本发明涉及一类具有酪氨酸激酶alk选择性抑制活性的化合物及其药学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物，其制备方法、包含该化合物的药物组合物，以及这些化合物在制备用于预防或治疗与生物体内和渐变性淋巴瘤酶的相关的细胞异常增殖、形态变化以及运动功能亢进等相关的疾病，以及与血管新生或癌转移相关的疾病的药物，尤其是用于治疗或预防肿瘤生长与转移的药物中的用途。
背景技术：
：渐变性淋巴瘤酶(alk)是一种受体酪氨酸激酶，隶属于胰岛素受体超家族。最早发现于渐变性大细胞淋巴瘤(alcl)中，约60％-85％的alcl中有alk的表达，而正常的alk专一表达于神经系统中，尤其是新生儿的脑中。人体中alk基因表达水平随着脑的发育成熟而下降，成熟脑组织中的量很低，表达存在一定的区域性；其它系统尤其是造血系统中未发现alk的表达。alk基因在绝大多数非造血系统肿瘤和正常组织中缺乏表达，表明alk蛋白的分布范围是极其狭窄的。alk基因位于染色体2p23位点，正常情况下人源的alk可转录产生大小6222bp的mrna，由29个外显子构成，编码1620个氨基酸序列200kda的i型穿膜蛋白alk。alk基因通常处于休眠状态，由于与其他基因发生融合而导致细胞恶化发展为恶性肿瘤。然而能和它发生融合的基因有很多，在非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer，nsclc)中主要是与eml4基因(棘皮动物微管相关蛋白样4)发生融合，棘皮动物微管相关蛋白样4－间变淋巴瘤激酶(eml4-alk)融合基因在nsclc的发生率为3％～7％。随着非小细胞肺癌(nsclc)分子生物学研究的不断深入，基于分子标记物的个体化治疗已经从实验室走到了临床，并在晚期nsclc患者的治疗上取得了显著的临床进展。同样重要的是，除了传统的病理组织学分类之外，nsclc还可以根据各种分子标记物表达的不同，进行分子表型分类，并以与肿瘤发生、发展相关的驱动性基因为靶点，研发新的药物，进行有针对性的个体化分子靶向治疗，改善患者预后。在理想状态下，所有nsclc患者应该在治疗前进行相关分子标记物的检测，在充分了解患者肿瘤分子表达特征的情况下实施有针对性的治疗，提高治疗效果。在这样的背景下，酪氨酸激酶已成为近年来炙手可热的分子靶点，其选择性抑制剂，或围绕alk的多靶点小分子抑制剂已成为抗肿瘤药物研究的热点。目前，pfizer公司开发的小分子抑制剂克唑替尼(crizotinib)已经被美国fda于2011年8月26日批准上市。但是，已有临床研究表明对crizotinib已经出现了耐药性，而导致crizotinib耐药的因素主要有二次突变，旁路信号激活及一些未知因素。2014年针对alk二次突变的艾乐替尼(alectinib)及色瑞替尼(ceritinib)两个二代抑制剂上市，alk二次突变近20种，而alk的二次突变与egfr二次突变主要为t790m不同，近20种突变除了门控位点l1196m突变稍微常见其它基本几率相近。但是alectinib及ceritinib尤其是ceritinib仅仅针对少数突变有活性[curropinoncol.2015；27(2):118-24]。这样alk抑制剂的研发面对着新的挑战，我们针对ceritinib的溶剂区域，通过直接在ceritinib的哌啶n原子引入柔性片段及去除哌啶环直接在多取代苯环上引入柔性水溶性片段两种策略进行改造，获得了一类新的具有较好alk的抑制活性及代谢性质的衍生物。技术实现要素：本发明的一个目的是提供一类以2,4-二氨基嘧啶为母核结构的化合物，其药学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物。所述化合物为一类酪氨酸激酶抑制剂，alk具有较好的抑制作用。本发明提供了一种2,4-二氨基嘧啶类衍生物，其结构如下通式(i)所示：其中：r1选自于氢、c1～c3烷基、卤素；t选自氧、哌啶环；r2，r3共同构成4～10元杂环烷基或3～6元环烷基；该4～10元杂环烷基中杂原子选自氧、氮和硫原子，该4～10元杂环烷基可为饱和或部分不饱和的杂环基，还可以是单环，双环，桥环或螺环式杂环烷基；r4选自羟基，羟基c1-c3烷基，c1-c3烷基，含有选自氧、氮和硫原子中的一个或多个杂原子的4～10元杂环烷基c1-c3烷基，由卤素取代的含有选自氧、氮和硫原子中的一个或多个杂原子的4～10元杂环烷基c1-c3烷基，氨基，含有选自氧、氮和硫原子中的一个或多个杂原子的4～10元杂环烷基取代的氨基，由羟基取代的含有选自氧、氮和硫原子中的一个或多个杂原子的4～10元杂环烷基取代的c1-c3烷基氨基，由羟基和1至3个c1-c3烷基取代的含有选自氧、氮和硫原子中的一个或多个杂原子的4～10元杂环烷基取代的c1-c3烷基氨基，酰胺基，氨基取代的c1-c3烷基酰胺基，羟基取代的c1-c3烷基酰胺基，含有选自氧、氮和硫原子中的一个或多个杂原子的4～10元杂环烷基取代的酰胺基。优选的，r1选自于氢、c1～c3烷基；t选自氧、哌啶环；r2，r3共同构成4～6元杂环烷基或3～6元环烷基，该4～6元杂环烷基中杂原子可选自氧和氮原子，该4～6元杂环烷基为饱和的杂环烷基。r4选自羟基，羟基c1-c3烷基，c1-c3烷基，含有选自氧、氮和硫原子中的一个或多个杂原子的4～6元杂环烷基c1-c3烷基，由卤素取代的含有选自氧、氮和硫原子中的一个或多个杂原子的4～6元杂环烷基c1-c3烷基，氨基，含有选自氧、氮和硫原子中的一个或多个杂原子的4～6元杂环烷基取代的氨基，由羟基取代的含有选自氧、氮和硫原子中的一个或多个杂原子的4～6元杂环烷基取代的c1-c3烷基氨基，由羟基和1至3个c1-c3烷基取代的含有选自氧、氮和硫原子中的一个或多个杂原子的4～6元杂环烷基取代的c1-c3烷基氨基，酰胺基，氨基取代的c1-c3烷基酰胺基，羟基取代的c1-c3烷基酰胺基，含有选自氧、氮和硫原子中的一个或多个杂原子的4～6元杂环烷基取代的酰胺基。进一步优选的，r1选自于氢、甲基；t选自氧、哌啶环；r2，r3可共同构成4-氮杂环己烷基，3-氮杂环丁烷基，环丙基，3-氧杂环丁烷基或4-氧杂环己烷基。r4选自羟基，羟甲基，甲基、含有选自氧和氮原子中的一个或多个杂原子的4～6元杂环烷基c1-c3烷基、由卤素取代的含有选自氧和氮原子中的一个或多个杂原子的4～6元杂环烷基c1-c3烷基、氨基、含有选自氧和氮原子中的一个或多个杂原子的4～6元杂环烷基取代的氨基、由羟基取代的含有选自氧和氮原子中的一个或多个杂原子的4～6元杂环烷基取代的c1-c3烷基氨基、由羟基和1至3个甲基取代的含有选自氧和氮原子中的一个或多个杂原子的4～6元杂环烷基取代的c1-c3烷基氨基、酰胺基、氨基取代的c1-c3烷基酰胺基、羟基取代的c1-c3烷基酰胺基、含有选自氧、氮和硫原子中的一个或多个杂原子的4～6元杂环烷基取代的酰胺基。