本发明涉及新型的5-(羟烷基)-1-苯基-1,2,4-三唑衍生物、制备这种化合物的方法、含有这种化合物的药物组合物以及这种化合物或组合物用于治疗和/或预防疾病、特别是用于治疗和/或预防心血管疾病和肾脏疾病的用途。
人体的液体含量由各种生理控制机理决定，其目的是保持人体液体含量的恒定（容量自体稳定）。在该过程中，血管系统的体积充填量以及血浆的渗透性均由适当的感受器（压力感受器和渗透压感受器）连续地记录。这些感受器向脑的相关中心提供的信息调节饮水行为并借助于体液信号和神经信号控制经由肾的液体排泄。肽类激素加压素在其中起重要作用[schrierr.w.,abraham,w.t.,newengl.j.med.341,577-585（1999）]。
加压素在第三脑室（下丘脑）壁中的视束上核和室旁核中的特化的内分泌神经元中产生，并从那里沿着所述神经元的神经突被送到脑下垂体后叶（神经垂体）中。在那里响应刺激将该激素释放进血流中。容量损失（例如由于急性出血、大量出汗、长时间口渴或腹泻）是该激素大量释放的刺激因素。相反地，血管内容量的增加（例如由于液体摄入的增加）抑制加压素的分泌。
加压素主要通过与3种受体的结合来发挥它的作用，所述受体被分类为v1a-、v1b-和v2-受体，且属于g蛋白偶联受体家族。v1a受体主要位于血管平滑肌肉组织的细胞上。它们的活化导致血管收缩，从而升高外周阻力和血压。除此以外，在肝脏中也可以检测到v1a受体。在中枢神经系统中可以检测到v1b受体（也称作v3受体）。与促皮质素释放激素（crh）一起，加压素经由v1b受体调节促肾上腺皮质激素（acth）的基础的和应激诱导的分泌。v2受体位于远端管状上皮和肾集合管的上皮中。它们的活化使得这些上皮可透过水。该现象是由于在上皮细胞的腔膜中嵌入了水通道蛋白（特殊的水通道）。
根据由于激素缺乏（例如由于脑下垂体损伤）造成的尿崩症的临床表现，加压素对于从肾中的尿中重吸收水的重要性变得清晰可见。如果不给他们施用替代激素，遭受该病症的患者每24小时排泄最多20升尿。该体积相当于约10%的原尿。由于其对于从尿中重吸收水极为重要，加压素也同义地称作抗利尿激素（adh）。因此，加压素/adh对v2受体的作用的药理学抑制会导致增加的尿排泄。但是，与其它利尿剂（噻嗪类和袢利尿剂类）的作用相反，v2受体拮抗剂造成增加的水排泄，而不显著增加电解质的排泄。这意味着，通过v2拮抗药物，可以恢复容量自体稳定，而不影响电解质体内稳态。因此，具有v2拮抗活性的药物似乎特别适合用于治疗与身体的水过载有关、而没有同时充分增加电解质的所有疾病状态。
在临床化学中，显著的电解质异常可作为低钠血症（钠浓度<135mmol/l）测得；其是住院患者中最重要的电解质异常，仅在美国而言具有约5%的发生率或每年250000例。如果血浆钠浓度降到115mmol/l以下，则面临昏迷状态和死亡。根据根本原因，区分为低容量性、正常容量性和高容量性低钠血症。临床上重要的是具有水肿形成的血容量过多的形式。它们的典型实例是不适当的adh/加压素分泌（siadh）的综合征（例如在颅脑损伤后或者作为癌的肿瘤伴随症候）和在肝硬化、多种肾病和心力衰竭中的高容量性低钠血症[delucal.等人,am.j.cardiol.96（增刊）,19l-23l（2005）]。特别是，患有心力衰竭的患者尽管其相对的低钠血症和血容量过多，经常表现出升高的加压素水平，这被视作心力衰竭中普遍被扰乱的神经体液性调节的后果[francisg.s.等人,circulation82,1724-1729（1990）]。
被扰乱的神经体液性调节主要表现为交感紧张的升高和肾素-血管紧张素-醛固酮系统的不适当活化。现在，心力衰竭的药理学治疗的固有部分是一方面通过β-受体阻滞剂和另一方面通过ace抑制剂或血管紧张素-受体阻滞剂来抑制这些组分，但目前，在晚期心力衰竭中加压素分泌的不适当升高仍然是不可充分治疗的。除了由v2受体介导的水的保留和与其有关的在后负荷增加方面不利的血液动力学后果以外，左心室的排空、肺血管中的压力和心输出量也受到v1a介导的血管收缩的不利影响。此外，基于动物实验数据，对心肌的直接的肥厚促进作用也归因于加压素。与肾的容积扩张的效应（其由v2受体的活化介导）不同，对心肌的这种直接作用通过v1a受体的活化来触发。
出于这些理由，抑制加压素对v2和/或v1a受体的作用的试剂似乎适用于治疗心力衰竭。尤其是，具有对两种加压素受体（v1a和v2）的组合活性的化合物应当具有期望的肾脏效应以及血液动力学效应并且因而提供对于治疗心力衰竭患者而言特别理想的特性。提供这样的组合的加压素拮抗剂也似乎是合理的，因为经由v2受体阻滞单独介导的容量减少会引起渗透压感受器的刺激，且因此引起加压素释放的进一步代偿性增加。经此，在缺乏同时阻滞v1a受体的组分存在下，会进一步强化加压素的有害作用，例如血管收缩和心肌肥厚[saghip.等人,europ.heartj.26,538-543（2005）]。
在wo2005/063754-a1和wo2005/105779-a1中已经记载了某些4-苯基-1,2,4-三唑-3-基衍生物用作加压素v1a受体拮抗剂，其可用于治疗妇科疾病，尤其是月经失调，例如痛经。
在wo2011/104322-a1中，已经公开了一组特定的双芳基连接的1,2,4-三唑-3-酮类（包括其5-苯基-1,2,4-三唑-3-基和1-苯基-1,2,3-三唑-4-基衍生物）作为可用于治疗和/或预防心血管疾病的加压素v1a和/或v2受体拮抗剂。然而，在进一步研究该结构类别的过程中，当口服给予清醒大鼠后体内评估时，发现候选化合物经常受挫于不令人满意的促排水效力。然而，如上所述，稳健的促排水功效对于治疗与身体的水过载有关的疾病状态，例如充血性心力衰竭而言是期望的先决条件。
促排水效力的显著增加也将有助于减少为达到和保持期望的疗效所需要的物质的量，从而在治疗可能已经面临例如急性或慢性心力衰竭或肾衰竭的高风险的患者的过程中限制不可接受的副作用和/或不需要的药物-药物相互作用的可能性。
因此，本发明要解决的技术问题可视为识别并提供用作有效的加压素v1a和v2受体拮抗剂并且另外在体内还表现出促排水能力显著增加的新化合物。
出人意料地，现在已经发现某些5-(羟烷基)-1-苯基-1,2,4-三唑衍生物是非常有效的加压素v1a和v2受体拮抗剂，其在口服施用后在体内表现出显著增强的促排水效力。这种提高的活性特性使得本发明的化合物特别可用于治疗和/或预防心血管疾病和肾脏疾病。
在一个方面，本发明涉及通式(i)的5-(羟烷基)-1-苯基-1,2,4-三唑衍生物，
其中
r1为氢或甲基，且
r2a和r2b各自独立地选自氢、氟、氯、氰基、甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、乙基、甲氧基、二氟甲氧基和三氟甲氧基。
根据本发明的化合物也可以以它们的盐、溶剂化物和/或所述盐的溶剂化物的形式存在。
根据本发明的化合物是式(i)的化合物和它们的盐、溶剂化物和所述盐的溶剂化物；包含于以下提及的化学式的式(i)中的化合物和它们的盐、溶剂化物和所述盐的溶剂化物；以及包含于式(i)中且以下作为过程产物和/或实施方案实例提及的化合物和它们的盐、溶剂化物和所述盐的溶剂化物；其中包含于式(i)中且以下提及的化合物尚未成为盐、溶剂化物和所述盐的溶剂化物。
用于本发明的盐优选为根据本发明的化合物的药学上可接受的盐(例如，参见s.m.berge等人,"pharmaceuticalsalts",j.pharm.sci.1977,66,1-19)。也包括下述盐：尽管其本身不适合药用，但是其可以用于例如分离、纯化或储存根据本发明的化合物。
药学上可接受的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘二磺酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸的盐。
药学上可接受的盐也包括常规碱的盐，例如碱金属盐（例如钠盐和钾盐）、碱土金属盐（例如钙盐和镁盐）和铵盐，所述铵盐源自氨或有机胺，例如示例性地且优选地，乙胺、二乙胺、三乙胺、n,n-二异丙基乙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基氨基乙醇、二乙基氨基乙醇、普鲁卡因、二环己胺、二苄胺、n-甲基吗啉、n-甲基哌啶、精氨酸、赖氨酸和1,2-乙二胺。
在本发明范围内，溶剂化物指根据本发明的化合物的这样的形式：其通过与溶剂分子的化学计量配位作用形成固体或液体状态的络合物。水合物是溶剂化物的一种具体形式，其中所述配位作用是与水发生。在本发明范围内，水合物是优选的溶剂化物。
本发明的化合物由于不对称中心或者由于受阻旋转可以以异构体(对映异构体、非对映异构体)的形式存在。可以存在任何异构体，其中不对称中心为(r)-、(s)-或(r,s)构型。
也会认识到当本发明的化合物中存在两个或更多个不对称中心时，经常可能存在例示结构的多个非对映异构体和对映异构体，而纯的非对映异构体和纯的对映异构体表示优选的实施方案。这意味着纯的立体异构体、纯的非对映异构体、纯的对映异构体以及它们的混合物都在本发明的范围内。
本发明的化合物的所有异构体，无论是分离的、纯的、部分纯的或外消旋混合物，都包含在本发明的范围内。所述异构体的纯化和所述异构体混合物的分离可以通过本领域中已知的标准技术来实现。例如，非对映异构体混合物可以通过色谱法或结晶化而分离成单独的异构体，外消旋物可以通过手性相上的色谱法或者通过拆分而分离成各对映异构体。
此外，上述化合物的所有可能的互变异构体形式也包含在本发明中。
本发明也包括根据本发明的化合物的所有合适的同位素变体。根据本发明的化合物的同位素变体在这里理解为是指这样的化合物：其中在本发明的化合物内至少一个原子已经被替换为相同原子序数的另一原子，但是所述另一原子的原子质量不同于在自然界中通常存在或优势存在的原子质量。可以掺入根据本发明的化合物中的同位素的实例是：氢、碳、氮、氧、氟、氯、溴和碘的同位素，诸如2h（氘）、3h（氚）、13c、14c、15n、17o、18o、18f、36cl、82br、123i、124i、129i和131i。根据本发明的化合物的特定同位素变体（特别是其中已经掺入一种或多种放射性同位素的那些）可能是有益的，例如，用于检查作用机理或活性化合物在体内的分布。由于相对容易的可制备性和可检测性，用3h、14c和/或18f同位素标记的特殊化合物适用于该目的。另外，由于化合物的更大代谢稳定性，同位素（例如氘）的掺入可以导致特定的治疗益处，例如体内半衰期的延长或必需的活性剂量的降低。因此，根据本发明的化合物的这种改性在某些情况下也可以构成本发明的优选实施方案。通过本领域技术人员已知的方法，例如通过在下面描述的方法和在工作实施例中描述的方法，通过在其中使用具体试剂和/或起始化合物的相应的同位素改性，可以制备根据本发明的化合物的同位素变体。
在一个具体实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r1为甲基。
在另一个具体实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r2a和r2b中的至少一个不为氢。
在又一个具体实施方案中，本发明涉及式(i)的化合物，其中r1为氢或甲基，且
r2a和r2b独立地选自氢、氟、氯、甲基和甲氧基，其中r2a和r2b中的至少一个不为氢。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及根据式(i)的化合物，其选自以下化合物：
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(3-氯苯基)-5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(3-氟苯基)-5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
5-(4-氯苯基)-2-{[5-(羟甲基)-1-(2-甲基苯基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
2-({1-(2-氯-4-氟苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
2-{[1-(2-氯-4-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)；
2-{[1-(2-氯-4-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)；
2-({1-(2-氯-5-氟苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
2-{[1-(2-氯-5-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)；
2-{[1-(2-氯-5-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)；
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氟苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氟苯基)-5-[(1r)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氟苯基)-5-[(1s)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氯苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氯苯基)-5-[(1r)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氯苯基)-5-[(1s)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
5-(4-氯苯基)-2-({1-(2-氯苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
5-(4-氯苯基)-2-({1-(2-氯苯基)-5-[(1r)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；和
5-(4-氯苯基)-2-({1-(2-氯苯基)-5-[(1s)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮。
在一个特别优选的实施方案中，本发明涉及根据式(i)的化合物，其选自以下化合物：
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氟苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氟苯基)-5-[(1s)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氯苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氯苯基)-5-[(1s)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；
5-(4-氯苯基)-2-({1-(2-氯苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮；和
5-(4-氯苯基)-2-({1-(2-氯苯基)-5-[(1s)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种制备通式(i)的化合物的方法，其特征在于，首先使式(ii)的化合物
与肼反应而得到式(iii)的酰肼，
然后在碱的存在下与式(iv)的脒或其盐缩合
其中r1具有上述含义，
而得到式(v)的1,2,4-三唑衍生物和/或其互变异构体，
其中r1具有上述含义，
然后在铜催化剂和胺碱的存在下与式(vi)的苯基硼酸偶联
其中r2a和r2b具有上述含义，
而得到式(i)的目标化合物，
其中r1、r2a和r2b具有上述含义，
接着任选地，在适当情况下，通过(i)优选使用色谱法，分离式(i)的化合物由此得到其各自的非对映异构体，和/或(ii)通过用相应的溶剂和/或酸或碱处理而将式(i)的化合物转化为其各自的水合物、溶剂化物、盐和/或所述盐的水合物或溶剂化物。
通过在上述缩合反应中使用适当的脒(iv)[r1=甲基]的对映异构体（即(iv-a)或(iv-b)）或其盐，也可以得到非对映异构体纯形式的式(i)的化合物（其中r1表示甲基）。
(ii)→(iii)的转化通过在+20℃至+100℃的温度下在醇溶剂中用肼或水合肼处理甲基酯(ii)而以常规方式进行，所述醇溶剂例如为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇或正丁醇。
(iii)+(iv)→(v)的缩合反应通常在惰性偶极非质子溶剂中在足够强的碱的存在下进行，所述惰性偶极非质子溶剂例如为n,n-二甲基甲酰胺(dmf)、n,n-二甲基乙酰胺(dma)、二甲基亚砜(dmso)、n-甲基吡咯烷酮(nmp)或n,n’-二甲基丙撑脲(dmpu)，所述足够强的碱例如为氢化钠或者钠或钾的醇盐，例如甲醇钠或甲醇钾、乙醇钠或乙醇钾、或者叔丁醇钠或叔丁醇钾。所述脒(iv)可以原样用于该反应中或者以盐的形式例如盐酸盐的形式使用。在后者的情况下，使用成比例过量的碱。该反应通常在+80℃至+150℃的温度下进行。利用微波反应器装置加热对于该缩合反应可能具有有益的效果。
通过该反应制备的式(v)的1,2,4-三唑衍生物也可以以其它互变异构体形式存在，例如(v-a)或(v-b)，或者以互变异构体混合物的形式存在。
(v)+(vi)→(i)的偶联反应通常借助于铜催化剂和胺碱进行["chan-lam偶联"条件;参见例如d.m.t.chan等人,tetrahedronlett.44(19),3863-3865(2003);j.x.qiao和p.y.s.lam,synthesis,829-856(2011);k.s.rao和t.-s.wu,tetrahedron68,7735-7754(2012)]。适合于该过程的铜催化剂特别是铜(ii)盐，例如乙酸铜(ii)、三氟甲磺酸铜(ii)或溴化铜(ii)。实用的胺碱包括：例如三乙胺、n,n-二异丙基乙胺、吡啶和4-(n,n-二甲基氨基)吡啶。该反应在惰性有机溶剂例如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、1,4-二氧杂环己烷、1,2-二甲氧基乙烷、甲苯、吡啶、乙酸乙酯、乙腈或n,n-二甲基甲酰胺中进行，或者在这些溶剂的混合物中进行。优选地，使用吡啶作为溶剂和碱。该偶联反应通常在+20℃至+120℃的温度下、优选在+20℃至+70℃的温度下进行。伴随的微波辐射在该反应中也可能具有有益的效果。
