用于治疗和预防眼科疾病的缓释药物组合物的制作方法

本发明涉及药物组合物，其包含作为活性成分的萜类化合物衍生物，所述萜类化合物衍生物具有激活Keap1/Nrf2/ARE信号传导通路的能力，并且具有优异的抗炎作用和细胞保护作用，其中所述药物组合物对治疗和预防由氧化应激引起的眼病表现出显著效果。
背景技术：
：在检测到在能量代谢过程中产生的活性氧等后，启动宿主防御系统诸如抗氧化酶组、解毒代谢酶组等。Keap1/Nrf2/ARE信号传导通路控制该宿主防御系统的启动。已知Keap1/Nrf2/ARE信号传导通路的激活诱导其靶基因：NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQO1)、血红素加氧酶-1(HO-1)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)等(非专利文献1)。NQO1是异生素代谢的2期酶，并且对于解毒是重要的。HO-1和GCLC已知为典型的抗氧化酶。当这些酶量增加或激活时，细胞变得对毒物、氧化应激、炎症等具有抗性。因此，激活该信号传导通路的化合物被认为充当各种疾病的治疗药物(非专利文献2至5)。被靶向疾病的具体实例如下给出。已报道Nrf2缺陷小鼠在视网膜缺血/再灌注系统中表现出脆弱性(非专利文献6)。这表明该化合物对眼病的适用性，所述眼病诸如过敏性结膜疾病、病毒性结膜炎、翼状胬肉、角膜感染、角膜内皮疾病、白内障、葡萄膜炎、白塞氏病、糖尿病性视网膜病变、视网膜脱落、视网膜静脉闭塞、中心性浆液性脉络膜视网膜病变、年龄相关性黄斑变性、糖尿病性黄斑水肿、黄斑病、色素性视网膜炎、青光眼和白内障(非专利文献7和8)。已报道Nrf2缺陷小鼠表现出对顺铂诱导的肾毒性的脆弱性(非专利文献9)。这表明该化合物对肾病的适用性，所述肾病诸如急性肾炎、慢性肾炎、急性肾衰竭、慢性肾衰竭、肾病综合征、IgA肾病、糖尿病性肾病、痛风肾、肾硬化、肾盂积水、肾小管间质性肾炎和尿道感染(非专利文献10)。已报道Nrf2缺陷小鼠表现出对香烟烟雾暴露的脆弱性(非专利文献11)。这表明该化合物对呼吸系统疾病的适用性，所述呼吸系统疾病诸如支气管炎、肺炎、胸膜炎、慢性阻塞性肺病、弥漫性泛细支气管炎、肺气肿和哮喘(非专利文献12和13)。已报道Nrf2缺陷小鼠当用甲硫氨酸/胆碱缺陷膳食饲喂时可能发展非酒精性脂肪性肝炎(非专利文献14)。这表明该化合物对肝病的适用性，所述肝病诸如酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化和肝硬化(非专利文献2和15)。此外，已报道Nrf2激活剂在小鼠中表现出低血糖作用(非专利文献16)。这表明该化合物对糖尿病及其并发症(糖尿病性视网膜病变、糖尿病性肾病变和糖尿病性神经病变)等的适用性。作为激活Keap1/Nrf2/ARE信号传导通路的物质，已报道花椰菜芽中含有的萝卜硫素、用于咖喱的姜黄中含有的姜黄素等激活Nrf2并促进致癌物的解毒(非专利文献17)。此外，已报道由Honda等人发现的包含甲基2-氰基-3,12-二氧代齐墩果-1,9(11)-二烯-26-酸的5-元环三萜类化合物(非专利文献18和专利文献1至10)激活Keap1/Nrf2/ARE信号传导通路。已报道这些化合物导致产生几种抗炎蛋白和抗氧化蛋白(例如，NQO1、HO-1和GCLC)(专利文献9)。同时，已经设计了使用各种基质材料的各种形式诸如纳米颗粒、微球和棒的药物组合物，其目的是使对眼后段疾病具有如上所述的抗氧化作用的化合物的药理作用最大化，同时减少对患者的施用负担。此外，已对各种DDS技术(诸如离子电渗疗法和微针)的开发进行了研究(非专利文献19)。这表明在眼病领域中极其需要用于实现向受影响区域的药物递送、药物保留和维持以及药物有效性的专门施用方法。可能的材料是金属、不可降解的塑料和可生物降解的塑料，并且可能的形式是各种形式，诸如微球和棒。聚乳酸或聚(乳酸-共-乙醇酸)是具有优异的生物相容性和生物降解性的基质材料(非专利文献20)。由于存在一些具有该基质材料作为组分的药物产品，已经明显地建立了该基质材料的实际应用。微球或棒形式是适于作为植入物在玻璃体内施用的形状。尽管如上所述已设计了用于预防或治疗眼后段疾病的活性成分(药物)和各种DDS技术，但在非常罕见的情况下已发现具有与DDS技术相容的特性的药物。关于药物和DDS技术的组合，只有少数制品已作为药物产品推出，而在眼病领域中，仅存在地塞米松的植入物注射。这种困难由各种因素引起，然而，在许多情况下，据推测归因于剂量不足，因为不容易在一个剂量中包含维持所需的时间段所必需的足够量的药物。因此，需要开发对眼后段疾病具有优异的预防和治疗效果的化合物，和用于眼后段疾病的药物组合物，所述药物组合物含有该化合物作为活性成分，并且能够以在医疗实践中可接受的长给药时间间隔发挥其预防和治疗效果。引文列表专利文献专利文献1:WO99/65478专利文献2:WO2012/125488专利文献3:WO2011/130302专利文献4:WO2009/146216专利文献5:WO2009/129546专利文献6:WO2009/129548专利文献7:WO2009/023232专利文献8:WO2004/064723专利文献9:WO2009/089545专利文献10:WO2013/188818非专利文献非专利文献1:Int.J.Biochem.Cell.Biol.2012;44:1315-1320非专利文献2:Clin.Pharmacol.Ther.2012;92:340-348非专利文献3:Adv.Pharmacol.2012;63:43-79非专利文献4:Med.Res.Rev.2012;32:687-726非专利文献5:Mol.Aspects.Med.2011;32:234-246非专利文献6:FreeRadicBiol.Med.2011;51:216-224非专利文献7:FrontBiosci.(EliteEd.)2012;4:141-115非专利文献8:Curr.Med.Chem.2011;18:931-942非专利文献9:J.Pharmacol.Exp.Ther.2010;335:2-12非专利文献10:Int.J.Nephrol.2012;321714非专利文献11:Proc.Natl.Acad.Sci.USA2009;106:250-255非专利文献12:TrendsMol.Med.2011;17:363-371非专利文献13:Toxicol.Appl.Pharmacol.2010;244:43-56非专利文献14:FreeRadicBiol.Med.2010;48:357-371非专利文献15:J.Nutr.Biochem.2012;23:1201-1206非专利文献16:J.Biol.Chem.2010;285:40581-40592非专利文献17:TheJournalofTheJapaneseBiochemicalSociety,2009;81:447-9非专利文献18:Bioorg.Med.Chem.Lett.,1998:8:2711-2714非专利文献19:DrugDiscoveryToday2011:16:1-8非专利文献20:AdvancedDrugDliveryReviews2013;65:104-120。发明概述技术问题本发明人已经对激活Keap1/Nrf2/ARE信号传导通路并可用于预防和治疗眼后段疾病的化合物以及包含所述化合物作为活性成分的药物组合物进行了深入研究，并且因此通过以下发现而完成了本发明：特定萜类化合物衍生物具有优异的抗炎作用和细胞保护作用，且含有所述化合物作为活性成分的特定药物组合物能够以医疗实践中可接受的长给药时间间隔发挥其预防和治疗作用。问题的解决方案具体地，本发明提供(1)由下式(I)代表的萜类化合物衍生物：[式1](2)具有以下物理化学性质的萜类化合物衍生物：1)外观：无色粉末状物质2)分子式：C32H43NO53)分子量：521(通过ESI质谱法测量)4)通过高分辨率LC-ESI质谱法测量的精确质量[M+H]+如下给出：实测值：522.32062计算值：522.321405)1H-核磁共振谱：使用TMS在参照为0.00ppm的氘代氯仿中测量的1H-核磁共振谱(500MHz)如下给出：σ:0.98(3H,s),0.99(3H,s),1.00(3H,s),1.17(3H,s),1.18-1.22(1H,m),1.25(3H,s),1.28-1.30(1H,m),1.33(3H,s),1.49(3H,s),1.51-1.55(1H,m),1.62-1.66(1H,m),1.68-1.71(1H,m),1.69-1.72(1H,m),1.70-1.80(2H,m),1.77-1.79(1H,m),1.76-1.82(2H,m),1.85-1.89(2H,m),2.96(1H,d,J=5.0Hz),3.04(1H,ddd,J=4.0Hz,4.0Hz,14.0Hz),3.49(1H,dd,J=5.0Hz,11.5Hz),3.71(3H,s),5.97(1H,s),8.03(1H,s)ppm6)13C-核磁共振谱：使用TMS在参照为0.00ppm的氘代氯仿中测量的13C-核磁共振谱(125MHz)如下给出：σ:16.4(q),18.2(t),21.4(q),21.5(q),23.9(t),24.6(q),26.6(q),27.0(q),28.1(t),29.1(q),31.1(d),31.6(t),35.8(t),35.9(s),40.1(t),42.0(s),42.5(s),45.0(s),45.7(s),47.7(d),48.9(s),49.0(d),52.1(q),73.7(d),114.3(s),114.6(s),124.0(d),165.5(d),168.5(s),176.6(s),196.5(s),198.7(s)ppm7)高效液相色谱：柱：UnisonUK-C18(4.6mm(直径)×75mm(长度)；由ImtaktCorp.制造)溶剂：A：含有0.01％甲酸的10mM甲酸铵水溶液B：含有0.01％甲酸的乙腈A/B=用5/5平衡，随后线性梯度7分钟，直至A/B=1/9流速：1.0ml/min温度：40℃检测：紫外吸收λ=230nm保留时间：4.3分钟，(3)由下式(II)代表的萜类化合物衍生物：[式2](4)具有以下物理化学性质的萜类化合物衍生物：1)外观：无色粉末状物质2)分子式：C32H43NO63)分子量：537(通过ESI质谱法测量)4)通过高分辨率LC-ESI质谱法测量的精确质量[M+H]+如下给出：实测值：538.31496计算值：538.316315)1H-核磁共振谱：使用TMS在参照为0.00ppm的氘代氯仿中测量的1H-核磁共振谱(500MHz)如下给出：σ:0.96(3H,s),1.06(3H,s),1.11(3H,s),1.12(3H,s),1.19(3H,s),1.27(3H,s),1.28(3H,s),1.46(1H,d,J=13.0Hz),1.47(1H,d,J=13.0Hz),1.52-1.59(2H,m),1.61-1.65(2H,m),1.66-1.69(1H,m),1.68-1.75(1H,m),1.75(1H,dd,J=3.5Hz,14.5Hz),1.88(1H,brd,J=14.5Hz),1.98(1H,dd,J=5.5Hz,9.5Hz),2.03(1H,dd,J=3.5Hz,14.5Hz),2.38(1H,ddd,J=3.5Hz,14.0Hz,14.0Hz),2.99(1H,d,J=4.5Hz),3.10(1H,brd,J=13.5Hz),3.53(1H,brs),3.69(3H,s),4.34(1H,s),6.09(1H,s)ppm6)13C-核磁共振谱：使用TMS在参照为0.00ppm的氘代氯仿中测量的13C-核磁共振谱(125MHz)如下给出：σ:18.3(t),21.0(q),21.3(q),22.8(q),23.9(q),24.0(q),25.7(t),27.4(q),28.0(q),28.7(t),30.0(t),31.4(t),31.5(d),35.2(s),38.9(t),40.9(s),42.1(s),42.6(d),45.1(s),45.5(s),47.0(s),49.5(d),52.0(q),53.2(s),69.1(d),74.8(d),113.6(s),124.8(d),168.8(s),177.6(s),198.8(s),202.4(s)ppm7)高效液相色谱：柱：UnisonUK-C18(4.6mm(直径)×75mm(长度)；由ImtaktCorp.制造)溶剂：A：含有0.01％甲酸的10mM甲酸铵水溶液B：含有0.01％甲酸的乙腈A/B=用5/5平衡，随后线性梯度7分钟，直至A/B=1/9流速：1.0ml/min温度：40℃检测：紫外吸收λ=230nm保留时间：5.4分钟，(5)用于生产根据(1)或(2)所述的化合物的方法，其包括使用由下式(1)代表的化合物作为底物：[式3]在培养基中将该化合物与毛壳菌属的用于生物转化的菌株一起培养，所述菌株能够将所述化合物转化为根据(1)或(2)所述的化合物，并从培养物收集根据(1)或(2)所述的化合物，(6)根据(5)所述的用于生产化合物的方法，其中所述用于生物转化的菌株是属于毛壳菌属的球毛壳菌(Chaetomiumglobosum)SANK10312(保藏号NITEBP-1486)，(7)根据(5)所述的用于生产化合物的方法，其中所述用于生物转化的菌株是属于毛壳菌属的毛壳菌种SANK11867(保藏号NITEBP-01916)，(8)用于生产由下式(III)代表的萜类化合物衍生物的方法：[式4]其包括使用由式(1)代表的化合物作为底物，在培养基将该化合物与属于毛壳菌属的毛壳菌种SANK11867(保藏号NITEBP-01916)一起培养，所述菌种能够将所述化合物转化为由式(III)代表的萜类化合物衍生物，并从培养物收集由式(III)代表的萜类化合物衍生物，(9)用于生产根据(3)或(4)所述的化合物或由式(III)代表的萜类化合物衍生物的方法，其包括通过使用有机过氧化物的环氧化反应从式(1)的化合物生产由下式(2)代表的化合物：[式5]，随后使用由式(2)代表的化合物作为底物，在培养基中将该化合物与用于生物转化的菌株一起培养，所述菌株能够将所述化合物转化为根据(3)或(4)所述的化合物或由式(III)代表的萜类化合物衍生物，并从培养物收集根据(3)或(4)所述的化合物或由式(III)代表的萜类化合物衍生物，(10)根据(9)所述的方法，其中所述用于生物转化的菌株是属于芽孢杆菌属的芽孢杆菌种SANK70214(保藏号NITEBP-01914)，(11)根据(9)所述的方法，其中所述用于生物转化的菌株是属于芽孢杆菌属的巨大芽孢杆菌SANK70314(保藏号NITEBP-01915)，(12)根据(9)所述的方法，其中所述用于生物转化的菌株是通过用编码以下蛋白(a)、(b)、(c)或(d)的基因转化宿主而获得的转化体：(a)具有SEQIDNO:5的氨基酸序列的蛋白(图11)，(b)具有SEQIDNO:6的氨基酸序列的蛋白(图12)，(c)具有通过一个或若干个氨基酸的缺失、置换、插入或添加而衍生自蛋白(a)或(b)的氨基酸序列的氨基酸序列的蛋白，(d)具有与蛋白(a)或(b)的氨基酸序列具有90％或更高序列同一性的氨基酸序列的蛋白，和(e)由在严格条件下与由编码蛋白(a)或(b)的核苷酸序列组成的DNA杂交的DNA编码的蛋白，(13)根据(12)所述的方法，其中所述宿主是大肠杆菌或细菌，(14)根据(13)所述的方法，其中所述细菌是枯草芽孢杆菌，(15)具有以下核苷酸序列(f)至(j)中的任一种且编码具有针对由式(2)代表的底物化合物的羟基化酶活性的蛋白的核苷酸序列：(f)SEQIDNO:3中所述的核苷酸序列(图9)，(g)SEQIDNO:4中所述的核苷酸序列(图10)，(h)在严格条件下与包含核苷酸序列(f)或(g)中定义的任一核苷酸序列的互补序列的DNA杂交的DNA的核苷酸序列，(i)与核苷酸序列(f)或(g)中定义的任一核苷酸序列具有90％或更高同一性的核苷酸序列，和(j)核苷酸序列，其由于遗传密码的简并性在严格条件下不与包含核苷酸序列(f)或(g)中定义的任一核苷酸序列的互补序列的DNA杂交，但与(f)至(h)中任一项中定义的核苷酸序列序列编码相同的氨基酸，(16)具有以下核苷酸序列(k)至(n)中的任一种且具有针对由式(2)代表的底物化合物的羟基化酶活性的蛋白：(k)SEQIDNO:5中所述的氨基酸序列(图11)，(l)SEQIDNO:6中所述的氨基酸序列(图12)，(m)通过一个或几个氨基酸的缺失、置换和/或添加而衍生自氨基酸(k)或(l)中定义的任一氨基酸序列的氨基酸序列，和(n)与氨基酸序列(k)或(l)中定义的任一氨基酸序列具有90％或更高同一性的氨基酸序列，(17)携带根据(15)所述的核苷酸序列的自主复制或整合复制的重组质粒，(18)通过用根据(17)所述的重组质粒转化宿主而获得的转化体，(19)通过用根据(17)所述的重组质粒转化枯草芽孢杆菌而获得的转化体枯草芽孢杆菌SANK70214T，(20)通过用根据(17)所述的重组质粒转化枯草芽孢杆菌而获得的转化体枯草芽孢杆菌SANK70314T，(21)属于芽孢杆菌属的芽孢杆菌种SANK70214(保藏号NITEBP-01914)，(22)属于芽孢杆菌属的巨大芽孢杆菌SANK70314(保藏号NITEBP-01915)，(23)用于治疗或预防以下疾病的药物：眼病(眼病是过敏性结膜疾病、病毒性结膜炎、翼状胬肉、角膜感染、干眼症、角膜病症(其为角膜上皮病症和/或角膜内皮病症)、葡萄膜炎、白塞氏病、糖尿病性视网膜病变、视网膜脱落、视网膜静脉阻塞、中心性浆液性脉络膜视网膜病变、年龄相关性黄斑变性、糖尿病性黄斑水肿、黄斑病、色素性视网膜炎、青光眼或白内障)，肾病(肾病是急性肾炎、慢性肾炎、急性肾衰竭、慢性肾衰竭、肾病综合征、IgA肾病、糖尿病性肾病、痛风肾、肾硬化、肾盂积水、肾小管间质性肾炎、冠状动脉搭桥手术后肾功能降低或尿道感染)，呼吸系统疾病(呼吸系统疾病是支气管炎、肺炎、胸膜炎、慢性阻塞性肺病、急性肺损伤(ALI)、弥漫性泛细支气管炎、肺气肿或哮喘)，肝病(肝病是酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化或与肝移植相关的肝功能障碍)，脑病(脑病是阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、脑梗塞或多发性硬化)，或心脏病(心脏病是心肌梗塞)，所述药物包含(1)至(4)中任一项所述的萜类化合物衍生物作为活性成分，(24)用于治疗或预防眼病的缓释药物组合物，其包含根据(1)至(4)中任一项的萜类化合物衍生物或由式(III)代表的萜类化合物衍生物作为活性成分，其中所述缓释药物组合物通过在生理条件下缓释所述萜类化合物衍生物而将其药理作用维持1周或更长时间，并且具有可施用于玻璃体的基质材料和可施用于玻璃体的形式，(25)用于治疗或预防眼病的缓释药物组合物，其包含由式(III)代表的萜类化合物衍生物作为活性成分，其中所述缓释药物组合物通过在生理条件下缓释所述萜类化合物衍生物而将其药理作用维持1周或更长时间，并且具有可施用于玻璃体的基质材料和可施用于玻璃体的形式，(26)根据(24)或(25)所述的用于治疗或预防眼病的缓释药物组合物，其中所述基质材料是可生物降解的聚合物，(27)根据(24)或(25)所述的用于治疗或预防眼病的缓释药物组合物，其中所述基质材料是聚乳酸或聚(乳酸-共-乙醇酸)，(28)根据(24)至(27)中任一项所述的用于治疗或预防眼病的缓释药物组合物，其中所述形式是微球，(29)根据(24)至(27)中任一项所述的用于治疗或预防眼病的缓释药物组合物，其中所述形式是棒，(30)根据(24)至(29)中任一项所述的用于治疗或预防眼病的缓释药物组合物，其中所述活性成分的含量是5重量％至80重量％，(31)根据(242)至(29)中任一项所述的用于治疗或预防眼病的缓释药物组合物，其中所述活性成分的含量是20重量％至60重量％，(32)根据(24)或(25)所述的用于治疗或预防眼病的缓释药物组合物，其中所述活性成分的含量是20重量％至60重量％，所述缓释药物组合物通过在生理条件下缓释所述活性成分而将其药理作用维持1周或更长时间，所述基质材料是聚乳酸或乳酸乙醇酸，且形状是微球或棒，(33)根据(24)至(32)中任一项所述的用于治疗或预防眼病的缓释药物组合物，其中所述眼后段疾病是年龄相关性黄斑变性，和(34)根据(24)至(32)中任一项所述的用于治疗或预防眼病的缓释药物组合物，其中所述眼后段疾病是糖尿病性黄斑水肿和/或视网膜静脉闭塞。