一种以酱香型白酒糟制备新型细菌培养基的方法
【技术领域】 [0001] 本发明属于微生物培养基的制备领域，特别设及一种W酱香型白酒糟制备单细胞微生 物培养基的方法。
[0002] 技术背景
[0003] 白酒糟是白酒固态发酵和固态蒸馈传统酿造工艺的下脚料，其中残存许多未能完 全利用的营养成分，特别是富含微生物生长的所需的生长因子，而酱香型白酒丢糟因酱香 型白酒固态发酵独特生产工艺导致其粗蛋白明显高于其它香型白酒丢糟，经测量，粗蛋白 含量可高达23%。因此本发明考虑使用主要原料为酱香型白酒丢糟。目前白酒糟的利用主要 有生产化工产品;培养食用菌;酿醋W及生产饲料等，其利用率及附加值尚有待于进一步提 高，而且白酒丢糟保管不当还易污染环境。
[0004] 我国是一个传统酿酒大国，酒糟资源非常丰富，然而酒糟的深度利用率却非常低， 白酒丢糟，尤其是酱香型白酒丢糟的资源化利用的潜力还很大。限制酒糟资源利用的主要 制约因素有W下两个方面:一是鲜酒糟酸度大(抑小于4)，水分含量高巧5%~60%)，易腐败变 质，不易于运输和储藏。二是在酿造过程中渗合了大量的稻壳，在干物质中稻壳占干物质重 量的36%左右，体积占50%左右，粗纤维含量高达18%W上。
[0005]
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种W酱香型白酒糟制备新型细菌培养基的方法。该方法 变废为宝，工艺简单、成本低，易于操作，适合规模化生产。
[0007] 本发明的一种W酱香型白酒糟制备新型细菌培养基的方法，包括： (1) 将新鲜酱香型白酒糟直接加水并用固碱调节pH，在适宜溫度下分步进行酶解;新鲜 酱香型白酒糟与水的质量体积比为Ig : 8~12ml，充分混匀，进行一级酶解，酶解完成后于 90~95°C，10~15min灭酶;然后进行二级酶解，酶解完成后于90~95°C，10~15min灭酶，过滤得 到水解液； (2) 将上述水解液浓缩至膏状，或继续干燥至固体； (3) 将上述水解产物等量替代或部分替代细菌基本培养基中的蛋白腺，配置成培养基， 接种后进行细菌培养，培养18~24h后测定菌体的生物量(OD值）。
[000引步骤(1)中酶包括碱性蛋白酶（IXlO5IVg)和木瓜蛋白酶（IXlO5IVg);其添加量依 次为500~2500U/g干酒糟、250~2000U/g干酒糟酶解顺序依次为碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶或 木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶。
[0009]步骤(1)中的固碱为氨氧化钢、氨氧化钟或氨氧化巧。
[0010] 步骤（1)中调节抑包括碱性蛋白酶酶解抑7.0~13.0，木瓜蛋白酶酶解抑6.0~7.0。
[0011] 步骤(1)中适宜溫度为碱性蛋白酶40~55 °C，木瓜蛋白酶50~55 °C。
[0012] 步骤(1)中酶解时间为碱性蛋白酶酶解2~4h、木瓜蛋白酶^化。
[0013] 步骤(2)中所述步骤(2)中水解液浓缩至膏状条件为低溫浓缩，溫度小于80°C，浓 缩至水分含量为40~50%，得到膏状物；或继续干燥，干燥溫度为70~90°C，真空度为0.008~ 0.0 l 2MPa，干燥至含水量低于5%即可。
[0014] 步骤(3)中水解产物替代培养基中蛋白腺的比例依次为0%、50%、100%。
[0015] 步骤（3 )中基本培养基为牛肉膏蛋白腺培养基：牛肉膏3.Og、蛋白腺10.Og、 船(：120.0邑、水1000.01111、抑7.0~7.2。
[0016] 步骤(3)中的细菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌和苏云金芽抱杆 困。
[0017] 步骤(3)中接种量为0.5%~3%。
[0018] 本发明利用白酒工业下脚料酱香型白酒糟为原料制备新型细菌培养基，用酒糟的 酶解产物替代蛋白腺，既降低了使用蛋白腺作为培养基氮源的成本，又防止了酒糟对环境 的污染，提高了酒糟的使用价值，变废为宝。本发明生产出的氮源占原材料总氮的48~61%， 干燥后的含氮量4.0%~6.5%。在经等质量替代和部分替代氮源蛋白腺后，等质量替代的或部 分替代蛋白腺后菌体的生物量增加了 1.5~3.2倍。酱香型酒糟不仅可W替代蛋白腺作为细 菌培养中的氮源，而且有利于降低培养基成本，又为解决白酒固态酒糟污染多提供了一条 途径，故本发明及其方法具有潜在很好的推广价值。
