缘区淋巴瘤(MZL)、伯基特淋巴瘤、外周T-细胞淋巴瘤(PTCL)以及多发性骨髓瘤(MM)、骨髓增生异常综合征(MDS)、伴有骨髓纤维化的骨髓增生异常；
-肿瘤性疾病，如肥大细胞病、实体瘤，包括头颈癌、肝细胞癌以及人胃肠道病症；
-代谢疾病，如糖尿病及其慢性并发症、肥胖症、II型糖尿病、高脂血症和血脂异常、动脉粥样硬化、高血压和心血管疾病；
-变应性疾病，如哮喘、变应性鼻炎、变应性窦炎、过敏性综合征(anaphylactic syndrome)、荨麻疹、血管性水肿、特应性皮炎、变应性接触性皮炎、结节性红斑、多形性红斑、皮肤坏死性小静脉炎(cutaneous necrotizing venulitis)和虫咬性皮肤炎症以及吸血寄生虫感染；
-骨吸收(骨质疏松症)；
-血管生成；
-炎性疾病，如类风湿性关节炎、结膜炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎及其他关节炎病情；
-自身免疫疾病，如多发性硬化、牛皮癣、肠道炎性疾病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、类风湿性关节炎和多发性关节炎、局部和全身性硬皮病、全身性红斑狼疮、盘状红斑狼疮、皮肤狼疮(cutaneous lupus)、皮肌炎、多发性肌炎、斯耶格伦氏综合征、结节性全身动脉炎、自身免疫性肠病以及增生性肾小球肾炎和T-细胞介导的自身免疫糖尿病；
-在任何器官移植(包括肾、胰腺、肝、肺)中以及对于治疗白血病和淋巴瘤、异位心脏移植而言，对同种异体造血细胞移植的移植物排斥或移植物抗宿主疾病；
-本发明所涵盖的其它自身免疫疾病，包括慢性活动性肝炎和慢性疲劳综合征；
-血管炎；
-病毒感染；
-真菌感染；
-细菌感染；
-CNS病症，如Nasu-Hakola疾病、精神病症、偏头痛、疼痛、记忆丧失和神经细胞退化。具体而言，将本发明所述方法用于治疗下述病症：抑郁症，包括心境恶劣障碍、循环情感性障碍、两极型忧郁症、重度抑郁或“忧郁质”抑郁、非典型性抑郁、难治性抑郁、季节性抑郁；厌食症；贪食症；经期前综合征；绝经后综合征(post-menopause syndrome)；其它综合征，如精神迟钝(mental slowing)和注意力不集中；悲观忧虑(pessimistic worry)；激动；自我贬损(self-deprecation)；性欲降低；疼痛，包括急性疼痛、术后疼痛、慢性疼痛、伤害感受性疼痛、癌性疼痛、神经性疼痛、心因性疼痛综合征；焦虑病症，包括与换气过度和心率失常相关的焦虑、恐怖症、强迫症、创伤后应激障碍、急性应激障碍、泛化性焦虑症；诸如惊恐发作(panic attacks)的精神病急症，包括精神异常、妄想性障碍、转换障碍(conversion disorders)、恐惧症、躁狂症、谵妄(delirium)；解离型发作(dissociative episode)，包括解离型健忘症、解离型神游症和解离型认同症、人格解体、紧张症、癫痫(seizures)；重度精神病急症，包括自杀行为、自我忽视、暴力或攻击性行为、创伤、边缘型人格和急性精神异常；精神分裂症，包括类偏狂型精神分裂症、错乱型精神分裂症、紧张型精神分裂症和混合型精神分裂症；
-神经退行性疾病，包括阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷顿氏病、朊病毒病、运动神经元病(MND)和肌萎缩性侧索硬化症(ALS)；
-脑缺血；
-视网膜缺血；
-缺血性中风；
-纤维症。
恶性血液病可以是非霍奇金淋巴瘤(NHL)，包括B-CLL/SLL、DLBCL、FL、MCL和WM、外周T-细胞淋巴瘤和骨髓增生异常综合征(MDS)。增殖病症可以是癌症。自身免疫病症可以是多发性硬化、牛皮癣、肠道炎性疾病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、类风湿性关节炎和多发性关节炎、局部和全身性硬皮病、全身性红斑狼疮、盘状红斑狼疮、皮肤狼疮(cutaneous lupus)、皮肌炎、多发性肌炎、斯耶格伦氏综合征、结节性全身动脉炎、自身免疫性肠病、特应性皮炎和/或增生性肾小球肾炎。变应性疾病可以是哮喘、变应性鼻炎、变应性窦炎、过敏性综合征(anaphylactic syndrome)、荨麻疹、血管性水肿、特应性皮炎、变应性接触性皮炎、结节性红斑、多形性红斑、皮肤坏死性小静脉炎(cutaneous necrotizing venulitis)和虫咬性皮肤炎症以及吸血寄生虫感染。神经疾病可以是亨廷顿氏病、精神分裂症、帕金森氏病和/或阿尔茨海默氏病。
在一个特定的实施方式中，本发明公开的方法可以用于预防或治疗选自于以下的疾病或病症：类风湿性关节炎、哮喘、多发性硬化、特应性皮炎、克罗恩氏病、间质性膀胱炎、强直性脊柱炎、慢性阻塞性肺病、牛皮癣、肥大细胞病、B-细胞恶性肿瘤、结肠直肠癌、肺癌、胃癌、胶质母细胞瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、黑素瘤、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胃癌、oesogastric癌、胰腺癌、前列腺癌、多发性骨髓瘤、T细胞淋巴瘤、头颈癌、肝细胞癌、霍奇金淋巴瘤、缺血性肝炎，乙型肝炎、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、帕金森氏病、肌肉萎缩症(de Duchene)、进行性核上性麻痹(PSP)、脑缺血、成瘾、可卡因成瘾、抑郁症、与重性抑郁症或心境恶劣障碍相关的情绪病症、以及阿尔茨海默氏病。
可将式(I)化合物(如式(II)或式(III)化合物)或其药学上可接受的盐用于治疗上述所公开的疾病或病症，例如血液病症、增殖病症、自身免疫病症、代谢病症、炎性病症和/或变应性病症。
在本文所公开的方法中，可将式(I)化合物或其药学上可接受的盐用作唯一的活性药物成分，或与另一活性药物成分组合使用。
本公开文本公开了用于预防或治疗选自于血液病症、细胞增殖病症、代谢病症、炎性病症、自身免疫病症和变应性病症的疾病或病症的方法，所述方法包括：以足够提供治疗效果的量，向有需要的人或动物受试者同时或顺序地给予与另一活性药物成分相组合的至少一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
本公开文本公开了药物组合物，所述药物组合物包含式(I)化合物(如式(II)或式(III)化合物)或其药学上可接受的盐以及另一活性药物试剂作为组合制剂，以顺序、同时或分别用于治疗选自于由血液病症、增殖病症、自身免疫病症、炎性病症和变应性病症所组成的组中的疾病或病症。
本公开文本公开了任选与另一药学活性试剂相组合的式(I)化合物(如式(II)或式(III)化合物)或其药学上可接受的盐在制造药物方面的用途，所述药物用于治疗选自于由血液病症、增殖病症、代谢病症、自身免疫病症、炎性病症和变应性病症所组成的组中的疾病或病症。
尽管上述所公开的方法与用途是指式(I)化合物(如式(II)或(III)化合物)或其药学上可接受的盐，但只要技术上兼容，应将它们理解为同样是指包含相同化合物的药物组合物。
通过下述实施例对本发明加以阐明，其代表了目前的优选实施方式(构成了本发明的一部分)，但不应将实施例用于对本发明的范围进行限定。