所述通式(i)表示的化合物的药学上可接受的盐非限制性地包括无机酸盐、有机酸盐、烷基磺酸盐和芳基磺酸盐；所述无机酸盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、硫酸盐、磷酸盐等；所述有机酸盐包括甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、苯甲酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐等；所述烷基磺酸盐包括甲基磺酸盐、乙基磺酸盐等；所述芳基磺酸盐包括苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等。所述通式(i)表示的化合物的药学上可接受的溶剂合物非限制性地包括通式(i)表示的化合物与水、乙醇、异丙醇、乙醚或丙酮等的溶剂合物。本发明的通式(i)表示的化合物更优选为如下具体化合物：本发明还提供了制备所述的通式(i)表示的化合物的方法，其中，有以下三种制备方法：制备方法一：化合物i的制备参考文献方法(j.med.chem.2013,56,5675-5690)，甲烷磺酸酯iia在有机碱二异丙基乙胺(dipea)作用下与化合物i发生取代反应得到化合物iii；或化合物i与螺环类化合物iib在有机碱二异丙基乙胺(dipea)作用下发生开环反应得到化合物iii；其中，r2，r3共同构成4～10元杂环烷基或3～6元环烷基；该4～10元杂环烷基中杂原子选自氧、氮和硫原子，该4～10元杂环烷基可为饱和或部分不饱和的杂环基；r4定义与前述相同。制备方法二：(1)化合物iv与化合物v在叔丁醇钾作用下进行取代反应得到化合物vi；(2)化合物vi经钯碳催化氢化室温反应得到化合物vii；(3)化合物ix的制备参考文献方法(j.med.chem.2013,56,5675-5690)，经化合物vii与化合物viii在有机酸樟脑磺酸作用下经取代反应得到化合物ix；(4)化合物ix经过还原氨化反应，取代反应或酰基化反应可得到不同r4取代的化合物x。制备方法三：(1)化合物iv-b与化合物v-b在无机碱作用下进行取代反应得到化合物vi-b；(2)化合物vi-b与化合物v在无机碱作用下发生取代反应得到vii-b；(3)化合物vii-b经过钯碳催化氢化，室温下反应得到化合物viii-b；(4)化合物viii-b与化合物viii在有机酸作用下加热反应或通过pd催化偶联反应得到化合物ix-b。步骤(1)所述无机碱优选为碳酸钾；步骤(2)所述无机碱优选为碳酸铯；步骤(4)所述有机酸优选为樟脑磺酸；步骤(4)所述加热反应的反应温度优选为135℃，偶联反应的反应温度优选为100℃。本发明所制备的这些化合物用于预防或治疗与生物体内和渐变性淋巴瘤酶的相关的细胞异常增殖、形态变化以及运动功能亢进等相关的疾病，以及与血管新生或癌转移相关的疾病，尤其是用于治疗或预防肿瘤生长与转移。本发明提供了所述化合物作为酪氨酸激酶抑制剂的用途。本发明还提供了所述化合物在制备预防和/或治疗与生物体内和渐变性淋巴瘤酶的相关的细胞异常增殖、形态变化以及运动功能亢进等相关的疾病，以及与血管新生或癌转移相关的疾病的药物中的用途。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述。这些实施例仅是出于解释说明的目的，而不限制本发明的范围和实质。1h-nmr用varianmercuryamx300型仪测定，所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理获得；除说明外，所有反应均是在氮气保护下进行并tlc跟踪，后处理时均经饱和氯化钠水溶液洗涤和无水硫酸钠干燥过程；产品的纯化除说明外均使用硅胶(200-300目)柱色谱法；其中硅胶(200-300目)由青岛海洋化工厂生产，gf-254薄层硅胶板由烟台江友硅胶开发有限公司生产。制备实施例1化合物s1的制备化合物1-1的制备参考文献方法(j.med.chem.2013,56,5675-5690)。化合物s1的合成：将化合物1-1及(3-(溴甲基)氧杂环丁酮-3-基)甲醇(2eq)溶解在乙腈中，加入(3eq)二异丙基乙胺(dipea)，加热至90℃回流过夜。反应完全后将反应液冷却，缓慢倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝20:1得化合物s1。1hnmr(300mhz,dmso)δ9.41(s,1h),8.42(d,j＝8.3hz,1h),8.20(s,1h),8.04(s,1h),7.81(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),7.64–7.55(m,1h),7.52(s,1h),7.42–7.27(m,1h),6.83(s,1h),4.64–4.48(m,1h),4.39–4.14(m,4h),3.48(d,j＝8.1hz,2h),3.46–3.30(m,1h),2.72(m,1h),2.52–2.43(m,4h),2.31(s,3h),2.28(s,2h),1.85–1.60(m,4h),1.22(d,j＝6.0hz,6h),1.16(d,j＝6.8hz,6h).制备实施例2化合物s2的制备化合物s2的合成：将化合物1-1及3-(溴甲基)-3甲基氧杂环丁酮(2eq)溶解在乙腈中，加入dipea(3eq)，加热至90℃回流过夜。反应完全后将反应液冷却，缓慢倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh＝30:1得化合物s2。1hnmr(300mhz,dmso)δ9.44(s,1h),8.44(d,j＝8.3hz,1h),8.22(s,1h),8.06(s,1h),7.82(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),7.65–7.56(m,1h),7.51(s,1h),7.40–7.26(m,1h),6.82(s,1h),4.66–4.49(m,1h),4.39–4.14(m,4h),3.48–3.32(m,1h),2.68(m,1h),2.51-2.42(m,4h),2.31(s,3h),2.26(s,3h),1.88–1.60(m,4h),1.22(d,j＝6.0hz,6h),1.16(d,j＝6.8hz,6h).制备实施例3化合物s3的制备化合物3-1的制备参照文献方法(wo2013024130)。化合物s3的合成：将化合物1-1及中间体3-1溶解在乙醇中，加入dipea(3eq)，加热至90℃回流过夜。反应完全后将反应液冷却，缓慢倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝30:1得化合物s3。