[0019] 下面结合实施例对本发明做进一步说明。
[0020]
【附图说明】
[0021] 图1为酱香型白酒糟酶解后代替或部分代替培养基中的蛋白腺培养细菌的结果。
[0022]
【具体实施方式】 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，运些实施例仅用于说明本发明而不 用于限制本发明的范围。次外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可 W对本发明作改动或是修改，运些等价形式同样落于本发明申请所附权利要求书所限定的 范围。
[0023] 实施例1酱香型白酒糟水解物的制备包括W下步骤： (1) 将新鲜酱香型白酒糟直接加水并用固碱调节pH，在适宜溫度下分步进行酶解;新鲜 酱香型白酒糟与水的质量体积比为Ig : 8~12ml(例lg:8ml、lg: IOmUlg: 12ml)充分混匀， 进行一级酶解，酶解完成后于90~95°C，10~15min灭酶;然后进行二级酶解，酶解完成后于90 ~95 °C，10~15min灭酶，过滤得到水解液； (2) 将上述水解液浓缩至膏状，或继续干燥至固体； 步骤（1)中酶包括碱性蛋白酶（1 X IO5IVg)和木瓜蛋白酶（1 X 105IVg);其添加量依次 为 500 ~2500U/g 干酒糟（例 100011八、15001]八、20001]八）、250~20001]八干酒糟（例5001]/邑、 lOOOU/g、2000U/g)酶解顺序依次为碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶或木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶。
[0024] 步骤(1)中的碱为氨氧化钢、氨氧化钟或氨氧化巧。
[0025] 步骤（I)中调节pH包括碱性蛋白酶酶解抑7.0~13.0(例pH7.0、P朋.0、pHl 1.0)，木 瓜蛋白酶酶解抑6.0~7.0(例抑6.0、pH7.0)。
[0026] 步骤（1)中适宜溫度为碱性蛋白酶40~55 °C (例45 °C、50 °C、55 °C )，木瓜蛋白酶50~ 55°C (例 50°C、55°C)。
[0027] 步骤（1)中酶解时间为碱性蛋白酶酶解2~4h(例化、3h、4h)、木瓜蛋白酶1~3h(例 化、化、化）。
[00巧]步骤（2)中水解液浓缩至膏状条件为低溫浓缩，溫度小于80°C(例60°C、7(rC、80 °C )，浓缩至水分含量为40~50%(例40%、45%、50%)，得到膏状物;或继续干燥，干燥溫度为70~ 90°(：(例70°(：、80°(：、90°(：)，真空度为0.008~0.0121?曰（例0.008 1化、0.010 1化、0.012 MPa)，干燥至含水量低于5%即可。
[0029] 实施例2酱香型白酒糟水解物替代氮源蛋白腺培养大肠杆菌 将得到的酱香型白酒糟水解物替代培养基中氮源蛋白腺设置处理如下:CK(牛肉膏蛋 白腺培养基）水解物替代量50%、100%共3个处理，培养基pH统一调至7.2,250mlS角瓶装 50ml试验培养基，121°C灭菌20min。取已经活化的大肠杆菌种子培养液(30°C、170r/min，培 养18h)按照1%接种至灭菌的S角瓶中30°C、170r/min，培养24h后将培养液稀释10倍后测吸 光值。得到相应吸光值，结果:CK吸光值为0.186; 50%替代量吸光值为0.281; 100%替代量吸 光值为0.2375。50%替代量的吸光值是CK的1.5倍;100%替代量的吸光值是CK的1.2倍。
[0030] 实施例3酱香型白酒糟水解物替代氮源蛋白腺培养枯草芽抱杆菌 将得到的酱香型白酒糟水解物替代培养基中氮源蛋白腺设置处理如下:CK(牛肉膏蛋 白腺培养基）水解物替代量50%、100%共3个处理，培养基pH统一调至7.2,250mlS角瓶装 50ml试验培养基，12rC灭菌20min。取已经活化的枯草芽抱杆菌种子培养液(30°C、170r/ min,培养1她)按照1%接种至灭菌的S角瓶中30°C、170r/min，培养24h后将培养液稀释10倍 后测吸光值。得到相应吸光值，结果:CK吸光值为0.193; 50%替代量吸光值为0.566; 100%替 代量吸光值为0.482。50%替代量的吸光值是CK的3.2倍;100%替代量的吸光值是CK的2.5倍。
