鉴定或辅助鉴定啤酒生产过程微生物的系统及其应用的制作方法与工艺

文档序号:13108891
技术领域本发明涉及微生物领域中鉴定或辅助鉴定啤酒生产过程污染微生物的系统及其应用。

背景技术:
啤酒生产是一个纯种酵母酿造的过程,任何细菌以及外来野生酵母的污染均有可能带来啤酒品质上的恶化,每个啤酒厂在长期的生产过程中,由于所处的地理位置、气候环境以及微生物管理的不同,已经形成了自己的“小型生态系统”,并在某种程度上形成了“生态平衡”。受到有害菌污染的啤酒大部分会腐败变质,其主要污染菌有乳酸菌、醋酸菌、肠道细菌、厌氧发酵单胞菌和一些野生酵母等,啤酒受到微生物污染后会产生多种代谢物,其代谢产物和细胞内容物留在啤酒中,使得啤酒出现异杂味。啤酒厂微生物控制对啤酒的质量关系重大。微生物控制不好,不仅影响酵母活性,降糖能力下降,酵母凝聚性变差,pH值变化,使双乙酰还原速度减慢,而且能产生许多副产物,引起啤酒口味变化,即使一些污染菌没有进入成品酒中,但其代谢产物仍会留在啤酒中并产生有害影响,因此微生物控制应贯穿生产全过程。对于啤酒厂微生物的控制应建立在对微生物污染种类及分布情况充分把握的基础上的,在确定污染菌的种类的前提下,了解其生活特征,分析可能带来的危害,有利于对啤酒微生物污染源头进行追溯,并采取有效防治措施。不仅如此,由于中国国内不同区域的气候环境与其他国家地区具有差异,中国啤酒生产企业在啤酒生产过程中污染微生物的种群分布也是与其他国家地区有差异的,因此,建立符合中国国内啤酒生产过程污染特征的污染微生物数据库是极具有指导意义的,一方面,可使国内啤酒生产企业的工艺及质量管理人员全面了解本企业主要微生物的种类及其在各工序的分布情况,提高微生物管理的针对性和自信心;另一方面,通过利用与污染菌数据菌库中的鉴定图谱比对,有利于对啤酒有害菌进行快速初步判定,了解工序中出现的微生物变化,及时采取措施。并且,随着污染菌数据库的建立,污染菌的鉴定与保存方法的规范化,可逐步完善中国啤酒污染微生物的菌种资源,提高微生物的整体认识及控制水平,为提高产品质量打下坚实的基础。