本发明的萜类化合物衍生物(I)、(II)和(III)(以下也将这些化合物统称为本发明的萜类化合物衍生物)可以形成溶剂化物。另外，本发明的萜类化合物衍生物，当放置于空气中时，可能吸水，或通过吸收水分而形成水合物。此类溶剂化物或水合物也包括在本发明中。本发明的有利效果本发明的萜类化合物衍生物具有优异的抗炎作用和细胞保护作用，且可用作眼病、肾病、呼吸系统疾病、肝病、糖尿病及其并发症、特别是眼病的治疗药物。包含本发明的萜类化合物衍生物作为活性成分的本发明的缓释药物组合物可以通过一个剂量将其药理作用维持1周或更长。本发明的缓释药物组合物能够以医疗实践中可接受的长给药时间间隔发挥其作用，其目的在于预防和治疗眼后段疾病，因此可用作用于治疗或预防眼病的缓释药物组合物。使用本发明的生物转化菌株的本发明的制备方法可以以高生物转化率从底物合成本发明的萜类化合物衍生物。附图简述[图1]图1显示萜类化合物衍生物(I)的1H-NMR谱。[图2]图2显示萜类化合物衍生物(I)的1H-13CHSQC谱。[图3]图3显示萜类化合物衍生物(I)的1H-1HNOESY谱。[图4]图4显示萜类化合物衍生物(II)的1H-NMR谱。[图5]图5显示萜类化合物衍生物(II)的1H-13CHSQC谱。[图6]图6显示萜类化合物衍生物(II)的1H-1HNOESY谱。[图7]图7显示SANK7021416SrDNA的部分核苷酸序列(SEQIDNO:1)。[图8]图8显示SANK7031416SrDNA的部分核苷酸序列(SEQIDNO:2)。[图9]图9显示具有羟基化活性的SANK70214的蛋白的DNA序列(SEQIDNO:3)。[图10]图10显示具有羟基化活性的SANK70314的蛋白的DNA序列(SEQIDNO:4)。[图11]图11显示具有羟基化活性的SANK70214的蛋白的氨基酸序列(SEQIDNO:5)。[图12]图12显示具有羟基化活性的SANK70314的蛋白的氨基酸序列(SEQIDNO:6)。[图13]图13显示SANK70214和SANK70314的系统发生树。实施方案的描述本发明的萜类化合物衍生物可以根据常规方法从微生物的培养物中分离和纯化，所述微生物能够将特定底物化合物转化为本发明的萜类化合物衍生物[在本发明中，称为用于生物转化的菌株]。1.底物化合物(1)由下式(1)代表的化合物可用作底物，用于生产本发明的由式(I)代表的萜类化合物衍生物(以下称为萜类化合物衍生物(I))和由式(III)代表的萜类化合物衍生物(以下称为萜类化合物衍生物(III))。[式6]该化合物在Bioorganic&MedicinalChemistryLetters8(1998)2711-2714中的合成方案2中被描述为化合物No.17，并且也被称为2-氰基-3,12-二氧代齐墩果-1,9-二烯-26(CDDO-Me)。在下文中，该底物化合物也称为CDDO-Me。CDDO-Me可以根据Bioorganic&MedicinalChemistryLetters7(1997)1623-1628和Bioorganic&MedicinalChemistryLetters8(1998)2711-2714中描述的合成方法制备。(2)由下式(2)代表的化合物可用作底物，用于生产本发明的由式(II)代表的萜类化合物衍生物(以下称为萜类化合物衍生物(II))和由式(III)代表的萜类化合物衍生物。[式7]由式(2)代表的化合物可以通过使用有机过氧化物的环氧化反应由CDDO-Me产生。所述有机过氧化物的实例可以包括但不特别限于过甲酸、过乙酸、过苯甲酸和3-氯过苯甲酸。优选3-氯过苯甲酸。2.用于从底物化合物生产本发明的萜类化合物衍生物的用于生物转化的菌株(1)<SANK10312>用于从底物化合物(1)生产本发明的萜类化合物衍生物(I)或萜类化合物衍生物(III)的用于生物转化的菌株没有特别限制，且优选为真菌。其实例包括属于毛壳菌属(genusChaetomium)的真菌。所述属于毛壳菌属的真菌优选为球毛壳霉，更优选球毛壳菌SANK10312(保藏号NITEBP-1486)(以下将该菌株称为“SANK10312”)。SANK10312于2000年11月从京都府的淡水中分离出来。为了鉴定真菌菌株SANK10312，使用以下4种类型的培养基，并且它们的组成如下：<PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)>Nissui马铃薯葡萄糖琼脂培养基(由NissuiPharmaceuticalCo.,Ltd.制造)39g蒸馏水1000ml<OA培养基(燕麦粉琼脂培养基)>燕麦粉提取物*1000ml琼脂20g*向30g燕麦粉中添加蒸馏水，并将混合物熬煮2小时，并通过布过滤，随后填充至1000ml以制备燕麦粉提取物。<MEA培养基(麦芽提取物琼脂培养基)>Bacto麦芽提取物(由Becton,DickinsonandCompany制造)30gBactoSoytone(由Becton,DickinsonandCompany制造)3g琼脂15g蒸馏水1000ml。<CMA培养基(玉米粉琼脂培养基)>玉米粉琼脂"Nissui"(由NissuiPharmaceuticalCo.,Ltd.制造)17g蒸馏水1000ml在下面的描述中，根据Kornerup,A.&Wanscher,J.H.1978.Methuenhandbookofcolour(第3版).EryeMethuen,London指示颜色。SANK10312的真菌学性质如下给出。将SANK10312接种至4种类型的培养基(PDA培养基、OA培养基、CMA培养基和MEA培养基)中，并观察其真菌学性质。PDA培养基中的SANK10312的生长温度为9至33℃，并且该菌株生长良好，特别是在18至31℃下。SANK10312的真菌学性质如下。通过在28℃下培养10天，OA培养基中的菌落直径为80mm或更大。菌落薄，由白色和短棉状菌丝构成，并且为灰黄色，其中在稍微远离中心的位置处同心圆地从灰棕色至黄棕色。菌落的中心部分在表面上密集地形成小颗粒状的子囊果，并且是深绿色的。反面是浅黄色至棕橙色，其中在中心部分为橄榄棕色，且在稍微远离中心的位置处同心圆地呈深棕色。通过在28℃下培养10天，MEA培养基中的菌落直径为80mm或更大。菌落薄，由白色和短棉状菌丝构成，且呈褐橙色。既不形成分生孢子，也不形成子囊果。反面与之类似。通过在28℃下培养10天，CMA培养基中的菌落直径为60mm。菌落非常薄，而在琼脂表面上只有稀疏的菌丝。菌落的表面颜色几乎是无色透明的，而反面与之类似。PDA培养基中的SANK10312的生长温度为9至33℃，并且该菌株生长良好，特别是在18至31℃下。OA培养基中的SANK10312在28℃下在第10天的微观结构如下：子囊果是深棕色至黑色，具有亚球形至椭圆形，宽度为175至240μm，高度为275至400μm，并且具有由交错菌丝和顶部的孔口组成的外壁。侧毛是直的或略微波形，淡橄榄色，直径为3.5μm或更小，而在子囊果的上部区域与末端毛成为一体。大量的末端毛是致密的，且为波形或朝向顶端松散地卷绕，并且整体上具有粗糙表面，具有隔片，和圆形顶端。末端毛基部宽度为3至4μm，且为橄榄色，并且朝向顶端变得更细和更加淡色。子囊是棍棒形，且为八孢子的。子囊孢子为柠檬形，且未熟时为淡褐色，而成熟时则为淡绿色至暗橄榄棕色，且为6.0至9.0×8.0至11.0μm。未观察到分生孢子。上述真菌学特征与关于土壤真菌纲中的Kunze球毛壳菌(ChaetomiumglobosumKunze)的描述(K.H.Domsch,W.Gams和T.-H.Anderson(2007))完全一致。因此，该真菌菌株被鉴定为球毛壳菌(Chaetomiumglobosum)并命名为球毛壳菌(Chaetomiumglobosum)SANK10312。将SANK10312在2012年12月18日以保藏号NITEBP-1486国际保藏于NITE专利微生物保藏中心(NPMD)，生物资源中心，国家技术和评价研究所(NITEPatentMicroorganismsDepositary(NPMD),BiologicalResourceCenter,NationalInstituteofTechnologyandEvaluation)(地址：2-5-8Kazusakamatari,Kisarazu-shi,Chiba,Japan)。众所周知，真菌对自然界中的或通过人工操作(例如，紫外线照射、辐射或化学试剂处理)的突变敏感。据推测，本发明的SANK10312也对此类突变敏感。在本发明中，SANK10312涵盖其所有变体。这些变体还涵盖通过遗传方法例如重组、转导或转化获得的那些。具体地，作为用于生产本发明的萜类化合物衍生物的用于生物转化的菌株的SANK10312、它们的变体以及与其无明显区别的真菌菌株都包括在SANK10312中。(2)<SANK11867>用于从底物化合物(1)生产本发明的萜类化合物衍生物(I)或萜类化合物衍生物(III)的用于生物转化的菌株没有特别限制，且优选为真菌。其实例可以包括属于毛壳菌属(genusChaetomium)的真菌。所述属于毛壳菌属的真菌优选为毛壳菌种，更优选为毛壳菌种SANK11867(保藏号NITEBP-01916)(该菌株被称为“SANK11867”)。从日本的土壤分离的SANK11867是我们公司的储备菌株。为了鉴定真菌菌株SANK11867，使用4种类型的培养基(PDA培养基、OA培养基、MEA培养基和CMA培养基)用于鉴定真菌菌株SANK10312。在下面的描述中，根据“Methuenhandbookofcolour”指示颜色。SANK11867的真菌学性质如下给出。将SANK11867接种至4种类型的培养基(PDA培养基、OA培养基、CMA培养基和MEA培养基)中，并观察其真菌学性质。PDA培养基中的SANK11867的生长温度为5至33℃，并且该菌株生长良好，特别是在13至31℃下。SANK11867的真菌学性质如下。OA培养基中的菌落在20℃下在第10天直径为80mm或更大。菌落薄，由白色和短棉状菌丝构成，且呈灰黄色。菌落的中心部分在表面上密集地形成小颗粒状的子囊果，并且是深绿色的。反面具有与表面的颜色相同的颜色。MEA培养基中的菌落在20℃下在第10天直径为80mm或更大。菌落薄，由白色和短棉状菌丝构成，且呈褐橙色。既不形成分生孢子，也不形成子囊果。反面与之类似。CMA培养基中的菌落在20℃下在第10天直径为52至55mm。菌落非常薄，而在琼脂表面上只有稀疏的菌丝。菌落的表面颜色几乎是无色透明的，而反面与之类似。OA培养基中的SANK11867在28℃下在第10天的微观结构如下：子囊果是深棕色至黑色，具有亚球形至椭圆形，宽度为145至350μm，高度为225至625μm，并且具有由交错菌丝和顶部的孔口组成的外壁。侧毛是直的或略微波形，淡橄榄色，而在子囊果的上部区域与末端毛成为一体。大量的末端毛是致密的，且为波形或朝向顶端松散地卷绕，并且整体上具有粗糙表面，具有隔片，和圆形顶端。末端毛基部宽度为2.5至6.5μm，且为橄榄色，并且朝向顶端变得更细和更加淡色。子囊是棍棒形，且为八孢子的。子囊孢子为柠檬形，且未熟时为淡褐色，而成熟时则为淡绿色至暗橄榄棕色，且为8.5至10.5×7.0至8.5μm。未观察到分生孢子。上述真菌学特征与关于土壤真菌纲中的毛壳菌属的描述(K.H.Domsch,W.Gams和T.-H.Anderson(2007))完全一致。因此，该真菌菌株被鉴定为毛壳菌种并命名为毛壳菌种SANK11867。将SANK11867在2014年8月7日以保藏号NITEBP-01916国际保藏于NITE专利微生物保藏中心(NPMD)，生物资源中心，国家技术和评价研究所(NITEPatentMicroorganismsDepositary(NPMD),BiologicalResourceCenter,NationalInstituteofTechnologyandEvaluation)(地址：2-5-8Kazusakamatari,Kisarazu-shi,Chiba,Japan)。众所周知，微生物对自然界中的或通过人工操作(例如，紫外线照射、辐射或化学试剂处理)的突变敏感。据推测，本发明的SANK11867也对此类突变敏感。在本发明中，SANK11867涵盖其所有变体。这些变体还涵盖通过遗传方法例如重组、转导或转化获得的那些。具体地，作为用于生产本发明的萜类化合物衍生物的用于生物转化的菌株的SANK11867、其变体以及与其无明显区别的真菌菌株都包括在SANK11867中。(3)<SANK70214>用于从底物化合物(2)生产本发明的萜类化合物衍生物(II)或萜类化合物衍生物(III)的用于生物转化的菌株没有特别限制，且优选为具有羟基化酶活性的细菌。其实例可以包括属于芽孢杆菌属的细菌。所述属于芽孢杆菌属的细菌优选为芽孢杆菌种，更优选为芽孢杆菌种SANK70214(保藏号NITEBP-01914)(以下称为SANK70214)。SANK7021416SrDNA的部分核苷酸序列显示于SEQIDNO:1中(图7)。SANK70214在1997年9月分离自在北海道收集的淡水样品。为了鉴定细菌菌株SANK70214，细菌培养中使用的培养基的组成如下：<TSB(PearlcoreTrypto-SoyBroth)琼脂培养基>PearlcoreTrypto-SoyBroth(EikenChemicalCo.,Ltd.)30g琼脂15g蒸馏水1000ml(在高压灭菌前将pH调节至8.0)。下面将描述SANK70214。[1]形态学性质在TSB培养基(pH8.0)中在28℃下培养24小时后观察到的细菌是细胞宽度为1μm且长度为4至5μm的杆状细菌，并且显示没有运动。[2]培养性质在TSB培养基(pH8.0)中在28℃下培养24小时后的菌落的颜色是半透明乳白色，并且不太发亮。菌落具有朝向中心以类似凸透镜形状凸起的圆形，并且具有光滑的表面和整个边缘。[3]生物学性质(1)过氧化氢酶：+(2)生长温度：14至39℃(3)革兰氏染色：阳性(4)酸产生(使用API50CH)赤藓醇：-D-阿拉伯糖：-L-阿拉伯糖：-D-核糖：+L-木糖：+甲基-β-D-吡喃木糖苷：-D-半乳糖：-D-甘露糖：+L-鼠李糖：+卫矛醇：-肌醇：-D-山梨醇：-甲基-α-D-吡喃甘露糖苷：-甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷：-N-乙酰葡糖胺：-苦杏仁苷：+水杨苷：+D-乳糖：-D-蜜二糖：-D-松三糖：-D-棉子糖：-淀粉：-糖原：-木糖醇：-龙胆二糖：+D-松二糖：-D-来苏糖：-D-塔格糖：-D-阿拉伯糖醇：-葡糖酸：-2-酮-葡萄糖酸：-(5)生长pHpH6:+pH7:+pH8:+pH9:+pH10:+(6)在含有NaCl的培养基中的生长0%:+2%:+4%:+6%:+8%:+10%:-。[4]遗传性质(1)G+C含量：40.8%(2)16SrDNA分析：作为将测定的核苷酸序列(1478bp：序列表的SEQIDNO:1)与登记在RibosomalDatabaseProject(RDP)中的各种细菌菌株的数据(Release11，(在2014年3月7日更新))进行比较的结果，与吉氏芽孢杆菌(B.gibsonii)DSM8722的同源性最高，其中同源性值为99.5％。通过Saitou和Nei的邻接法(SaitouN.和M.Nei,MolecularBiologyandEvolution,4,p.406-425(1987))进一步进行系统发生分析，以获得图13中所示的结果。