如果发生，由在其它三唑氮原子上发生的偶联反应产生的位置异构的苯基三唑衍生物[cf.互变异构体(v-a),(v-b)]可以通过常规的hplc色谱法与目标产物(i)容易地分离。
式(ii)的化合物可以通过国际专利申请wo2011/104322-a1中记载的程序来合成(也可以参见以下的合成方案1a和1b)。
式(iv)、(iv-a)、(iv-b)和(vi)的化合物可以是市售的、从文献中已知的，或者可以从容易获得的起始原料通过改变文献中记载的标准方法而制备。用于制备该起始原料的详细程序和参考文献也可以在关于起始原料和中间体制备的章节中的实验部分中找到。
本发明的化合物的制备可以通过以下的合成方案来说明：
方案1a
[cf.国际专利申请wo2011/104322-a1]。
方案1b
[cf.国际专利申请wo2011/104322-a1]。
方案2
本发明的化合物具有有价值的药理学性质，且可以用于预防和/或治疗人类和其它哺乳动物的多种疾病和疾病引起的状态。
在本发明的上下文中，术语“治疗（treatment或treating）”包括抑制、延迟、缓解、减轻、阻止、减少或者复原疾病、病症、病情或状态、其发展和/或进程、和/或其症状。术语“预防（prevention或preventing）”包括减少获得、感染或者经历疾病、病症、病情或状态、其发展和/或进程、和/或其症状的风险。术语预防包括防治。疾病、病症、病情或状态的治疗或预防可以是部分的或完全的。
在整个文件中，为了简单起见，相比于复数语言，优选使用单数语言，但是如果不另外说明，通常意味着包括复数语言。例如，表述“一种治疗患者的疾病的方法，其包括向患者给予有效量的式(i)的化合物”意味着包括同时治疗一种以上的疾病和给予一种以上的式(i)的化合物。
本发明的化合物是非常有效的加压素v1a和v2受体的双重拮抗剂。此外，本发明的化合物在口服给药后在体内表现出显著的促排水效果。因此，预期本发明的化合物作为治疗和/或预防疾病、特别是治疗和/或预防心血管疾病和肾脏疾病的治疗剂是非常有价值的。
可以使用本发明的化合物治疗和/或预防的上下文中的心血管疾病包括但不限于以下疾病：急性和慢性心力衰竭（包括恶化性慢性心力衰竭（或心力衰竭的住院治疗）和充血性心力衰竭）、动脉高血压、顽固性高血压、肺动脉高血压、冠心病、稳定型和不稳定型心绞痛、房性和室性心律失常、心房和心室节律紊乱和传导障碍例如i-iii级房室传导阻滞(avbi-iii)、室上性心动过速、心房颤动、心房扑动、心室颤动、心室扑动、室性心动过速、扭转型室性心动过速、心房和心室期外收缩、av结外收缩、病窦综合症、晕厥、av-节点折返性心动过速和预激综合征、急性冠状动脉综合征（acs）、自身免疫性心脏疾病（心包炎、心内膜炎、心瓣炎、主动脉炎、心肌症）、休克例如心源性休克、感染性休克和过敏性休克、动脉瘤、boxer心肌病（室性早搏）、以及血栓栓塞性疾病和局部缺血例如外周灌注障碍、再灌注损伤、动脉和静脉血栓、心肌机能不全、内皮功能障碍、微血管和大血管损伤（血管炎），预防再狭窄（例如在溶栓治疗、经皮腔内血管成形术（pta）、经皮腔内冠状动脉血管成形术（ptca）、心脏移植和旁通手术后）、动脉硬化、脂质代谢紊乱、低脂蛋白血症（hypolipoproteinaemias）、血脂异常、高甘油三酯血症、高脂血症和合并高脂血症、高胆固醇血症、无β脂蛋白血症、谷固醇血症、黄瘤病、丹吉尔病、脂肪过多、肥胖症、代谢综合征、短暂缺血性发作、中风、炎症性心血管病、外周和心脏血管疾病、外周循环疾病、冠状动脉和外周动脉痉挛，以及水肿例如肺水肿、脑水肿、肾水肿和心力衰竭有关的水肿。
在本发明的意义上，术语心力衰竭也包括更具体的或相关的疾病形式，例如右心衰竭、左心衰竭、总体衰竭、缺血性心肌病、扩张型心肌病、先天性心脏缺陷、心脏瓣膜缺陷、伴随心脏瓣膜缺陷的心力衰竭、二尖瓣狭窄、二尖瓣闭锁不全、主动脉瓣狭窄、主动脉瓣闭锁不全、三尖瓣狭窄、三尖瓣闭锁不全、肺动脉瓣狭窄、肺动脉瓣闭锁不全、复合心脏瓣膜缺陷、心肌炎症（心肌炎）、慢性心肌炎、急性心肌炎、病毒性心肌炎、糖尿病心力衰竭、酒精中毒性心肌病、心脏贮存疾病、射血分数正常性心力衰竭（hfpef或舒张期心力衰竭）和射血分数减少性心力衰竭（hfref或收缩期心力衰竭）。
根据本发明的化合物也适合于治疗和/或预防肾脏疾病，特别是急性和慢性肾功能不全以及急性和慢性肾衰竭。在本发明的意义上，术语肾功能不全包括肾功能不全的急性和慢性临床表现，以及潜在的或相关的肾脏疾病，例如肾脏灌注不足、透析相关性低血压、尿路梗阻、肾小球病、肾小球肾炎、急性肾小球肾炎、肾小球硬化症、肾小管间质疾病、肾病，例如原发性和先天性肾病、肾炎、免疫性肾脏疾病，例如肾移植排斥、免疫复合物诱导的肾脏疾病、有毒物质诱导的肾病、造影剂诱导的肾病、糖尿病性和非糖尿病性肾病、肾盂肾炎、肾囊肿、肾硬化、高血压性肾硬化和肾病综合征，其例如可以通过异常降低的肌酸酐和/或水排泄，异常增加的尿素、氮、钾和/或肌酸酐的血液浓度，改变的肾脏酶例如谷氨酰氨合成酶的活性，改变的尿液渗透压或尿量，增加的微量白蛋白尿、大量白蛋白尿，肾小球和小动脉的病变，肾小管扩张，高磷血症和/或需要透析而在诊断上表征。本发明还包括根据本发明的化合物用于治疗和/或预防肾功能不全的后遗症，例如肺水肿、心力衰竭、尿毒症、贫血、电解质紊乱（例如高钾血症、低钠血症）和骨和碳水化合物代谢紊乱的用途。
本发明的化合物尤其可用于治疗和/或预防心肾综合征(crs)及其各种亚型。该术语包括特定的心脏和肾脏的疾病，其中一个器官的急性或慢性功能障碍可能导致另一个器官的急性或慢性功能障碍。crs根据启动损伤的器官以及疾病的急性和慢性被细分为5个类型(类型1：由急性失代偿性心力衰竭导致的肾功能不全的发展；类型2：由进行性肾功能障碍导致的慢性充血性心力衰竭；类型3：由肾功能的突然下降导致的急性心功能不全；类型4：慢性肾脏疾病导致心脏重构；类型5：包括心脏和肾脏的全身性疾病)[参见例如m.r.kahn等人,naturerev.cardiol.10,261-273(2013)]。
根据本发明的化合物也适用于治疗和/或预防多囊性肾病（pckd）和adh分泌不足综合征（siadh）。此外，根据本发明的化合物适合用作利尿剂用于治疗水肿和电解质紊乱，尤其是在高容量性和正常容量性低钠血症的情况中。
此外，根据本发明的化合物可以用于治疗和/或预防原发性和继发性雷诺现象、微循环紊乱、跛行、外周和自主神经病变、糖尿病性微血管病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性溃疡肢、坏疽、crest综合征、红斑症、甲癣、风湿性疾病和用于促进伤口愈合。
此外，本发明的化合物适合用于治疗泌尿系统疾病和男性和女性的泌尿生殖系统的疾病，例如，良性前列腺综合征（bps）、良性前列腺增生（bph）、良性前列腺肥大（bpe）、膀胱出口梗阻（boo）、下泌尿道综合征（luts）、神经源性膀胱活动过度（oab）、间质性膀胱炎（ic）、尿失禁（ui），例如混合性、急迫性、压力性和溢流性尿失禁（mui、uui、sui、oui）、骨盆疼痛、勃起功能障碍和女性性功能障碍。
根据本发明的化合物也可以用于治疗和/或预防炎性疾病、哮喘疾病、慢性阻塞性肺病（copd）、急性呼吸窘迫综合征（ards）、急性肺损伤（ali）、α-1抗胰蛋白酶缺乏症（aatd）、肺纤维化、肺气肿（例如吸烟引起的肺气肿）和囊性纤维化（cf）。此外，本发明的化合物可以用于治疗和/或预防肺动脉高血压（pah）和其他形式的肺高血压（ph），包括与左心室疾病、hiv感染、镰状细胞贫血、血栓栓塞（cteph）、肉状瘤病、慢性阻塞性肺病（copd）或肺纤维化相关的肺高血压。
此外，根据本发明的化合物可用于治疗和/或预防肝硬化、腹水、糖尿病和糖尿病并发症，例如神经病和肾病。此外，本发明的化合物适合用于治疗和/或预防中枢神经病症例如焦虑状态和抑郁症、青光眼和癌症，特别是肺肿瘤，以及用于管理昼夜节律失调，例如时差和轮班工作。
此外，根据本发明的化合物可以用于治疗和/或预防疼痛病症、肾上腺疾病，例如嗜铬细胞瘤和肾上腺卒中、肠疾病，例如克罗恩氏病和腹泻、月经紊乱，例如痛经，或者子宫内膜异位、早产和用于安胎。
由于它们的活性和选择性特性，据信本发明的化合物特别适合用于治疗和/或预防急性和慢性心力衰竭、心肾综合征(类型1-5)、高容量性和正常容量性低钠血症、肝硬化、腹水、水肿和adh分泌不足综合征(siadh)。
上述疾病已经在人类中充分表征，但是在其它哺乳动物中也存在类似的病因，并且可以使用本发明的化合物和方法治疗这些哺乳动物。
因此，本发明还涉及本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病、尤其是上述疾病的用途。
本发明还涉及本发明的化合物用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物用于治疗和/或预防疾病、尤其是上述疾病。
本发明还涉及本发明的化合物在用于治疗和/或预防疾病、尤其是上述疾病的方法中的用途。
本发明还涉及通过使用有效量的至少一种本发明的化合物治疗和/或预防疾病、尤其是上述疾病的方法。
本发明的化合物可以以单独药剂的形式给药，或者可以与一种或多种另外的治疗剂联合给药，只要该联合给药不会导致不期望的和/或不能接受的副作用。这样的联合治疗包括：给予含有如上所定义的式(i)的化合物和一种或多种另外的治疗剂的单一的药物剂型，以及以其各自单独的药物剂型给予式(i)的化合物和各另外的制剂。例如，式(i)的化合物和治疗剂可以以单一（固定）口服剂量组合物例如片剂或胶囊的形式一起给予患者，或者各药剂可以以单独的剂型给予。
当使用单独的剂型时，式(i)的化合物和一种或多种另外的治疗剂可以基本上在同一时间（即同时）给予、或者在分别错开的时间（即依次）给予。
特别是，本发明的化合物可以与以下物质固定或分开组合使用：
●有机硝酸酯和no供体，例如硝普钠、硝酸甘油、单硝酸异山梨酯、二硝酸异山梨酯、吗多明或sin-1和吸入的no；
●抑制环单磷酸鸟苷(cgmp)的降解的化合物，例如磷酸二酯酶(pde)1、2和/或5的抑制剂，尤其是pde-5抑制剂，例如西地那非、伐地那非、他达拉非、乌地那非、达生他非、阿伐那非、米罗那非或罗地那非；
●正性肌力药物，例如强心苷(地高辛)和β-肾上腺素能的和多巴胺能的激动剂诸如异丙肾上腺素、肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺或多巴酚丁胺；
●利尿钠肽，例如心房利尿钠肽(anp、阿那立肽)、b-型利尿钠肽或脑利尿钠肽(bnp、奈西立肽)、c-型利尿钠肽(cnp)或尿扩张素；
●钙敏化剂，例如且优选左西孟旦；
●不依赖于no和血红素的可溶性鸟苷酸环化酶活化剂，例如尤其是cinaciguat以及在wo01/19355、wo01/19776、wo01/19778、wo01/19780、wo02/070462和wo02/070510中记载的化合物；
●不依赖于no、但是依赖于血红素的鸟苷酸环化酶刺激剂，例如尤其是利奥西呱、维利西呱以及在wo00/06568、wo00/06569、wo02/42301、wo03/095451、wo2011/147809、wo2012/004258、wo2012/028647和wo2012/059549中记载的化合物；
●人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(hne)的抑制剂，例如西维来司他或dx-890(reltran)；
●抑制信号转导级联的化合物，特别是酪氨酸和/或丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，例如尼达尼布、达沙替尼、尼洛替尼、波舒替尼、瑞戈非尼、索拉非尼、舒尼替尼、西地尼布、阿西替尼、替拉替尼、伊马替尼、布立尼布、帕唑帕尼、瓦他拉尼、吉非替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、卡奈替尼、来妥替尼、培利替尼、司马沙尼或坦度替尼；
●影响心脏的能量代谢的化合物，例如且优选乙莫克舍、二氯乙酸盐、雷诺嗪或曲美他嗪，或者完全或部分腺苷a1受体激动剂；
●影响心率的化合物，例如且优选伊伐布雷定；
●心肌肌球蛋白激活剂，例如且优选omecamtivmecarbil(ck-1827452)；
●抗血栓剂，例如且优选地选自血小板聚集抑制剂、抗凝血剂和纤溶酶原物质；
●降血压剂，例如且优选地选自钙拮抗剂、血管紧张素aii拮抗剂、ace抑制剂、血管肽酶抑制剂、内皮素拮抗剂、肾素抑制剂、α-受体阻滞剂、β-受体阻滞剂、盐皮质激素受体拮抗剂和利尿剂；和/或
●改变脂肪代谢的药剂，例如且优选地选自甲状腺受体激动剂、胆固醇合成抑制剂（例如且优选hmg-coa-还原酶或角鲨烯合成抑制剂、acat抑制剂、cetp抑制剂、mtp抑制剂、ppar-α、ppar-γ和/或ppar-δ激动剂）、胆固醇吸收抑制剂、脂肪酶抑制剂、聚合胆汁酸吸附剂、胆汁酸重吸收抑制剂和脂蛋白(a)拮抗剂。
抗血栓剂优选地理解为选自血小板聚集抑制剂、抗凝血剂和纤溶酶原物质的化合物。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与血小板聚集抑制剂联合给药，所述血小板聚集抑制剂例如且优选是阿司匹林、氯吡格雷、噻氯匹定或双嘧达莫。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与凝血酶抑制剂联合给药，所述凝血酶抑制剂例如且优选是希美加群、达比加群、美拉加群、比伐卢定或依诺肝素。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与gpiib/iiia拮抗剂联合给药，所述gpiib/iiia拮抗剂例如且优选是替罗非班或阿昔单抗。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与因子xa抑制剂联合给药，所述因子xa抑制剂例如且优选为利伐沙班、阿派沙班、奥米沙班、非德沙班、雷扎沙班、磺达肝素、艾卓肝素、du-176b、pmd-3112、ym-150、kfa-1982、emd-503982、mcm-17、mln-1021、dx9065a、dpc906、jtv803、ssr-126512或ssr-128428。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与肝素或低分子量（lmw）肝素衍生物联合给药。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与维生素k拮抗剂联合给药，所述维生素k拮抗剂例如且优选为香豆素。
降血压剂优选地理解为是指选自下述的化合物：钙拮抗剂、血管紧张素aii拮抗剂、ace抑制剂、血管肽酶抑制剂、内皮素拮抗剂、肾素抑制剂、α-受体阻滞剂、β-受体阻滞剂、盐皮质激素受体拮抗剂和利尿剂。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与钙拮抗剂联合给药，所述钙拮抗剂例如且优选为硝苯地平、氨氯地平、维拉帕米或地尔硫卓。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与α-1受体阻滞剂联合给药，所述α-1受体阻滞剂例如且优选为哌唑嗪或坦索罗辛。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与β-受体阻滞剂联合给药，所述β-受体阻滞剂例如且优选为普萘洛尔、阿替洛尔、噻吗洛尔、吲哚洛尔、阿普洛尔、氧烯洛尔、喷布洛尔、布拉洛尔、美替洛尔、纳多洛尔、甲吲洛尔、卡拉洛尔、索他洛尔、美托洛尔、倍他洛尔、塞利洛尔、比索洛尔、卡替洛尔、艾司洛尔、拉贝洛尔、卡维地洛、阿达洛尔、兰地洛尔、奈必洛尔、依泮洛尔或布新洛尔。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与血管紧张素aii受体拮抗剂联合给药，所述血管紧张素aii受体拮抗剂例如且优选是氯沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、替米沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、依普沙坦或阿齐沙坦。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与血管肽酶抑制剂或中性内肽酶抑制剂(nep)联合给药，所述抑制剂例如且优选为沙库必曲、奥马曲拉或ave-7688。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与双重血管紧张素aii受体拮抗剂/nep抑制剂（arni）联合给药，所述双重血管紧张素aii受体拮抗剂/nep抑制剂（arni）例如且优选为lcz696。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与ace抑制剂联合给药，所述ace抑制剂例如且优选为依那普利、卡托普利、赖诺普利、雷米普利、地拉普利、福辛普利、喹那普利、培哚普利或群多普利。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与内皮素拮抗剂联合给药，所述内皮素拮抗剂例如且优选为波生坦、达卢生坦、安倍生坦、替唑生坦或西他生坦。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与肾素抑制剂联合给药，所述肾素抑制剂例如且优选为阿利吉仑、spp-600或spp-800。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与盐皮质激素受体拮抗剂联合给药，所述盐皮质激素受体拮抗剂例如且优选为finerenone、螺内酯、坎利酮、坎利酸钾或依普利酮。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与利尿剂联合给药，所述利尿剂例如且优选为呋塞米、布美他尼、吡咯他尼、托拉塞米、苄氟噻嗪、氯噻嗪、氢氯噻嗪、希帕胺、吲达帕胺、氢氟噻嗪、甲氯噻嗪、泊利噻嗪、三氯噻嗪、氯噻酮、美托拉宗、喹乙宗、乙酰唑胺、二氯苯磺胺、醋甲唑胺、甘油、异山梨醇、甘露醇、阿米洛利或氨苯蝶啶。