化合物合成的实施例
通过参考下述制备实例将更全面地理解本发明，但不应将所述制备实例视为对本发明的范围的限定。通用内容：所有使用的化学品都是商品试剂级产品。溶剂为无水的商品级，并且无需进一步纯化而直接使用。通过使用预涂硅胶60F 254(Merck TLC板)的薄层色谱对反应进程进行监测，在UV光下加以可视化。1H NMR光谱中的多重性表示为单峰(s)、宽单峰(br s)、双峰(d)、三重峰(t)、四重峰(q)以及多重峰(m)，NMR谱在Bruker 300或400MHz光谱仪中进行。在连接至TQD质谱仪的超高压液相色谱(UPLC)ACQUITY Waters仪器上运行液相色谱-质谱联用法(LCMS)。使用的梯度为：在t＝0.0min时以处于水+0.1％甲酸中的5％CH3CN+0.1％甲酸起始，直至t＝0.5min；然后，从t＝0.5min至t＝7.0min以线性梯度达到100％CH3CN+0.1％甲酸；然后，从t＝7.0min至t＝10.0min保持这一状态。使用的柱为Waters HSS C18 1.8μm，2.1×50mm。使用的检测仪器为使用电喷雾离子化(ESI)正离子模式的三重四极质谱仪(TQD)。使用ChemDraw Ultra版本7.0.1生成化学名称。
缩写：
CDCl3 氘代氯仿
Conc.HCl 浓盐酸(37％)
Cs2CO3 碳酸铯
DCM 二氯甲烷
DMSO-d6 六氘代二甲亚砜
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
Et3N 三乙胺
Fe(acac)3 三(乙酰丙酮)铁(III)
h 小时
iPrOH 2-丙醇
K2CO3 碳酸钾
KOH 氢氧化钾
LiHMDS 二(三甲基硅基)氨基锂
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
MgSO4 硫酸镁
Mins 分钟
NaCl 氯化钠
Na2CO3 碳酸钠
NaHCO3 碳酸氢钠
Ns 对硝基苯磺酰基或p-硝基苯磺酰基
Pd2(dba)3 三(二亚苄基丙酮)二钯(0)
Pd(PPh3)4 四(三苯基膦)钯(0)
RT 室温
SiO2 硅胶
TosMIC 对甲苯磺酰基甲基异腈
THF 四氢呋喃
tR 保留时间
Xantphos 4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽
实施例001：
化合物001的合成途径
4,7-二氮杂-螺[2.5]辛烷-8-酮(Ie)的制备
中间体(Ie)的合成途径
N-(2-氯-乙基)-4-硝基苯磺酰胺(If)的制备
在0℃，滴加处于干燥DCM(25ml)中的对硝基苯磺酰氯(1.91g，8.62mmol)溶液，对处于干燥DCM(25ml)中的2-氯乙胺盐酸盐(1.00g，8.62mmol)和Et3N(3.60ml，25.9mmol)搅拌后的溶液进行处理。加入完成后，将溶液升至环境温度并搅拌过夜。将溶液蒸发，通过柱色谱(SiO2，处于环己烷中的20％EtOAc至30％EtOAc)将残余物纯化，获得白色固体状的标题化合物(2.03g，89％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45-8.38(m,3H),8.09-8.04(m,2H),3.59(t,J＝6.0Hz,2H),3.17(s,2H)。
1-(4-硝基-苯磺酰基)-氮丙啶(Ig)的制备
根据Iwaki等(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,(2012)，2798-2802)的方法制备中间体Ig。用处于水(12ml)中的KOH(2.54g，45.3mmol)溶液一次性对处于甲苯(100ml)中的If(2.00g，7.56mmol)搅拌后的浆状物进行处理，然后在环境温度下搅拌3h。将溶液用EtOAc稀释，将有机相分离，用饱和NaCl水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发，获得浅黄色固体状的标题化合物(1.41g，82％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.47-8.26(m,2H),8.24-8.10(m,2H),2.48(s,4H)。
1-[2-(4-硝基-苯磺酰基氨基)-乙基氨基]-环丙烷甲酸乙酯(Ih)的制备
将处于干燥乙腈(120ml)中的Ns-氮丙啶的Ig(6.89g，30.2mmol)、1-氨基-环丙烷甲酸乙酯盐酸盐(5.00g，30.2mmol)和Na2CO3(3.20g，30.2mmol)的混合物加热回流3h。将混合物冷却，过滤并蒸发。通过柱色谱(SiO2，处于DCM中的5％丙酮至10％丙酮)将残余物纯化，获得浅黄色固体状的标题化合物(6.58g，61％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝8.8Hz,2H),8.04(d,J＝8.8Hz,2H),7.84(br s,1H),4.02(q,J＝7.1Hz,2H),2.84(s,2H),2.72-2.58(m,3H),1.14(t,J＝7.1Hz,3H),1.07(dd,J＝7.0,3.7Hz,2H),0.81(dd,J＝7.0,3.8Hz,2H)。
4,7-二氮杂-螺[2.5]辛烷-8-酮的制备(Ie)
主要根据Maligres等(Tetrahedron Letters，(1997)，5253-5256)的方法进行制备。将处于干燥乙腈(250ml)中的保护的氨基酯Ih(5.45g，15.3mmol)的溶液用K2CO3(8.95g，64.8mmol)和苯硫酚(4.96ml，48.6mmol)进行处理，并在50℃下搅拌过夜。在真空下将混合物蒸发，通过柱色谱(SiO2，10:90:1EtOH:DCM:NH4OH(体积比))将残余物纯化，获得灰白色固体状的标题化合物(1.14g，59％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.53(s,1H),3.26(s,2H),2.84(s,3H),1.01(dd,J＝6.1,3.1Hz,2H),0.60(dd,J＝6.1,3.1Hz,2H)。
5-(3-硝基-苯基)-噁唑(Ia)的制备
将处于甲醇(400ml)中的3-硝基苯甲醛(15.0g，99.3mmol)的溶液用TosMIC(21.3g，109mmol)和K2CO3(16.5g，119mmol)进行处理，并加热回流30分钟。将冷却的溶液浓缩，用水(400ml)处理以形成大量沉淀，过滤。将滤饼用水洗涤，然后将固体置于EtOAc中，并用MgSO4干燥。将溶液过滤并蒸发，将所得固体在真空下干燥，得到米色固体状的标题化合物(18.0g，95％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(s,1H),8.50(t,J＝1.9Hz,1H),8.21(ddd,J＝8.2,2.3,1.0Hz,1H),8.17(ddd,J＝7.8,1.6,1.0Hz,1H),7.99(s,1H),7.78(t,J＝8.0Hz,1H)。
3-噁唑-5-基-苯胺(Ib)的制备