通过参考Bergey'sManualofSystematicBacteriology,Vol.3(2009年发布)鉴定具有这些真菌学性质的SANK70214。从16SrDNA的核苷酸序列的分析结果来看，SANK70214显示与吉氏芽孢杆菌DSM8722的密切的系谱关系。SANK70214的形态学性质、培养性质、生物学性质和遗传性质与芽孢杆菌属的那些完全一致。因此，SANK70214被鉴定为属于芽孢杆菌属的菌株。SANK70214与显示与其最接近的系谱关系的吉氏芽孢杆菌的不同在于利用L-阿拉伯糖、D-乳糖、D-蜜二糖、D-松三糖、D-棉子糖和D-松二糖的碳源。另外，在16SrDNA的核苷酸序列的方面，SANK70214与芽孢杆菌属的已知细菌种明显不同。因此，SANK70214被命名为芽孢杆菌种SANK70214。将SANK70214在2014年8月7日以保藏号NITEBP-01914国际保藏于NITE专利微生物保藏中心(NPMD)，生物资源中心，国家技术和评价研究所(NITEPatentMicroorganismsDepositary(NPMD),BiologicalResourceCenter,NationalInstituteofTechnologyandEvaluation)(地址：2-5-8Kazusakamatari,Kisarazu-shi,Chiba,Japan)。众所周知，微生物对自然界中的或通过人工操作(例如，紫外线照射、辐射或化学试剂处理)的突变敏感。据推测，本发明的SANK70214也对此类突变敏感。在本发明中，SANK70214涵盖其所有变体。这些变体还涵盖通过遗传方法例如重组、转导或转化获得的那些。具体地，作为用于生产本发明的萜类化合物衍生物的用于生物转化的菌株的SANK70214、其变体以及与其无明显区别的细菌菌株都包括在SANK70214中。(4)<SANK70314>作为用于从底物化合物(2)生产本发明的萜类化合物衍生物(II)或萜类化合物衍生物(III)的用于生物转化的菌株的属于芽孢杆菌属细菌的另一个实例可以优选包括巨大芽孢杆菌SANK70314(保藏号NITEBP-01915)(以下称为SANK70314)。SANK7031416SrDNA的部分核苷酸序列显示于SEQIDNO:2(图8)。SANK70314在2013年9月分离自在冲绳县收集的土壤样品。为了鉴定细菌菌株SANK70314，细菌培养中使用的培养基的组成如下：<NA(Pearlcore营养琼脂)培养基>Pearlcore营养琼脂(EikenChemicalCo.,Ltd.)35g蒸馏水1000ml。下面将描述SANK70314。[1]形态学性质在营养琼脂(由EikenChemicalCO.,Ltd.制造)中在28℃下培养24小时后观察到的细菌是细胞宽度为1μm且长度为4至5μm的杆状细菌，并且显示没有运动。[2]培养性质在营养琼脂中在28℃下培养24小时后的菌落的颜色是不透明的乳白色，并且不太发亮。菌落具有朝向中心以类似凸透镜形状凸起的圆形，并且具有光滑的表面和整个边缘。[3]生物学性质(1)过氧化氢酶：+(2)生长温度：13至46℃(3)革兰氏染色：阳性(4)碳源的利用(使用API50CH)甘油：+赤藓醇：-D-阿拉伯糖：-D-核糖：+L-木糖：-D-阿东糖醇：-甲基-β-D-吡喃木糖苷：-D-半乳糖：+D-果糖：+L-山梨糖：-L-鼠李糖：-卫矛醇：-肌醇：-D-山梨醇：-甲基-α-D-吡喃甘露糖苷：-N-乙酰葡糖胺：+苦杏仁苷：+熊果苷：+D-纤维二糖：+D-麦芽糖：+D-乳糖：-D-蜜二糖：+D-蔗糖：+D-海藻糖：+菊粉：-D-松三糖：+D-棉子糖：+木糖醇：-龙胆二糖：+D-松二糖：+D-来苏糖：-D-塔格糖：-D-岩藻糖：-L-岩藻糖：-D-阿拉伯糖醇：-L-阿拉伯糖醇：-葡糖酸：-2-酮-葡萄糖酸：-5-酮-葡萄糖酸：-(5)生长pHpH6:+pH7:+pH8:+pH9:-。[4]遗传性质(1)G+C含量：38.0%(2)16SrDNA分析：作为将测定的核苷酸序列(1383bp：序列表的SEQIDNO:2)与登记在RibosomalDatabaseProject(RDP)中的各种细菌菌株的数据(Release11，(在2014年3月7日更新))进行比较的结果，与巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)IAM13418的同源性最高，其中同源性值为99.9%。通过Saitou和Nei的邻接法(SaitouN.和M.Nei,MolecularBiologyandEvolution,4,p.406-425(1987))进一步进行系统发生分析，以获得图13中所示的结果。通过参考Bergey'sManualofSystematicBacteriology,Vol.3(2009年发布)鉴定具有这些真菌学性质的SANK70314。从16SrDNA的核苷酸序列的分析结果来看，SANK70314显示与巨大芽孢杆菌IAM13418的非常密切的系谱关系。SANK70314的形态学性质、培养性质、生物学性质和遗传性质与巨大芽孢杆菌的那些完全一致。因此，SANK70314被鉴定为巨大芽孢杆菌并命名为巨大芽孢杆菌SANK70314。将SANK70314在2014年8月7日以保藏号NITEBP-01915国际保藏于NITE专利微生物保藏中心(NPMD)，生物资源中心，国家技术和评价研究所(NITEPatentMicroorganismsDepositary(NPMD),BiologicalResourceCenter,NationalInstituteofTechnologyandEvaluation)(地址：2-5-8Kazusakamatari,Kisarazu-shi,Chiba,Japan)。众所周知，微生物对自然界中的或通过人工操作(例如，紫外线照射、辐射或化学试剂处理)的突变敏感。据推测，本发明的SANK70314也对此类突变敏感。在本发明中，SANK70314涵盖其所有变体。这些变体还涵盖通过遗传方法例如重组、转导或转化获得的那些。具体地，作为用于生产本发明的萜类化合物衍生物的用于生物转化的菌株的SANK70314、其变体以及与其无明显区别的细菌菌株都包括在SANK70314中。(5)<SANK70214的转化菌株和SANK70314的转化菌株>为了从底物化合物(2)生产本发明的萜类化合物衍生物(III)，从上述微生物测定编码参与底物化合物(2)的羟基化的蛋白的核苷酸序列，并且可以使用表达本发明的蛋白的微生物。具体地，从SANK70214和SANK70314中的每一种测定将底物化合物(2)选择性羟基化成萜类化合物衍生物(III)的蛋白，并且可以使表达该蛋白的微生物作用于底物化合物(2)以生产萜类化合物衍生物(III)。<本发明的蛋白>本发明的蛋白可以通过获得和使用编码该蛋白的基因来制备。以下，将具体描述用于获得本发明的基因的方法和用于制备本发明的蛋白的方法。<用于获得本发明的基因的方法>通过常规方法从SANK70214和SANK70314中的每一种提取基因组DNA，并使用基因组测序仪分析全基因组。可以鉴定具有羟基化能力的蛋白以获得本发明的基因。本发明的羟基化酶相关基因的获得具有不能通过本领域技术人员通常尝试的方法容易地解决的问题。具有将底物化合物(2)转化为萜类化合物衍生物(III)的能力的微生物所属的芽孢杆菌属被认为在基因组中保留了参与羟基化的多个基因。此外，参与羟基化的酶的正常功能需要铁氧还蛋白和向这些酶提供电子的还原酶。因此，似乎难以通过仅使用羟基化酶的基因的通常的Southern杂交或简并PCR获得目标羟基化酶。因此，通过使用下一代测序仪的基因组分析来全面分析这些基因，以找到本发明中涉及的羟基化酶的基因的编码核苷酸序列。由此获得的编码具有针对底物化合物(2)的羟基化活性的本发明的每种蛋白的核苷酸序列显示于以下(f)、(g)、(h)、(i)或(j)中：(f)编码具有羟基化活性的SANK70214的蛋白的SEQIDNO:3中所述的核苷酸序列(图9)，(g)编码具有羟基化活性的SANK70314的蛋白的SEQIDNO:4中所述的核苷酸序列(图10)，(h)作为由(f)或(g)代表的DNA的改变形式的DNA，其具有在严格条件下与由(f)或(g)代表的任何DNA杂交的核苷酸序列，且编码具有针对底物化合物(2)的羟基化活性的蛋白，(i)DNA，其由于遗传密码的简并性在严格条件下不与由(f)或(g)代表的任何DNA杂交，但编码与由(f)或(g)代表的任何DNA编码的蛋白的氨基酸序列相同的氨基酸序列的蛋白，和(j)DNA，其具有通过一个或几个碱基的缺失、置换和/或添加而衍生自由(f)代表的DNA的核苷酸序列的核苷酸序列，且编码具有针对底物化合物(2)的羟基化活性的蛋白。(k)衍生自具有针对底物化合物(2)的羟基化活性的SANK70214的本发明的蛋白的实例包括以下蛋白：-具有SEQIDNO:5的氨基酸序列的蛋白(图11)，-具有通过一个或几个氨基酸的缺失、置换、插入或添加而衍生自SEQIDNO:5的蛋白的氨基酸序列的氨基酸序列的蛋白，-具有与SEQIDNO:5的蛋白的氨基酸序列具有90％序列同一性的氨基酸序列的蛋白，和-由在严格条件下与由编码SEQIDNO:5的蛋白的核苷酸序列组成的DNA杂交的DNA编码的蛋白。(l)衍生自具有针对底物化合物(2)的羟基化活性的SANK70314的本发明的蛋白的实例包括以下蛋白：-具有SEQIDNO:6的氨基酸序列的蛋白(图12)，-具有通过一个或几个氨基酸的缺失、置换、插入或添加而衍生自SEQIDNO:6的蛋白的氨基酸序列的氨基酸序列的蛋白，-具有与SEQIDNO:6的蛋白的氨基酸序列具有90％序列同一性的氨基酸序列的蛋白，和-由在严格条件下与由编码SEQIDNO:6的蛋白的核苷酸序列组成的DNA杂交的DNA编码的蛋白。3.本发明的转化体通过用蛋白编码基因(f)、(g)、(h)、(i)或(j)通过通常的基因工程改造方法转染宿主而获得本发明的转化体。具体地，制备允许编码本发明的转化体的基因在宿主细胞中表达的表达载体，并且可以用该表达载体转染宿主细胞，使得转化宿主细胞以制备转化体。用于从底物化合物(2)生产本发明的萜类化合物衍生物(III)的转化体是表达将底物化合物(2)羟基化成萜类化合物衍生物(III)的蛋白的转化体。所述转化体没有特别限制，且优选为以大肠杆菌作为宿主表达蛋白(k)或(l)的转化体，更优选以枯草芽孢杆菌作为宿主表达蛋白(k)或(l)的转化体，进一步优选枯草芽孢杆菌SANK70214T(以下称为SANK70212T)或枯草芽孢杆菌SANK70314T(以下称为SANK70314T)。用于所述转化体的宿主没有特别限制，并且可以使用微生物、藻类、植物或动物。针对转化效率，宿主优选为微生物。用作宿主的微生物优选为大肠杆菌或枯草芽孢杆菌，更优选枯草芽孢杆菌。表达载体基于的载体可以是可以单独或与编码具有铁氧还蛋白功能的蛋白的DNA一起将编码具有针对底物化合物(2)的羟基化活性的蛋白的DNA转移至宿主、使得可以在宿主细胞中表达该基因的任何载体。例如，可以使用具有适合于待转染的宿主类型的启动子或终止子的表达控制区且具有复制起点、选择标记等的载体。或者，所述载体可以是在染色体外自主生长或复制的载体，诸如质粒，或可以是整合至染色体中的载体。转化方法没有特别限制，只要该方法能够用目标基因转染宿主。例如，可以使用利用钙离子的方法，一般感受态细胞转化法(JournalofBacteriology,93,1925(1967))、原生质体转化法(MolecularandGeneralGenetics,168,111(1979))、电穿孔(FEMSMicrobiologyLetters,55,135(1990))或LP转化法(T.Akamatsu和J.Sekiguchi,ArchivesofMicrobiology,1987,146,p.353-357;以及T.Akamatsu和H.Taguchi,Bioscience,Biotechnology,andBiochemistry,2001,65,4,p.823-829)。可以通过使用选择标记等来选择携带目标基因片段的转化体。例如，作为在转化期间将载体来源的药物抗性基因与目标DNA片段一起转移至宿主细胞中的结果，可以通过使用由转化体获得的药物抗性作为指标来进行选择。或者，目标DNA片段的转移也可以通过以基因组作为模板的PCR等来确认。4.培养方法和纯化方法(本发明的萜类化合物衍生物的生产和纯化)上述用于生物转化的菌株可以使用通常用于生产微生物的次生代谢物的培养基来培养。此类培养基含有微生物可利用的碳源、氮源、无机盐、非常少量的生长因子、痕量金属等。碳源的实例包括葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、甘油、糊精、燕麦、黑麦、淀粉、马铃薯、玉米粉、棉籽油、糖蜜、柠檬酸和酒石酸。这些碳源可以单独使用或组合使用。添加的碳源的量通常在培养基量的1至10重量％的范围内。含有蛋白及其水解产物或无机盐的物质通常用作氮源。此类氮源的实例包括大豆粉、糠、花生粉、棉籽粉、酪蛋白水解物、Pharmamin、鱼粉、玉米浆、蛋白胨、肉提取物、酵母、酵母提取物、麦芽提取物、硝酸钠、硝酸铵和硫酸铵。这些氮源可以单独使用或组合使用。添加的氮源的量通常在培养基量的0.2至10重量％的范围内。另外，可以向培养基中添加能够提供钠、钾、镁、铵、钙、磷酸根、硫酸根、氯、碳酸根等离子的盐。可以向培养基中进一步添加微生物可利用的维生素诸如维生素B1和生物素，促进真菌体增殖的物质诸如硫胺素，以及金属诸如锰或钼的盐。在液体培养基的情况下，可以向培养基中添加消泡剂诸如硅油、聚亚烷基二醇醚、植物油、动物油或表面活性剂以防止培养基的发泡。用于培养用于生物转化的菌株的液体培养基的pH取决于本发明的真菌菌株和萜类化合物衍生物的pH稳定性，等。用于生物转化的菌株的培养温度取决于本发明的真菌菌株和萜类化合物衍生物的热稳定性等。在用于生物转化的菌株是SANK10312菌株的情况下，培养温度优选为9至33℃，更优选20至35℃。在用于生物转化的菌株是SANK11867的情况下，培养温度优选为5至33℃，更优选13至31℃。在用于生物转化的菌株是SANK70214的情况下，培养温度优选为14至39℃，更优选20至35℃。在SANK70314的情况下，培养温度优选为13至46℃，更优选20至40℃。在用于生物转化的菌株是SANK70214T的情况下，培养温度优选为5至50℃，更优选27至37℃。在SANK70314T的情况下，培养温度优选为5至50℃，更优选27至37℃。用于培养用于生物转化的菌株的方法的实例可以包括但不特别限于使用固体培养基的培养方法、搅拌培养方法、振荡培养方法、通气培养方法和通气搅拌培养方法。所述培养方法优选为搅拌培养方法、振荡培养方法、通气培养方法和通气搅拌培养方法，更优选振荡培养方法。对于工业规模的培养，更优选通气搅拌培养方法。用于生物转化的菌株的培养通常使用少量以用于生物转化的菌株的倾斜培养物接种的培养基从种子培养开始，并且通过再次以更大规模进行任选的种子培养，随后以更大规模在最后阶段主要培养来实现。在以小规模培养用于生物转化的菌株的情况下，使用锥形烧瓶等进行种子培养，并且如果需要，再次以更大规模进行种子培养，随后使用锥形烧瓶等进行主要培养。在以大规模培养用于生物转化的菌株的情况下，优选使用装备有搅拌装置和通气装置的发酵罐或罐。使用此类装置允许在发酵罐或罐中制备和灭菌培养基。该方法适用于大规模生产。添加底物后的用于生物转化的菌株的培养时间取决于真菌或细菌菌株。在用于生物转化的菌株是SANK10312的情况下，培养时间优选为2至14天，更优选3至10天。在用于生物转化的菌株是SANK11867的情况下，培养时间优选为2至14天，更优选3至10天。在用于生物转化的菌株是SANK70214的情况下，培养时间优选为1至10天，更优选3至7天。在SANK70314的情况下，培养时间优选为1至10天，更优选1至7天。在用于生物转化的菌株是SANK70214T的情况下，培养时间优选为1至168小时，更优选2至24小时。在SANK70314T的情况下，培养时间优选为1至168小时，更优选8至96小时。培养结束后，可以从获得的培养物、其中含有的真菌体和/或培养上清液中提取本发明的萜类化合物衍生物。离心法或使用硅藻土作为助滤剂的过滤法可用于从培养上清液中分离真菌体和其它固体物质。对于本发明的萜类化合物衍生物的提取，可以利用该化合物的物理化学性质。培养滤液或培养上清液中含有的本发明的萜类化合物衍生物可以用水不混溶的有机溶剂诸如乙酸乙酯、氯仿、二氯乙烷、二氯甲烷或丁醇或这些溶剂中的两种或更多种的混合溶剂提取。蒸馏掉有机溶剂之后，真菌体中含有的本发明的萜类化合物衍生物可以使用50至90％丙酮水溶液或甲醇水溶液从其中提取，并且以与萜类化合物衍生物存在于培养滤液或培养上清液的情况下相同的方式提取。可以通过向整个培养物中添加20至80％、优选40至60％、更优选50％的丙酮或甲醇来提取整个培养物中含有的本发明的萜类化合物衍生物。提取完成后，以硅藻土作为助滤剂过滤提取物，并且可以以与其中萜类化合物衍生物存在于培养滤液或培养上清液中的情况相同的方式从获得的可溶性物质中提取萜类化合物衍生物。用于从提取物中分离本发明的萜类化合物衍生物的纯化可以通过纯化技术诸如吸附色谱法、离子交换色谱法、分配色谱法、反相色谱法或高效液相色谱法(以下称为HPLC)来进行。吸附色谱法如下进行：使含有本发明的萜类化合物衍生物的提取物与吸附剂接触，以通过吸附除去杂质；或吸附本发明的萜类化合物衍生物以除去杂质，随后洗脱。吸附剂的实例可以包括活性炭，AmberliteXAD-2，AmberliteXAD-4和AmberliteXAD-16(都由RohmandHaasCompany制造)，以及DiaionHP-20，DiaionHP-21，DiaionHP-20SS，SepabeadsSP-207，SepabeadsSP-850和SepabeadsSP-700(都由MitsubishiChemicalCorp.制造)。