改变脂肪代谢的药剂优选地理解为选自下述的化合物：cetp抑制剂、甲状腺受体激动剂、胆固醇合成抑制剂（例如hmg-coa还原酶或角鲨烯合成抑制剂、acat抑制剂、mtp抑制剂、ppar-α、ppar-γ和/或ppar-δ激动剂）、胆固醇吸收抑制剂、聚合胆汁酸吸附剂、胆汁酸重吸收抑制剂、脂肪酶抑制剂和脂蛋白(a)拮抗剂。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与cetp抑制剂联合给药，所述cetp抑制剂例如且优选为达塞曲匹、安塞曲匹、bay60-5521或cetp-疫苗(avant)。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与甲状腺受体激动剂联合给药，所述甲状腺受体激动剂例如且优选为d-甲状腺素、3,5,3'-三碘甲状腺原氨酸(t3)、cgs23425或阿昔替罗(cgs26214)。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与选自他汀类的hmg-coa还原酶抑制剂联合给药，所述hmg-coa还原酶抑制剂例如且优选为洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、罗舒伐他汀或匹伐他汀。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与角鲨烯合成抑制剂联合给药，所述角鲨烯合成抑制剂例如且优选为bms-188494或tak-475。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与acat抑制剂联合给药，所述acat抑制剂例如且优选为阿伐麦布、甲亚油脂酰胺、帕替麦布、依鲁麦布或smp-797。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与mtp抑制剂联合给药，所述mtp抑制剂例如且优选为英普他派、r-103757、bms-201038或jtt-130。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与ppar-γ激动剂联合给药，所述ppar-γ激动剂例如且优选为吡格列酮或罗格列酮。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与ppar-δ激动剂联合给药，所述ppar-δ激动剂例如且优选为gw-501516或bay68-5042。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与胆固醇吸收抑制剂联合给药，所述胆固醇吸收抑制剂例如且优选为依折麦布、替奎安或帕马苷。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与脂肪酶抑制剂联合给药，所述脂肪酶抑制剂例如且优选为奥利司他。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与聚合胆汁酸吸附剂联合给药，所述聚合胆汁酸吸附剂例如且优选为考来烯胺、考来替泊、colesolvam、考来胶或考来替兰。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与胆汁酸重吸收抑制剂联合给药，所述胆汁酸重吸收抑制剂例如且优选为asbt(=ibat)抑制剂，例如azd-7806、s-8921、ak-105、bari-1741、sc-435或sc-635。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的化合物与脂蛋白(a)拮抗剂联合给药，所述脂蛋白(a)拮抗剂例如且优选为gemcabene钙(ci-1027)或烟酸。
在一个特别优选的实施方案中，本发明的化合物与一种或多种另外的治疗剂联合给药，所述另外的治疗剂选自利尿剂、血管紧张素aii拮抗剂、ace抑制剂、β-受体阻断剂、盐皮质激素受体拮抗剂、有机硝酸酯、no供体、可溶性鸟苷酸环化酶（sgc）活化剂、可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂和正性肌力药物。
因此，在另一个实施方案中，本发明涉及包含至少一种本发明的化合物和一种或多种另外的治疗剂的药物组合物，所述药物组合物用于治疗和/或预防疾病，特别是前述疾病。
此外，本发明的化合物可以原样使用、或者用于组合物、用于研究和诊断、或者用作分析参考标准品等，这在本领域中是众所周知的。
当本发明的化合物作为药物向人或其它哺乳动物给药时，可以给予这些化合物本身或者以含有例如0.1%至99.5%（更优选0.5%至90%）的活性成分以及一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物的形式给药。
因此，在另一个方面，本发明涉及包含至少一种本发明的化合物和通常一种或多种惰性的、无毒的药学上适合的赋形剂的药物组合物，以及该药物组合物用于治疗和/或预防疾病，特别是前述疾病的用途。
根据本发明的化合物可以全身地和/或局部地起作用。为此目的，可以将它们以合适的方式给药，例如通过口服、肠胃外、经肺、经鼻、经舌、舌下、经颊、直肠、真皮、透皮、结膜、经耳或局部途径，或者作为植入物或支架。
对于这些给药途径，本发明的化合物可以以合适的施用形式给药。
就口服给药而言，下述施用形式是合适的：所述施用形式根据现有技术水平起作用并且快速地和/或以改良方式递送根据本发明的化合物，且含有结晶形式、无定形形式和/或溶解形式的根据本发明的化合物，例如片剂（无包衣的或包衣的片剂，例如具有肠溶性包衣或者不溶性或延迟溶解且控制本发明化合物的释放的包衣）、在口腔中快速崩解的片剂、或膜/膜片、膜/冻干剂、胶囊（例如硬或软明胶胶囊）、糖衣片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、乳剂、混悬液、气雾剂或溶液。
通过绕开吸收步骤（静脉内、动脉内、心内、椎管内或腰椎内）或者通过包括吸收（肌肉内、皮下、皮内、经皮或腹膜内），可以实施肠胃外施用。适合的肠胃外施用形式包括溶液、混悬液、乳剂、冻干剂或无菌粉末形式的注射制剂和输液制剂。
适合于其它施用途径的形式包括：例如吸入药物形式（例如粉末吸入器、喷雾器）、滴鼻剂、溶液或喷剂、经舌、舌下或经颊给药的片剂或胶囊（例如糖锭剂、锭剂）、栓剂、耳用和眼用制剂（例如滴剂、软膏剂）、阴道胶囊、水性混悬液（洗剂、振摇混合物）、亲脂性混悬液、软膏剂、乳膏剂、乳状液、糊剂、泡沫剂、扑粉、透皮治疗体系（例如贴剂）、植入物和支架。
在一个优选的实施方案中，包含如上所述的式(i)的化合物的药物组合物以适合于口服给药的形式提供。在另一个优选的实施方案中，包含如上所述的式(i)的化合物的药物组合物以适合于静脉内给药的形式提供。
可以将本发明的化合物以本身已知的方式通过与惰性的、无毒的药学上合适的赋形剂混合而转化成所述的施用形式。这些赋形剂尤其包括载体（例如微晶纤维素、乳糖、甘露醇）、溶剂（例如液体聚乙二醇）、乳化剂（例如十二烷基硫酸钠）、表面活性剂（例如聚氧山梨醇酐油酸酯（polyoxysorbitanoleate））、分散剂（例如聚乙烯吡咯烷酮）、合成的和天然的聚合物（例如白蛋白）、稳定剂（例如抗氧化剂，例如抗坏血酸）、着色剂（例如无机颜料，例如氧化铁）、以及口味和/或气味掩蔽剂。
本发明的化合物的优选剂量是患者能够承受且不会产生严重的副作用的最大量。用作说明地，本发明的化合物可以以约0.001mg/kg体重至约10mg/kg体重的剂量、优选约0.01mg/kg体重至约1mg/kg体重的剂量肠胃外给药。在口服给药时，例示的剂量范围为约0.01至100mg/kg体重，优选为约0.01至20mg/kg体重，更优选为约0.1至10mg/kg体重。介于上述值中间的范围也意欲作为本发明的一部分。
然而，本发明药物组合物中有效成分的实际剂量水平和给药时程可能会变化，以便得到对于特定的患者、组成和给药模式而言可有效达到期望的治疗响应而不会对患者产生毒性的活性成分的量。因此，在适当的情况下，可能会需要偏离所述量，特别是根据患者的年龄、性别、体重、饮食和整体健康状况；特定的化合物的生物利用度和药代动力学特性以及其给药模式和途径；给药发生的时间或间隔；所选择的给药方案；个体患者对活性成分的应答；所涉及的具体疾病；疾病的程度、涉入度或严重性；同期治疗的种类（即，本发明的化合物与其它同时给药的治疗剂的相互作用），以及其它相关情况。
因此，在有些情况下，少于前述最少量可能足以应付，而在另一些情况下，必须超过所述上限。可以以少于该化合物的最佳剂量的较小的剂量开始治疗。然后，可以以小增量增加剂量直到达到该情况下的最佳效果。为方便起见，每日总剂量可以被分成并以遍布一天的单独的份给药。
以下的例示性实施方案说明本发明。本发明不限于这些实施例。
除非另有说明，以下的试验和实施例中的百分比为重量百分比，份为重量份。对液体/液体溶液进行报道的溶剂比、稀释比和浓度各自基于体积。
a.实施例
缩写和缩略词:
ac乙酰基
aq.水性(溶液)
br.宽峰(1hnmr信号)
cat.催化
conc.浓缩的
d双重峰(1hnmr信号)
dci直接化学电离(ms)
d.e.非对映异构体过量
dmfn,n-二甲基甲酰胺
dmso二甲基亚砜
ei电子碰撞电离(ms)
eq.当量
esi电喷雾电离(ms)
et乙基
h小时
1hnmr质子核磁共振光谱法
hplc高效液相色谱法
lc/ms液相色谱-质谱联用
m多重峰(1hnmr信号)
me甲基
min分钟
ms质谱法
mtbe甲基叔丁基醚
m/z质荷比(ms)
ofth.理论的(化学收率)
q四重峰(1hnmr信号)
quant.定量(收率)
rac外消旋的
rftlc保留因子
rp反相(hplc)
rt室温
rt保留时间(hplc)
s单峰(1hnmr信号)
sat.饱和(溶液)
sfc超临界流体色谱
t三重峰(1hnmr信号)
tbu叔丁基
tert叔
tfa三氟乙酸
thf四氢呋喃
tlc薄层色谱法
uv紫外线。
lc/ms和hplc方法:
方法1(lc/ms):
仪器:watersacquitysqduplc系统;柱:watersacquityuplchsst31.8µ,50mmx1mm;洗脱液a:1l水+0.25ml99%甲酸,洗脱液b:1l乙腈+0.25ml99%甲酸;梯度:0.0min90%a→1.2min5%a→2.0min5%a;柱箱:50℃;流速:0.40ml/min;uv检测:208-400nm。
方法2(lc/ms):
仪器:watersacquitysqduplc系统;柱:watersacquityuplchsst31.8µ,50mmx1mm;洗脱液a:1l水+0.25ml99%甲酸,洗脱液b:1l乙腈+0.25ml99%甲酸;梯度:0.0min95%a→6.0min5%a→7.5min5%a;柱箱:50℃;流速:0.35ml/min;uv检测:210-400nm。
方法3(lc/ms):
ms仪器:agilentmsquad6150;hplc仪器:agilent1290;柱:watersacquityuplchsst31.8µ,50mmx2.1mm;洗脱液a:1l水+0.25ml99%甲酸,洗脱液b:1l乙腈+0.25ml99%甲酸;梯度:0.0min90%a→0.3min90%a→1.7min5%a→3.0min5%a;柱箱:50℃;流速:1.20ml/min;uv检测:205-305nm。
方法4(制备hplc):
柱:chromatorexc1810µm,125mmx30mm;洗脱液a:水+0.05%tfa,洗脱液b:乙腈+0.05%tfa;梯度:20%b→45%b,45%b等度,45%b→80%b;柱温:室温;流速:50ml/min;uv检测:210nm。
起始原料和中间体：
实施例1a
{3-(4-氯苯基)-5-氧代-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-4,5-二氢-1h-1,2,4-三唑-1-基}乙酸甲酯
在氩气下，在室温下将叔丁醇钾(9.118g,81.26mmol)分批加入到5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(wo2011/104322-a1中实施例5a;20g,65.01mmol)于thf(40ml)中的溶液中。向该溶液中加入溴乙酸甲酯(10.939g,71.51mmol)，并将该混合物在室温下搅拌过夜。然后，将该反应混合物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。得到了16.4g(30.23mmol)目标化合物(收率46.5%，纯度70%)。
标题化合物也可以通过wo2011/104322-a1(实施例7a)中记载的程序合成。
实施例2a
2-{3-(4-氯苯基)-5-氧代-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-4,5-二氢-1h-1,2,4-三唑-1-基}乙酰肼
将7.2g(18.96mmol){3-(4-氯苯基)-5-氧代-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-4,5-二氢-1h-1,2,4-三唑-1-基}乙酸甲酯溶于60ml无水乙醇。向该溶液中加入2.088g(41.71mmol)水合肼，并将该混合物在回流下搅拌5h，然后在室温下搅拌过夜。将所得到的混合物部分地真空浓缩，然后用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将残留物溶于二氯甲烷，结晶后，过滤出白色固体，并在高真空下干燥。得到了7.02g(18.49mmol)目标化合物(收率97.5%)。
实施例3a
5-(4-氯苯基)-2-{[5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
在氩气下，在室温下将乙醇钠(2.987g,42.14mmol,纯度96%)分批加入到2-{3-(4-氯苯基)-5-氧代-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-4,5-二氢-1h-1,2,4-三唑-1-基}乙酰肼(8.0g,21.07mmol)和2-羟基乙脒盐酸盐(2.329g,21.07mmol)于dmf(200ml)中的溶液中。将该反应混合物在100℃下搅拌过夜。冷却后，将该反应混合物部分地真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释。将所得到的混合物用水洗涤，相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。将所得到的固体在高真空下干燥，从而得到8.69g(纯度89%，18.47mmol)目标化合物，其无需进一步纯化即使用(收率约88%)。
实施例4a
5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
在氩气下，在室温下将乙醇钠(1.531g,21.59mmol,纯度96%)分批加入到2-{3-(4-氯苯基)-5-氧代-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-4,5-二氢-1h-1,2,4-三唑-1-基}乙酰肼(4.1g,10.80mmol)和2-羟基丙脒盐酸盐(1.480g,11.88mmol)于dmf(110ml)中的溶液中。将该反应混合物在120℃下搅拌4.5h。冷却后，将该反应混合物部分地真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释。将所得到的混合物用水洗涤，相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。将所得到的固体在高真空下干燥，从而得到4.90g(纯度92%，10.42mmol)目标化合物（非对映异构体混合物），其无需进一步纯化即使用。
实施例5a
5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1s)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
与实施例4a类似地由(2s)-2-羟基丙脒盐酸盐(1.1eq.)开始、并仅使用1.1eq.乙醇钠作为碱(反应温度：100℃)合成了标题化合物。
市售的(2s)-2-羟基丙脒盐酸盐也可以由(2s)-2-羟基丙酰胺[l-(-)-乳酰胺]通过wo00/59510-a1(制备例11，步骤a)和wo2013/138860-a1(前体82的中间体，p.101-102)中记载的程序而合成。
实施例6a
5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1r)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
与实施例4a类似地由(2r)-2-羟基丙脒盐酸盐(1.1eq.)开始、并仅使用1.1eq.乙醇钠作为碱(反应温度：100℃)合成了标题化合物。
市售的(2r)-2-羟基丙脒盐酸盐也可以由(2r)-2-羟基丙酰胺[r-(+)-乳酰胺]通过wo00/59510-a1(制备例11，步骤a)和wo2013/138860-a1(前体82的中间体，p.101-102)中记载的程序而合成。
制备实施例:
以下分别称为“非对映异构体1”和“非对映异构体2”的具有1-羟乙基取代基的实施例化合物[式(i)中r1=ch3]表示一对分离后的非对映异构体，其关于1-羟乙基部分的绝对构型(1r或1s)尚未被测定。
非对映异构体过量(d.e.)值以常规方式通过hplc峰面积分析根据下式测定：
实施例1
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(3-氯苯基)-5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
向5-(4-氯苯基)-2-{[5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.96mmol)于吡啶(12ml)中的溶液中加入(3-氯苯基)硼酸(298.74mg,1.91mmol)和乙酸铜(ii)(347mg,1.91mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(74.7mg,0.48mmol,0.5eq.)。再搅拌2天后，将该反应混合物用mtbe稀释，然后用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并得到了目标化合物(113mg,0.21mmol)(收率22.4%)。