将处于无水乙醇(210ml)中的中间体Ia(3.52g，18.5mmol)的溶液用水(21ml)、然后用SnCl2·2H2O(20.9g，92.6mmol)和浓HCl(15ml，180mmol)进行处理。在室温下搅拌过夜后，用10％NaOH水溶液将溶液调至pH 7，并用EtOAc重复萃取。将有机物干燥(MgSO4)，过滤并蒸发，获得浅橙色粉末状的标题化合物(2.74g，93％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,1H),7.49(s,1H),7.10(t,J＝7.8Hz,1H),6.90(t,J＝1.8Hz,1H),6.86(d,J＝7.6Hz,1H),6.59–6.54(m,1H),5.25(s,2H)。
(4-甲基-嘧啶-2-基)-(3-噁唑-5-基-苯基)-胺(Ic)的制备
将处于2-丙醇(50ml)中的中间体Ib(1.00g，6.24mmol)的溶液用处于乙醇(7.5ml，9.38mmol)中的2-氯-4-甲基嘧啶(800mg，6.22mmol)和1.25M HCl溶液进行处理，加热回流40h。将溶剂蒸发，将残余物用饱和NaHCO3水溶液调成碱性，并用EtOAc萃取。将有机物干燥(MgSO4)，过滤并蒸发，获得米色固体状的标题化合物(1.04g，67％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.71(s,1H),8.45(s,1H),8.37(d,J＝4.9Hz,1H),8.23(s,1H),7.76(d,J＝7.9Hz,1H),7.60(s,1H),7.37(t,J＝7.8Hz,1H),7.30(d,J＝7.5Hz,1H),6.77(d,J＝4.9Hz,1H),2.38(s,3H)。
[3-(2-氯-噁唑-5-基)-苯基]-(4-甲基-嘧啶-2-基)-胺(Id)的制备
在氩气、-78℃下，滴加处于THF中的1M LiHMDS溶液(7.20mmol，7.20mmol)，对处于干燥THF(60ml)中的中间体Ic(1.23g，4.88mmol)的溶液进行处理。在-78℃下45分钟后，一次性加入六氯乙烷(1.39g，5.87mmol)，继续进一步搅拌40分钟，再升温至RT。然后再次将溶液冷却至-78℃，滴加1M LiHMDS(7.20ml，7.20mmol)进行处理，并立即使其升温至室温。将溶液用水处理，并用EtOAc萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。通过柱色谱(SiO2，处于环己烷中的20％至30％EtOAc)将残余物纯化，获得浅黄色固体状的标题化合物(1.17g，84％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),8.37(d,J＝5.0Hz,1H),8.19(t,J＝1.8Hz,1H),7.79(dd,J＝8.0,1.8Hz,1H),7.70(s,1H),7.38(t,J＝7.9Hz,1H),7.27(d,J＝7.7Hz,1H),6.78(d,J＝5.0Hz,1H),2.38(s,3H)。
4-{5-[3-(4-甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-噁唑-2-基}-4,7-二氮杂-螺[2.5]辛烷-8-酮(化合物001)的制备
将中间体Id(800mg，2.79mmol)和Ie(704mg，5.58mmol)的混合物研磨在一起，并加热至140℃1h。将冷却的固体残余物置于少量热乙醇中，用NaHCO3溶液(饱和水溶液)处理，并用处于DCM中的10％乙醇萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。通过柱色谱(SiO2，处于DCM中的10％EtOH)将残余物纯化，获得米色固体状的标题化合物(691mg，66％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.63(s,1H),8.35(d,J＝5.0Hz,1H),8.09(t,J＝1.8Hz,1H),7.77(s,1H),7.66(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),7.31–7.26(m,2H),7.14(d,J＝7.8Hz,1H),6.76(d,J＝5.0Hz,1H),3.85(t,J＝5.7Hz,2H),3.44(td,J＝5.7,1.5Hz,2H),2.38(s,3H),1.46(dd,J＝7.8,4.5Hz,2H),1.32(dd,J＝7.7,4.4Hz,2H)。
实施例002：
化合物002的合成途径
2-氯-5-(3-硝基-苯基)-噁唑(IIa)的制备
按如上对中间体Id所述，由中间体Ia进行制备，随后通过柱色谱(SiO2，处于环己烷中的20％EtOAc)纯化，获得浅黄色固体状的标题化合物(77％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45–8.43(m,1H),8.21(ddd,J＝8.2,2.2,0.9Hz,1H),7.91(ddd,J＝7.8,1.5,1.0Hz,1H),7.64(t,J＝8.0Hz,1H),7.46(s,1H)。
4-[5-(3-硝基-苯基)-噁唑-2-基]-4,7-二氮杂-螺[2.5]辛烷-8-酮(IIb)的制备
将处于2-丙醇(100ml)中的中间体IIa(500mg，2.23mmol)和4,7-二氮杂-螺[2.5]辛烷-8-酮Ie(842mg，6.68mmol)的溶液加热回流10天。将混合物冷却至环境温度，在真空下浓缩，通过过滤将形成的黄色沉淀除去，在干燥器中干燥，得到黄色固体状的标题化合物(410mg，59％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33(s,1H),8.08(dd,J＝8.1,1.9Hz,1H),7.99(d,J＝7.9Hz,1H),7.80(s,1H),7.75–7.66(m,2H),3.90(t,J＝5.6Hz,2H),3.42(t,J＝4.6Hz,2H),1.45(dd,J＝7.7,4.5Hz,2H),1.32(dd,J＝7.7,4.4Hz,2H)。
4-[5-(3-氨基-苯基)-噁唑-2-基]-4,7-二氮杂-螺[2.5]辛烷-8-酮(IIc)的制备
在环境温度和大气压力下，将处于THF(60ml)和甲醇(40ml)中的硝基噁唑IIb(360mg，1.15mmol)的浆状物和10％Pd/C(50mg)在氢气气氛下搅拌16h。将溶液过滤并在真空下蒸发后，通过柱色谱(SiO2，处于DCM中的5％EtOH)纯化，获得白色固体状的标题化合物(230mg，79％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79(s,1H),7.19(s,1H),7.04(t,J＝7.8Hz,1H),6.74–6.69(m,2H),6.46(dd,J＝7.9,1.9Hz,1H),5.19(s,2H),3.82(t,J＝5.6Hz,2H),3.43–3.38(m,2H),1.43(dd,J＝7.8,4.5Hz,2H),1.27(dd,J＝7.7,4.4Hz,2H)。