[0031] 表1酱香型白酒糟不同方法水解后的氨基酸组成及含量
【主权项】
1. 一种以酱香型白酒糟制备新型细菌培养基的方法法，包括： (1) 将新鲜酱香型白酒糟直接加水并用固碱氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钙调节PH，在 适宜温度下分步进行酶解;新鲜酱香型白酒糟与水的质量体积比为lg : 8~12ml，充分混 匀，进行一级酶解，酶解完成后于90~95°C ,10~15min灭酶;然后进行二级酶解，酶解完成后 于90~95°C，10~15min灭酶，过滤得到水解液； (2) 将上述水解液浓缩至膏状，或继续干燥至固体； (3) 将上述水解产物等量替代或部分替代细菌基本培养基中的蛋白胨，配置成培养基， 接种后进行细菌培养，培养18~24h后测定菌体的生物量(OD值）。2. 根据权利要求1所述的一种以酱香型白酒糟制备新型细菌培养基的方法，其特征在 于:所述步骤(1)中酶包括碱性蛋白酶（lXl〇 5U/g)和木瓜蛋白酶（lX105U/g);其添加量依 次为500~2500U/g干酒糟、250~2000U/g干酒糟酶解顺序依次为碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶或 木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶。3. 根据权利要求1所述的一种以酱香型白酒糟制备新型细菌培养基的方法，特征在于： 所述步骤（1)中调节pH和适宜温度包括碱性蛋白酶酶解pH 7.0~13.0，适宜温度为40~55 °C ; 木瓜蛋白酶酶解PH6.0~7.0，适宜温度为50~55 °C。4. 根据权利要求1所述的一种以酱香型白酒糟制备新型细菌培养基的方法，特征在于： 所述步骤(1)中酶解时间为碱性蛋白酶酶解2~4h、木瓜蛋白酶1~3h。5. 根据权利要求1所述的一种以酱香型白酒糟制备新型细菌培养基的方法，特征在于： 所述步骤(2)中水解液浓缩至膏状条件为低温浓缩，温度小于80°C，浓缩至水分含量为40~ 50%，得到膏状物;或继续干燥，干燥温度为70~90°C，真空度为0.008~0.012MPa，干燥至含水 量低于5%即可。6. 根据权利要求1所述的一种以酱香型白酒糟制备新型细菌培养基的方法，特征在于： 所述步骤(3 )中水解产物替代培养基中蛋白胨的比例依次为0%、50%、100%。7. 根据权利要求1所述的一种以酱香型白酒糟制备新型细菌培养基的方法，特征在于： 所述步骤（3 )中基本培养基为牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、NaCl 20.0gd)C1000.0ml、pH7.0~7.2。8. 根据权利要求1所述的一种以酱香型白酒糟制备新型细菌培养基的方法，其特征在 于:所述步骤(3)中的细菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌。9. 根据权利要求1所述的一种以酱香型白酒糟制备细菌培养基的方法，其特征在于:所 述步骤(3)中接种量为0.5%~3%。
【专利摘要】本发明属于生物培养基制备领域。本发明涉及一种新型细菌培养基制备方法，包括：(1)将新鲜酱香型白酒糟加水后酶解；过滤得到滤液；(2)将上述滤液浓缩至膏状或继续干燥；(3)将上述浓缩物以不同比例替代细菌培养基中的蛋白胨，进行典型细菌培养验证。本发明的突出优点是以酿酒副产物白酒糟为原料酶解后以不同比例替代蛋白胨作为氮源培养细菌，既节约了蛋白胨，又防止白酒糟污染环境，同时提升了白酒糟的使用价值。经浓缩物不同比例替代蛋白胨作为氮源，培养受试菌18～24h，其生物量(OD值)普遍高于纯蛋白胨为氮源时的生物量。本发明在微生物培养基氮源的生产领域具有良好的应用前景。
【IPC分类】C12R1/445, C12R1/125, C12R1/19, C12R1/07, C12N1/20
【公开号】CN105713861
【申请号】CN201610149407
【发明人】胡承, 文章, 李克亚
【申请人】四川大学