实施例2
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(3-氟苯基)-5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
向5-(4-氯苯基)-2-{[5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(100mg,0.24mmol)于吡啶(3ml)中的溶液中加入(3-氟苯基)硼酸(66.83mg,0.48mmol)和乙酸铜(ii)(86.75mg,0.48mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(16.72mg,0.12mmol,0.5eq.)。再搅拌2天后，将该反应混合物用mtbe稀释，然后用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并得到了目标化合物(25mg,0.05mmol)(收率20.2%)。
实施例3
5-(4-氯苯基)-2-{[5-(羟甲基)-1-(2-甲氧基苯基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
向5-(4-氯苯基)-2-{[5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(300mg,0.72mmol)于吡啶(9ml)中的溶液中加入(2-甲氧基苯基)硼酸(217.72mg,1.43mmol)和乙酸铜(ii)(260.25mg,1.43mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(54.4mg,0.36mmol,0.5eq.)。再搅拌2天后，将该反应混合物用mtbe稀释，然后用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并得到了目标化合物(73mg,0.14mmol)(收率22.4%，纯度98%)。
实施例4
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(2-氯苯基)-5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
向5-(4-氯苯基)-2-{[5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(3g,5.946mmol,纯度83%)于吡啶(75ml)中的溶液中加入(2-氯苯基)硼酸(930mg,5.946mmol)和乙酸铜(ii)(2.16g,11.89mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌过夜，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(500mg,3.20mmol)。将该反应混合物在室温下再搅拌9天。在此期间，再加入3份硼酸(总计1.5g,9.6mmol)。然后，将该反应混合物用mtbe稀释，然后用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并得到了目标化合物(1.44g,2.72mmol)(收率45.7%)。
实施例5
5-(4-氯苯基)-2-{[5-(羟甲基)-1-(2-甲基苯基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
向5-(4-氯苯基)-2-{[5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.96mmol)于吡啶(12ml)中的溶液中加入(2-甲基苯基)硼酸(259.7mg,1.91mmol)和乙酸铜(ii)(347mg,1.91mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(64.9mg,0.48mmol,0.5eq.)。再搅拌2天后，将该反应混合物用mtbe稀释，然后用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并得到了目标化合物(58mg,0.11mmol)(收率11.9%)。
实施例6
2-{[1-(3-氯-5-氟苯基)-5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
向5-(4-氯苯基)-2-{[5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.96mmol)于吡啶(12ml)中的溶液中加入(3-氯-5-氟苯基)硼酸(333.1mg,1.91mmol)和乙酸铜(ii)(347mg,1.91mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(83.2mg,0.48mmol,0.5eq.)。再搅拌2天后，将该反应混合物用mtbe稀释，然后用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并得到了目标化合物(91mg,0.17mmol)(收率17.4%)。
实施例7
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(3,5-二氟苯基)-5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
与实施例1类似地由360mg(0.86mmol)5-(4-氯苯基)-2-{[5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮开始制备了标题化合物。得到了61mg(0.11mmol)目标化合物(收率13.4%)。
实施例8
5-(4-氯苯基)-2-({5-(羟甲基)-1-[2-(三氟甲基)苯基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
与实施例1类似地由500mg(1.19mmol)5-(4-氯苯基)-2-{[5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮开始制备了标题化合物。得到了104mg(0.18mmol)目标化合物(收率15.5%)。
实施例9
2-{[1-(2-氯-5-氟苯基)-5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
与实施例1类似地由500mg(1.19mmol)5-(4-氯苯基)-2-{[5-(羟甲基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮开始制备了标题化合物。得到了8.7mg(0.02mmol)目标化合物(收率1.3%，纯度95%)。
实施例10
5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1-(2-甲氧基苯基)-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(500mg,1.16mmol)于吡啶(15ml)中的溶液中加入(2-甲氧基苯基)硼酸(351.1mg,2.31mmol)和乙酸铜(ii)(419.7mg,2.31mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(87mg,0.58mmol,0.5eq.)。再搅拌2天后，将该反应混合物真空浓缩，然后用mtbe稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(132mg,0.22mmol)(收率19.1%，纯度90%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将128mg溶于10ml甲醇；进样体积：0.3ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/甲醇70:30；流速：80ml/min；温度：40℃；uv检测：210nm]分离。分离后，分离出43.6mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例11)和45.1mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例12)。
实施例11
5-(4-氯苯基)-2-{[5-(1-羟乙基)-1-(2-甲氧基苯基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc(sfc)：rt=3.08min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-3250x4mm；洗脱液：二氧化碳/甲醇(5%→60%)；流速：3ml/min；uv检测：220nm]。
实施例12
5-(4-氯苯基)-2-{[5-(1-羟乙基)-1-(2-甲氧基苯基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc(sfc):rt=3.38min,d.e.=91.1%[柱：daicelchiralcel®ox-3250x4mm；洗脱液：二氧化碳/甲醇(5%→60%)；流速：3ml/min；uv检测：220nm]。
实施例13
2-({1-(3-氯-5-氟苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(430mg,0.99mmol)于吡啶(12.5ml)中的溶液中加入(3-氯-5-氟苯基)硼酸(346.49mg,1.99mmol)和乙酸铜(ii)(360.9mg,1.99mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(86.7mg,0.497mmol,0.5eq.)。再搅拌2天后，将该反应混合物真空浓缩，然后用mtbe稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(148mg,0.26mmol)(收率26.5%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc(sfc)[样品制备：将143mg溶于15ml甲醇；进样体积：0.5ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：二氧化碳/甲醇80:20；流速：80ml/min；温度：40℃；uv检测：210nm]分离。分离后，分离出70mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例14)和60mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例15)。
实施例14
2-{[1-(3-氯-5-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc(sfc):rt=4.45min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-3250x4mm；洗脱液：二氧化碳/甲醇(5%→60%)；流速：3ml/min；uv检测：220nm]。
实施例15
2-{[1-(3-氯-5-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc(sfc):rt=4.80min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-3250x4mm；洗脱液：二氧化碳/甲醇(5%→60%)；流速：3ml/min；uv检测：220nm]。
实施例16
5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1-苯基-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(250mg,0.462mmol,纯度80%)于吡啶(6ml)中的溶液中加入苯基硼酸(112.69mg,0.92mmol)和乙酸铜(ii)(167.9mg,0.92mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌4天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(28.2mg,0.23mmol,0.5eq.)。在60℃再搅拌4h，然后在室温下再搅拌2天后，将该反应混合物真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(42.5mg,0.08mmol)(收率18.1%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将38.9mg溶于1ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：1ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇75:25；流速：15ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出13mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例17)和14mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例18)。
实施例17
5-(4-氯苯基)-2-{[5-(1-羟乙基)-1-苯基-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc:rt=8.18min,d.e.=100%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例18
5-(4-氯苯基)-2-{[5-(1-羟乙基)-1-苯基-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=11.40min,d.e.=100%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例19
5-(4-氯苯基)-2-({1-[3-(二氟甲基)苯基]-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.74mmol,纯度80%)于吡啶(9.6ml)中的溶液中加入[3-(二氟甲基)苯基]硼酸(254.26mg,1.48mmol)和乙酸铜(ii)(268.6mg,1.48mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌5天。将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(47mg,0.08mmol)(收率11.3%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将45mg溶于1ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：1ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇75:25；流速：15ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出20mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例20)和20mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例21)。
实施例20
5-(4-氯苯基)-2-({1-[3-(二氟甲基)苯基]-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=6.72min,d.e.=99%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例21
5-(4-氯苯基)-2-({1-[3-(二氟甲基)苯基]-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=9.36min,d.e.=100%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例22
5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1-[3-(三氟甲基)苯基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.74mmol,纯度80%)于吡啶(9.6ml)中的溶液中加入[3-(三氟甲基)苯基]硼酸(280.86mg,1.48mmol)和乙酸铜(ii)(268.6mg,1.48mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(70.2mg,0.37mmol,0.5eq.)。在60℃再搅拌4h，然后在室温下搅拌过夜后，将该反应混合物真空浓缩，然后用mtbe稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(58.2mg,0.10mmol)(收率13.6%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将58mg溶于2ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：1ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇75:25；流速：15ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出19.5mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例23)和19.2mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例24)。