2-氯-4-氰基嘧啶(IId)的制备
主要根据WO2005/075468中所述的方法进行制备。在15℃下，用亚硝酸钠(10.4g，150mmol)一次性对处于50％乙酸水溶液(100ml)中的4-甲基-1H-嘧啶-2-酮盐酸盐(14.7g，100mmol)进行处理，并剧烈搅拌引起放热反应(40℃)。过滤出黄色沉淀，用冷水洗涤并在真空干燥器中干燥，获得淡黄色固体状的2-羟基-嘧啶-4-甲醛肟中间体(13.1g，94％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.44(s,1H),11.87(br s,1H),7.92(d,J＝6.3Hz,1H),7.77(d,J＝0.4Hz,1H),6.66(dd,J＝6.4,0.9Hz,1H)。将上述肟用磷酰氯(20ml)处理，并缓慢升温至45℃。当温度突然上升至70℃时，停止升温，将混合物搅拌3h。加入二异丙基乙胺(2ml)，将混合物回流30分钟后，倾入冰中并用DCM萃取。将有机物用水、然后用NaHCO3(饱和水溶液)、然后再次用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发，获得黄色油状的中间体IId，该黄色油状的中间体IId在静置时结晶(1.51g，30％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(d,J＝4.9Hz,1H),8.25(d,J＝4.9Hz,1H)。
2-{3-[2-(8-氧代-4,7-二氮杂-螺[2.5]辛-4-基)-噁唑-5-基]-苯基氨基}-嘧啶-4-甲腈(化合物002)的制备
将处于2-丙醇(3ml)中的中间体IIc(45mg，0.158mmol)和2-氯-4-氰基嘧啶IId(66mg，0.474mmol)的溶液加热回流40h。将所形成的沉淀物过滤，并用NaHCO3溶液(饱和水溶液)处理，用处于DCM(50mL)中的10％乙醇萃取。将合并的有机相干燥(MgSO4)，过滤，然后在真空下部分浓缩。通过过滤将沉淀物收集，用乙醚洗涤并干燥，获得黄色固体状的化合物002(39mg，64％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.31(s,1H),8.79(d,J＝4.7Hz,1H),7.95(s,1H),7.81(s,1H),7.59(d,J＝8.2Hz,1H),7.41(d,J＝4.8Hz,1H),7.39–7.33(m,2H),7.25(d,J＝7.7Hz,1H),3.85(t,J＝5.6Hz,2H),3.44(t,J＝6.0Hz,2H),1.46(dd,J＝7.8,4.5Hz,2H),1.32(dd,J＝7.6,4.4Hz,2H)。
根据Jorgensen等(J.Am.Chem.Soc.，(2011)，15686-15696)的方法对非市售的2-氯-4-烷基嘧啶中间体进行制备，将该中间体用于制备化合物表中列出的化合物。
2-氯-4-乙基嘧啶(IIIa)的制备
在氩气、-78℃下，滴加乙基溴化镁溶液(处于THF中1M，16.2ml，16.2mmol)，从而对处于干燥THF(24ml)中的2,4-二氯嘧啶(2.00g，13.4mmol)和Fe(acac)3(954mg，2.70mmol)的混合物进行处理。在-78℃下搅拌30分钟后，将混合物升温至环境温度并进一步搅拌1小时。将混合物再次冷却至-78℃，用乙基溴化镁溶液(10ml，10mmol)进行处理，升温至RT。将该混合物用水稀释，用EtOAc萃取，再将有机相干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。通过柱色谱(SiO2，处于环己烷中的20％EtOAc)将残余物纯化，获得澄清液体状的标题化合物(642mg，34％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.64(d,J＝5.1Hz,1H),7.47(d,J＝5.1Hz,1H),2.76(q,J＝7.6Hz,2H),1.21(t,J＝7.6Hz,3H)。
通过Suzuki偶联方法(参见例如N.Miyaura和A.Suzuki，Chemical Reviews，(1995)，2457-2483)，对2-氯-4-芳基-2-基-嘧啶和2-氯-4-杂芳基-2-基-嘧啶中间体进行制备，将该中间体用于制备化合物表中列出的化合物。
2-氯-4-噻吩-2-基-嘧啶(IIIb)的制备
将处于THF(20ml)中的2,4-二氯嘧啶(1.00g，6.71mmol)、2-噻吩硼酸(430mg，3.36mmol)、Na2CO3(处于水中的0.4M溶液，20ml，8.06mmol)和Pd(PPh3)4(78mg，0.067mmol)的混合物加热至90℃过夜。将冷却的混合物用水稀释，用DCM萃取，将有机相干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。通过柱色谱(SiO2，处于环己烷中的20％EtOAc)将残余物纯化，获得白色固体状的标题化合物(591mg，89％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(d,J＝5.3Hz,1H),8.16(dd,J＝3.8,1.1Hz,1H),8.04(d,J＝5.3Hz,1H),7.95(dd,J＝5.0,1.1Hz,1H),7.29(dd,J＝5.0,3.8Hz,1H)。
主要基于US2006/199804中所述的方法对4-氨基-2-氯-嘧啶中间体进行制备，将该中间体用于制备化合物表中列出的化合物。
4-(2-氯-嘧啶-4-基)-吗啉(IIIc)的制备
在0℃下，用吗啉(3.18ml，36.5mmol)对处于EtOH(60ml)中的2,4-二氯嘧啶(5.00g，36.5mmol)和二异丙基乙基胺(14.0ml，80.4mmol)的搅拌后的溶液进行处理，并升温至环境温度过夜。将溶液倾入盐水中，并用DCM萃取。将有机相干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。通过柱色谱(SiO2，处于DCM中的5％EtOH)将残余物纯化，得到白色固体状的标题化合物IIIc(1.3g，36％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.10(d,J＝6.2Hz,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),3.72–3.49(m,8H)。
4-{5-[3-(4-甲基-吡啶-2-基氨基)-苯基]-噁唑-2-基}-4,7-二氮杂-螺[2.5]辛烷-8-酮(化合物021)的制备：
如对中间体Ia、IIa和IIb所述，由3-溴苯甲醛以3个步骤对4-[5-(3-溴-苯基)-噁唑-2-基]-4,7-二氮杂-螺[2.5]辛烷-8-酮(IVa)进行制备。1H NMR(400MHz,,DMSO-d6)δ7.81(s,1H),7.77(t,J＝1.7Hz,1H),7.58–7.54(m,1H),7.54(s,1H),7.44(ddd,J＝8.0,1.7,1.1Hz,1H),7.37(t,J＝7.9Hz,1H),3.87(t,J＝5.7Hz,2H),3.40(td,J＝5.5,1.6Hz,2H),1.42(dd,J＝7.8,4.5Hz,2H),1.29(dd,J＝7.7,4.4Hz,2H)。