1hnmr(300mhz,dmso)δ9.45(s,1h),8.46(d,j＝8.3hz,1h),8.24(s,1h),8.04(s,1h),7.83(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),7.65–7.56(m,1h),7.52(s,1h),7.41–7.28(m,1h),6.83(s,1h),4.65–4.49(m,1h),4.13(s,1h),3.73–3.53(m,4h),3.51–3.37(m,1h),3.03(d,j＝11.0hz,2h),2.56(s,1h),2.37–2.20(m,4h),2.11(s,3h),1.78–1.52(m,6h),1.37(d,j＝13.0hz,2h),1.22(d,j＝6.0hz,6h),1.16(d,j＝6.8hz,6h).制备实施例4化合物s4的制备化合物4-3的合成：将(1-羟甲基环丙基)-叔丁氧羰基氨基溶解于四氢呋喃[thf]溶液中低温下加入叔丁醇钾(1.5eq)，搅拌30min后加入4-氟-2-异丙氧基-1-硝基苯(1.3eq)，加热至50℃过夜。反应完全后将反应液冷却，倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，pe[石油醚]:ea[乙酸乙酯](体积比)＝5:1得化合物4-3。化合物4-4的合成：将化合物4-3溶解于甲醇中，加入20％的钯碳，催化氢化6h。反应完全后，抽滤除去钯碳，滤液旋干上柱，展开剂为pe:ea(体积比)＝5:1得化合物4-4。化合物4-5的制备参照文献方法(j.med.chem.2013,56,5675-5690)。化合物s4的合成：将化合物4-4及化合物4-5(2eq)溶解于正丁醇中，加入2eq的樟脑磺酸[d-csa]，加热至135℃反应6h。反应完全后，将反应液冷却至室温，减压旋出正丁醇，加水稀释，用nahco3调ph至7-8。用乙酸乙酯萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh＝20:1得化合物s4。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.52(s,1h),8.57(d,j＝8.3hz,1h),8.12(s,1h),8.05(d,j＝8.8hz,1h),7.89(dd,j＝7.9,1.7hz,1h),7.64–7.56(m,1h),7.34(s,1h),7.23(d,j＝8.4hz,1h),6.55(d,j＝2.5hz,1h),6.36(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),4.56(p,j＝6.0hz,1h),3.80(s,2h),3.21(q,j＝6.9hz,1h),1.36(d,j＝6.1hz,6h),1.30(d,j＝6.8hz,6h),0.78–0.71(m,2h),0.64(d,j＝4.7hz,2h).制备实施例5化合物s5的制备化合物5-1的合成：将5-氟-4-甲基-2-硝基苯酚与碳酸铯(1.5eq)溶解于n,n-二甲基甲酰胺中，滴加2-溴丙烷(1.5eq)，加热至65℃，5h后反应完全。将反应液冷却至室温倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，pe:ea(体积比)＝10:1，得化合物5-1。化合物5-2的合成：将化合物4-1溶解于thf溶液中，低温下加入叔丁醇钾(1.5eq)，搅拌30min后加入(1.3eq)化合物5-1，加热至50℃过夜。反应完全后将反应液冷却，倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，pe:ea(体积比)＝5:1得化合物5-2。化合物5-3的合成：将化合物5-2溶解于甲醇中，加入20％的钯碳，催化氢化6h。反应完全后，抽滤除去钯碳，滤液旋干上柱，展开剂为pe:ea(体积比)＝5:1得化合物5-3。化合物s5的合成：将化合物5-3及化合物4-5(2eq)溶解于正丁醇中，加入(2eq)的樟脑磺[d-csa]，加热至135℃反应6h。反应完全后，将反应液冷却至室温，减压旋出正丁醇，加水稀释，用nahco3调ph至7-8。用乙酸乙酯萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝30:1得化合物s5。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.51(s,1h),8.58(d,j＝8.4hz,1h),8.13(s,1h),7.92(d,j＝6.8hz,2h),7.65–7.56(m,1h),7.34(s,1h),7.24(d,j＝7.3hz,1h),6.46(s,1h),4.50(p,j＝6.1hz,1h),3.80(s,2h),3.26(p,j＝6.9hz,1h),2.13(s,3h),1.91(s,2h),1.36(d,j＝6.1hz,6h),1.32(d,j＝6.8hz,6h),0.74(s,2h),0.66(s,2h).制备实施例6化合物s6的制备化合物s6的合成：将化合物s4及3-氧杂环丁酮(5eq)溶解于干燥的二氯甲烷中，搅拌30min后加入氰基硼氢化钠(4eq)，加热至40℃过夜。反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh＝30:1得化合物s6。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.54(s,1h),8.59(d,j＝8.4hz,1h),8.13(s,1h),8.07(d,j＝8.8hz,1h),7.92(d,j＝7.9hz,1h),7.65–7.58(m,1h),7.38(s,1h),7.26(d,j＝8.2hz,1h),6.52(d,j＝2.6hz,1h),6.33(dd,j＝8.9,2.6hz,1h),4.82(t,j＝6.9hz,2h),4.62–4.54(m,1h),4.44(t,j＝6.6hz,2h),4.17(q,j＝7.0hz,1h),3.66(s,2h),3.24(q,j＝6.8hz,1h),1.39(d,j＝6.1hz,6h),1.32(d,j＝6.8hz,6h),0.77(q,j＝4.6,4.1hz,2h),0.64(q,j＝4.4hz,2h).制备实施例7化合物s7的制备化合物7-2的合成：将化合物s5及1-boc-3-氮杂环丁酮(5eq)溶解于干燥的二氯甲烷中，搅拌30min后加入氰基硼氢化钠(4eq)，加热至40℃过夜。反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝30:1得化合物7-2。化合物s7的合成：将化合物7-2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10eq)，常温搅拌过夜。