实施例23
5-(4-氯苯基)-2-({5-(1-羟乙基)-1-[3-(三氟甲基)苯基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=4.94min,d.e.=100%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例24
5-(4-氯苯基)-2-({5-(1-羟乙基)-1-[3-(三氟甲基)苯基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=6.13min,d.e.=98.6%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例25
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3,5-二氟苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.92mmol)于吡啶(12ml)中的溶液中加入(3,5-二氟苯基)硼酸(291.9mg,1.85mmol)和乙酸铜(ii)(335.7mg,1.85mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌4天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(72.98mg,0.46mmol,0.5eq.)。在60℃再搅拌2h，然后在室温下再搅拌3天后，将该反应混合物真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(114.3mg,0.21mmol)(收率22.7%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将110mg溶于7ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：0.6ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：20ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出42mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例26)和44mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例27)。
实施例26
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(3,5-二氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=1.09min,d.e.=100%[柱：daicelchiralpackox-33µm,50x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；uv检测：220nm]。
实施例27
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(3,5-二氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=1.28min,d.e.=99%[柱：daicelchiralpackox-33µm,50x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；uv检测：220nm]。
实施例28
5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1-(3-甲基苯基)-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.92mmol)于吡啶(12ml)中的溶液中加入(3-甲基苯基)硼酸(251.32mg,1.85mmol)和乙酸铜(ii)(335.7mg,1.85mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌3天。将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(59.6mg,0.11mmol)(收率12.3%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将56mg溶于2ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：0.5ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：15ml/min；温度：25℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出22mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例29)和24mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例30)。
实施例29
5-(4-氯苯基)-2-{[5-(1-羟乙基)-1-(3-甲基苯基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=7.97min,d.e.=100%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例30
5-(4-氯苯基)-2-{[5-(1-羟乙基)-1-(3-甲基苯基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=11.44min,d.e.=99.1%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例31
5-(4-氯苯基)-2-({1-(2-乙基苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(600mg,1.39mmol)于吡啶(18ml)中的溶液中加入(2-乙基苯基)硼酸(415.87mg,2.77mmol)和乙酸铜(ii)(503.6mg,2.77mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌3天。将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(69.4mg,0.13mmol)(收率9.1%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将65mg溶于4ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：0.5ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇50:50；流速：20ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出25mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例32)和25mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例33)。
实施例32
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(2-乙基苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc:rt=0.96min,d.e.=100%[柱：daicelchiralpackox-33µm,50x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇50:50；流速：1ml/min；uv检测：220nm]。
实施例33
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(2-乙基苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=1.09min,d.e.=100%[柱：daicelchiralpackox-33µm,50x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇50:50；流速：1ml/min；uv检测：220nm]。
实施例34
2-({1-(2-氯-4-氟苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(600mg,1.39mmol)于吡啶(18ml)中的溶液中加入(2-氯-4-氟苯基)硼酸(483mg,2.77mmol)和乙酸铜(ii)(503.6mg,2.77mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(242mg,1.39mmol)。将该反应混合物在室温下再搅拌4天。在此期间，再加入2份硼酸(总计483mg,2.77mmol)。然后，将该反应混合物真空浓缩，然后用mtbe稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(107mg,0.19mmol)(收率13.7%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将104mg溶于5ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：0.5ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：20ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出56mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例35)和29mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例36)。
实施例35
2-{[1-(2-氯-4-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=1.36min,d.e.=100%[柱：daicelchiralpackox-33µm,50x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；uv检测：220nm]。
实施例36
2-{[1-(2-氯-4-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=1.72min,d.e.=100%[柱：daicelchiralpackox-33µm,50x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；uv检测：220nm]。
实施例37
5-(4-氯苯基)-2-({1-(5-氟-2-甲氧基苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(600mg,1.39mmol)于吡啶(18ml)中的溶液中加入(5-氟-2-甲氧基苯基)硼酸(471.22mg,2.77mmol)和乙酸铜(ii)(503.6mg,2.77mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌3天。将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(62.2mg,0.11mmol)(收率8.1%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将55.4mg溶于6ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：2ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：20ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出23mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例38)和21mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例39)。
实施例38
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(5-氟-2-甲氧基苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=2.13min,d.e.=100%[柱：daicelchiralpackox-33µm,50x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：1ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]。
实施例39
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(5-氟-2-甲氧基苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=2.75min,d.e.=100%[柱：daicelchiralpackox-33µm,50x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：1ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]。
实施例40
5-(4-氯苯基)-2-({1-(2-氟苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(600mg,1.39mmol)于吡啶(18ml)中的溶液中加入(2-氟苯基)硼酸(387.96mg,2.77mmol)和乙酸铜(ii)(503.6mg,2.77mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌3天。在此期间，再加入2份硼酸(总计387.96mg,2.77mmol)。然后，将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(30.1mg,0.06mmol)(收率4.1%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将26mg溶于4ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：2ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：25ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出11mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例41)和9mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例42)。
实施例41
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(2-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=2.32min,d.e.=100%[柱：daicelchiralpackox-33µm,50x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：1ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]。
实施例42
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(2-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=3.23min,d.e.=100%[柱：daicelchiralpackox-33µm,50x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：1ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]。
实施例43
2-({1-(3-氯-4-氟苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.92mmol)于吡啶(12ml)中的溶液中加入(3-氯-4-氟苯基)硼酸(322.6mg,1.85mmol)和乙酸铜(ii)(335.7mg,1.85mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌6天。将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(99.1mg,0.18mmol)(收率19.1%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将97.1mg溶于3ml乙醇；进样体积：0.3ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：15ml/min；温度：25℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出40mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例44)和42mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例45)。