用于洗脱本发明的吸附萜类化合物衍生物的溶剂的实例可以包括有机溶剂诸如甲醇、丙酮、丁醇和乙腈及其与水的混合溶液。离子交换色谱法通过利用本发明的萜类化合物衍生物表现为中性物质的事实来进行。具体地，使含有本发明的萜类化合物衍生物的提取物与例如离子交换载体接触，以使得当本发明的萜类化合物衍生物从其中通过时，不需要的物质被吸附至载体上。离子交换载体的实例可以包括DEAE-Sephadex，DEAE-Sepharose，QAE-Sephadex，CM-Sephadex和SP-Sephadex(都由GEHealthcareLifeSciences制造)，DEAE-Toyopearl，QAE-Toyopearl，CM-Toyopearl和SP-Toyopearl(都由TosohCorp.制造)，DuoliteA113LF，DuoliteA116，DuoliteA368S，DuoliteA375LF，DuoliteC20J和DuoliteC433LF(都由DiamondShamrockChemicalCompany制造)，AmberliteIRA-67，AmberliteIRA-98，AmberliteIRA400J，AmberliteIRA458RF，AmberliteIR120B和AmberliteIRC76(都由RohmandHaasCompany制造)和Dowex50WX4，DowexHCR-S，Dowex1×4，Dowex22，Dowex66和DowexSBR-P(由TheDowChemicalCompany制造)。用于分配色谱法的载体的实例可以包括硅胶、TSKgelToyopearlHW-40F(由TosohCorp.制造)、SephadexLH-20(由GEHealthcareLifeSciences制造)和纤维素(由MerckKGaA制造)。用于反相色谱法的载体的实例可以包括Cosmosil140C18(由NacalaiTesque,Inc.制造)和ODS-A(由YMCCo.,Ltd.制造)。用于HPLC的柱的实例可以包括反相柱，诸如ShodexAsahipakODP50-4E(由ShowaDenkoK.K.制造)、YMCpackODS-A(由YMCCo.,Ltd.制造)、CAPCELLPAKUG120(由ShiseidoCo.,Ltd.制造)和UnisonC18(由ImtaktCorp.制造)。本发明的萜类化合物衍生物可以单独或以适当的组合使用这些纯化技术进行分离。如果需要，可以重复相同的纯化技术。可以选择适合于纯化的方法，诸如柱色谱法、批量色谱法、薄层色谱法，以便进行每种纯化技术。获得的本发明的萜类化合物衍生物的立体结构源自起始化合物的立体结构。使用核Overhauser效应光谱法(NOESY)测定新引入起始化合物的取代基的空间结构。例如，从起始化合物的立体结构、(2)中所述的物理化学性质和下文实施例1中所述的NOESY的测量结果测定具有以上(2)中所述的物理化学性质的萜类化合物衍生物(I)的立体结构。同样地，从起始化合物的空间结构、(4)中所述的物理化学性质、(6)中所述的物理化学性质和下文实施例3中所述的NOESY的测量结果测定具有以上(4)中所述的物理化学性质的萜类化合物衍生物(II)的空间结构。5.包含本发明的萜类化合物衍生物的药物如上所述纯化的本发明的萜类化合物衍生物具有激活Keap1/Nrf2/ARE信号传导通路的作用，并且具有抗炎作用和细胞保护作用。Keap1/Nrf2/ARE信号传导通路的激活诱导其靶基因：NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQO1)、血红素加氧酶-1(HO-1)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)等(非专利文献1)。当这些酶的量增加或被激活时，细胞变得对毒性、氧化应激、炎症等具有抗性。因此，本发明的萜类化合物衍生物可用作疾病诸如眼病、肾病、肝病和糖尿病及其并发症的预防或治疗剂。眼病的实例包括疾病诸如过敏性结膜疾病、病毒性结膜炎、翼状胬肉、角膜感染、干眼症、角膜病症(其为角膜上皮病症和/或角膜内皮病症)、葡萄膜炎、白塞氏病、糖尿病性视网膜病变、视网膜脱落、视网膜静脉阻塞(RVO)、中心性浆液性脉络膜视网膜病变、年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、黄斑病、色素性视网膜炎、青光眼和白内障。肾病的实例包括由肾脏问题引起的疾病，诸如急性肾炎、慢性肾炎、急性肾衰竭、慢性肾衰竭、肾病综合征、IgA肾病、糖尿病性肾病、痛风肾、肾硬化、肾盂积水、肾小管间质性肾炎、冠状动脉搭桥手术后肾功能降低和尿道感染。呼吸系统疾病的实例包括支气管炎、肺炎、胸膜炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、急性肺损伤(ALI)、弥漫性泛细支气管炎、肺气肿和哮喘。肝病的实例包括酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化和与肝移植相关的肝功能障碍。脑病的实例包括阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、脑梗塞和多发性硬化(MS)。心脏病的实例包括心肌梗塞。糖尿病及其并发症的实例包括糖尿病性视网膜病、糖尿病性肾病和糖尿病性神经病。在这些疾病中，本发明的萜类化合物衍生物特别可用作以下疾病的预防或治疗剂：作为眼病的干眼病、角膜病症(其为角膜上皮疾病和/或角膜内皮疾病)、葡萄膜炎、糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉闭塞、年龄相关性黄斑变性、糖尿病性黄斑水肿或青光眼；作为肾病的糖尿病性肾病；作为呼吸道疾病的慢性阻塞性肺病或急性肺损伤(ALI)；作为肝病的非酒精性脂肪性肝炎或与肝移植相关的肝功能障碍；或作为脑病的脑梗塞或多发性硬化。这些疾病中，本发明的萜类化合物衍生物进一步优选作为干眼病的预防或治疗剂、角膜上皮和/或角膜内皮病症的预防或治疗剂、年龄相关性黄斑变性的预防或治疗剂、糖尿病性黄斑水肿和/或视网膜静脉阻塞的预防或治疗剂、慢性阻塞性肺病的预防或治疗剂、脑梗塞的预防或治疗剂或多发性硬化的预防或治疗剂。在使用本发明的萜类化合物衍生物作为药物的情况下，该药物可以以各种形式施用。剂型取决于制剂、年龄、性别、疾病等。例如，口服施用片剂、丸剂、散剂、粉剂、糖浆剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂或胶囊剂。例如，将注射剂静脉内、肌内、皮内、皮下、玻璃体内、前房内、结膜下、至Tenon囊或腹膜内施用。将滴眼剂滴入眼睛。眼用软膏用于眼粘膜。直肠内施用栓剂。这些施用方法中的任一种均可以通过施用缓释药物组合物来实现。在使用本发明的萜类化合物衍生物作为用于眼病的药物的情况下，口服施用是可能的。然而，一般来讲，通常采用滴入眼睛中、玻璃体内施用、前房内施用、结膜下施用或向Tenon囊施用，其允许直接施用至作用点。含有本发明的萜类化合物衍生物作为活性成分的各种药物组合物可以根据常规方法使用通常可用于药物制剂领域中的常规添加剂诸如赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、增溶剂、矫味剂和包衣剂来生产。6.包含本发明的萜类化合物衍生物作为活性成分的用于治疗和/或预防眼病的缓释药物组合物包含本发明的萜类化合物衍生物作为活性成分的用于治疗和/或预防眼病的缓释药物组合物(以下也称为本发明的缓释药物组合物)具有可施用至玻璃体的基质材料和可施用至玻璃体的形式，并且直接施用至眼睛中。将药物直接施用至眼睛中给患者带来很大的负担。本发明的缓释药物组合物可以通过在生理条件下缓释所述萜类化合物衍生物而将其药理作用维持1周或更长时间。因此，可以降低施用频率，且减轻对患者的负担。本发明的缓释药物组合物诱导参与抑制毒性、氧化应激、炎症等的酶，并因此保护视网膜组织，并且可用作用于治疗或预防眼后段疾病的局部施用型缓释药物组合物。眼后段疾病的实例包括年龄相关性黄斑变性、糖尿病性黄斑水肿和糖尿病性视网膜病变。使用可生物降解的聚合物作为本发明的缓释药物组合物的基质材料。所述可生物降解的聚合物的实例包括聚乳酸、聚乙醇酸和聚(乳酸-共-乙醇酸)。优选聚乳酸或聚(乳酸-共-乙醇酸)。这些可生物降解的聚合物可以根据本领域已知的生产方法来制备，或者可以使用分子量或共聚比不同的各种市售产品(J.BiomaterialsNanobiotechnology2012:3:208-252;和BiomedicalEngineering,TrendsinMaterialsScience,Laskovski,A(Ed.)pp.489-512,InTech,Rijeka,2011)。本发明的缓释药物组合物的形式包括旨在用于以粉末形式缓释的粉末药物组合物以及均匀地或以颗粒状态分散于基质材料中的本发明的萜类化合物衍生物的棒、片、膜、盘或微囊的缓释形式。其中，微球或棒形式优选为用于治疗或预防眼后段疾病的缓释药物组合物的形式。本发明的缓释药物组合物中含有的本发明的萜类化合物衍生物的量没有特别限定，且优选为5至80重量％，更优选20至60重量％。以微球的形式生产本发明的缓释药物组合物的方法的实例包括在水中的干燥方法(例如，o/w、w/o和w/o/w方法)、相分离方法、喷雾干燥法、使用超临界流体的造粒法，与之等效的方法，以及下文提及的实施例中描述的方法(R.T.Liggins,H.M.Burt/InternationalJournalofPharmaceutics222(2001)19-33;K.Andreas等人/ActaBiomaterialia7(2011)1485-1495;J.Herberger等人/JournalofControlledRelease90(2003)181-195;和A.J.Thote,R.B.Gupta/Nanomedicine:Nanotechnology,Biology,andMedicine1(2005)85-90)。以聚合物植入体诸如棒、片、膜、圆盘或微球的形式生产本发明的缓释药物组合物的方法的实例包括这样的方法，其涉及适当添加表面活性剂或乳化剂作为形成溶剂，和通过使用各种技术诸如熔融挤出、注射成型、压缩成型(包括压片)或辊压缩使用有机溶剂将具有所需形状的缓释药物组合物的内核加工成所需形状或结构。使用有机溶剂诸如丙酮(其被分类为FDA3级溶剂(毒性低且允许通过最少使用而除去残留溶剂的溶剂))作为成型中使用的有机溶剂。在不使用有机溶剂的情况下加工本发明的缓释药物组合物的内核的情况下，该加工可以在这样的条件下进行：其中将本发明的萜类化合物衍生物与整个基质材料可生物降解的聚合物或仅聚合物的特定位点彻底混合，并分散或溶解于其中。7.施用本发明的萜类化合物衍生物的剂量和频率本发明的萜类化合物衍生物的剂量根据症状、年龄等而不同，且对于局部施用，优选为0.0001μg/位点至100μg/位点。用于全身施用的剂量优选为0.00001mg/kg至10mg/kg。含有本发明的萜类化合物衍生物作为活性成分的药物的施用频率为每天数次、每天一次或每几天一次。作为参考，所述缓释药物组合物每周施用一次、每四周施用一次、每三个月施用一次或每六个月施用一次。接下来，将参考药物组合物的实施例、测试实施例和配制实施例更详细地描述本发明。然而，本发明不限于此。实施例(实施例1)萜类化合物衍生物(I)和萜类化合物衍生物(III)的生产(用于生物转化的菌株：SANK10312)[式8](1)用于生物转化的毛壳属菌株的培养将20ml具有下表1中所示的组成的种子培养基置于四个100-ml锥形烧瓶中的每个中，在121℃下灭菌20分钟，然后冷却至室温。将1mlSANK10312的孢子悬浮液接种至每个烧瓶中的培养基中，并在23℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养2天。在下文中，将获得的培养溶液称为“种子培养溶液”。(表1)表1.用于SANK10312的种子培养基的组成*1NissanDisfoamCB-442(由NOFCorp.制造)*2pH未调整。将80ml具有下表2中所示的组成的主要培养基置于13个500-ml锥形烧瓶中的每个中，在121℃下灭菌20分钟，然后冷却至室温。将4mlSANK10312的种子培养溶液无菌接种至每个烧瓶中的培养基中，并在23℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养2天。将0.8ml以10mg/ml的浓度溶解于二甲基亚砜中的CDDO-Me溶液添加至每个烧瓶中的该培养溶液中，并将混合物在23℃下在旋转振荡器中以210rpm再次培养6天。(表2)表2.主要培养基的组成*1NissanDisfoamCB-442(由NOFCorp.制造)*2pH未调整。(2)萜类化合物衍生物(I)和萜类化合物衍生物(III)的分离在下面给出的条件下通过HPLC监测本实施例中的萜类化合物衍生物(I)和萜类化合物衍生物(III)的行为。柱：UnisonUK-C18(4.6mm(直径)×75mm(长度)；由ImtaktCorp.制造)溶剂：A：含有0.01％甲酸的10mM甲酸铵水溶液B:含有0.01％甲酸的乙腈A/B=用5/5平衡，随后线性梯度7分钟，直至A/B=1/9流速：1.0ml/min检测：紫外吸收λ=230nm保留时间：4.3分钟(萜类化合物衍生物(I))4.9分钟(萜类化合物衍生物(III))。向1,040ml段落(1)中获得的培养溶液中添加等量的丙酮，并使混合物在室温下放置1小时。然后，通过在减压下过滤来除去菌丝体，以获得2,000ml滤液。向该滤液中添加1L乙酸乙酯进行液-液分布，以获得含有目标化合物的有机层。将获得的有机层用饱和盐水洗涤，并经无水硫酸钠干燥，并将溶剂蒸发至干燥，以获得549.9mg含有萜类化合物衍生物(I)和萜类化合物衍生物(III)的粉末。将275mg该粉末的等分试样溶解于1.37ml甲醇中。将0.2ml该溶液的等分试样施加至预先用0.01％甲酸水溶液：含有0.01％甲酸的乙腈=45:55的溶剂平衡的HPLC柱(UnisonUS-C18；20mm(直径)×150mm(长度)；由ImtaktCorp.制造)，随后用0.01％甲酸水溶液：含有0.01％甲酸的乙腈=45:55的溶剂以18.0ml/min的流速洗脱。在波长λ=230nm处检测目标化合物的紫外吸收。将在9.1分钟的保留时间处出现的峰(萜类化合物衍生物(I))和12.3分钟的保留时间处出现的峰(萜类化合物衍生物(III))各自分离7次。将每种化合物的级分溶液合并，并在减压下浓缩，并将获得的悬浮液冻干，以获得1.4mg作为无色粉末的萜类化合物衍生物(I)和16.2mg作为无色粉末的萜类化合物衍生物(III)。使用二维核磁共振光谱法(NOESY)测定本发明的获得的萜类化合物衍生物(I)的立体结构。在萜类化合物衍生物(I)的二维核磁共振光谱法(NOESY)中，观察到第19位的β-质子和第21位的β-质子之间的相关性。因此确定其立体结构由式(I)所代表。萜类化合物衍生物(I)的物理化学性质的测量值1)外观：无色粉末状物质2)分子式：C32H43NO53)分子量：521(通过ESI质谱法测量)4)通过高分辨率LC-ESI质谱法测量的精确质量[M+H]+如下给出：实测值：522.32062计算值：522.321405)1H-核磁共振谱：使用TMS在参照为0.00ppm的氘代氯仿中测量的1H-核磁共振谱(500MHz)如下给出：σ:0.98(3H,s),0.99(3H,s),1.00(3H,s),1.17(3H,s),1.18-1.22(1H,m),1.25(3H,s),1.28-1.30(1H,m),1.33(3H,s),1.49(3H,s),1.51-1.55(1H,m),1.62-1.66(1H,m),1.68-1.71(1H,m),1.69-1.72(1H,m),1.70-1.80(2H,m),1.77-1.79(1H,m),1.76-1.82(2H,m),1.85-1.89(2H,m),2.96(1H,d,J=5.0Hz),3.04(1H,ddd,J=4.0Hz,4.0Hz,14.0Hz),3.49(1H,dd,J=5.0Hz,11.5Hz),3.71(3H,s),5.97(1H,s),8.03(1H,s)ppm6)13C-核磁共振谱：使用TMS在参照为0.00ppm的氘代氯仿中测量的13C-核磁共振谱(125MHz)如下给出：σ:16.4(q),18.2(t),21.4(q),21.5(q),23.9(t),24.6(q),26.6(q),27.0(q),28.1(t),29.1(q),31.1(d),31.6(t),35.8(t),35.9(s),40.1(t),42.0(s),42.5(s),45.0(s),45.7(s),47.7(d),48.9(s),49.0(d),52.1(q),73.7(d),114.3(s),114.6(s),124.0(d),165.5(d),168.5(s),176.6(s),196.5(s),198.7(s)ppm7)高效液相色谱：柱：UnisonUK-C18(4.6mm(直径)×75mm(长度)；由ImtaktCorp.制造)溶剂：A：含有0.01％甲酸的10mM甲酸铵水溶液B：含有0.01％甲酸的乙腈A/B=用5/5平衡，随后线性梯度7分钟，直至A/B=1/9流速：1.0ml/min温度：40℃检测：紫外吸收λ=230nm保留时间：4.3分钟8)萜类化合物衍生物(I)的1H-核磁共振谱显示于图1中，且其二维核磁共振谱(1H-13CHSQC谱)显示于图2中。作为分析1H-核磁共振谱和二维核磁共振谱(1H-13CHSQC谱)的结果，每个质子的特征如下：第19位的β-质子：1.28至1.30ppm(亚甲基)第21位的β-质子：3.49ppm(次甲基)9)萜类化合物衍生物(I)的二维核磁共振谱(1H-1HNOESY谱)显示于图3中。在图3中，观察到19位的β-质子和21位的β-质子之间的相关性。因此确定其立体结构由(I)所代表。