将处于脱气后的二氧六环(5ml)中的中间体IVa(100mg，0.287mmol)的溶液在密封管中用2-氨基-4-甲基吡啶(47mg，0.431mmol)、Pd2(dba)3(5mg，0.00574mmol)、4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(7mg，0.0115mmol)和Cs2CO3(140mg，0.431mmol)进行处理。将管密封并加热至100℃过夜。进一步加入Pd2(dba)3(20mg，0.0218mmol)和4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(28mg，0.0484mmol)后，将混合物进一步加热24h。将冷却的混合物用水处理，并用DCM萃取，将有机相干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。首先通过柱色谱(SiO2，处于DCM中的5％-10％乙醇)将残余物纯化，然后用EtOAc研磨，获得奶油色固体状的化合物021(32mg，30％)。1H NMR(400MHz,,DMSO-d6)δ9.01(s,1H),8.04(d,J＝5.1Hz,1H),7.95(s,1H),7.79(s,1H),7.54(dd,J＝8.2,1.2Hz,1H),7.29(s,J＝2.7Hz,1H),7.26(t,J＝8.0Hz,1H),7.08(d,J＝7.7Hz,1H),6.66(s,1H),6.62(d,J＝5.2Hz,1H),3.85(t,J＝5.5Hz,2H),3.44(t,J＝4.4Hz,2H),2.24(s,3H),1.46(dd,J＝7.7,4.4Hz,2H),1.32(dd,J＝7.6,4.4Hz,2H)。
4-{5-[3-(噻唑-2-基氨基)-苯基]-噁唑-2-基}-4,7-二氮杂-螺[2.5]辛烷-8-酮(化合物022)的制备：
将处于EtOH(45ml)和水(5ml)中的中间体Ib(1.50g，9.37mmol)的溶液用2-溴噻唑(1.69ml，18.7mmol)和浓HCl(1.61ml，187mmol)进行处理，并在100℃下搅拌6小时。进一步加入2-溴噻唑(1.69ml，18.7mmol)后，将溶液进一步加热24h，然后冷却并用NaOH水溶液调至pH 14。用处于DCM中的10％EtOH以及随后的DCM萃取之后，将有机相干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。通过柱色谱(SiO2，处于DCM中的5％丙酮)将残余物纯化，获得白色固体状的中间体IVb(493mg，22％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),8.46(s,1H),8.10(t,J＝1.8Hz,1H),7.63(s,1H),7.56(ddd,J＝8.1,2.2,1.1Hz,1H),7.39(t,J＝7.9Hz,1H),7.33–7.29(m,2H),6.95(d,J＝3.7Hz,1H)。
然后，如对上述中间体Id和化合物001所述，由中间体IVb制备化合物022：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.29(s,1H),7.84(s,1H),7.81(s,1H),7.54(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),7.37–7.29(m,2H),7.27(d,J＝3.6Hz,1H),7.15(d,J＝7.8Hz,1H),6.94(d,J＝3.7Hz,1H),3.85(t,J＝5.5Hz,2H),3.43(s,2H),1.46(dd,J＝7.7,4.5Hz,2H),1.32(dd,J＝7.6,4.5Hz,2H)。
通过使用合适的起始材料和条件重复上文所述方法，得以对化合物表1中下述另外的类似物进行制备和表征。
化合物表1：
IC 50：抑制50％蛋白激酶的浓度。
将上述化合物表中给出的Syk活性表示为：
+++：IC50<500nM
++：500>IC50<2000nM
+：IC50>2000nM
药理学实施例：
1)体外SYK抑制试验
抑制试验方案
将SYK激酶纯化为近似均一的杆状病毒系统中的全长蛋白。用Cisbio international开发的Kinease TK(酪氨酸激酶)HTRF(均相时间分辨荧光)试验进行所有的激酶试验。这些试验在室温下、于96孔半区白色培养板中、在25μl终体积的激酶缓冲液(10mM MgCl2；2mM MnCl2；50mM HEPES-钠pH7.8；BRIJ-35 0.01％，1μM底物)(含浓度至少两倍于各酶Km的ATP以及适量的重组酶)中进行，从而确保线性反应速率。反应在引入酶时起始，随着加入一反应体积(25μl)的HTRF检测缓冲液而终止。将培养板在室温下孵育1小时，并在Pherastar FS酶标仪(BMG Labtech)中测量时间分辨荧光共振能量转移信号。所有数据均为三个平行实验的平均值，标准偏差<10％。
实验结果
化合物表1列出了使用上述实验方案的本发明各种化合物的实验结果。
实验和结果的说明
本发明人观察到本文所公开的式(I)化合物类极其有效地抑制了SYK。化合物表中列出的化合物很好地代表了式(I)化合物类。
对化合物001的以下引用是指上述化合物表1中的相同编号的化合物。将化合物001与R406进行比较，R406是fostamatinib/R788的活性代谢物、Rigel Pharmaceutical SYK抑制剂(WO2006/078846A1；Drugs Future，(2011)，36(4):273-280)。
2)体外抗-SYK激酶活性和选择性
通过使用体外重组激酶试验和基于细胞的增殖试验，针对各种酪氨酸激酶对测试化合物进行筛选，来测定SYK靶标的活性和选择性。
抑制试验方案
基于细胞的增殖和存活力试验
在BaF3模型上进行CellTiter-Bleue基于细胞的存活/增殖试验(Promega G8080)。
总共将1×104细胞/孔/50μl接种于96孔板中。通过加入2×的从0μM至10μM的1/2系列稀释的药物溶液，开始进行处理。使细胞在37℃下生长48h-72h，然后在37℃下与10μl/孔的Promega CellTiter-Bleue试剂一起孵育4h。使用扫描多孔分光光度计(POLARstar Omega，BMG labtech，法国)，通过其在450nm处的吸光度，对形成的甲臜染料的量进行定量。将无细胞的空白孔用作分光光度计的本底对照，并且所有的试验均以两个平行实验重复进行至少两次。
重组SYK和各种蛋白激酶的体外激酶试验
激酶的克隆和表达
在本发明人的设施中，对该研究中测试的大多数激酶进行克隆、表达和纯化。在杆状病毒或在大肠杆菌表达系统中，将所述激酶表达为N-末端六聚组氨酸标记的酶、六聚组氨酸-天冬酰胺标记的酶或GST标记的酶。其余的酶(JAKs)购自Millipore或Proqinase。对于每种酶，对稳态动力学参数进行测定，并用已知抑制剂进行验证。所有实验均在大过量的底物中进行，并就ATP而言具有对应于至少2*Km的ATP浓度。