反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh＝20:1得化合物s7。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.51(s,1h),8.56(d,j＝8.4hz,1h),8.12(s,1h),7.92(d,j＝7.8hz,2h),7.66–7.61(m,1h),7.34(s,1h),7.30(d,j＝7.9hz,1h),6.35(s,1h),4.52–4.44(m,1h),4.14(t,j＝10.2hz,3h),3.80(d,j＝9.6hz,2h),3.67(s,2h),3.30–3.22(m,1h),2.12(s,3h),1.37–1.30(m,12h),0.74(d,j＝5.8hz,2h),0.64(d,j＝4.0hz,2h).制备实施例8化合物s8的制备化合物s8的合成：将化合物s5及6-1溶解于干燥的二氯甲烷中，搅拌30min后加入氰基硼氢化钠(4eq)，加热至40℃过夜。反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh＝30:1得化合物s8。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.44(s,1h),8.50(d,j＝8.3hz,1h),8.06(s,1h),7.86(d,j＝9.7hz,2h),7.54(t,j＝7.8hz,1h),7.28(s,1h),7.17(s,1h),6.30(s,1h),4.75(t,j＝6.9hz,2h),4.39(dt,j＝13.3,6.4hz,3h),4.17–4.09(m,1h),3.58(s,2h),3.23–3.15(m,1h),2.08(s,3h),1.27(dd,j＝10.2,6.5hz,12h),0.74–0.65(m,2h),0.58(d,j＝4.2hz,2h).制备实施例9化合物s9的制备化合物s9的合成：将化合物s4与3-1(3eq)溶解于乙醇中，滴加dipea(5eq)，加热至80℃反应过夜。反应完全后减压旋出乙醇，拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝30:1，得化合物s9。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.55(s,1h),8.60(dd,j＝8.6,1.2hz,1h),8.14(s,1h),8.08(d,j＝8.9hz,1h),7.92(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),7.62(ddd,j＝8.7,7.3,1.7hz,1h),7.38(s,1h),7.27–7.23(m,1h),6.55(d,j＝2.7hz,1h),6.40(dd,j＝8.9,2.7hz,1h),4.58(p,j＝6.0hz,1h),3.85(s,2h),3.77(dt,j＝8.4,2.7hz,4h),3.29–3.20(m,1h),2.68(s,2h),1.60–1.51(m,2h),1.45(d,j＝2.3hz,2h),1.39(d,j＝6.1hz,6h),1.32(d,j＝6.9hz,6h),0.80–0.73(m,2h),0.70–0.63(m,2h).制备实施例10化合物s10的制备化合物10-1的制备参照文献方法(wo2013024130)。化合物10-2的合成：将化合物s5及中间体10-1(3eq)溶解于乙醇中，滴加dipea(5eq)，加热至80℃反应过夜。反应完全后减压旋出乙醇，拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝30:1，得化合物10-2。化合物s10的合成：将化合物10-2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10eq)，常温搅拌过夜。反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有机相用饱和碳酸氢钠溶液中和，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh＝20:1得化合物s10。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.50(s,1h),9.36(s,1h),8.56(d,j＝8.3hz,1h),8.13(s,1h),7.92(d,j＝10.0hz,2h),7.62(t,j＝7.9hz,1h),7.36(s,1h),7.28(s,1h),6.44(s,1h),4.51(p,j＝6.1hz,1h),3.83(s,2h),3.39–3.21(m,5h),2.82(s,2h),2.08(s,3h),1.91(q,j＝10.2,5.8hz,2h),1.68(d,j＝13.5hz,2h),1.36(d,j＝6.1hz,6h),1.31(d,j＝6.9hz,6h),0.80(s,2h),0.69(s,2h).制备实施例11化合物s11的制备化合物11-1的制备参照文献方法(wo2013024130)。化合物s11的合成：将化合物s5与中间体11-1(3eq)溶解于乙醇中，滴加dipea(5eq)，加热至80℃反应过夜。反应完全后减压旋出乙醇，拌样上柱，ch2cl2:meoh＝30:1，得化合物s11。1hnmr(300mhz,cdcl3δ9.53(s,1h),8.59(d,j＝8.4hz,1h),8.13(s,1h),7.93(d,j＝9.1hz,2h),7.63–7.57(m,1h),7.36(s,1h),7.27–7.23(m,1h),6.45(s,1h),4.55–4.47(m,1h),3.92–3.81(m,4h),3.25(q,j＝6.9hz,1h),2.66(s,2h),2.12(s,3h),1.46(d,j＝13.1hz,2h),1.37(d,j＝6.0hz,6h),1.32(d,j＝6.9hz,6h),1.18(s,3h),1.16(s,3h),1.09(t,j＝12.2hz,2h),0.75(d,j＝4.5hz,2h),0.67(d,j＝4.6hz,2h).制备实施例12化合物s12的制备化合物s12的合成：将化合物s5与中间体3-1(3eq)溶解于乙醇中，滴加dipea(5eq)，加热至80℃反应过夜。反应完全后减压旋出乙醇，拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝30:1，得化合物s12。