(实施例2)萜类化合物衍生物(I)和萜类化合物衍生物(III)的生产(用于生物转化的菌株：SANK11867)(1)用于生物转化的毛壳属菌株的培养将20ml具有实施例的表1中所示的组成的种子培养基置于176个100-ml锥形烧瓶中的每个中，在121℃下灭菌20分钟，然后冷却至室温。将1mlSANK11867的孢子悬浮液接种至每个烧瓶中的培养基中，并在23℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养2天。在下文中，将获得的培养溶液称为“种子培养溶液”。将80ml具有实施例的表2中所示的组成的主要培养基置于583个500-ml锥形烧瓶中的每个中，在121℃下灭菌20分钟，然后冷却至室温。将4mlSANK11867的种子培养溶液无菌接种至每个烧瓶中的培养基中，并在23℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养2天。将0.8ml以30mg/ml的浓度溶解于二甲基亚砜中的CDDO-Me溶液添加至每个烧瓶中的该培养溶液中，并将混合物在23℃下在旋转振荡器中以210rpm再次培养6天。(2)萜类化合物衍生物(I)和萜类化合物衍生物(III)的分离在下面给出的条件下通过HPLC监测本实施例中的萜类化合物衍生物(I)和萜类化合物衍生物(III)的行为。柱：UnisonUK-C18(4.6mm(直径)×75mm(长度)；由ImtaktCorp.制造)溶剂：A：含有0.01％甲酸的10mM甲酸铵水溶液B：含有0.01％甲酸的乙腈A/B=用5/5平衡，随后线性梯度7分钟，直至A/B=1/9流速：1.0ml/min检测：紫外吸收λ=230nm保留时间：4.3分钟(萜类化合物衍生物(I))4.9分钟(萜类化合物衍生物(III))。向42.6L段落(1)中获得的培养溶液中添加等量的丙酮，并将混合物充分搅拌，然后使其在室温下放置过夜。然后，通过在减压下过滤来除去菌丝体，以获得78L滤液。将该滤液施加至预先用丙酮洗涤的SepabeadsSP207(2L；由MitsubishiChemicalCorp.制造)柱，然后用水缓冲液置换。将该柱用6L丙酮：水=5:5的混合溶剂洗涤，然后用6L丙酮：水=6:4的混合溶剂洗涤，随后用6L丙酮：水=7:3的混合溶剂洗脱。向含有目标化合物的该洗脱液中添加1.2L水，再添加2.6L乙酸乙酯进行液-液分布，以分离含有目标化合物的有机层。将有机层用饱和盐水洗涤，然后经无水硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩，以获得6.92g含有萜类化合物衍生物(I)和萜类化合物衍生物(III)的萃取物。将1.5g该萃取物的等分试样溶解于5ml甲醇中。将该溶液吸附至ODS-A(7.5g;；由YMCCo.,Ltd.制造)上，并将微型柱用所得载体填充，然后施加至预先用乙腈：含有0.01%甲酸的水=55:45的混合溶剂平衡的ODS-A(100g；由YMCCo.,Ltd.制造)柱，随后用与上述相同的混合溶剂以15ml/min的流速洗脱。在波长λ=230nm处检测目标化合物的紫外吸收。将在42.0分钟的保留时间处出现的峰(萜类化合物衍生物(I))和50.0分钟的保留时间处出现的峰(萜类化合物衍生物(III))各自分离5次。将每种化合物的级分溶液合并，并在减压下浓缩，以获得192mg作为无色粉末的萜类化合物衍生物(I)和2.45g含有萜类化合物衍生物(III)的淡黄色粉末。将2.45g含有萜类化合物衍生物(III)的淡黄色粉末溶解于2ml乙腈中。将该溶液施加至预先用乙腈：水=55:45的混合溶剂缓冲液置换的SepabeadsSP207SS(500ml；由MitsubishiChemicalCorp.制造)柱。将该柱用1,750ml乙腈：水=60:40的混合溶剂洗涤，随后用2,340ml乙腈：水=65:35的混合溶剂洗脱。将1,200ml含有高纯度萜类化合物衍生物(III)的洗脱液的等分试样在减压下浓缩，随后冻干，以获得2.19g萜类化合物衍生物(III)。(实施例3)萜类化合物衍生物(II)和萜类化合物衍生物(III)的生产(用于生物转化的菌株：SANK70214)[式9][式10](1)底物化合物(2)的合成[式11]将CDDO-Me(8.00g,15.8mmol)溶解于二氯甲烷(40ml)中。在冰冷却下向该溶液中添加3-氯过苯甲酸(>65%)(5.04g,19.0mmol)，并将混合物在室温下搅拌3小时。向反应混合物中添加饱和碳酸氢钠水溶液(40ml)，并将混合物在与上述相同的温度下搅拌15分钟。向该混合物中进一步添加10％硫代硫酸钠水溶液(40ml)，并将所得混合物在与上述相同的温度下搅拌5分钟，随后用乙酸乙酯萃取。将分离的有机层用饱和盐水洗涤，并经硫酸镁干燥，并在减压下蒸发掉溶剂。将残余物通过硅胶柱色谱(正己烷：乙酸乙酯=4:1,v/v)纯化，以获得作为白色无定形固体的底物化合物(2)(8.16g,99%)。ESI-MS;m/z:522(M++1)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:0.91(3H,s),1.01(3H,s),1.08(3H,s),1.12(3H,s),1.19(3H,s),1.27(3H,s),1.55(3H,s),1.18-2.00(15H,m),2.94(1H,d,J=4.9Hz),3.05(1H,dt,J=13.8,3.7Hz),3.70(3H,s),4.34(1H,s),6.07(1H,s)。高效液相色谱：纯度：99.0%柱：Cosmosil5C18-MS-II(6.0mm(直径)×150mm(长度)；由NacalaiTesque,Inc.制造)溶剂：A：10mM乙酸铵水乳液B：乙腈A/B=15/85等度流速：1.0ml/min温度：40℃检测：紫外吸收λ=254nm保留时间：9.6分钟。(2)用于生物转化的芽孢杆菌属菌株的培养将20ml具有下表3中所示的组成的种子培养基置于20个100-ml锥形烧瓶中的每个中，在121℃灭菌30分钟，然后冷却至室温。将一个菌环的SANK70214菌落接种至每个烧瓶中的培养基中，并在28℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养24小时。在下文中，将获得的培养溶液称为“种子培养溶液”。(表3)表3.用于SANK70214的种子培养基的组成*1NissanDisfoamCB-442(由NOFCorp.制造)*2灭菌前用NaOH或HCl将pH调节至7.2。将80ml具有上表3中所示的组成的主要培养基置于300个500-ml锥形烧瓶中的每个中，在121℃下灭菌30分钟，然后冷却至室温。将0.8ml以30mg/ml的浓度溶解于二甲基亚砜中的底物化合物(2)(在段落(1)中合成)的溶液添加至每个烧瓶中的该培养物溶液中。将0.8mlSANK70214的种子培养溶液无菌接种至每个烧瓶中的培养基中，并在28℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养5天。(3)萜类化合物衍生物(II)和萜类化合物衍生物(III)的分离在下面给出的条件下通过HPLC监测本实施例中的萜类化合物衍生物(II)和萜类化合物衍生物(III)的行为。柱：UnisonUK-C18(4.6mm(直径)×75mm(长度)；由ImtaktCorp.制造)溶剂：A：含有0.01％甲酸的10mM甲酸铵水溶液B：含有0.01％甲酸的乙腈A/B=用5/5平衡，随后线性梯度7分钟，直至A/B=1/9流速：1.0ml/min检测：紫外吸收λ=230nm保留时间：5.4分钟(萜类化合物衍生物(II))4.9分钟(萜类化合物衍生物(III))。向22.8L段落(2)中获得的培养溶液中添加等量的丙酮，并将混合物充分搅拌，然后使其在室温下放置过夜。然后，通过压滤机除去细菌细胞，以获得42L滤液。将该滤液施加至预先用丙酮洗涤的SepabeadsSP207(2L；由MitsubishiChemicalCorp.制造)柱，然后用水缓冲液置换。将该柱用14L丙酮：水=5:5的混合溶剂洗涤，然后用6L丙酮：水=6:4的混合溶剂洗涤，随后用7.2L丙酮：水=7:3的混合溶剂洗脱，并用8L丙酮：水=8:2的混合溶剂进一步洗脱。从用丙酮：水=7:3的混合溶剂洗脱的级分中回收4L含有目标化合物的洗脱液。向其中添加SepabeadsSP207SS(16ml；由MitsubishiChemicalCorp.制造)。将有机溶剂蒸发掉，以将目标化合物吸附至树脂上。将吸附的物质施加至预先用丙酮洗涤的SepabeadsSP207SS(350ml；由MitsubishiChemicalCorp.制造)柱，然后用水缓冲液置换。将该柱用1,200ml乙腈：水=50:50的混合溶剂洗涤，然后用1,050ml乙腈：水=55:45的混合溶剂洗涤，随后用2,950ml乙腈：水=60:40的混合溶剂洗脱。将920ml含有高纯度萜类化合物衍生物(III)的洗脱液的等分试样中的有机溶剂蒸发掉，并将残余物冻干，以获得1.58g萜类化合物衍生物(III)。另外，将580ml含有萜类化合物衍生物(II)的洗脱液的等分试样中的有机溶剂蒸发掉，并将残余物冻干，以获得120.7mg含有萜类化合物衍生物(II)的粉末。将109mg该粉末的等分试样溶解于1.0ml二甲基亚砜中。将0.3ml该溶液的等分试样施加至预先用0.01％甲酸水溶液：含有0.01％甲酸的乙腈=45:55的溶剂平衡的HPLC柱(UnisonUS-C18；20mm(直径)X150mm(长度)；由ImtaktCorp.制造)，随后用0.01％甲酸水溶液：含有0.01％甲酸的乙腈=45:55的溶剂以20.0ml/min的流速洗脱。在波长λ=230nm处检测目标化合物的紫外吸收。将在13.6分钟的保留时间处出现的峰(萜类化合物衍生物(II))分离3次。将级分溶液合并，并在减压下浓缩，并将获得的悬浮液冻干，以获得4.5mg作为无色粉末的萜类化合物衍生物(II)。使用二维核磁共振光谱法(NOESY)测定本发明的获得的萜类化合物衍生物(II)的立体结构。在萜类化合物衍生物(II)的二维核磁共振光谱法(NOESY)中，观察到第19位的α-质子和第21位的α-质子之间的相关性。因此确定其立体结构由式(II)所代表。萜类化合物衍生物(II)的物理化学性质的测量值1)外观：无色粉末状物质2)分子式：C32H43NO63)分子量：537(通过ESI质谱法测量)4)通过高分辨率LC-ESI质谱法测量的精确质量[M+H]+如下给出：实测值：538.31496计算值：538.316315)1H-核磁共振谱：使用TMS在参照为0.00ppm的氘代氯仿中测量的1H-核磁共振谱(500MHz)如下给出：σ:0.96(3H,s),1.06(3H,s),1.11(3H,s),1.12(3H,s),1.19(3H,s),1.27(3H,s),1.28(3H,s),1.46(1H,d,J=13.0Hz),1.47(1H,d,J=13.0Hz),1.52-1.59(2H,m),1.61-1.65(2H,m),1.66-1.69(1H,m),1.68-1.75(1H,m),1.75(1H,dd,J=3.5Hz,14.5Hz),1.88(1H,brd,J=14.5Hz),1.98(1H,dd,J=5.5Hz,9.5Hz),2.03(1H,dd,J=3.5Hz,14.5Hz),2.38(1H,ddd,J=3.5Hz,14.0Hz,14.0Hz),2.99(1H,d,J=4.5Hz),3.10(1H,brd,J=13.5Hz),3.53(1H,brs),3.69(3H,s),4.34(1H,s),6.09(1H,s)ppm6)13C-核磁共振谱：使用TMS在参照为0.00ppm的氘代氯仿中测量的13C-核磁共振谱(125MHz)如下给出：σ:18.3(t),21.0(q),21.3(q),22.8(q),23.9(q),24.0(q),25.7(t),27.4(q),28.0(q),28.7(t),30.0(t),31.4(t),31.5(d),35.2(s),38.9(t),40.9(s),42.1(s),42.6(d),45.1(s),45.5(s),47.0(s),49.5(d),52.0(q),53.2(s),69.1(d),74.8(d),113.6(s),124.8(d),168.8(s),177.6(s),198.8(s),202.4(s)ppm7)高效液相色谱：柱：UnisonUK-C18(4.6mm(直径)×75mm(长度)；由ImtaktCorp.制造)溶剂：A：含有0.01％甲酸的10mM甲酸铵水溶液B：含有0.01％甲酸的乙腈A/B=用5/5平衡，随后线性梯度7分钟，直至A/B=1/9流速：1.0ml/min温度：40℃检测：紫外吸收λ=230nm保留时间：5.4分钟。8)萜类化合物衍生物(II)的4H-核磁共振谱显示于图1中，且其二维核磁共振谱(1H-13CHSQC谱)显示于图5中。作为分析1H-核磁共振谱和二维核磁共振谱(1H-13CHSQC谱)的结果，每个质子的特征如下：第19位的α-质子：1.47ppm(亚甲基)第21位的α-质子：3.53ppm(次甲基)9)萜类化合物衍生物(II)的二维核磁共振谱(1H-1HNOESY谱)显示于图6中。在图6中，观察到第19位的α-质子和第21位的α-质子之间的相关性。因此确定其立体结构由(II)所代表。(实施例4)萜类化合物衍生物(III)的生产(用于生物转化的菌株：SANK70314)(1)用于生物转化的芽孢杆菌属菌株的培养将20ml下面给出的Trypto-SoyBroth培养基(以下称为TSB培养基)作为种子培养基置于100-ml锥形烧瓶中，在121℃下灭菌15分钟，然后冷却至室温。将一个菌环的SANK70314菌落接种至烧瓶中的培养基中，并在28℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养24小时。在下文中，将获得的培养溶液称为“种子培养溶液”。<TSB培养基(Trypto-SoyBroth培养基)>PearlcoreTrypto-SoyBrothEiken(由EikenChemicalCo.,Ltd.制造)30g蒸馏水1,000ml将100mlTSB培养基作为主要培养基置于500-ml锥形烧瓶中，在121℃下灭菌15分钟，然后冷却至室温。将1.0ml以30mg/ml的浓度溶解于二甲基亚砜中的底物化合物(2)(通过实施例3(1)中描述的方法合成)的溶液添加至烧瓶中的该培养物溶液中。将1.0mlSANK70314的种子培养溶液无菌接种至烧瓶中的培养基中，并在37℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养3天。(2)萜类化合物衍生物(III)的分离在下面给出的条件下通过HPLC监测本实施例中的萜类化合物衍生物(III)的行为。柱：UnisonUK-C18(4.6mm(直径)×75mm(长度)；由ImtaktCorp.制造)溶剂：A：含有0.01％甲酸的10mM甲酸铵水溶液B：含有0.01％甲酸的乙腈A/B=用5/5平衡，随后线性梯度7分钟，直至A/B=1/9流速：1.0ml/min检测：紫外吸收λ=230nm保留时间：4.9分钟(萜类化合物衍生物(III))。将段落(1)中获得的培养溶液稀释至100ml。然后，向其中添加100ml丙酮，并将混合物在室温下静置1小时。将1ml其等分试样分离并以10000rpm离心10分钟。将上清液用作培养溶液提取物。将10μl因此制备的培养溶液提取物在上述HPLC条件下进行洗脱。在波长λ=230nm处检测目标化合物的紫外吸收。从在4.9分钟的保留时间处出现的峰(萜类化合物衍生物(III))的峰面积计算向底物化合物(2)的转化效率。作为结果，对于萜类化合物衍生物(III)，确认生物转化效率为32％。(实施例5)从野生菌株克隆SANK70214(1)芽孢杆菌种SANK70214的基因组DNA样品的制备将100ml由3%PearlcoreTrypto-SoyBroth(由EikenChemicalCo.,Ltd.制造)构成的培养基(在高压灭菌前将pH调节至8.0)(以下称为TSB培养基(pH8.0))置于500-ml锥形烧瓶中，在121℃下灭菌15分钟，然后冷却至室温。将一个菌环的SANK70214接种至烧瓶中的培养基中，并在28℃和210rpm的条件下培养15.5小时。将获得培养溶液用作种子培养物。将100mlTSB培养基(pH8.0)置于500-ml锥形烧瓶中，在121℃下灭菌15分钟，然后冷却至室温。将1mlSANK70214的种子培养溶液无菌接种至烧瓶中的培养基中，并在28℃和210rpm的条件下培养8小时。将40ml获得的培养溶液分配至每个50-ml锥形管中，并以6,000rpm离心10分钟以回收细菌细胞。由其制备基因组DNA。(2)基因组测序和P450基因的鉴定使用PacBioRSII(由PacificBiosciencesofCalifornia,Inc.制造)和Miseq(由Illumina,Inc.制造)在下一代天然产物化学技术研究协会(TechnologyResearchAssociationforNextgenerationnaturalproductschemistry)进行基因组测序。获得的序列为4.0Mbp，其中GC含量为40.8％。使用BASysServer2(https://www.basys.ca/server2/basys/cgi/text_search.pl)用碱性芽孢杆菌作为参考序列注释获得的基因组序列，以获得一个推定的P450核苷酸序列(具有羟基化活性的SANK70214的蛋白的核苷酸序列)(SEQIDNO:3，图9)。获得的核苷酸序列保留了Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,20121;22(1):606-609中所述的3种类型的基序。