HTRF激酶试验
用 KinEASE试验(Cisbio International)对于化合物对激酶活性影响的分析进行评价， KinEASE试验是使用标记有铕(Eu3+)穴状化合物的抗磷酸化特异性抗体、基于对生物素化的肽底物的磷酸化水平加以定量的免疫试验。该试验包括两个步骤：-酶促步骤，在此期间，用不同浓度的药物(0μM-10μM)对肽底物、激酶、ATP、Mg2+和/或Mn2+进行孵育；-检测步骤，在反应结束时(通过加入螯合Mg2+的EDTA而停止)，向反应混合物加入抗体抗磷酸化肽-Eu3+(发射620nm)和链霉亲和素XL-665(发射665nm)。孵育后，所得到的信号与样品中的磷酸化的肽的浓度成比例。所有测量均在BMG Labtech Pherastar FS设备上进行。将结果表示为按照以下定义的delta荧光(DF)单位：DF％＝[(比值-空白比值)/(空白比值)]*100，其中，比值＝(665nm/620nm)*104。每个实验均以两个平行实验重复进行两次或三次。
实验结果
表2：抗-SYK化合物的活性和选择性(IC50μM)
*测试化合物的激酶抑制活性的酶法测定(否则为基于细胞的试验)，R406是R788/fostamatinib的活性代谢物。
实验和结果的说明
上述体外数据显示化合物001具有良好的抗-SYK活性。与多激酶抑制剂R406相比，发现化合物001比R406在Ba/F3TEL-SYK模型上更加有效，并在基于细胞的试验和激酶试验中均表现出非常好的选择性。
3)鼠骨髓肥大脱粒试验中的体外抗-SYK活性
抑制试验方案
通过β-氨基己糖苷酶的释放对体外肥大细胞脱粒试验进行监测。通过从C57BL/6J小鼠的股骨冲洗骨髓细胞，来获得鼠骨髓肥大细胞(BMMC)，然后将其在含有小鼠重组IL-3(30ng/ml)的RPMI中培养3周-4周。RBL-2H3是保持于EMEM(补充有20％FCS、1mM谷氨酰胺和1×抗生素)的单层培养物中的大鼠嗜碱性粒细胞系。用0.2μg/ml抗-DNP-IgE(Sigma-Aldrich D8406)对细胞进行敏化过夜。将细胞在Tyrode缓冲液(10mM Hepes、130mM NaCl、6.2mM D-葡萄糖、3mM KCl、1.4mM CaCl2、1mM MgCl2和0.1％BSA)中充分洗涤。将细胞(5×104细胞/孔/90μl)以三个平行实验铺于96孔板中。通过加入10μl的10×浓缩的稀释液，获得0.01μM、0.1μM、1μM和10μM的终浓度，来开始用SYK激酶抑制剂进行处理。在2小时的药物处理后，用110μl终体积的125ng/ml DNP-HAS(Sigma-Aldrich A6661)对细胞进行刺激90min。对于β-氨基己糖苷酶活性的测量而言，收集50μl的上清液，并在柠檬酸缓冲液(pH 4.5)中与制备的50μl 3.7mM的对硝基苯酚-N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖苷(PNAG，Sigma-Aldrich N9376)一起孵育。在37℃下孵育90min后，通过加入100μl的碳酸钠缓冲液(0.1M Na2CO3/NaHCO3pH 10.0)将反应淬灭。使用PolarSTAR酶标仪(BMG labech)，参比620nm处的板吸光度，通过读取405nm处的板吸光度对β-氨基己糖苷酶的活性进行定量。
实验结果
在IgE-介导的肥大细胞脱粒试验中，对抗-SYK化合物的活性进行测试。在FcεRI的聚集后，SYK被鉴定为对于肥大细胞介体释放的起始而言是关键的。在其阻断IgE-介导的颗粒组分β-氨基己糖苷酶的释放的能力中，对抗-SYK化合物001和R406进行了比较。如下列表3所示，相较于未处理的细胞(100％)，将结果表示为β-氨基己糖苷酶残余活性的％。
表3：抗-SYK对β-氨基己糖苷酶释放/活性的影响
*测试化合物的基于细胞的试验(否则为激酶抑制活性的酶法测定)。
实验和结果的说明
与纯化SYK的体外激酶试验以及Ba/F3tel-SYK细胞系的基于细胞的增殖试验一致，化合物001有效地抑制了肥大细胞脱粒(IC50＝50nM)。在这些实验中，SYK抑制剂化合物001与多激酶抑制剂R406同样强效地抑制肥大细胞脱粒。
4)鼠骨髓肥大细胞因子产生中的体外抗-SYK活性
试验方案
通过从C57BL/6J小鼠的股骨冲洗骨髓细胞来获得鼠骨髓肥大细胞(BMMC)，然后将其在含有小鼠重组IL-3(30ng/ml)的RPMI中培养3周-4周。在IL3-耗尽的培养基中，将细胞用0.1μg/ml-0.2μg/ml的抗-DNP-IgE(Sigma-Aldrich D8406)敏化过夜。将细胞用抑制剂预孵育30min，然后用10ng/ml抗原(Ag)和/或干细胞因子(SCF，30ng/ml)刺激。将细胞孵育6h。收获上清液，使用CISBIO IL6和TNFαHTRF试验(分别为cat#63ADKEBU043和6FMTNPEB)对细胞因子含量进行测量。
实验结果
为了探讨化合物001对细胞因子产生的影响，对鼠骨髓肥大细胞(BMMC)中的IL-6和TNFα的产生进行了考查(表4和表5)。
表4：在BMMC中FcεRI和Kit-诱发的TNFα细胞因子释放
*Ag＝抗原；**SCF＝干细胞因子
表5：在BMMC中FcεRI和Kit-诱发的IL6细胞因子释放
*Ag＝抗原；**SCF＝干细胞因子
实验和结果的说明
根据以前的报道，在SCF的缺乏下，IgE-刺激的FcεRI聚集在最低程度上诱发了BMMC中的细胞因子的产生。然而，在SCF的存在下，IL-6和TNFα的产生和释放明显增加。化合物001(IC50～50nM)有效地阻断了此类细胞因子的释放。在这些实验中，化合物001与R406同样有效地阻断了细胞因子的释放，并在低至0.1μM的浓度下观察到抑制作用。
5)小鼠哮喘模型中的体外抗-SYK活性
试验方案
Balb/c雄性小鼠(8周龄)购自Janvier(Le Genest-Saint-Isle；法国)并在动物设施中饲养4周。将药物溶解在饮用溶剂中(80％水；10％Tween 80和10％异丙二醇)。将其分成小份试样并储存在-20℃。每只小鼠每天接受两次药物。在处理前和处理后对动物的重量进行计算。
敏化和处理
用吸附至2mg Al(OH)3(Prolabo，法国)并稀释于生理盐水(0.9％NaCl)中的50μg卵清蛋白(Sigma-Aldrich，德国)对小鼠(9周龄)进行敏化。在第1天和第7天，腹膜内注射卵清蛋白。接着从第18天至第21天，每天用稀释于0.9％NaCl中的10μg卵清蛋白通过鼻内激发进行敏化。在第17天至第21天的5天期间，以15mg/ml、7.5mg/ml或3.75mg/ml每天口服给予两次，使药物处理的动物接受100μl的溶液。这些处理分别对应于60mg/小鼠kg、30mg/小鼠kg以及15mg/小鼠kg的浓度。
气道反应性及肺功能的评价
使用侵入性(SCIREQ)技术对气道反应性进行测量。简言之，将小鼠称重，并用6mg/kg的甲苯噻嗪溶液(Bayer，法国)和10分钟后的6mg/kg的戊巴比妥溶液(CEVA)进行i.p.麻醉。将各麻醉剂稀释于生理盐水溶液中。当小鼠被深度麻醉时，将气管插管并连接至计算机控制的小动物呼吸机当连接后，电脑通过不同体积和压力控制策略来控制机械通气，以获取准确、可重复的呼吸力学(气道阻力、弹性和顺应性)测量。在盐水溶液雾化后对基线值进行测量，并在0.26M乙酰甲胆碱溶液(50mg/ml)雾化后对气道高反应性进行评估。