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.52(s,1h),8.58(d,j＝8.5hz,1h),8.13(s,1h),7.99–7.86(m,2h),7.65–7.56(m,1h),7.35(s,1h),7.24(d,j＝8.3hz,1h),6.46(s,1h),4.51(p,j＝6.2hz,1h),3.84(s,2h),3.77(d,j＝8.1hz,4h),3.31–3.23(m,1h),2.71(s,2h),2.11(s,3h),1.60–1.51(m,2h),1.44(d,j＝12.8hz,2h),1.37(d,j＝6.1hz,6h),1.32(d,j＝6.9hz,6h),0.76(d,j＝3.8hz,2h),0.66(d,j＝6.4hz,2h).制备实施例13化合物s13的制备化合物13-2的合成：将化合物s4、1-n-boc-3-吖丁啶羧酸(1.3eq)及o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯[tbtu](1.5eq)溶解于dmf中，加入dipea(2eq)，室温搅拌过夜。反应完全后，反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝20:1得化合物13-2。化合物s13的合成：将化合物13-2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10eq)，常温搅拌过夜。反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝20:1得化合物s13。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.45(s,1h),8.48(d,j＝8.4hz,1h),8.02(s,1h),7.81(d,j＝8.0hz,2h),7.74(s,1h),7.50(t,j＝8.3hz,1h),7.15(d,j＝7.3hz,1h),6.39(s,1h),4.43–4.37(m,1h),4.17(d,j＝17.0hz,4h),3.91(s,2h),3.76(s,1h),3.64(d,j＝7.0hz,1h),3.21–3.12(m,1h),1.97(s,3h),1.23(d,j＝1.9hz,6h),1.21(d,j＝2.7hz,6h),0.87(s,4h).制备实施例14化合物s14的制备化合物14-1的合成：将化合物s4、13-1(1.3eq)及tbtu(1.5eq)溶解于dmf中，加入dipea(2eq)，常温搅拌过夜。反应完全后，反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝20:1得化合物14-1。化合物s14的合成：将化合物14-1溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10eq)，常温搅拌过夜。反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝20:1得化合物s14。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.53(s,1h),8.56(d,j＝8.3hz,1h),8.13(s,1h),8.05(d,j＝8.9hz,1h),7.92(dd,j＝7.9,1.6hz,1h),7.63(ddd,j＝8.7,7.4,1.7hz,1h),7.36(s,1h),7.30(s,1h),6.53(dd,j＝12.5,2.6hz,2h),6.37(dd,j＝8.9,2.7hz,1h),4.55(td,j＝6.1,2.8hz,1h),4.02(s,2h),3.76(dt,j＝26.7,7.7hz,4h),3.33–3.20(m,2h),2.41(s,1h),1.37(d,j＝6.1hz,6h),1.31(d,j＝6.9hz,6h),1.00–0.91(m,4h).制备实施例15化合物s15的制备化合物15-2的合成：将化合物s5、boc-l-脯氨酸(1.3eq)及tbtu(1.5eq)溶解于dmf中，加入dipea(2eq)，常温搅拌过夜。反应完全后，反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝20:1得化合物15-2。化合物s15的合成：将化合物15-2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10eq)，常温搅拌过夜。反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝20:1得化合物s15。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.50(s,1h),8.58(d,j＝8.4hz,1h),8.13(s,1h),8.05(s,1h),7.91(d,j＝9.7hz,2h),7.61(d,j＝7.9hz,1h),7.32(s,1h),7.23(d,j＝7.4hz,1h),6.45(s,1h),4.50(dt,j＝12.2,6.2hz,1h),4.06–3.93(m,2h),3.67(dd,j＝9.1,5.4hz,1h),3.26(p,j＝6.8hz,1h),2.99(dt,j＝10.2,6.7hz,1h),2.86(dt,j＝10.1,6.3hz,1h),2.10(s,4h),1.83(dt,j＝12.4,6.0hz,1h),1.71–1.61(m,2h),1.39–1.28(m,12h),0.95(d,j＝4.1hz,2h),0.91(d,j＝3.7hz,2h).制备实施例16化合物s16的制备化合物16-2的合成：将化合物s5、boc-甘氨酸(1.3eq)及tbtu(1.5eq)溶解于dmf中，加入dipea(2eq)，常温搅拌过夜。反应完全后，反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝20:1得化合物16-2。化合物s16的合成：将化合物16-2溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10eq)，常温搅拌过夜。反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝30:1得化合物s16。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.50(s,1h),8.58(d,j＝8.4hz,1h),8.13(s,1h),7.92(d,j＝6.4hz,2h),7.70(s,1h),7.61(t,j＝8.4hz,1h),7.33(s,1h),7.23(d,j＝7.5hz,1h),6.47(s,1h),4.50(p,j＝6.0,5.5hz,1h),4.01(s,2h),3.29(d,j＝5.6hz,2h),3.25(d,j＝6.9hz,1h),2.10(s,3h),1.58(s,2h),1.33(dd,j＝8.6,6.5hz,12h),0.99(d,j＝3.4hz,2h),0.97–0.91(m,2h).