因此，克隆了具有将底物化合物(2)羟基化成本发明的萜类化合物衍生物(III)的活性的蛋白(SEQIDNO:5，图11)的基因。(3)克隆至大肠杆菌中为了通过PCR扩增SANK70214的P450的核苷酸序列，制备F1(GAAGGAGATATACATATGAGTCATGCTGCGAACG)和R1(TGTCGACGGAGCTCTTTAGAATGAAACGGGCAATG)的引物组。使用该引物组和SANK70214作为模板进行PCR反应。PCR反应采用PrimeSTARMax(由TakaraBioInc.制造)和PCR装置(由TakaraBioInc.制造，TP350)，并将3阶段反应重复30次，所述3阶段反应涉及在98℃下变性10秒，在55℃下退火5秒，并在72℃下延伸10秒钟。作为结果，扩增了具有约1.2kb的长度的DNA片段。用提供用于In-Fusion克隆反应的CloningEnhancer(由ClontechLaboratories,Inc.制造)处理获得的约1.2kb的SANK70214DNA片段。为了通过PCR扩增用于克隆和表达的载体pET21b(由Novagen/EMDBiosciences,Inc.制造)，制备F2(ATGTATATCTCCTTCTTAAAGTTAAAC)和R2(AGAGCTCCGTCGACAAGC)的引物组。使用该引物组和pET21b作为模板进行PCR反应。PCR反应采用PrimeSTARMax(由TakaraBioInc.制造)和PCR装置(由TakaraBioInc.制造，TP600)，并将3阶段反应重复30次，所述3阶段反应涉及在98℃下变性10秒，在55℃下退火5秒，并在72℃下延伸60秒钟。作为结果，扩增了具有约5kb的长度的DNA片段。将该PCR反应溶液进行琼脂糖凝胶电泳，并切出约5kb的DNA片段，并使用MonofasDNA纯化试剂盒I(由GLSciencesInc.制造)回收。将回收的预先用克隆增强剂处理的约5kb的pET21bDNA片段和约1.2kb长的DNA片段使用In-FusionHD克隆试剂盒(由ClontechLaboratories,Inc.制造)连接，并用于转化大肠杆菌DH5α(由ToyoboCo.,Ltd.制造)。然后，在含有100μg/ml羧苄青霉素的LB琼脂培养基中选择大肠杆菌。然后，在含有100μg/ml羧苄青霉素的LB液体培养基中培养获得的转化的大肠杆菌的菌落。回收生长的大肠杆菌，并使用QIAprepSpinMiniprep试剂盒(由QiagenN.V.制造)纯化质粒DNA，以获得携带具有羟基化活性的SANK70214的蛋白的核苷酸序列的质粒(pET-SANK70214-01)。(4)克隆至枯草芽孢杆菌168中为了用具有羟基化活性的SANK70214的蛋白的核苷酸序列转化枯草芽孢杆菌168，将该核苷酸序列重新克隆至pHT01(由MoBiTecGmbH制造)(枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的穿梭载体)中。为了通过PCR扩增pET-SANK70214-01中克隆的P450的核苷酸序列，制备F3(AAGGAGGAAGGATCCATGAGTCATGCTGCGAACGTAA)和R3(GACGTCGACTCTAGATTAGAATGAAACGGGCAATG)的引物组。使用该引物组和pET-SANK70214-01作为模板进行PCR反应。PCR反应采用PrimeSTARMax(由TakaraBioInc.制造)和PCR装置(由TakaraBioInc.制造，TP350)，并将3阶段反应重复30次，所述3阶段反应涉及在98℃下变性10秒，在55℃下退火5秒，并在72℃下延伸10秒钟。作为结果，扩增了具有约1.2kb的长度的DNA片段。用提供用于In-Fusion克隆反应的CloningEnhancer(由ClontechLaboratories,Inc.制造)处理获得的约1.2kb的SANK70214DNA片段。为了通过PCR扩增pHT01(由MoBiTecGmbH制造)(枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的穿梭载体)，制备F4(TCTAGAGTCGACGTCCCCG)和R4(GGATCCTTCCTCCTTTAATTG)的引物组。使用该引物组和pHT01作为模板进行PCR反应。PCR反应采用PrimeSTARMax(由TakaraBioInc.制造)和PCR装置(由TakaraBioInc.制造，TP350)，并将3阶段反应重复30次，所述3阶段反应涉及在98℃下变性10秒，在55℃下退火5秒，并在72℃下延伸60秒钟。作为结果，扩增了具有约8kb的长度的DNA片段。将该PCR反应溶液进行琼脂糖凝胶电泳，并切出约8kb的DNA片段，并使用MonofasDNA纯化试剂盒I(由GLSciencesInc.制造)回收。将回收的预先用克隆增强剂处理的约8kb的pHT01DNA片段和约1.2kb长的DNA片段使用In-FusionHD克隆试剂盒(由ClontechLaboratories,Inc.制造)连接，并用于转化大肠杆菌DH5α(由ToyoboCo.,Ltd.制造)。然后，在含有100μg/ml羧苄青霉素的LB琼脂培养基中选择大肠杆菌。然后，在含有100μg/ml羧苄青霉素的LB液体培养基中培养获得的转化的大肠杆菌的菌落。回收生长的大肠杆菌，并使用QIAprepSpinMiniprep试剂盒(由QiagenN.V.制造)纯化质粒DNA，以获得携带具有羟基化活性的SANK70214的蛋白的核苷酸序列的质粒(pHT01-SANK70214-01)。用获得的用于转化枯草芽孢杆菌的pHT01-SANK70214-01转化大肠杆菌C600(由ZymoResearchCorp.制造)。然后，在含有100μg/ml羧苄青霉素的LB琼脂培养基中选择大肠杆菌。然后，在含有100μg/ml羧苄青霉素的LB液体培养基中培养获得的转化的大肠杆菌的菌落。回收生长的大肠杆菌，并使用QIAprepSpinMiniprep试剂盒(由QiagenN.V.制造)纯化质粒DNA，以获得pHT01-SANK70214-01用于转化枯草芽孢杆菌。通过电穿孔用pHT01-SANK70214-01转化枯草芽孢杆菌168。在含有100μg/ml氯霉素的LB琼脂培养基中选择枯草芽孢杆菌。获得携带HT01-SANK70214-01的枯草芽孢杆菌。将该转化体命名为枯草芽孢杆菌SANK70214T。(实施例6)从野生型克隆SANK70314(1)巨大芽孢杆菌SANK70314的基因组DNA样品的制备以与实施例5相同的方式制备SANK70314的基因组DNA样品，不同之处在于，使用SANK70314代替SANK70214，并将SANK70314的种子培养溶液的培养时间设定为6小时。(2)基因组测序和P450基因的鉴定使用PacBioRSII(由PacificBiosciencesofCalifornia,Inc.制造)和Miseq(由Illumina,Inc.制造)进行基因组测序。获得的序列为5.4Mbp，其中GC含量为38.0%。使用BASysServer2(https://www.basys.ca/server2/basys/cgi/text_search.pl)用巨大芽孢杆菌作为参考序列注释获得的基因组序列，以获得六个推定的P450核苷酸序列(具有羟基化活性的SANK70314的蛋白的核苷酸序列)。获得的P450的核苷酸序列各自保留了Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,20121;22(1):606-609中所述的3种类型的基序。其中，克隆了具有将底物化合物(2)羟基化成本发明的萜类化合物衍生物(III)的活性的蛋白(SEQIDNO:6，图12)的基因(SEQIDNO:4，图10)。(3)克隆至大肠杆菌中为了通过PCR扩增SANK70314的P450的核苷酸序列，制备F5(GAAGGAGATATACATATGAAAACCGAAAGAGAAAAC)和R5(TGTCGACGGAGCTCTTATACATGTTTACGAATCA)的引物组。使用该引物组和SANK70314作为模板进行PCR反应。以与实施例5相同的方式进行随后的程序，以获得携带具有羟基化活性的SANK70314的蛋白的核苷酸序列的质粒(pET-SANK70314-01)。(4)克隆至枯草芽孢杆菌168中为了用具有羟基化活性的SANK70314的蛋白的核苷酸序列转化枯草芽孢杆菌168，将该核苷酸序列重新克隆至pHT01(由MoBiTecGmbH制造)(枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的穿梭载体)中。为了通过PCR扩增pET-SANK70314-01中克隆的P450的核苷酸序列，制备F6(AAGGAGGAAGGATCCATGAAAACCGAAAGAGAAAAC)和R6(GACGTCGACTCTAGATTATACATGTTTACGAATCAATAATTC)的引物组。使用该引物组和pET-SANK70214-01作为模板进行PCR反应。PCR反应采用PrimeSTARMax(由TakaraBioInc.制造)和PCR装置(由TakaraBioInc.制造，TP350)，并将3阶段反应重复30次，所述3阶段反应涉及在98℃下变性10秒，在55℃下退火5秒，并在72℃下延伸10秒钟。作为结果，扩增了具有约1.2kb的长度的DNA片段。用提供用于In-Fusion克隆反应的CloningEnhancer(由ClontechLaboratories,Inc.制造)处理获得的约1.2kb的SANK70314DNA片段。为了通过PCR扩增pHT01(由MoBiTecGmbH制造)(枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的穿梭载体)，利用F4(TCTAGAGTCGACGTCCCCG)和R4(GGATCCTTCCTCCTTTAATTG)的引物组。使用该引物组和pHT01作为模板进行PCR反应。PCR反应采用PrimeSTARMax(由TakaraBioInc.制造)和PCR装置(由TakaraBioInc.制造，TP350)，并将3阶段反应重复30次，所述3阶段反应涉及在98℃下变性10秒，在55℃下退火5秒，并在72℃下延伸60秒钟。作为结果，扩增了具有约8kb的长度的DNA片段。将该PCR反应溶液进行琼脂糖凝胶电泳，并切出约8kb的DNA片段，并使用MonofasDNA纯化试剂盒I(由GLSciencesInc.制造)回收。将回收的预先用克隆增强剂处理的约8kb的pHT01DNA片段和约1.2kb长的DNA片段使用In-FusionHD克隆试剂盒(由ClontechLaboratories,Inc.制造)连接，并用于转化大肠杆菌DH5α(由ToyoboCo.,Ltd.制造)。然后，在含有100μg/ml羧苄青霉素的LB琼脂培养基中选择大肠杆菌。然后，在含有100μg/ml羧苄青霉素的LB液体培养基中培养获得的转化的大肠杆菌的菌落。回收生长的大肠杆菌，并使用QIAprepSpinMiniprep试剂盒(由QiagenN.V.制造)纯化质粒DNA，以获得携带具有羟基化活性的SANK70314的蛋白的核苷酸序列的质粒(pHT01-SANK70314-01)。用获得的用于转化枯草芽孢杆菌的pHT01-SANK70314-01转化大肠杆菌C600(由ZymoResearchCorp.制造)。然后，在含有100μg/ml羧苄青霉素的LB琼脂培养基中选择大肠杆菌。然后，在含有100μg/ml羧苄青霉素的LB液体培养基中培养获得的转化的大肠杆菌的菌落。回收生长的大肠杆菌，并使用QIAprepSpinMiniprep试剂盒(由QiagenN.V.制造)纯化质粒DNA，以获得pHT01-SANK70314-01用于转化枯草芽孢杆菌。通过电穿孔用pHT01-SANK70314-01转染枯草芽孢杆菌168。在含有100μg/ml氯霉素的LB琼脂培养基中选择枯草芽孢杆菌。获得携带HT01-SANK70314-01的枯草芽孢杆菌。将该转化体命名为枯草芽孢杆菌SANK70314T。(实施例7)萜类化合物衍生物(III)的生产(用于生物转化的菌株：SANK70214T)(1)SANK70214T的培养将20ml具有下表4中所示的组成的种子培养基置于100-ml锥形烧瓶中，在121℃下灭菌15分钟，然后冷却至室温。将一个菌环的SANK70214T菌落接种至烧瓶中的培养基中，并在37℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养24小时。在下文中，将获得的培养溶液称为“种子培养溶液”。[表4]表4.用于SANK70214T的种子培养基的组成*pH未调整。将100ml具有下表5中所示的组成的主要培养基-1置于500-ml锥形烧瓶中，并在121℃下灭菌30分钟。然后，向其中无菌添加具有下表6中所示的组成的主要培养基-2，以制备主要培养基。向其中无菌接种1.0mlSANK70214T的种子培养溶液，并在37℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养2小时。然后，以0.1mM(终浓度)向其中添加IPTG(异丙基-β-硫代吡喃半乳糖苷)，并将混合物在37℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养1小时。然后，向其中添加1.0ml以30mg/ml的浓度溶解于二甲基亚砜中的底物化合物(2)(通过实施例3(1)的方法合成)的溶液，并将混合物在37℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养5小时。[表5]表5.主要培养基-1的组成(表6)表6.主要培养基-2的组成(2)萜类化合物衍生物(III)的分离在下面给出的条件下通过HPLC监测本实施例中的萜类化合物衍生物(III)的行为。柱：UnisonUK-C18(4.6mm(直径)×75mm(长度)；由ImtaktCorp.制造)溶剂：A：含有0.01％甲酸的10mM甲酸铵水溶液B：含有0.01％甲酸的乙腈A/B=用5/5平衡，随后线性梯度7分钟，直至A/B=1/9流速：1.0ml/min检测：紫外吸收λ230nm保留时间：4.9分钟(萜类化合物衍生物(III))将段落(1)中获得的培养溶液稀释至100ml。然后，向其中添加100ml丙酮，并将混合物在室温下静置1小时。将1ml其等分试样分离并以10,000rpm离心10分钟。将上清液用作培养溶液提取物。将10μl由此制备的培养溶液提取物在上述HPLC条件下进行洗脱。在波长λ=230nm处检测目标化合物的紫外吸收。从在4.9分钟的保留时间处出现的峰(萜类化合物衍生物(III))的峰面积计算向底物化合物(2)的转化效率。作为结果，对于萜类化合物衍生物(III)，确认生物转化效率为77%。(1)SANK70314T的培养将20ml具有实施例7的表4中所示的组成的种子培养基置于100-ml锥形烧瓶中，在121℃下灭菌15分钟，然后冷却至室温。将一个菌环的SANK70314T菌落接种至烧瓶中的培养基中，并在37℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养10小时。在下文中，将获得的培养溶液称为“种子培养溶液”。将100ml具有实施例7的表5中所示的组成的主要培养基-1置于500-ml锥形烧瓶中，并在121℃下灭菌15分钟。然后，向其中无菌添加具有上表6中所示的组成的主要培养基-2，以制备主要培养基。向其中无菌接种1.0mlSANK70314T的种子培养溶液，并在37℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养2小时。然后，以0.1mM(终浓度)向其中添加IPTG，并将混合物在37℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养1小时。然后，向其中添加1.0ml以30mg/ml的浓度溶解于二甲基亚砜中的底物化合物(2)(通过实施例3(1)的方法合成)的溶液，并将混合物在37℃和210rpm的条件下在旋转振荡器中培养84小时。(2)萜类化合物衍生物(III)的分离在下面给出的条件下通过HPLC监测本实施例中的萜类化合物衍生物(III)的行为。柱：UnisonUK-C18(4.6mm(直径)×75mm(长度)；由ImtaktCorp.制造)溶剂：A：含有0.01％甲酸的10mM甲酸铵水溶液B：含有0.01％甲酸的乙腈A/B=用5/5平衡，随后线性梯度7分钟，直至A/B=1/9流速：1.0ml/min检测：紫外吸收λ=230nm保留时间：4.9分钟(萜类化合物衍生物(III))。将段落(1)中获得的培养溶液稀释至100ml。然后，向其中添加100ml丙酮，并将混合物在室温下静置1小时。将1ml其等分试样分离并以10,000rpm离心10分钟。将上清液用作培养溶液提取物。将10μl由此制备的培养溶液提取物在上述HPLC条件下进行洗脱。在波长λ=230nm处检测目标化合物的紫外吸收。从在4.9分钟的保留时间处出现的峰(萜类化合物衍生物(III))的峰面积计算向RNR-0014的转化效率。作为结果，对于萜类化合物衍生物(III)，确认生物转化效率为39%。(实施例9)作为缓释药物组合物的微球的生产本发明的萜类化合物衍生物(III)用作缓释药物组合物中的活性成分。表7中所示的聚乳酸或聚(乳酸-共-乙醇酸)(由WakoPureChemicalIndustries,Ltd.制造)用作基质材料。[表7]表7.基质材料通过以下方法生产具有10重量％的药物含量的微球：将本发明的基质材料和萜类化合物衍生物(III)分别以约17％和约1.7%(w/v)的浓度溶解于二氯甲烷中。随后，将获得的溶液进一步添加至0.05％聚乙烯醇水溶液中，并使用搅拌器形成o/w乳液。在该乳液中，水相的体积为油相的体积的约6.7倍。通过适当调节用于形成o/w乳液的搅拌速度来控制获得的微球的粒径。