气道炎症的评价
将动物从断开后，进行支气管肺泡灌洗(Bronchio-alveolar lavage，BAL)。用5ml(0.5ml，10次)冰冷的0.9％NaCl 2.6mM EDTA对气道进行灌洗。将BAL样品在1200rpm、4℃下离心5分钟。收集沉淀的细胞，并加入1.5ml去离子水对红细胞进行裂解30秒。用0.5ml的0.6M KCl中和后，将细胞在1200rpm、4℃下离心5分钟。将BAL样品用于计算总细胞数，并用于进行离心涂片(shandon，Pontoise)。Hemacolor(Merck)染色后，通过形态标准对细胞类型进行鉴定。
实验结果
相较于Syk抑制剂R406和抗-Kit抑制剂马赛替尼(用于治疗哮喘的AB Science候选药物)，就化合物001在鼠哮喘模型中对气道炎症和反应性的影响，对其进行了评估(Allergy，(2009)，64(8):1194-201)。如以上试验方案所述，用卵清蛋白对小鼠进行敏化和激发。将小鼠分成具有5只-6只动物的组，用7.5mg/Kg-60mg/Kg的抗-SYK/KIT药物(PO)每天处理两次。
表6呈现了若干实验中获得的数据的总结。
表6：在鼠哮喘模型中马赛替尼和R406与化合物001活性的比较
实验和结果的说明
卵清蛋白的敏化和激发诱发了细胞(主要是巨噬细胞和嗜酸性粒细胞)总数的明显增加。结果显示化合物001以剂量依赖性方式诱发了嗜酸性粒细胞募集作用的显著降低。在该哮喘模型中，在来自敏化小鼠的BAL中，C-kit抑制剂马赛替尼和化合物001在30mg/kg的剂量下诱发了嗜酸性粒细胞数量显著并相似的降低(表6，实验#2)，而马赛替尼比R406更强效(表6，实验#1)。确实使用较低剂量的马赛替尼或化合物001，获得了与R406相同的效果(表6，实验#1和实验#2)。根据气道炎症分析，化合物001处理以剂量依赖性方式降低了支气管高反应性。
6)类风湿性关节炎的小鼠模型中的体内抗-SYK活性
试验方案
从8周龄的关节炎小鼠对K/BxN血清池进行制备。在诱发关节炎之前，用SYK抑制剂通过两次口服给予对小鼠进行预处理两天。在第0天和第2天，通过腹腔内注射(每g体重7.5μl血清)在C57Bl/6小鼠(8周龄)中诱发关节炎。
持续用SYK抑制剂处理13天。在诱发关节炎之前和疾病进展期间，将对照小鼠用溶剂注射。将化合物溶解于含有10％Tween 80和10％1,2-丙二醇的溶液中。在给予前对其进行制备。
使用精密测径器对踝增厚程度(定义为与第0天的踝厚度的差值)进行测量。将关节炎/临床得分定义为各lim得分的总和(0没有疾病；1爪子或仅有一些足趾轻度肿胀；2明显的关节炎症；3严重的关节炎症)，满分＝12。
髓过氧化物酶活性
在炎性疾病中，髓过氧化物酶(MPO)是原代中性粒细胞中最丰富的酶，并被证明是中性粒细胞浸润的有用的可靠标志物。根据已发表的实验方案对MPO活性进行测定(American Journal of Pathology，(2000)，56(6):2169-2177)。简言之，将组织样品称重，并以50mg组织比1ml缓冲液的比例，悬浮在含有5mg/ml十六烷基三甲基溴化铵(Sigma Chemical Co.)的50mmol/L的磷酸钾缓冲液(pH 6.0)中。通过polytron组织均质器对组织进行均质化1min，将1ml倾入无菌Eppendorf管中并在12,000rpm下离心15分钟。使用微量滴定板扫描仪，在标准96孔板中，向含有7μl样品的各孔加入200μl的反应混合物(含有16.7mg的邻联茴香胺(Sigma Chemical Co.)、90μl的蒸馏H2O、10μl的磷酸钾缓冲液和50μl的1％H2O2)，并在450nm处以5min的间隔记录三个吸光度读数。
实验结果
K/BxN是自发性类风湿性关节炎的鼠模型，该模型模拟了主要在远端小关节具有滑膜炎的人类疾病的许多临床和组织学特征。如上述试验方案所述，通过在第0天和第2天腹腔内注射K/BxN小鼠的关节炎血清来诱发关节炎。与50mg/kg/天b.i.d.的马赛替尼(用于治疗类风湿性关节炎的AB Science候选药物)相比，在15和50mg/kg/天b.i.d.下，对化合物001进行测试(Arthritis Res Ther.，(2009)，11(3):R95)。将踝增厚得分和关节炎得分用于监测化合物的体内活性。数据显示化合物001以剂量依赖性方式显著改善了关节炎症状(表7)。
表7：在鼠关节炎模型中化合物001和马赛替尼的比较
在炎性疾病中，髓过氧化物酶(MPO)是原代中性粒细胞中最丰富的酶，并被证明是中性粒细胞浸润的有用的可靠标志物。已用不同剂量的化合物001对MPO活性进行了测量(表8)。
表8：化合物001处理后的MPO剂量
实验和结果的说明
表7的结果显示，以2×50mg/kg/天给予的化合物001以剂量依赖性效应极其有效地降低了关节炎得分(踝增厚得分和关节炎得分各自降低52％和68％)。在该类风湿性关节炎模型中，当与相同剂量的马赛替尼相比时，化合物001明显且显著地更加强效。
与通过50mg/kg b.i.d.剂量的化合物001处理显著降低的对照小鼠相比，在KBxN小鼠中测量到MPO活性(U/ml)增加(表8)。
7)心脏毒性：心肌细胞的细胞增殖试验和活力试验
试验方案
对原代成人心肌细胞和新生大鼠心肌细胞进行WST-1细胞存活/增殖试验(Roche Diagnostic ref N1644807)。
人心肌细胞分离自成人心脏的正常人心室组织，并能够增殖若干代。新生心室大鼠心肌细胞(P1-3)保留其收缩特性并在培养基中具有电生理学活性。将1×104个原代大鼠细胞或2×104-2.5×104个成人细胞铺于96孔板的各孔中。在药物处理之前，使细胞粘附至板5天。通过加入从0μM至10μM的1/2系列稀释的2X药物溶液，开始进行处理。使细胞在37℃下生长48h，然后在37℃下用10μl/孔的WST-1试剂孵育4h。使用扫描多孔分光光度计(MultiSkan MS，Thermo-LabSystems，法国)，通过其在450nm处的吸光度，对形成的甲臜染料的量进行定量。将无细胞的空白孔用作分光光度计的本底对照，并且所有的试验均以三个平行实验重复。
实验结果
可使用原代心肌细胞对药物的心脏毒性进行体外测定。使用体外增殖试验和存活试验，对测试物质对于大鼠和人心肌细胞的细胞毒性进行分析。将结果报道于表9中。
表9：药物诱发的人和大鼠心肌细胞的细胞毒性
人-CM＝人心肌细胞，大鼠-CM＝大鼠心肌细胞
实验和结果的说明
上述数据清楚显示在上至10μM的浓度下，化合物001对人和大鼠心肌细胞均未表现出细胞毒性作用。相反，IC50≤2.6μM的R406对人和大鼠心肌细胞均具有毒性。
8)心脏毒性：功能性hERG/Kv11.1钾通道
试验方案
使用Invitrogen提供的结合试验(Predictor hERG荧光偏振试验试剂盒PV5365)，对测试化合物在hERG钾通道上的活性进行评估。以3μM单一浓度的药物进行测试。将E-4031(公知的hERG钾通道选择性抑制剂)用作阳性对照。将数据表示为hERG抑制的百分比，100％对应于E-4031获得的抑制作用，0％对应于溶剂DMSO获得的抑制作用(阴性对照)。