实施例44
2-{[1-(3-氯-4-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
制备手性hplc：rt=9.97min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：15ml/min；温度：25℃；uv检测：220nm]。
实施例45
2-{[1-(3-氯-4-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
制备手性hplc：rt=11.35min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：15ml/min；温度：25℃；uv检测：220nm]。
实施例46
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3,5-二氯苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.92mmol)于吡啶(12ml)中的溶液中加入(3,5-二氯苯基)硼酸(352.73mg,1.85mmol)和乙酸铜(ii)(335.7mg,1.85mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌6天。将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(105.5mg,0.18mmol)(收率19.8%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将103.5mg溶于14ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：2ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：20ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出29.2mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例47)和28.9mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例48)。
实施例47
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(3,5-二氯苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=1.49min,d.e.=100%[柱：daicelchiralpackox-33µm,50x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：1ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]。
实施例48
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(3,5-二氯苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=2.02min,d.e.=99.8%[柱：daicelchiralpackox-33µm,50x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：1ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]。
实施例49
5-(4-氯苯基)-2-({1-(2,5-二氯苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.92mmol)于吡啶(12ml)中的溶液中加入(2,5-二氯苯基)硼酸(352.73mg,1.85mmol)和乙酸铜(ii)(335.75mg,1.85mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌3天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(100mg,0.52mmol)。将该反应混合物在室温下再搅拌6天。在此期间，加入另1份硼酸(100mg,0.52mmol)。然后，将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(52.8mg,0.09mmol,纯度97%)(收率9.6%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将50mg溶于10ml甲醇；进样体积：0.5ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：二氧化碳/甲醇82:18；流速：80ml/min；温度：40℃；uv检测：210nm]分离。分离后，分离出20.3mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例50)和24.1mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例51)。
实施例50
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(2,5-二氯苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc(sfc):rt=2.87min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-3,250x4mm；洗脱液：二氧化碳/甲醇(5%→60%)；流速：3ml/min；uv检测：220nm]。
实施例51
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(2,5-二氯苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc(sfc):rt=3.11min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-3,250x4mm；洗脱液：二氧化碳/甲醇(5%→60%)；流速：3ml/min；uv检测：220nm]。
实施例52
2-({1-(3-氯-2-氟苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.92mmol)于吡啶(12ml)中的溶液中加入(3-氯-2-氟苯基)硼酸(322.31mg,1.85mmol)和乙酸铜(ii)(335.75mg,1.85mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌12天，在此期间，每天分批加入额外的硼酸(总计322.31mg,1.85mmol)。然后，将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(15.9mg,0.03mmol,纯度97%)(收率3%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将14mg溶于1ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：1ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：15ml/min；温度：25℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出6mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例53)和6mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例54)。
实施例53
2-{[1-(3-氯-2-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=5.49min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30+0.2%tfa和1%水；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例54
2-{[1-(3-氯-2-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=6.16min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30+0.2%tfa和1%水；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例55
5-(4-氯苯基)-2-({1-[3-(二氟甲氧基)苯基]-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.92mmol)于吡啶(12ml)中的溶液中加入[3-(二氟甲氧基)苯基]硼酸(347.40mg,1.85mmol)和乙酸铜(ii)(335.75mg,1.85mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌6天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(100mg,0.53mmol)。将该反应混合物在室温下再搅拌2天。将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(60.3mg,0.10mmol)(收率11.4%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将58mg溶于2ml乙醇；进样体积：0.7ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：15ml/min；温度：35℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出20.7mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例56)和17.7mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例57)。
实施例56
5-(4-氯苯基)-2-({1-[3-(二氟甲氧基)苯基]-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=5.57min,d.e.=98.7%[柱：daicelchiralcel®ox-h5,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30+0.2%tfa和1%水；流速：1ml/min；温度：35℃；uv检测：220nm]。
实施例57
5-(4-氯苯基)-2-({1-[3-(二氟甲氧基)苯基]-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=6.70min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-h5,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30+0.2%tfa和1%水；流速：1ml/min；温度：35℃；uv检测：220nm]。
实施例58
2-({1-(2-氯-5-氟苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.92mmol)于吡啶(12ml)中的溶液中加入(2-氯-5-氟苯基)硼酸(322.31mg,1.85mmol)和乙酸铜(ii)(335.75mg,1.85mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌10天。在此期间，每天分批加入额外的硼酸(总计322.31mg,1.85mmol)。将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(61mg,0.11mmol,纯度98%)(收率11.5%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将58mg溶于3ml乙醇/异己烷(2:1)；进样体积：1ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：15ml/min；温度：25℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出25mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例59)和25mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例60)。
实施例59
2-{[1-(2-氯-5-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=5.43min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30+0.2%tfa和1%水；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例60
2-{[1-(2-氯-5-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=6.11min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30+0.2%tfa和1%水；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例61
5-(4-氯苯基)-2-({1-(2,3-二氯苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(500mg,0.92mmol,纯度80%)于吡啶(12ml)中的溶液中加入(2,3-二氯苯基)硼酸(176.36mg,0.92mmol)和乙酸铜(ii)(335.75mg,1.85mmol)。将该反应混合物加热至60℃1h，然后在室温下搅拌24h，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(80mg,0.42mmol)。将该反应混合物在室温下再搅拌5天。在此期间，再加入2份硼酸(合计160mg,0.84mmol)。然后，将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用mtbe稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(148mg,0.25mmol,纯度97.3%)(收率27%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc(sfc)[样品制备：将141mg溶于18ml甲醇；进样体积：0.3ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：二氧化碳/甲醇70:30；流速：80ml/min；温度：40℃；uv检测：210nm]分离。分离后，分离出58.5mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例62)和53mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例63)。
实施例62
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(2,3-二氯苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc(sfc):rt=3.09min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-3250x4mm；洗脱液：二氧化碳/甲醇(5%→60%)；流速：3ml/min；uv检测：220nm]。
实施例63
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(2,3-二氯苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc(sfc):rt=3.38min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-3250x4mm；洗脱液：二氧化碳/甲醇(5%→60%)；流速：3ml/min；uv检测：220nm]。
实施例64
5-(4-氯苯基)-2-({1-(2,3-二氟苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(430mg,0.99mmol)于吡啶(12.5ml)中的溶液中加入(2,3-二氟苯基)硼酸(156.89mg,0.99mmol)和乙酸铜(ii)(360.94mg,1.99mmol)。将该反应混合物加热至60℃1h，然后在室温下搅拌24h，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(80mg,0.51mmol)。将该反应混合物在室温下再搅拌5天。在此期间，再加入5份硼酸(合计400mg,2.54mmol)。然后，将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用mtbe稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(44mg,0.08mmol)(收率8.1%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将40mg溶于1ml乙醇；进样体积：0.5ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：15ml/min；温度：35℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出18mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例65)和16mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例66)。