例如，获得的微球通过大转数而具有小粒径，并且通过小转数而具有大粒径。通过采用在水中的干燥方法(o/w法)蒸发油相中的溶剂。该蒸发在常压下用使用磁力搅拌器的搅拌进行。通过过滤分离因此获得的微球。然后，将附着在微球表面上的乳化剂等用纯净水等重复洗涤几次。然后，将微球再次分散于蒸馏水(纯净水)中并冻干，以获得目标微球。通过以下方法生产具有30重量％的药物含量的微球：将本发明的基质材料和萜类化合物衍生物(III)分别以约12％和约5%(w/v)的浓度溶解于二氯甲烷中。随后，将获得的溶液进一步添加至0.05％聚乙烯醇水溶液中，并使用搅拌器形成o/w乳液。在该乳液中，水相的体积为油相的体积的约6.7倍。使用激光衍射粒径分布测量装置(Helos&Cuvette,SympatecGmbH)测量获得的微球的平均粒径。测量结果显示于表8中。[表8]表8.粒径分布测量结果基质材料药物含量(％)X10X50X90PLGA-0005103.7014.424.3PLGA-5020106.5216.927.4PLGA-5020305.8817.127.8PLGA-75201011.127.941.6PLA-0020105.4117.327.3通过下面给出的方法测量获得的微球中的本发明的萜类化合物衍生物(III)的含量(含药微球中的药物的重量分数)。将生产的微球(精确称量约1mg)溶解于二甲基亚砜中以精确地制成1mL。从高效液相色谱(HPLC)的测量值计算该溶液中含有的本发明的萜类化合物衍生物(III)的量。根据下式计算微球中的本发明的萜类化合物衍生物(III)的含量：含量(重量％)=(含有的本发明的萜类化合物衍生物(III)的量的测量值/微球的量)×100。HPLC条件如下：<HPLC条件>仪器：色谱仪(Acquity,WatersCorp.)，UV检测器(Acquity,WatersCorp.)，数据分析仪(Empower,WatersCorp.)HPLC柱：ACQUITYUPLCBEHC181.7μm(2.1mmI.D.x50mm,WatersCorp.)分析时间：14min流动相A：水：乙腈：磷酸(95:5:0.1)流动相B：乙腈：水：磷酸(95:5:0.1)流速：0.75mL/min(梯度条件显示于表9中)柱温度：约40℃的恒温样品温度：约25℃的恒温检测波长：UV-245nm。[表9]表9.梯度条件时间(min)00.53.56.011.011.114.0流动相A(%)8080505018080流动相B(%)20205050992020通过该方法测定的药物含量是从生产微球时的基质材料和药物的组成计算的重量比的85％至95％，从而确认是定量的。因此，在本发明中，为了方便起见，以从生产时的组成计算的药物含量指示组成。(实施例10)作为缓释药物组合物的棒状植入物的生产使用含有PLA-0020作为基质材料和10重量％的本发明的萜类化合物衍生物(III)的微球生产棒状植入物。能够通过加热至约200℃来完全熔化微球。用熔化的微球填充金属管并使其冷却。然后，取出其所得产物并完全冷却，以获得目标棒状植入物(直径：约1mm)。将获得的棒状植入物溶解于二甲基亚砜中，以精确地制成1mg/mL。以与实施例4相同的方式测量该溶液中含有的萜类化合物衍生物(III)的量，以计算棒状植入物中萜类化合物衍生物(III)的含量。通过以下方法生产本实施例中使用的具有10重量％的药物含量的微球：将本发明的基质材料和萜类化合物衍生物(III)分别以约17％和约1.7%(w/v)的浓度溶解于二氯甲烷中。随后，将获得的溶液进一步添加至0.05％聚乙烯醇水溶液中，并使用搅拌器形成o/w乳液。在该乳液中，水相的体积为油相的体积的约6.7倍。(测试实施例1)NQO1测定培养Hepa1c1c7细胞(小鼠肝细胞系，ATCC，目录号CRL-2026)(5%CO2，37℃)。使用也含有10％灭活的FBS的DMEM(LifeTechnologiesJapanLtd.，目录号11965-092)培养基。培养基含有100单位/mL(终浓度)青霉素和100ug/mg(终浓度)链霉素。根据先前报道(AnalBiochem1998;169:328-;和MethodsEnzymol2004;382:243-)进行NQO1测定。将Hepa1c1c7细胞以10000个细胞/孔接种于96孔板中。约24小时后，用含有萜类化合物衍生物(III)、萜类化合物衍生物(I)或萜类化合物衍生物(II)的培养基替换培养基，并进行进一步培养约48小时。制备裂解溶液(含有2mMEDTA和0.8％洋地黄皂苷的溶液)、反应溶液(含有0.025Mtris-HCl、0.067％白蛋白、0.01％Tween-20、2U/mL葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、5μM黄素腺嘌呤二核苷酸、1μM葡萄糖-6-磷酸、30μM烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、0.03％3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT)和50μM甲萘醌)和终止溶液(含有0.3mM双香豆素和5mM磷酸二氢钾的溶液，pH7.4)。除去培养基后，向其中添加50μL裂解溶液，并将混合物在37℃下静置10分钟。将反应混合物在室温下进一步振荡10分钟。向其中添加200μL溶液，并将混合物在室温下静置5分钟。向其中添加50μL终止溶液，并测量490nm处的吸光度。使用Prism(GraphPadSoftware,Inc.,Ver.5)分析测试结果，以计算NQO1的活性增加2倍时的浓度的CD值(双重NQO1活性的浓度)。每组由3个孔组成并表示为CD值的平均值。萜类化合物衍生物(III)的CD值是1.0nM，萜类化合物衍生物(I)的CD值是0.3nM，而萜类化合物衍生物(II)的CD值是0.1nM。(测试实施例2)含有萜类化合物衍生物(III)的微球的体外药物释放测试通过实施例7中描述的方法生产含有10重量％的本发明的萜类化合物衍生物(III)的微球。使眼内灌注溶液(OpeguardMA，由SenjuPharmaceuticalCo.,Ltd.制造)含有1w/v%的表面活性剂(Tween80)。向该溶液中添加微球，使得本发明的萜类化合物衍生物(III)的浓度为50μg/mL。将混合物在设定至37℃的培养箱中搅拌。在温育开始后1、2、3和7天，将该混合溶液离心(3,750rpm，10分钟)，并将200μL获得的上清液与800μL50％乙腈混合。通过HPLC测量溶解的本发明的萜类化合物衍生物(III)的量。HPLC条件与实施例4中所述的那些相同。当将完全溶解的本发明的萜类化合物衍生物(III)的药物浓度定义为100％时，计算本发明的萜类化合物衍生物(III)的溶解速度(％)。计算结果显示于表10中。这些结果表明所有测试的微球均以持续的方式释放药物。[表10]表10.本发明的萜类化合物衍生物(III)从微球中溶解的累积速率(％)*药物组合物中萜类化合物衍生物(III)的含量。(测试实施例3)含有萜类化合物衍生物(III)的棒状植入物的体外药物释放测试通过实施例8中描述的生产方法来生产棒状植入物。使眼内灌注溶液(OpeguardMA，由SenjuPharmaceuticalCo.,Ltd.制造)含有1w/v%的表面活性剂(Tween80)。向该溶液中添加棒状植入物，使得本发明的萜类化合物衍生物(III)的浓度为50μg/mL。将混合物在设定至37℃的培养箱中搅拌。在温育开始后1、2、3、7、14、21和28天，将该混合溶液离心(3,750rpm，10分钟)，并将200μL获得的上清液与800μL50％乙腈混合。通过HPLC测量溶解的本发明的萜类化合物衍生物(III)的量。HPLC条件与实施例7中所述的那些相同。用于计算溶解速率的方法与测试实施例2中相同。计算结果显示于表11中。这些结果表明，具有基质材料PLGA-5020的棒状植入物均以持续的方式释放药物。[表11]表11.本发明的萜类化合物衍生物(III)从棒状植入物(萜类化合物衍生物(III)的含量：10重量％)中的累积溶解速率(％)(测试实施例4)含有萜类化合物衍生物(III)的微球在兔眼中的药代动力学测试使用本发明的萜类化合物衍生物(III)、本发明的萜类化合物衍生物(III)-PLA-0005[通过使用PLA-0005作为基质材料和将本发明的萜类化合物衍生物(III)和PLA-0005的混合比率调节至1:9来制备]和本发明的萜类化合物衍生物(III)-PLA-0020[通过使用PLA-0020作为基质材料和将本发明的萜类化合物衍生物(III)和PLA-0020的混合比率调节至1:9来制备]中的每一种，以及盐水作为溶剂来制备悬浮液，使得萜类化合物衍生物(III)的浓度为3mM。向每只白兔(OrientalYeastCo.,Ltd.,Kbl:NZW，雄性，8周龄)玻璃体内施用50μL每种悬浮液。在玻璃体内施用后，将兔安乐死，并取样玻璃体内液和视网膜。测量这些样品中含有的萜类化合物衍生物(III)的浓度。结果显示于表13和14中。下表12中显示的数值由来自4只眼的平均值和标准偏差表示。通过LC/MS/MS测量每种组织中的药物浓度。通过用对应于组织重量的10倍的量的纯净水稀释、随后均质化来预处理组织，以获得测量样品。将含有内标溶液(IS；尼氟酸)的水/乙腈(1:1)溶液添加至获得的样品以提取药物。然后，将溶液通过过滤器过滤并注射至LC/MS/MS。LC/MS/MS条件如下：<UPLC条件>：WatersAcquityUPLC分析柱：ACQUITYUPLCBEHC181.7μm柱温度：50℃流动相A：95%乙腈(5mM乙酸铵)流动相B：5%乙腈(5mM乙酸铵)。(表12)表12.梯度表流速：0.8mL/min。<MS/MS条件>：分析仪器API4000电离模式：ESI离子极性模式：正监测离子萜类化合物衍生物(III)(前体离子(m/z):538.5，产物离子(m/z):460)IS(前体离子(m/z):283.2，产物离子(m/z):265)。[表13]表13.本发明的萜类化合物衍生物(III)的玻璃体内浓度(nM)(表14)表14.本发明的萜类化合物衍生物(III)的视网膜内浓度(ug/g组织)因此，能够确认，通过使用可生物降解聚合物作为基质材料显著维持本发明的萜类化合物衍生物(III)的玻璃体内和视网膜内浓度。(测试实施例5)含有萜类化合物衍生物(III)的棒状植入物在兔眼中的药代动力学测试生产由本发明的萜类化合物衍生物(III)-PLGA-5020[通过使用PLGA-5020作为基质材料和将本发明的萜类化合物衍生物(III)和PLGA-5020的混合比率调节至1:9来制备]构成的微球。使用微球，以及盐水作为溶剂来制备悬浮液，使得萜类化合物衍生物(III)的浓度为3mM。向每只白兔(OrientalYeastCo.,Ltd.,Kbl:NZW，雄性，8周龄)玻璃体内施用50μL该悬浮液。剂量为810μg微球(81μg本发明的萜类化合物衍生物(III))。生产由萜类化合物衍生物(III)-PLGA-5020[通过使用PLGA-5020作为基质材料和将本发明的萜类化合物衍生物(III)和PLGA-5020的混合比率调节至1:9来制备]构成的棒状植入物，并向每只兔玻璃体内施用。剂量为6.5mg棒状植入物(650ug本发明的萜类化合物衍生物(III))。在玻璃体内施用后，将兔安乐死，并取样玻璃体内液。测量其中的本发明的萜类化合物衍生物(III)的浓度。结果显示于表15中。下表15中显示的数值由来自2只眼的平均值表示。确认棒状植入物使药物在玻璃体中维持28天。进一步发现，与微球相比，棒状植入物能够显著维持萜类化合物衍生物(III)的玻璃体内浓度。(表15)表15.本发明的萜类化合物衍生物(III)的玻璃体内浓度(nM)(试验例6)萜类化合物衍生物(III)微球对兔视网膜基因的作用测试视网膜中的Nqo1基因作为Nrf2靶基因的动力学。向每只白兔(OrientalYeastCo.,Ltd.,Kbl:NZW，雄性，8周龄)玻璃体内施用50μL微球悬浮液。剂量为810μg微球(81μg本发明的萜类化合物衍生物(III))。使用提取试剂盒(由QiagenN.V.制造，RNeasyMini试剂盒，目录号74106)从取样自安乐死的兔的视网膜中回收mRNA。使用cDNA合成试剂盒(由GEHealthcareLifeSciences制造，第一链cDNA合成试剂盒)从获得的mRNA制备cDNA。获得的cDNA使用试剂(由AppliedBiosystems,Inc.制造，TaqMan(R)GeneExpressionMasterMix(目录号4369016))和探针扩增，并进行实时定量PCR(使用由AppliedBiosystems,Inc.制造的实时PCRHT7900)。当无玻璃体内施用的视网膜中Nqo1基因的表达水平被定义为1时，动力学显示于表16中。下表16中显示的数值由2只眼的平均值表示。(表16)表16.视网膜中Nqo1基因的动力学发现使用PLA-0020(在测试实施例3中证实其保持萜类化合物衍生物(III)的高含量)作为基质材料比使用PLA-0005作为基质材料更强烈地诱导Nrf2靶基因。(试验例7)当含量改变时萜类化合物衍生物(III)微球对兔视网膜基因的作用通过改变微球中含有的化合物的比例来测试视网膜中的Nqo1基因作为Nrf2靶基因的动力学。生产本发明的萜类化合物衍生物(III)-PLGA-5020[通过使用PLGA-5020作为基质材料和将本发明的萜类化合物衍生物(III)和PLA-0005的混合比率调节至1:9(10％重量)或3:7(30％重量)来制备]。使用每种测试样品并使用盐水作为溶剂来制备悬浮液，使得萜类化合物衍生物(III)的浓度为3mM。50uL每种悬浮液含有81ug萜类化合物衍生物(III)。向每只白兔(OrientalYeastCo.,Ltd.,Kbl:NZW，雄性，8周龄)玻璃体内施用50μL每种悬浮液。在玻璃体内施用后，将兔安乐死，并取样兔视网膜。通过实时定量PCR测定的视网膜中Nqo1基因的动力学显示于表17中。下表17中显示的数值由来自4只眼的平均值和标准偏差表示。(表17)表17.视网膜中Nqo1基因的动力学据发现，即使具有高含量的萜类化合物衍生物(III)的药物组合物也诱导Nrf2靶基因。玻璃体内液中的萜类化合物衍生物(III)的浓度显示于表18中。下表18中显示的数值由来自4只眼的平均值和标准偏差表示。(表18)表18.本发明的萜类化合物衍生物(III)的玻璃体内浓度(nM)(测试实施例8)发挥药理作用所需的浓度的计算通过向玻璃体局部施用包含本发明的萜类化合物衍生物(III)作为活性成分的缓释药物组合物，进行关于发挥药理作用所需的药理学有效浓度的研究。诱导Nrf2靶基因Nqo1的2倍活性时的浓度用作指标(AnalBiochem1988;169:328-)。根据该方法，通过使用在视网膜中2倍诱导Nrf2靶基因Hmox1的萜类化合物衍生物(III)的浓度作为指标来研究人中的体内药代动力学。使用PLA-0020作为基质材料生产含有10重量％的本发明的萜类化合物衍生物(III)的缓释药物组合物，并玻璃体内施用。关于Hmox1的时间依赖性诱导的结果显示于表19中。(表19)表19.通过玻璃体内施用含有PLA-0020作为基质材料的萜类化合物(III)组合物(微球)的视网膜中Nqo1基因的动力学变化从该表中显而易见，从施用缓释药物组合物起，Hmox1的约2倍或更多倍诱导被维持了28天，即约1个月。接下来，对表现出这些诱导比率所必需的靶组织(视网膜)中的药物浓度进行研究。通过玻璃体内施用缓释药物组合物而在视网膜中造成药物浓度的变化显示于表20中。(表20)表20.萜类化合物衍生物(III)的视网膜内浓度(nM)因此，在该测试中施用后，在直到28天(即约1个月)的所有时间都满足Hmox1的两倍或更多倍诱导。因此，在该测试中，据发现，在等于或高于最小视网膜内药物浓度，即施用后1个月时的视网膜浓度(来自表14的0.07μM)的浓度，获得发挥药理作用所必需的Hmox1的诱导。从表13确认，2倍诱导Hmox1基因1个月所必需的剂量为81μg/机体，这是在本测试实施例中施用的微球中的药物量。接下来，从该测试的结果预测对于人的药物的剂量。对于人，玻璃体内的容量为4mL，对于兔，玻璃体内的容量为1.5至2.5mL(InvestOphthalmolVisSci2007;48:2230-)。因此，通过使用约2倍的体积比进行校正，可以将兔玻璃体中的药物浓度外推至人。从用于获得表13的数据的药物的剂量81μg/机体(兔)，药物的必需剂量被计算为162μg/机体，前提条件是临床上期望的药理作用的持续时间是1个月。另一方面，作为棒状植入物药物组合物投放的Ozudex(R)中含有的药物的量为700μg(InvestOphthalmolVisSci20011;52:80-)。从这些推测包含本发明的萜类化合物衍生物(III)作为活性成分的药物组合物能够以临床上发挥其药理学作用的量施用所述药物。