制备实施例17化合物s17的制备化合物s17的合成：将化合物s5、羟基乙酸(1.3eq)及tbtu(1.5eq)溶解于dmf中，加入dipea(2eq)，常温搅拌过夜。反应完全后，反应完全后将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取三次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝20:1得化合物s17。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.53(s,1h),8.58(d,j＝8.3hz,1h),8.07(s,1h),7.91(d,j＝7.8hz,1h),7.76(s,1h),7.61(t,j＝7.5hz,1h),7.24–7.19(m,1h),7.00(s,1h),6.49(s,1h),4.48(dt,j＝12.2,5.5hz,1h),4.04(s,2h),3.95(s,2h),3.30–3.21(m,1h),2.11(s,3h),1.32(t,j＝6.0hz,12h),1.02–0.91(m,4h).制备实施例18化合物s18的制备化合物18-1的合成：将化合物3-溴甲基-3-羟甲基-1-氧杂环丁烷、1-叔丁氧羰基哌嗪(1.5eq)、碳酸钾(2eq)及碘化钾(0.2eq)溶解于乙腈中，加热至75℃反应4h。反应完全后将碳酸钾过滤掉，滤液旋干拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝50:1得化合物18-1。化合物18-2的合成：将化合物18-1、化合物5-1(1.2eq)及碳酸铯(2eq)溶解于dmf中，加热至65℃反应5h，反应完全后，将至室温。将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝100:1得化合物18-2。化合物18-3的合成：将化合物20-3溶解于甲醇中，加入20％的钯碳，催化氢化6h。反应完全后，抽滤除去钯碳，滤液旋干上柱，展开剂为pe:ea＝6:1得化合物18-3。化合物s18的合成：将化合物18-3、化合物4-5(1.1eq)、2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯[x-phos](0.05eq)、三(二亚苄基丙酮)二钯[pd2(dba)3](0.075eq)及碳酸钾(2eq)溶于1,4-二氧六环中，加热至100℃回流。6h后反应完全。将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝50:1得化合物s18。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.52(s,1h),8.58(d,j＝8.4hz,1h),8.14(s,1h),7.99–7.89(m,2h),7.60(t,j＝7.8hz,1h),7.37(s,1h),7.23(s,1h),6.54(s,1h),4.63–4.47(m,5h),4.17(s,2h),3.26(dt,j＝13.6,6.9hz,1h),3.14(s,4h),2.91(s,2h),2.72(s,4h),2.05(s,3h),1.39(d,j＝6.1hz,6h),1.32(d,j＝6.8hz,6h).制备实施例19化合物s19的制备化合物19-2的合成：将化合物1-2、3-氟丫丁啶盐酸盐(1.5eq)、碳酸钾(2eq)及碘化钾(0.2eq)溶解于乙腈中，加热至75℃反应4h。反应完全后将碳酸钾过滤掉，滤液旋干拌样上柱，展开剂为ch2cl2:meoh(体积比)＝50:1得化合物19-2。化合物19-3的合成：将化合物19-2、化合物5-1(1.2eq)及碳酸铯(2eq)溶解于dmf中，加热至65℃反应5h，反应完全后，将至室温。将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝100:1得化合物19-3。化合物19-4的合成：将化合物19-3溶解于甲醇中，加入20％的钯碳，催化氢化6h。反应完全后，抽滤除去钯碳，滤液旋干上柱，展开剂为pe:ea(体积比)＝6:1得化合物19-4。化合物s19的合成：将化合物19-4、化合物4-5(1.1eq)、x-phos(0.05eq)、pd2(dba)3(0.075eq)及碳酸钾(2eq)溶于1,4-二氧六环中，加热至100℃回流。6h后反应完全。将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh＝50:1得化合物s19。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.52(s,1h),8.58(d,j＝8.4hz,1h),8.13(s,1h),7.95–7.86(m,2h),7.60(ddd,j＝8.8,7.4,1.6hz,1h),7.37(s,1h),7.26–7.20(m,1h),6.53(s,1h),5.21–5.14(m,1h),4.97(q,j＝5.1hz,1h),4.59–4.50(m,5h),4.10(s,2h),3.74–3.64(m,2h),3.36–3.22(m,3h),3.01(s,2h),2.07(s,3h),1.38(d,j＝6.0hz,6h),1.32(d,j＝6.8hz,6h).制备实施例20化合物s20的制备化合物20-2的合成：将化合物1-2、3,3-二氟丫丁啶盐酸盐(1.5eq)、碳酸钾(2eq)及碘化钾(0.2eq)溶解于乙腈中，加热至75℃反应4h。反应完全后将碳酸钾过滤掉，滤液旋干拌样上柱，展开剂为ch2cl2:meoh(体积比)＝50:1得化合物20-2。化合物20-3的合成：将化合物20-2、化合物5-1(1.2eq)及碳酸铯(2eq)溶解于dmf中，加热至65℃反应5h，反应完全后，将至室温。将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝100:1得化合物20-3。化合物20-4的合成：将化合物20-3溶解于甲醇中，加入20％的钯碳，催化氢化6h。反应完全后，抽滤除去钯碳，滤液旋干上柱，展开剂为pe:ea(体积比)＝6:1得化合物20-4。化合物s20的合成：将化合物20-4、化合物4-5(1.1eq)、x-phos(0.05eq)、pd2(dba)3(0.075eq)及碳酸钾(2eq)溶于1,4-二氧六环中，加热至100℃回流。