实施例65
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(2,3-二氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=5.74min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30+0.2%tfa和1%水；流速：1ml/min；温度：35℃；uv检测：220nm]。
实施例66
5-(4-氯苯基)-2-{[1-(2,3-二氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc:rt=6.59min,d.e.=99.2%[柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30+0.2%tfa和1%水；流速：1ml/min；温度：35℃；uv检测：220nm]。
实施例67
2-{[1-(2-氯-3-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(500mg,0.92mmol,纯度80%)于吡啶(12ml)中的溶液中加入(2-氯-3-氟苯基)硼酸(161.15mg,0.92mmol)和乙酸铜(ii)(335.75mg,1.85mmol)。将该反应混合物加热至60℃1h，然后在室温下搅拌24h，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(75mg,0.43mmol)。将该反应混合物在室温下再搅拌6天。在此期间，再加入5份硼酸(合计375mg,2.15mmol)。然后，将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用mtbe稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以仍含有一些杂质的非对映异构体混合物的形式分离出91mg目标化合物。
通过制备手性hplc进一步纯化而得到两种纯的、分离的非对映异构体[样品制备：将90mg溶于3ml乙醇；进样体积：0.3ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：15ml/min；温度：35℃；uv检测：220nm]。分离后，分离出20mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例67)和21mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例68)。
分析手性hplc：rt=6.22min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30+0.2%tfa和1%水；流速：1ml/min；温度：35℃；uv检测：220nm]。
实施例68
2-{[1-(2-氯-3-氟苯基)-5-(1-羟乙基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-5-(4-氯苯基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=7.94min,d.e.=100%[柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30+0.2%tfa和1%水；流速：1ml/min；温度：35℃；uv检测：220nm]。
实施例69
5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1-(2-甲基苯基)-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(400mg,0.92mmol)于吡啶(12ml)中的溶液中加入(2-甲基苯基)硼酸(251.32mg,1.85mmol)和乙酸铜(ii)(335.75mg,1.85mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(62.8mg,0.46mmol,0.5eq.)。再搅拌2天后，将该反应混合物真空浓缩，然后用mtbe稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(100mg,0.17mmol)(收率17.2%，纯度90%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将98mg溶于2ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：1ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇75:25；流速：15ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出37mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例70)和39mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例71)。
实施例70
5-(4-氯苯基)-2-{[5-(1-羟乙基)-1-(2-甲基苯基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=7.65min,d.e.=100%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱剂：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例71
5-(4-氯苯基)-2-{[5-(1-羟乙基)-1-(2-甲基苯基)-1h-1,2,4-三唑-3-基]甲基}-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=10.27min,d.e.=100%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例72
5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1-[2-(三氟甲基)苯基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(600mg,1.11mmol,纯度80%)于吡啶(14.5ml)中的溶液中加入[2-(三氟甲基)苯基]硼酸(421.30mg,2.22mmol)和乙酸铜(ii)(402.9mg,2.22mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(105mg,0.55mmol,0.5eq.)。再在室温下搅拌过夜后，将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用mtbe稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(80mg)(收率12.4%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将78mg溶于2ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：1ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇75:25；流速：15ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出34mg首先洗脱出的非对映异构体1(实施例73)和30mg随后洗脱出的非对映异构体2(实施例74)。
实施例73
5-(4-氯苯基)-2-({5-(1-羟乙基)-1-[2-(三氟甲基)苯基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体1)
分析手性hplc：rt=6.16min,d.e.=100%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例74
5-(4-氯苯基)-2-({5-(1-羟乙基)-1-[2-(三氟甲基)苯基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体2)
分析手性hplc：rt=8.67min,d.e.=100%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
实施例75
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氟苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(430mg,0.795mmol,纯度80%)于吡啶(10ml)中的溶液中加入(3-氟苯基)硼酸(222.432mg,1.59mmol)和乙酸铜(ii)(288.75mg,1.59mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(55.6mg,0.40mmol)。将该反应混合物再次加热到60℃2h，然后在室温下搅拌过夜。将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用mtbe稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(100mg,0.19mmol)(收率23.9%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将97mg溶于4ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：1ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：15ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出36mg首先洗脱出的(1s)-非对映异构体(实施例76)和40mg随后洗脱出的(1r)-非对映异构体(实施例77)。
实施例76
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氟苯基)-5-[(1s)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
分析手性hplc：rt=9.71min,d.e.=100%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
该化合物的绝对立体化学通过另外以对映纯的非对映异构体5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1s)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(实施例5a)作为起始原料进行相同的反应并通过分析手性hplc比较两者各自的产物而测定。
实施例77
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氟苯基)-5-[(1r)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
分析手性hplc：rt=13.60min,d.e.=100%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
该化合物的绝对立体化学通过另外以对映纯的非对映异构体5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1r)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(实施例6a)作为起始原料进行相同的反应并通过分析手性hplc比较两者各自的产物而测定。
实施例78
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氯苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(430mg,0.795mmol,纯度80%)于吡啶(10ml)中的溶液中加入(3-氯苯基)硼酸(248.59mg,1.59mmol)和乙酸铜(ii)(288.75mg,1.59mmol)。将该反应混合物加热至60℃2h，然后在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(62.1mg,0.40mmol)。将该反应混合物再次加热到60℃2h，然后在室温下搅拌过夜。将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用mtbe稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(130mg,0.24mmol)(收率30.1%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc[样品制备：将128mg溶于4ml乙醇/异己烷(1:1)；进样体积：1ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：15ml/min；温度：30℃；uv检测：220nm]分离。分离后，分离出52mg首先洗脱出的(1s)-非对映异构体(实施例79)和49mg随后洗脱出的(1r)-非对映异构体(实施例80)。
实施例79
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氯苯基)-5-[(1s)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
分析手性hplc：rt=9.96min,d.e.=100%[柱:luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：1ml/min；温度：35℃；uv检测：220nm]。
该化合物的绝对立体化学通过另外以对映纯的非对映异构体5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1s)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(实施例5a)作为起始原料进行相同的反应并通过分析手性hplc比较两者各自的产物而测定。
实施例80
5-(4-氯苯基)-2-({1-(3-氯苯基)-5-[(1r)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
分析手性hplc：rt=14.41min,d.e.=100%[柱:luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇80:20；流速：1ml/min；温度：35℃；uv检测：220nm]。
该化合物的绝对立体化学通过另外以对映纯的非对映异构体5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1r)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(实施例6a)作为起始原料进行相同的反应并通过分析手性hplc比较两者各自的产物而测定。
实施例81
5-(4-氯苯基)-2-({1-(2-氯苯基)-5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(非对映异构体混合物)
向5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1rs)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(2.10g,3.88mmol,纯度80%)于吡啶(50ml)中的溶液中加入(2-氯苯基)硼酸(1.214g,7.76mmol)和乙酸铜(ii)(1.410g,7.76mmol)。将该反应混合物加热至60℃1h，然后在室温下搅拌5天，然后，由于未完全转化，加入额外的硼酸(303mg,1.94mmol)。在室温下再搅拌2天后，将所得到的反应混合物真空浓缩，然后用mtbe稀释，并用盐酸水溶液(0.5m)淬灭。相分离后，将水相用mtbe萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将粗产物通过制备hplc[方法4]纯化，并以非对映异构体混合物的形式得到了目标化合物(580mg,1.01mmol,纯度95%)(收率26.1%)。
将两种非对映异构体通过制备手性hplc(sfc)[样品制备：将575mg溶于35ml甲醇；进样体积：0.4ml；柱：daicelchiralcel®ox-h5µm,250x20mm；洗脱液：二氧化碳/甲醇70:30；流速：80ml/min；温度：40℃；uv检测：210nm]分离。分离后，分离出206mg首先洗脱出的(1s)-非对映异构体(实施例82)和189mg随后洗脱出的(1r)-非对映异构体(实施例83)。
实施例82
5-(4-氯苯基)-2-({1-(2-氯苯基)-5-[(1s)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
分析手性hplc：rt=8.34min,d.e.=100%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
