一种表达载体及其在制备转基因植物中的应用的制作方法

文档序号:13685297阅读:来源:国知局
技术特征:
1.一种表达载体,包含表达盒甲和表达盒乙;所述表达盒甲依次包括如下元件:启动子甲、选择标记基因和终止序列甲;所述表达盒乙依次包括如下元件:启动子乙、内含子和终止序列乙;所述表达盒乙中,所述启动子乙和所述内含子之间具有多克隆位点甲;所述内含子和所述终止序列之间具有多克隆位点乙;所述多克隆位点甲和所述多克隆位点乙中均具有一个以上酶切识别序列;所述表达载体中其它位置的酶切识别序列与所述多克隆位点甲中的酶切识别序列和所述多克隆位点乙中的酶切识别序列均不相同。2.如权利要求1所述的表达载体,其特征在于:所述启动子甲为35S启动子或UBI启动子;所述启动子乙为35S启动子或UBI启动子;所述终止序列甲为NOS终止子或ployA;所述终止序列乙为NOS终止子或ployA。3.如权利要求1或2所述的表达载体,其特征在于:所述选择标记基因为bar基因。4.如权利要求1至3任一所述的表达载体,其特征在于:所述多克隆位点甲具有如下酶切识别序列:PstⅠ、BamHⅠ、SmaⅠ、KpnⅠ、SalⅠ、NheⅠ和XholⅠ;所述多克隆位点乙具有如下酶切识别序列:SpeⅠ和SacⅠ。5.如权利要求1至4任一所述的表达载体,其特征在于:所述表达载体自5'末端至3'末端依次包括所述表达盒甲和所述表达盒乙。6.如权利要求1至5任一所述的表达载体,其特征在于:所述表达载体的核苷酸序列如序列表中序列1所示。7.权利要求1至6任一所述的表达载体在制备转基因植物中的应用。8.一种制备转基因植物的方法,包括如下步骤:将目的基因插入权利要求1至6任一所述的表达载体中的所述表达盒乙中的酶切识别序列,然后转化受体植物,借助选择标记基因进行筛选,得到T0代植株;将所述T0代植株进行自交,得到含有所述目的基因且不含有所述选择标记基因的T1代植株,即无选择标记的转基因植株。9.一种制备转基因植物的方法,包括如下步骤:以权利要求1至6任一所述的表达载体为出发载体,在所述多克隆位点甲中插入目的基因中的特定区段,在所述多克隆位点乙中插入所述目的基因中的特定区段的反向互补序列,得到目的载体;将所述目的载体转化受体植物,借助选择标记基因进行筛选,得到T0代植株;\t将所述T0代植株进行自交,得到不含有所述目的基因且不含有所述选择标记基因的T1代植株,即无选择标记的转基因植株。10.如权利要求8或9所述的方法,其特征在于:所述受体植物为如下a1)至a8)中的任一种:a1)双子叶植物;a2)单子叶植物;a3)水稻;a4)玉米;a5)大麦;a6)黑麦;a7)小麦;a8)小麦品种Fielder。
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