6h后反应完全。将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后拌样上柱，ch2cl2:meoh(体积比)＝50:1得化合物s20。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.49(s,1h),8.56(d,j＝8.6hz,1h),8.12(s,1h),7.94–7.86(m,2h),7.62–7.54(m,1h),7.33(s,1h),7.21(d,j＝8.3hz,1h),6.51(s,1h),4.58–4.46(m,5h),4.08(s,2h),3.68(dd,j＝14.4,7.5hz,2h),3.33(d,j＝6.9hz,1h),3.23(q,j＝6.8hz,2h),2.99(s,2h),2.24–2.17(m,1h),2.05(s,3h),1.36(d,j＝6.1hz,6h),1.30(d,j＝6.9hz,6h).实验实施例：分子受体酪氨酸激酶alk分子水平活性评价1.受体氨酸激酶alk分子水平酶活抑制初步评价实验(1)酶反应底物poly(glu,tyr)(摩尔比4:1)用无钾离子的pbs(10mm磷酸钠缓冲液，150mmnacl，ph7.2-7.4)稀释成20μg/ml，125μl/孔包被酶标板，置37℃反应12-16小时。弃去孔中液体。洗板，用200μl/孔的t－pbs(含0.1％tween-20的无钾离子的pbs)洗板三次，每次5分钟。于37℃烘箱中干燥酶标板1-2小时。(2)每孔加入用反应缓冲液(50mmhepesph7.4，50mmmgcl2，0.5mmmncl2，0.2mmna3vo4，1mmdtt)稀释的atp溶液49μl，每孔中加入1μl化合物，加入待测试化合物，再加入50μl用反应缓冲液稀释的各激酶域重组蛋白启动反应，每次实验需设无atp对照孔两孔。置37℃摇床(100rpm)反应1小时。弃去孔中液体，t-pbs洗板三次。(3)加入抗体py99100μl/孔(抗体用含bsa5mg/ml的t-pbs1:500稀释)，37℃摇床反应0.5小时。弃去孔中液体，t-pbs洗板三次。(4)加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗100μl/孔(抗体用含bsa5mg/ml的t-pbs1:2000稀释)，37℃摇床反应0.5小时。弃去孔中液体，t-pbs洗板三次。(5)加入2mg/ml的opd显色液100μl/孔(用含有0.03％h2o2的0.1m柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液(ph＝5.4)稀释)，25℃避光反应1-10分钟。(6)加入2mh2so450μl/孔中止反应，用可调波长式微孔板酶标仪versamax读数，波长为490nm。(7)结果分析2.受体酪氨酸激酶alk酶活抑制ic50评价实验化合物对受体酪氨酸激酶alk酶活抑制水平见下表：化合物抑制率(％)ic50(μm)化合物抑制率(％)ic50(μm)s196@0.1μm<0.01s289@0.1μm<0.01s389@0.1μm<0.01s470@0.1um<0.1s593@0.1μm<0.1s681@0.1μm<0.1s7112@0.1μm<0.01s894@0.1μm<0.01s990@0.1μm<0.1s10109@0.1μm<0.01s1179@0.1μm<0.1s1299@0.1μm<0.01s13112@0.1μm<0.01s1487@0.1μm<0.1s1590@0.1μm<0.01s1687@0.1μm<0.1s1774@0.1μm<0.1s1889@0.1μm<0.1s1965@0.1μm<0.1s2051@0.1μm<0.1实验实施例：部分化合物受体酪氨酸激酶alk细胞水平活性评价化合物对su-dhl-1细胞的增殖抑制作用以cck-8细胞计数试剂盒(dojindo)检测。具体步骤如下：处于对数生长期的su-dhl-1细胞按合适密度接种至96孔培养板中，每孔90μl，培养过夜后，加入不同浓度的化合物作用72hr，并设定溶剂对照组(阴性对照)。待化合物作用细胞72h后，化合物对细胞增殖的影响采用cck-8细胞计数试剂盒(dojindo)检测，每孔加入10μlcck-8试剂，置于37℃培养箱中放置2-4小时后，用全波长式微孔板酶标仪spectramax190读数，确定测定波长为450nm。采用以下列公式计算化合物对肿瘤细胞生长的抑制率(％)：抑制率(％)＝(od对照孔-od给药孔)/od对照孔×100％化合物对su-dhl-1细胞的增殖抑制率见下表：细胞水平活性测试结果显示化合物s1、s2、s3的抑制活性均强于ceritinib。实验实施例：部分化合物大鼠药动学研究试验1.给药方案sd大鼠21只，雄性，体重200-220g，随机分成6组，每组4或3只，灌胃或静脉给予化合物s1、s2、s3，具体安排见下表：试验前禁食12h，自由饮水。给药后2h统一进食。2.采血时间点及样品处理：灌胃给药：给药后0.25，0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0和24h；静脉给药：给药后5min，0.25，0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0和24h；在以上设定时间点经大鼠眼球后静脉丛取静脉血0.3ml，置肝素化试管中，11000rpm离心5min，分离血浆，于–20℃冰箱中冷冻。3.样品测试和数据分析采用lc/ms/ms法测定大鼠血浆中s1、s2和s3的浓度。采用winnonlin6.3软件(美国pharsight公司)的非房室模型计算给药后的药代动力学参数。达峰浓度cmax和达峰时间tmax为实测值；药时曲线下面积auc0-t值：采用梯形法计算；auc0-∞＝auc0-t+ct/ke，ct为最后一个可测得时间点的血药浓度；ke为消除速率常数；消除半衰期t1/2＝0.693/ke；清除率cl＝d/auc0-∞；稳态分布容积vss＝cl×mrt；绝对生物利用度f＝(auc灌胃×d静脉)/(auc静脉×d灌胃)×100％。4.试验结果三个化合物显示出较好的药代动力学性质。实验实施例：化合物小鼠体内药效试验1、对人淋巴瘤karpas-299scid小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用(1)剂量设置化合物s1，s3均设置两个剂量组，分别为50mg/kg和10mg/kg组。阳性对照药物crizotinib剂量为50mg/kg。(2)动物scid小鼠，雌性，4-5周龄，体重14±2g，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，质量合格证编号：no.11401300013295。