该化合物的绝对立体化学通过另外以对映纯的非对映异构体5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1s)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(实施例5a)作为起始原料进行相同的反应并通过分析手性hplc比较两者各自的产物而测定。
实施例83
5-(4-氯苯基)-2-({1-(2-氯苯基)-5-[(1r)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮
分析手性hplc：rt=11.88min,d.e.=98.1%[柱：luxcellulose-4,5µm,250x4.6mm；洗脱液：异己烷/乙醇70:30；流速：1ml/min；温度：40℃；uv检测：220nm]。
该化合物的绝对立体化学通过另外以对映纯的非对映异构体5-(4-氯苯基)-2-({5-[(1r)-1-羟乙基]-1h-1,2,4-三唑-3-基}甲基)-4-[(2s)-3,3,3-三氟-2-羟丙基]-2,4-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(实施例6a)作为起始原料进行相同的反应并通过分析手性hplc比较两者各自的产物而测定。
b.生物活性的评价
缩写和缩略词：
acc.no.登录号
avp精氨酸加压素
bmax最大配体结合能力
bsa牛血清白蛋白
camp环磷酸腺苷
cat.no.目录编号
cdna互补脱氧核糖核酸
cho中国仓鼠卵巢
crecamp反应元件
ct循环阈值
dmem/f12杜氏改良伊格尔培养基/哈姆f12培养基(1:1)
dna脱氧核糖核酸
dtt二硫苏糖醇
ec50半数有效浓度
edta乙二胺四乙酸
fam羧基荧光素琥珀酰亚胺酯
f.c.最终浓度
fcs胎牛血清
hepes4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸
ic50半数抑制浓度
kd解离常数
ki抑制剂的解离常数
mrna信使核糖核酸
pbs磷酸盐缓冲盐水
p.o.经口、口服
rna核糖核酸
rtpcr实时聚合酶链反应
spa闪烁迫近分析法
tamra羧基四甲基罗丹明
tris2-氨基-2-羟甲基丙烷-1,3-二醇。
本发明化合物活性的验证可以通过本领域中众所周知的体外、离体和体内试验进行。例如，为了验证本发明化合物的活性，可以使用以下的试验。
b-1.用于测定加压素受体活性的细胞体外试验
使用重组细胞系进行人类、大鼠和狗的v1a和v2加压素受体的激动剂和拮抗剂的鉴别以及本发明化合物的活性的定量。这些细胞系最初来源于仓鼠卵巢上皮细胞(中国仓鼠卵巢，chok1，atcc:美国模式培养物收集中心,manassas,va20108,usa)。该试验细胞系组成性表达人、大鼠或狗的v1a或v2受体。在gαq-偶联v1a受体的情况下，还用改良形式的钙敏感光蛋白水母发光蛋白（人和大鼠v1a）或obelin（狗v1a）稳定地转染细胞，其在用辅因子腔肠素重构后，在游离钙浓度增加时发射光[rizzutor,simpsonaw,brinim,pozzant,nature358,325-327(1992);illarionovba,bondarvs,illarionovava,vysotskies,gene153(2),273-274(1995)]。所得到的加压素受体细胞对由钙离子的细胞内释放引起的重组表达的v1a受体的刺激作出应答，这可以通过所得到的光蛋白的发光来定量。将gs偶联v2受体稳定地转染到细胞系中，所述细胞系在cre负责的启动子的控制下表达萤火虫荧光素酶的基因。v2受体的活化通过camp增加而诱导cre负责的启动子的活化，从而诱导萤火虫荧光素酶的表达。由v1a细胞系的光蛋白发出的光以及由v2细胞系的萤火虫荧光素酶发出的光对应于各加压素受体的活化或抑制。所述细胞系的生物发光可以使用合适的光度计来检测[milligang,marshallf,reess,trendsinpharmacologicalsciences17,235-237(1996)]。
试验程序：
加压素v1a受体细胞系：
在试验前1天，将所述细胞铺板在384-孔微量滴定板内的培养基(dmem/f12、2%fcs、2mm谷氨酰胺、10mmhepes、5µg/ml腔肠素)中，并保持在细胞培养箱(96%湿度、5%v/vco2、37℃)中。在试验当天，将试验化合物以不同的浓度在微量滴定板的孔中放置10分钟，然后加入ec50浓度的激动剂[arg8]-加压素。立即在光度计中测量产生的光信号。
加压素v2受体细胞系：
在试验前1天，将所述细胞铺板在384-孔微量滴定板内的培养基(dmem/f12、2%fcs、2mm谷氨酰胺、10mmhepes)中，并保持在细胞培养箱(96%湿度、5%v/vco2、37℃)中。在试验当天，将不同浓度的试验化合物与ec50浓度的激动剂[arg8]-加压素一起加入到孔中，并将所述板在细胞培养箱中培养3小时。在加入细胞溶解试剂triton™和底物荧光素后，在光度计中测量萤火虫荧光素酶的发光。
以下的表1a列出了由使用人v1a或v2受体转染的细胞系得到的本发明化合物（包括非对映异构体混合物以及分离的对映纯的非对映异构体）的各ic50值。
表1a中列出的ic50数据表明本发明的化合物作为非常有效的加压素v1a和v2受体的双重拮抗剂起作用。
出于比较目的，还在如上所述的细胞v1a和v2试验中测试了被认为代表最接近现有技术（cf.国际专利申请wo2011/104322-a1和其中记载的实施例化合物）的所选择的苯基三唑和咪唑衍生物。将由使用人v1a或v2受体转染的细胞系获得的这些化合物的ic50值列于以下的表1b中。
b-2.放射性结合试验
使用分别表达人、大鼠或狗的加压素v1a和v2受体的重组cho细胞系的膜部分在放射性结合竞争性spa试验中测定了ic50和ki值。这些细胞来源于仓鼠卵巢上皮细胞(中国仓鼠卵巢，chok1，atcc:美国模式培养物收集中心,manassas,va20108,usa)。此外，用人、大鼠或狗的v1a或v2受体稳定地转染所述细胞。对膜制品进行下述的放射性受体结合竞争性试验。
将各加压素受体转染的cho细胞在含有dmem/f12、10%fcs、15mmhepes、1mg/mlg418的t-175烧瓶中以适当的量生长，并保持在细胞培养箱(96%湿度、5%v/vco2、37℃)中。达到适当的细胞融合后，从膜制品中收获细胞。将细胞刮到pbs中，并通过在室温下以200xg温和离心5分钟而成团块。将细胞团块再悬浮于pbs中，并再次离心。再重复该步骤1次后，将所得到的细胞团块在-80℃急速冷冻30分钟。将冷冻的团块再悬浮于冰冷的制备缓冲液(50mmtris、2mmedta、2mmdtt，complete蛋白酶抑制剂混合物)中，并在2000rpm下均质35秒(polytronpt3000,kinematica)。将匀浆在冰上冷却2分钟，并重复该均质2次。将所得到的匀浆在4℃下以500xg离心10分钟。将膜在4℃下以4500xg成团块20分钟，再悬浮于储存的缓冲液(7.5mmtris、12.5mmmgcl2、0.3mmedta、250mm蔗糖，complete蛋白酶抑制剂混合物)，并在2000rpm下均质2秒(polytronpt3000,kinematica)。通过利用bca蛋白检测（thermoscientificpierce）测定蛋白浓度，并将该膜制品储存在-80℃。在使用当天，将等分试样解冻并简单地进行漩涡振荡。
为了测定试验化合物的受体结合亲和力，如下建立spa试验。对于各膜制品，测定kd和bmax值。根据这些数据，使spa珠的数量(wgapvt珠,perkinelmer,200µg/孔)、放射性配体的浓度(3h-avp,perkinelmer,2.431tbq/mmol,f.c.1-2xkd)和各膜制品的量(10µg蛋白质/孔)与96孔板中的结合缓冲液(50mmtris,0.2%bsa)中的试验体积(100µl)匹配。将试验化合物在结合缓冲液(f.c.10-4m至10-12m)中稀释，并进行试验。将板在室温下温和地震荡1-3小时，并进一步培养1-2小时。使用β-计数器(1450microbetatrilux)测定通过结合³h-avp而产生的信号。根据这些结果，使用graphpadprism计算试验化合物的ic50和ki值。
b-3.用于检测加压素v1a受体拮抗剂对促纤维化基因的调节作用的细胞体外试验
从大鼠心脏组织分离出的、被称为心肌细胞类型的细胞系h9c2(美国模式培养物收集中心no.crl-1446)以高拷贝数内源性地表达加压素v1a受体avpr1a，而不能检测出avpr2表达。关于通过受体拮抗剂抑制基因表达的avpr1a受体依赖性调节的细胞试验，其程序如下所述。
以50000细胞/孔的细胞密度将h9c2细胞接种在用于细胞培养的6-孔微量滴定板中的2.0mlopti-mem培养基(invitrogencorp.,carlsbadca,usa,目录号11058-021)中，并保持在细胞培养箱(96%湿度、8%v/v二氧化碳、37ºc)中。24小时后，给每组3个孔(一式三份)加入媒介物溶液(阴性对照)和加压素溶液([arg8]-加压素乙酸酯,sigma,目录号v9879)，或试验化合物(溶解于媒介物：含有20%v/v乙醇的水)和加压素溶液。在细胞培养中，最终的加压素浓度为1nm。将试验化合物溶液以小体积加入细胞培养物中，以使得在细胞试验中不超过0.03%的乙醇最终浓度。在5小时的培养时间后，抽吸出培养物上清液，使粘附的细胞在350μlrlt缓冲液(qiagen,目录号79216)中裂解，并使用rneasy试剂盒(qiagen,目录号74104)从该裂解物中分离出rna。之后进行dna酶消化(invitrogen,目录号18068-015)、cdna合成(promaga,improm-ii反转录系,目录号a3800)和rtpcr(ppcrmastermixrt-qp2x-03-075,eurogentec,seraing,比利时)。根据试验试剂制造商的工作方案进行所有程序。使用primer3plus程序，用6-famtamra-标记的探针，基于mrna基因序列(ncbigenbankentrez核苷酸数据库)来选择rtpcr的引物集合。使用appliedbiosystemsabiprism7700序列检测器，根据仪器操作说明书，以384-孔微量滴定板模式进行用于测定在不同试验批次的细胞中相对mrna表达的rtpcr。参照核糖体蛋白l-32基因(genbank登录号nm_013226)的表达水平和ct=35的ct阈值，用δ-δct值表示相对基因表达[appliedbiosystems,userbulletinno.2abiprism7700sds,1997年12月11日(2001年10月更新)]。
b-4.用于检测心血管效应的体内试验：麻醉大鼠的血压测量(加压素“激发”模型)
在氯胺酮/赛拉嗪/戊巴比妥注射麻醉下，在雄性sprague-dawley大鼠(250-350g体重)中，将预装了含有肝素(500iu/ml)的等渗氯化钠溶液的聚乙烯管(pe-50;intramedic®)插入颈静脉和股静脉中，然后固定。经由一个静脉入口，借助于注射器注射arg-加压素；并经由第二个静脉入口给予试验物质。为了测定收缩压，将压力导管(millarspr-3202f)固定在颈动脉中。将所述动脉导管与压力传感器连接，所述压力传感器将它的信号传至装备有合适的记录软件的记录计算机。在一个典型实验中，以10-15min的间隔，以限定量的arg-加压素(30ng/kg)的等渗氯化钠溶液，向实验动物给予3-4次连续推注。当血压再次达到初始水平时，在合适的溶剂中，以推注、随后持续输注给予试验物质。此后，在确定的间隔(10-15min)，再次给予与开始时相同量的arg-加压素。基于血压值，测定试验物质抵抗arg-加压素升压效应的程度。对照动物仅接受溶剂而非试验物质。
在静脉内给药后，与溶剂对照相比，本发明的化合物产生由arg-加压素引起的血压升高的抑制作用。
b-5.用于检测心血管效应的体内试验：保持在代谢笼中的清醒大鼠的利尿研究
保持wistar大鼠(220-450g体重)自由接近饲料(altromin)和饮用水。在实验期间，在适合该重量级大鼠的代谢笼中，单个地维持动物自由接近饮用水4-8小时或直到24小时(tecniplastdeutschlandgmbh,d-82383hohenpeißenberg)。在实验开始时，利用灌胃，以1-3ml/kg体重的合适溶剂体积，将试验物质给予动物。对照动物仅接受溶剂。在同一天，平行地进行对照和物质试验。对照组和物质剂量组各由4-8只动物组成。在实验期间，将动物排泄的尿连续地收集在笼子底部的接收器中。对于每只动物，单独地测定每单位时间的尿量，并且通过火焰光度法的标准方法测量尿电解质的浓度。在实验开始前，测定各动物的体重。
在口服给药后，与溶剂对照施用相比，本发明的化合物引起增加的尿排泄，其本质上基于增加的水排泄（促排水）。
以下的表2a示出了本发明的实施例化合物在2个不同剂量下所观察到的相对于溶剂对照（=100%）的尿排泄的变化。
出于比较目的，还在该试验中测试了被认为代表最接近现有技术（cf.国际专利申请wo2011/104322-a1和其中记载的实施例化合物）的所选择的苯基三唑和咪唑衍生物的利尿效果。将在2个不同剂量下观察到的的相对于溶剂对照(=100%)的尿排泄的变化示于以下的表2b中。
表2a和2b中所示的结果表明本发明的化合物在体内显著地更有效：与媒介物对照组相比，在口服剂量3mg/kg下，本发明的受试实施例导致尿量增加多于3倍，在某些情况下，多于10倍，大多数实施例在0.3mg/kg或1mg/kg的口服剂量下已经表现出显著的促排水活性。这与被认为代表最接近现有技术的苯基三唑和咪唑衍生物形成对比，其在低于3mg/kg的口服剂量下无活性，且在3mg/kg的口服剂量下为低活性。
b-6.用于检测心血管效应的体内试验：麻醉狗的血液动力学研究
用戊巴比妥(30mg/kg静脉内,narcoren®,merial,德国)麻醉体重在10-15kg之间的雄性比格犬(beagle,marshallbioresources)，用于外科手术和血液动力学与功能检测。另外使用泮库溴铵(2mg/动物，静脉内，ratiopharm，德国)作为肌肉松弛药。对狗进行插管，并用氧气/环境空气混合物(40/60%，约3-4l/min)通气。使用来自于gehealthcare(avance)的呼吸机进行通气，并使用分析仪(datex-ohmeda,ge)进行监测。通过连续输注戊巴比妥(50µg/kg/min)维持麻醉；使用芬太尼作为止痛剂(10-40µg/kg/h)。戊巴比妥的一种替代物是使用异氟烷(1-2体积%)。
在准备性干预中，给狗安装心脏起搏器。在第一次药物试验(即，实验开始)之前21天的时间，将心脏起搏器(来自biotronik，logos®)植入皮下皮囊中，并经由起搏器电极与心脏接触，所述起搏器电极通过颈外静脉延伸进入右心室中（利用透视法）。此后，取出所有接口，使狗自然地从麻醉中清醒。另外7天(即，在第一次药物试验之前14天)后，激活上述起搏器，并以220击/分钟的频率刺激心脏。
在开始起搏器刺激以后14天和28天，使用下述仪器实施实际的物质测试实验：
●插入膀胱导管，用于舒缓膀胱和用于测量尿流量；
●将心电图（ecg）导线连接至四肢，用于ecg测量；
●将装有氯化钠溶液的fluidmedic®pe-300管插入股动脉中，将该管连接至压力传感器(braunmelsungen,德国)，用于测量全身血压；
●经左心房或经安装在颈动脉中的端口，插入millartip导管(350pc型,millarinstruments,houston,usa)，用于测量心脏血液动力学；
●经由颈静脉将swan-ganz导管(ccombo7.5f,edwards,irvine,usa)插入肺动脉中，用于测量心输出量、氧饱和度、肺动脉压和中心静脉压；
●将静脉导管放入头静脉中，用于输注戊巴比妥、用于液体更换和用于血液取样(用于测定试验物质的血浆水平或其它临床血液值)；
●将静脉导管放入隐静脉中，用于输注芬太尼和用于给予试验物质；
●连续输注加压素(sigma,4mu/kg/min)，然后在该加压素输注下以不同剂量给予和评价试验化合物。
如果必要的话，放大初级信号(acq7700放大器,datasciencesinc.,minneapolis,usa或edwards-vigilance-monitor,edwards,irvine,usa)，随后输入ponemah系统(datasciencesinc,minneapolis,usa)用于评价。在整个实验期间连续地记录信号，通过软件进一步进行数字处理，取30秒内的平均值。
虽然参照具体实施方案公开了本发明，但是显然本领域技术人员可以在不偏离本发明的真正的精神和范围的情况下设计出本发明的其它实施方案和变形。权利要求旨在被解释为包括所有这样的实施方案和等价的变形。
c.关于药物组合物的实施例
根据本发明的药物组合物可以例示如下。
无菌静脉内溶液：
本发明的目标化合物的5mg/ml的溶液可以使用无菌注射用水来制备，并且如果需要对ph进行调节。将该溶液用无菌5%葡萄糖稀释至1-2mg/ml用于给药，并以静脉内输液剂的形式在约60分钟内给药。
用于静脉内给药的冻干粉：
无菌制剂可以使用(i)100-1000mg本发明的目标化合物作为冻干粉，(ii)32-327mg/ml柠檬酸钠，和(iii)300-3000mg右旋糖酐40来制备。将该制剂用无菌可注射盐水或5%葡萄糖重构成浓度10~20mg/ml，将其进一步用盐水或5%葡萄糖稀释至0.2~0.4mg/ml，并以静脉推注剂的形式给药，或者通过静脉输注在15-60分钟内给药。
肌肉内混悬液：
可以制备以下的溶液或混悬液用于肌肉内注射：
50mg/ml期望的不溶于水的本发明的化合物、5mg/ml羧甲基纤维素钠、4mg/ml吐温80、9mg/ml氯化钠、9mg/ml苯甲醇。
硬壳胶囊：
通过各自用100mg期望的粉状的本发明的化合物、150mg乳糖、50mg纤维素和6mg硬脂酸镁填充标准的两件式硬质明胶胶囊，制备了大量的单元胶囊。
软明胶胶囊：
制备本发明的目标化合物在易消化的油例如大豆油、棉籽油或橄榄油中的混合物，并利用容积式泵将其注射到熔融的明胶中而形成含有100mg该活性成分的软明胶胶囊。对该胶囊进行清洗和干燥。可以将本发明的目标化合物溶解于聚乙二醇、甘油和山梨醇的混合物中而制备水溶性的药物混合物。
片剂：
通过常规方法制备了大量片剂，以使得剂量单位为100mg本发明的目标化合物、0.2mg胶体二氧化硅、5mg硬脂酸镁、275mg微晶纤维素、11mg淀粉和98.8mg乳糖。可以施加适当的水性和非水性包衣以提高适口性、改善美观和稳定性或者延缓吸收。