保藏号NITEBP-01914NITEBP-01915NITEBP-01916序列表的自由文本SEQIDNO:1：SANK7021416SrDNA的部分核苷酸序列SEQIDNO:2：SANK7031416SrDNA的部分核苷酸序列SEQIDNO:3：具有羟基化活性的SANK70214的蛋白的DNA序列SEQIDNO:4：具有羟基化活性的SANK70314的蛋白的DNA序列SEQIDNO:5：具有羟基化活性的SANK70214的蛋白的氨基酸序列SEQIDNO:6：具有羟基化活性的SANK70314的蛋白的氨基酸序列序列表<110>Daiichisankyo<120>用于治疗和预防眼病的缓释药物组合物<130>DSPCT-FP1532<150>JP2014-183854<151>2014-09-10<160>6<170>PatentInversion3.5<210>1<211>1476<212>DNA<213>未知<220><223>芽孢杆菌种<400>1gcgtgcctaatacatgcaagtcgagcggacgtttttgaagcttgctttaaaaacgttagc60ggcggacgggtgagtaacacgtgggcaacctaccttatcgactgggataactccgggaaa120ccggggctaataccggataacatctagcacctcctggtgccggattgaaagagggcttct180tgctctcacgatgagatgggcccgcggcgcattagctagttggagaggtaatggctcccc240aaggcgacgatgcgtagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacgg300cccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccgcaatggacgaaagtctgacgg360agcaacgccgcgtgagtgatgaagggtttcggctcgtaaagctctgttatgagggaagaa420cacgtaccgttcgaatagggcggtaccttgacggtacctcatcagaaagccacggctaac480tacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttgtccggaattattgggcgt540aaagcgcgcgcaggcggccttttaagtctgatgtgaaatcttgcggctcaaccgcaagcg600gccattggaaactgggaggcttgagtacagaagaggagagtggaattccacgtgtagcgg660tgaaatgcgtagatatgtggaggaacaccagtggcgaaggcgactctctggtctgtaact720gacgctgaggcgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgcc780gtaaacgatgagtgctaggtgttaggggtttcgatgcccgtagtgccgaagttaacacat840taagcactccgcctggggagtacggccgcaaggctgaaactcaaaggaattgacgggggc900ccgcacaagcagtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtc960ttgacatcctttgaccactctggagacagagcttccccttcgggggcaaagtgacaggtg1020gtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgca1080acccttgaccttagttgccagcatttagttgggcactctaaggtgactgccggtgacaaa1140ccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacg1200tgctacaatggatggtacaaagggttgcgaagccgcgaggtgaagccaatcccataaagc1260cattctcagttcggattgtaggctgcaactcgcctgcatgaagctggaattgctagtaat1320cgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacac1380cacgagagtttgtaacacccgaagtcggtgaggtaaccttttggagccagccgccgaagg1440tgggacagatgattggggtgaagtcgtaacaaggta1476<210>2<211>1383<212>DNA<213>巨大芽孢杆菌<400>2gatgaacgctggcggcgtgcctaatacatgcaagtcgagcgaactgattagaagcttgct60tctatgacgttagcggcggacgggtgagtaacacgtgggcaacctgcctgtaagactggg120ataacttcgggaaaccgaagctaataccggataggatcttctccttcatgggagatgatt180gaaagatggtttcggctatcacttacagatgggcccgcggtgcattagctagttggtgag240gtaacggctcaccaaggcaacgatgcatagccgacctgagagggtgatcggccacactgg300gactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccgcaatggac360gaaagtctgacggagcaacgccgcgtgagtgatgaaggctttcgggtcgtaaaactctgt420tgttagggaagaacaagtacaagagtaactgcttgtaccttgacggtacctaaccagaaa480gccacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttatccgga540attattgggcgtaaagcgcgcgcaggcggtttcttaagtctgatgtgaaagcccacggct600caaccgtggagggtcattggaaactggggaacttgagtgcagaagagaaaagcggaattc660cacgtgtagcggtgaaatgcgtagagatgtggaggaacaccagtggcgaaggcggctttt720tggtctgtaactgacgctgaggcgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctg780gtagtccacgccgtaaacgatgagtgctaagtgttagagggtttccgccctttagtgctg840cagctaacgcattaagcactccgcctggggagtacggtcgcaagactgaaactcaaagga900attgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaa960ccttaccaggtcttgacatcctctgacaactctagagatagagcgttccccttcggggga1020cagagtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtc1080ccgcaacgagcgcaacccttgatcttagttgccagcatttagttgggcactctaaggtga1140ctgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgac1200ctgggctacacacgtgctacaatggatggtacaaagggctgcaagaccgcgaggtcaagc1260caatcccataaaaccattctcagttcggattgtaggctgcaactcgcctacatgaagctg1320gaatcgctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacac1380acc1383<210>3<211>1254<212>DNA<213>未知<220><223>芽孢杆菌种<400>3atgagtcatgctgcgaacgtaaaagagaaagtgttaggctttttaagtggaaaaagtgga60gaaaacccgtttcatttatttgctgaactccgagatttgggatcggtcgtctcaatccct120aacccaatgggtgatccaaacaaaaatgcttggatgatcactaagatggatacagcaaca180aaggttctaaaggattcaaaacggttcacggttgatccggcatcgattgaaaaggaaagt240ggatttagagcggaaatggtttcagatccagatgattctcccgataccttttttacaggt300aagtctatggtttttattgacggtattgatcataagcgattgcgaatgctcgtatcgaaa360gcattcactccgaaatatatggaagggttacgtcctcgtatacaggaaatagcagacggt420ttacttgatcaagttgaatcaaaaggtgagatggatcttgtaaaagattacgcctatcct480ctaccgattattgtgatatcagaaatgttaggagtacctaaagaagatcatgaaaatcta540caaatatggtcatcggctatagctaaaggcttaggctgggggaaacaagatccagccgtg600cagcagcatctaaaagattttggagattacacaaagaagcttgtagaaaagaaaagagct660catttagaggatgatctcatcagccagctgatccaaattgaagaagagggagaacgtcta720agtgaagaagagctgatctcgatgattacacttcttatctttgcagggcatgaaacaacg780tctaacctgatcgctacaggtagtatgatgttatttgaccacccggagcaattaaataaa840ttaaaatcaaacctagatctggtaccaactgctgttgaagaacttctgcgttttaacggt900ccttctacaactgtaggcccacgtttcgcaaaggaagatgtgaatatagatggacaagag960atcaaaaaaggagatatgctccttatccttgttaagtcagcgaaccgagatgaagaagtg1020ttctctgattccgaagaattggatgtcagtcgttcaattcaccgacatttagcctttggt1080tttggtatgcatatgtgccttggagctcctttagctcgagtggaaggagacgtcgctttt1140acaacgctcttaaaaaggctaccgaacatagagcttagtattccgcctgaggaagtaaag1200tggcaattcacgctctcaacgcaaggcctttcatcattgcccgtttcattctaa1254<210>4<211>1215<212>DNA<213>巨大芽孢杆菌<400>4atgaaaaccgaaagagaaaacggaatcgtccgtcaagtgaatacgattcaaacaaaagaa60gagcgctttaatcctttttcatggtatgaagagatgagaaacagcgcgcctgtgcgatgg120gatgaagaaaggcaggtatgggatgtttttcactatgatggggtcaaagaagtgctggaa180caaaaaaatattttttcttctgatcgaagacctccacaaaaccaaagacaaactgctcta240ggaacgagcctaattaatattgatccgcctaagcatgctgaaatgagagcgcttgttaat300aaagcttttacgcctaaagcaatgaaagcatgggagcctaaaattgcgcgcattaccgct360gaattattacaagaagttgagcatcttgaagatattgatatagtcgagcatctttcctat420ccgcttccggttatggtaattgccgatattttaggcgtcccgatagaagatcagcgtcag480tttaaagattggtcggatattatcgtagcgggtccatcgaataatgaacgtgaaacgctc540gaaaaattgcagcaagagaaaatgaaagcaaacgatgagttagaaacttacttttatcga600atcattgaagaaaagcgcacgcagccaggagatgatattatttccgtgcttcttcaagca660aaagaagaagggaagcagctaacggatgaagaaatcgtcgggttttccattttgctgctg720attgcaggcaacgaaacaaccacgaacttaatttcaaatacgatttattgtttaatggaa780gataaagcttcttttgaacgactcaaacgagaaaaagaacttttaccttctgcgattgaa840gaagttcttcgctatcgttcacccgttcaggctcttcaccgaatcgtaaaaaaagatgtg900gttcttgcagggaagaaattaaaagcgggcgaacacgtcgttccatggatgggatccgcg960caccgagatgcgcagtattttgaagacccggatgtatttcaaatcgatcgaaagccaaat1020atccatatggcatttggaagagggattcatttttgcttaggagcaccgcttgctcgaata1080gaagcaaaagttatgctggctgaactgattgaccgctatccgcatatggactggagcccg1140gcatttgagttaaagccgattgaaagcacgtttgtgtacgggttagaagaattattgatt1200cgtaaacatgtataa1215<210>5<211>417<212>PRT<213>未知<220><223>芽孢杆菌种<400>5MetSerHisAlaAlaAsnValLysGluLysValLeuGlyPheLeuSer151015GlyLysSerGlyGluAsnProPheHisLeuPheAlaGluLeuArgAsp202530LeuGlySerValValSerIleProAsnProMetGlyAspProAsnLys354045AsnAlaTrpMetIleThrLysMetAspThrAlaThrLysValLeuLys505560AspSerLysArgPheThrValAspProAlaSerIleGluLysGluSer65707580GlyPheArgAlaGluMetValSerAspProAspAspSerProAspThr859095PhePheThrGlyLysSerMetValPheIleAspGlyIleAspHisLys100105110ArgLeuArgMetLeuValSerLysAlaPheThrProLysTyrMetGlu115120125GlyLeuArgProArgIleGlnGluIleAlaAspGlyLeuLeuAspGln130135140ValGluSerLysGlyGluMetAspLeuValLysAspTyrAlaTyrPro145150155160LeuProIleIleValIleSerGluMetLeuGlyValProLysGluAsp165170175HisGluAsnLeuGlnIleTrpSerSerAlaIleAlaLysGlyLeuGly180185190TrpGlyLysGlnAspProAlaValGlnGlnHisLeuLysAspPheGly195200205AspTyrThrLysLysLeuValGluLysLysArgAlaHisLeuGluAsp210215220AspLeuIleSerGlnLeuIleGlnIleGluGluGluGlyGluArgLeu225230235240SerGluGluGluLeuIleSerMetIleThrLeuLeuIlePheAlaGly245250255HisGluThrThrSerAsnLeuIleAlaThrGlySerMetMetLeuPhe260265270AspHisProGluGlnLeuAsnLysLeuLysSerAsnLeuAspLeuVal275280285ProThrAlaValGluGluLeuLeuArgPheAsnGlyProSerThrThr290295300ValGlyProArgPheAlaLysGluAspValAsnIleAspGlyGlnGlu305310315320IleLysLysGlyAspMetLeuLeuIleLeuValLysSerAlaAsnArg325330335AspGluGluValPheSerAspSerGluGluLeuAspValSerArgSer340345350IleHisArgHisLeuAlaPheGlyPheGlyMetHisMetCysLeuGly355360365AlaProLeuAlaArgValGluGlyAspValAlaPheThrThrLeuLeu370375380LysArgLeuProAsnIleGluLeuSerIleProProGluGluValLys385390395400TrpGlnPheThrLeuSerThrGlnGlyLeuSerSerLeuProValSer405410415Phe<210>6<211>404<212>PRT<213>巨大芽孢杆菌<400>6MetLysThrGluArgGluAsnGlyIleValArgGlnValAsnThrIle151015GlnThrLysGluGluArgPheAsnProPheSerTrpTyrGluGluMet202530ArgAsnSerAlaProValArgTrpAspGluGluArgGlnValTrpAsp354045ValPheHisTyrAspGlyValLysGluValLeuGluGlnLysAsnIle505560PheSerSerAspArgArgProProGlnAsnGlnArgGlnThrAlaLe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