生产许可证号：scxk(京)2014-0004。药物所使用许可合格证编号：syxk(沪)2013-0049。每组动物数：阴性对照组10只，给药组5只。(3)细胞株人淋巴瘤karpas-299细胞株由我室保存。将该细胞接种scid小鼠右侧腋窝皮下，细胞接种量为5×106/只，形成移植瘤后再在scid小鼠体内传2代后使用。(4)实验方法取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于scid小鼠右侧腋窝皮下。scid小鼠皮下移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤平均体积生长至约130mm3左右后将动物随机分组。s1、s350mg/kg和10mg/kg组，每天口服给药一次，连续给药14天。阳性对照药pf234106650mg/kg组，每天口服给药一次，连续给药14天。溶剂对照组则给等量溶剂。整个实验过程中，每周2次测量移植瘤直径，同时称量小鼠体重。肿瘤体积(tumorvolume，tv)的计算公式为：tv＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示长、宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relativetumorvolume，rtv)，计算公式为：rtv＝vt/v0。其中v0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为：(1)相对肿瘤增殖率t/c(％)，计算公式如下：t/c(％)＝(trtv/crtv)×100％，trtv：治疗组rtv；crtv：阴性对照组rtv；(2)肿瘤体积增长抑制率gi(％)，计算公式如下：gi(％)＝[1-(tvt-tv0)/(cvt-cv0)]×100％，tvt为治疗组每次测量的瘤体积；tv0为治疗组分笼给药时所得瘤体积；cvt为对照组每次测量的瘤体积；cv0为对照组分笼给药时所得瘤体积；(3)瘤重抑制率，计算公式如下：瘤重抑制率％＝(wc-wt)/wc×100％，wc：对照组瘤重，wt：治疗组瘤重。(5)结果化合物s150mg/kg组，每天口服给药一次，连续给药14天，对人淋巴瘤karpas-299scid小鼠皮下移植瘤的生长有极其显著的抑制作用，第14天所得t/c百分数为6.03％，而10mg/kg剂量组，每天口服给药一次，连续给药14天，对人淋巴瘤karpas-299scid小鼠皮下移植瘤的生长则无明显抑制作用，第14天所得t/c百分数为84.37％。化合物s350mg/kg组，每天口服给药一次，连续给药14天，对人淋巴瘤karpas-299scid小鼠皮下移植瘤的生长有极其显著的抑制作用，第14天所得t/c百分数为0.00％，至实验结束时，全部5只受试小鼠肿瘤均完全消退。10mg/kg剂量组，每天口服给药一次，连续给药14天，对人淋巴瘤karpas-299scid小鼠皮下移植瘤的生长亦有显著的抑制作用，第14天所得t/c百分数为23.66％。给药方式及测试结果见下表：2、化合物对nih/3t3-alk-l1196m裸小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用(1)剂量设置s3设置两个剂量组，分别为50mg/kg和10mg/kg组。阳性对照药物crizotinib剂量为100mg/kg；ceritinib和alectinib均设置一个剂量组，为50mg/kg。(2)动物balb/ca裸小鼠，雌性，4-5周龄，体重17±2g，中科院上海药物研究所生产，生产许可证号：scxk(沪)2013-0017。上海药物所使用许可证编号：syxk(沪)2013-0049。每组动物数：阴性对照组12只，给药组6只。(3)细胞株将nih/3t3-alk-l1196m细胞株接种裸小鼠右侧腋窝皮下，细胞接种量为5×106/只，形成移植瘤后再在裸小鼠体内传1代后使用。(4)实验方法取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠皮下移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤平均体积生长至约150mm3左右后将动物随机分组。s3设置两个剂量组，分别为50mg/kg和10mg/kg组，每天口服给药一次，连续给药14天。阳性对照药crizotinib100mg/kg组，每天口服给药一次，连续给药14天；ldk378和ch542480250mg/kg组，每天口服给药一次，连续给药14天。溶剂对照组则给等量溶剂。整个实验过程中，每周2次测量移植瘤直径，同时称量小鼠体重。肿瘤体积(tumorvolume,tv)的计算公式为：tv＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示长、宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relativetumorvolume，rtv)，计算公式为：rtv＝vt/v0。其中v0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为1)相对肿瘤增殖率t/c(％)，计算公式如下：t/c(％)＝(trtv/crtv)×100％，trtv：治疗组rtv；crtv：阴性对照组rtv；2)肿瘤体积增长抑制率gi(％)，计算公式如下：gi(％)＝[1-(tvt-tv0)/(cvt-cv0)]×100％，tvt为治疗组每次测量的瘤体积；tv0为治疗组分笼给药时所得瘤体积；cvt为对照组每次测量的瘤体积；cv0为对照组分笼给药时所得瘤体积；3)瘤重抑制率，计算公式如下：瘤重抑制率(％)＝(wc-wt)/wc×100％，wc：对照组瘤重，wt：治疗组瘤重。(5)结果化合物s350mg/kg组，每天口服给药一次，对nih/3t3-alk-l1196m裸小鼠皮下移植瘤的生长有极其显著的抑制作用，连续给药14天，第14天所得t/c百分数为1.42％；10mg/kg组，每天口服给药一次，连续给药14天，对nih/3t3-alk-l1196m裸小鼠皮下移植瘤的生长有明显的抑制作用，第14天所得t/c百分数为37.05％。测试结果见下表：新化合物的哌啶n原子引入柔性水溶性基团及去除哌啶环直接在多取代苯环上引入柔性水溶性片段，很大程度上降低了ceritinib的clogp值(ceritinibclogp值高达5.62)，并同时降低化合物的刚性，改善其药代动力学性质。代表性化合物的测试结果显示，新化合物经alk分子水平，细胞水平，体内代谢研究及体内药效甚至包括alkl1196m突变模型均显示出与ceritinib相当甚至更好的结果，因此是非常有潜力的alk抑制剂。当前第1页12