实验结果
心脏毒性作用可能通过人Ether-a-go-go-相关(hERG)钾通道的非期望的堵塞而出现。因此，在小分子疗法的开发中，为了预测其潜在的心脏毒性副作用，对hERG通道功能的影响进行评估是至关重要的。将结合试验(“Predictor hERG荧光偏振试验”(Invitrogen PV5365))用于测定化合物001对于hERG功能的活性(表10)。
表10：药物诱发的hERG功能的抑制
实验和结果的说明
化合物001对hERG功能没有影响。
9)心肌细胞中的细胞内ROS
试验方案
在药物处理之前24小时，将2×103个人心肌细胞(Promocell C-12810)或4×104个新生大鼠心肌细胞(R-CM-561Lonza)接种于96孔板的各孔(黑色壁以用于荧光分析(655090Greiner Bio one))。通过加入10μM终浓度的药物溶液，开始进行处理。将5μM的阿霉素用作诱发ROS的阳性对照。药物处理8小时后，使细胞加载10μM的CM-H2DCFDA(C6827Invitrogen)1小时，接着在PBS中洗涤两次。CM-H2DCFDA是膜渗透性试剂，该试剂在ROS的存在下能够以酶促方式转化为二氢二氯荧光素(DCF)。使用荧光分光光度计(BMG Labtech)，以485nm的激发和560nm的发射对发荧光的DCF进行检测。将结果表示为对照细胞中的DCF-荧光的相对百分比。
实验结果
对预测药物的心脏毒性副作用而言，对心肌细胞中药物诱发的反应性氧类(ROS)的产生增加进行监测将会是重要的(表11)。在10μM浓度下，在8小时的药物处理之后，对人和大鼠心肌细胞中的ROS的产生进行研究。将结果表示为相对于心脏毒性化疗剂阿霉素诱发的ROS的产生(100％)的百分比。
表11：在人和大鼠心肌细胞中药物诱发的ROS的产生
人-CM＝人心肌细胞，大鼠-CM＝大鼠心肌细胞
实验和结果的说明
这些结果显示化合物001在心脏产生ROS方面没有诱发显著增加。
10)线粒体功能
试验方案
在分离自健康小鼠心脏的线粒体上，通过使用Clark氧电极监测氧消耗，来对药物诱发的线粒体毒性进行评估(Mitologics S.A.S，法国)。简言之，在37℃下，将分离的线粒体置于暴露至Clark氧电极表面的密封腔室中。氧的存在使得电极向氧监视器传递电流，氧监视器将电流放大，并将其转换成与腔室中的氧浓度直接成比例的电压输出。还通过使用基于细胞的试验(线粒体ToxGloTM试验，Promega Corporation(cat#G8000))监测线粒体ATP产生，来对药物诱发的线粒体毒性进行评估。这一多重试验同时测量了细胞膜完整性(作为细胞毒性的函数)和线粒体功能(经由ATP产生)，从而将表现出线粒体毒性与明显细胞毒性的化合物区分开来。一般毒性的特征为ATP产生降低以及膜完整性的丧失，而线粒体毒性导致ATP产生降低而膜完整性几乎没有变化。为了迫使癌细胞经由氧化磷酸化作用(crabtree效应)产生ATP，在生长于半乳糖培养基中的HepG2肿瘤细胞系上进行测试。将细胞用20μM药物处理2小时后，如制造商所述，使用PHERAstar和POLARstar OMEGA酶标仪(BMG Labteck Sarl)分别对ATP检测(发光信号)和细胞毒性(荧光信号)进行分析。
实验结果
线粒体功能障碍是药物诱发毒性的主要机制。氧消耗是线粒体功能最具信息量且最直接的量度之一。为了评估测试化合物潜在的线粒体毒性，在药物的存在下使用氧敏感探针(MitoXpress-Xtra，Luxcel Biosciences)进行O2消耗测量。
在20min的40μM和80μM浓度下的药物处理期间，对氧消耗进行分析(表12)。
表12：药物诱发的O2消耗的抑制
实验和结果的说明
数据显示化合物001未表现出对心肌线粒体ATP产生的抑制作用(104％，相较于100％DMSO对照)，并具有低的细胞毒性(11％)。这些结果显示在使用的实验条件中，化合物001没有影响HepG2细胞中的线粒体功能。
11)AMES诱变试验
试验方案
根据Ames试验，在鼠伤寒沙门氏菌菌株TA100和TA98中，对测试化合物及其代谢物(产生自大鼠肝脏S9部分)的诱变活性进行评估(Toxicology in vitro，(2001)，15:105-114)。将两种菌株用从0.5μg至1000μg的不同浓度的测试化合物进行处理，并在37℃孵育过夜。然后，相较于无S9部分的阳性对照2-硝基芴(TA98)和叠氮化钠(TA100)以及有大鼠S9混合物的2-氨基蒽(TA98和TA100)，对TA100和TA98菌株进行诱变性分析。将结果表示为相较于溶剂对照的诱变性比值。如果诱变性比值≥2，认为测试物质有活性。
实验结果
表13和表14分别报道了经化合物001处理的TA98和TA100菌株的每板回复突变菌落数。将结果表示为菌落数与阴性对照中菌落数(DMSO)的比值。如果诱变性比值≥2，测试物质有活性。
表13：经化合物001处理的TA98菌株的每板回复突变菌落数
表14：经化合物001处理的TA100菌株的每板回复突变菌落数
-S-9不存在，+S-9存在，2-NF＝2-硝基芴，NAN3＝叠氮化钠，2-AM＝2-氨基蒽
实验和结果的说明
在有S9混合物的TA98菌株中，在所有的测试剂量下均观察到回复突变数显著增加。增加超过了辅料对照值的2倍阈值，但该增加与剂量不相关。此外，在这些剂量水平下观察到的回复突变数和相应的个体回复突变菌落计数仍保持在相应辅料对照的历史范围内。因此，认为这些增加不是生物学相关的。
在研究的实验条件下，对于有或无肝脏代谢活化系统(S9混合物)的情况，测试化合物001均未显示任何诱变活性。
12)早期生物利用度测定
试验方案
进行早期筛选，以对Sprague Dawley大鼠口服或静脉内给予后所获得的测试化合物的血浆浓度进行估计。将DMSO用作口服和静脉内给予的辅料。简言之，使用4只约5周龄的雄性Sprague Dawley大鼠。PO(10mg/kg)或IV(2mg/kg)给予药物。根据定义的时间表收集血液样品，并用LC-MS/MS测定法对血液样品进行分析以用于PK参数计算。
实验结果
基于平均数据对PK参数进行计算，并呈现于表15中。
表15：基于平均数据计算的PK参数
Cmax(ng/mL)＝最大血浆浓度，Tmax(h)＝达到Cmax的第一时间，AUCt(ng/mL*h)＝在血浆浓度-时间曲线下从给予直到时间t时最后可量化浓度的面积，绝对生物利用度＝F(％)＝(AUC PO/剂量PO)/(AUC IV/剂量IV)*100。
实验和结果的说明
化合物001具有优异的药代动力学特性，生物利用度为97.5％。
在这些体外和体内研究中，发明人观察到本发明公开的式(I)化合物类极其有效地抑制了SYK激酶活性。使用毒理学和生理测试系统中已建立的模型对体外心脏毒性、诱变性和生物可用度进行评估，本发明人证明了抗-SYK的式(I)化合物具有良好的安全性概况。
虽然已参照其具体实施例对本发明进行了描述，本领域技术人员应当理解，可进行各种改变并可对等同物进行替代，而不脱离本发明的真实精神和范围。此外，可进行许多修改以使特定的情形、材料、物质组成、方法、方法步骤或步骤适于本发明的目的、精神和范围。所有的此类修改均意在落入所附权利要求的范围之内。