技术实现要素:
本发明所要求解决的技术问题是如何简化啤酒生产过程中微生物的鉴定流程、缩短鉴定周期、有效控制污染。为了解决上述技术问题,本发明提供了一种鉴定或辅助鉴定啤酒微生物的系统,包括啤酒生产过程中污染微生物的DNA样品和记载所述污染微生物信息的数据库;所述污染微生物信息包括1)-4)中至少一种:1)所述污染微生物的保守DNA序列;2)所述污染微生物的形态学特征;3)所述污染微生物的生理生化特征;4)所述微生物的分布特点。所述分布特点包括污染微生物出现的季节、区域和生产工序。上述系统中,所述季节为一年四季中至少一季,如夏季或冬季;所述区域为至少一个区域,如中国华北地区、华东地区、华南地区或西北地区;所述生产工序为至少一个工序,如CIP杀菌系统、糖化、发酵、过滤或包装。上述系统中,所述数据库中所述污染微生物包括71株好氧细菌、15株厌氧细菌和3株真菌。上述系统中,所述71株好氧细菌包括:肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiellapneumoniaesubsp.ozaenae)、Serratiamarcescenssubsp.Sakuensis、Aquitaleamagnusonii、Chryseobacteriumarthrosphaerae、Enterobacterxiangfangensis、Macrococcusequipercicus、Ralstoniainsidiosa、阿氏肠杆菌(Enterobacterasburiae)、鲍氏不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)、Acinetobacternosocomialis、产吲哚金黄杆菌(Chryseobacteriumindologenes)、Xanthomonassacchari、赫氏埃希氏菌(Escherichiahermannii)、解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种(Bacillusamyloliquefacienssubsp.Amyloliquefaciens)、解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillusamyloliquefacienssubsp.plantarum)、巨胞氮单胞菌(Azomonasmacrocytogenes)、抗辐射不动杆菌(Acinetobacterradioresistens)、Bacillussubtilissubsp.inaquosorum、蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)、Klebsiellaquasipneumoniaesubsp.quasipneumoniae、路德维希肠杆菌(Enterobacterludwigii)、木糖葡萄球菌(Staphylococcusxylosus)、皮特不动杆菌(Acinetobacterpittii)、栖木槿假单胞菌(Pseudomonashibiscicola)、乳微球菌(Micrococcuslactis)、沙福芽孢杆菌(Bacillussafensis)、嗜碱微小杆菌(Exiguobacteriumalkaliphilum)、嗜气芽孢杆菌(Bacillusaerophilus)、Burkholderiaarboris、炭疽杆菌(Bacillusanthracis)、Bacillustequilensis、土壤短芽孢杆菌(Brevibacillusagri)、Exiguobacteriumindicum、Deinococcusficus、Bacillussiamensis、辛氏不动杆菌(Acinetobacterschindleri)、杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacteryoungae)、Deinococcusradioduran、Bacillusinfantis、越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderiavietnamiensis)、Bacillusaryabhattai、Enterobactermori、Cronobacterdublinensissubsp.Lausannensis、Pantoeacalida、粪短波单胞菌(Brevundimonasfaecalis)、腐生葡萄球菌(Staphylococcussaprophyticussubsp.Saprophyticus)、华癸库特氏菌(Kurthiahuakuii)、吉氏库特氏菌(Kurthiagibsonii)、食甲醇芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)、Pseudomonasgraminis、简单芽孢杆菌(Bacillussimplex)、Lysinibacillusxylanilyticus、Chryseobacteriumhispalense、Kocuriamarina、Pseudomonaskunmingensis、Paenibacillushumicus、美棒杆菌(Corynebacteriumcallunae)、奈氏西地西菌(Cedeceaneteri)、耐寒短杆菌(Brevibacteriumfrigoritolerans)、柠檬色短小杆菌(Curtobacteriumcitreum)、Bacilluspanaciterrae、Chryseobacteriumhominis、少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaspaucimobilis)、Erwiniatasmaniensis、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、伪血鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaspseudosanguinis)、烟酸芽孢杆菌(Bacillusniacini)、乙酰微小杆菌(Exiguobacteriumacetylicum)、Deinococcuscaeni、Deinococcusgrandis、植物短小杆菌(Curtobacteriumplantarum);所述15株厌氧细菌包括:肠膜明串珠菌右旋葡聚糖亚种(Leuconostocmesenteroidessubsp.dextranicun)、短乳杆菌(Lactobacillusbrevis)、格氏乳球菌(Lactococcusgarvieae)、Lactobacillusparacaseisubsp.tolerans、食窦魏斯氏菌(Weissellacibaria)、Pediococcusclaussenii、Pediococcuslolii、乳明串珠菌(Leuconostocholzapfelii)、Lactococcuslactissubsp.tructae、乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcuslactissubsp.cremoris)、戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarumsubsp.plantarum)、假肠膜明串珠菌(Leuconostocpseudomesenteroides)、拜氏梭菌(Clostridiumbeijerinckii)、解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultellaornithinolytica);所述3株真菌包括:Aureobasidium、胶红酵母(Rhodotorulamucilaginosa)、Cryptococcusrajasthanensis。上述系统中,所述好氧细菌和所述厌氧细菌的保守DNA序列为16srDNA序列;所述真菌的保守DNA序列为ITS序列。上述系统中,所述数据库中所记载的所述污染微生物信息如A1-A71、B1-B15和C1-C3所示;A1-A71为所述71种好氧细菌的信息;B1-B15为所述15种厌氧细菌的信息;C1-C3为所述3种真菌的信息;具体信息请参见实施例1。上述系统中,所述数据库还记载了所述污染微生物的发生概率。所述污染微生物的发生概率为当生产工序出现微生物污染时,污染微生物为某种微生物的概率。所述生产工序为已发生污染的生产工序。上述系统中,所述污染微生物的发生概率请参见实施例1。本发明中所涉及的华北地区包括北京市、内蒙古自治区、河北省、山西省、山东省、辽宁省、黑龙江省和吉林省。本发明中所涉及的华东地区包括福建省、浙江省、湖南省、湖北省、江西省、河南省、安徽省、江苏省和上海市。本发明中所涉及的东南地区包括广西壮族自治区、广东省、云南省、贵州省、四川省和重庆市。本发明中所涉及的西北地区包括新疆维吾尔自治区、西藏自治区、宁夏回族自治区、青海省、甘肃省和陕西省。为了解决上述技术问题,本发明还提供上述系统在鉴定或辅助鉴定啤酒污染菌中的应用。为了解决上述技术问题,本发明又提供一种鉴定或辅助鉴定啤酒污染菌的方法。上述方法包括如下步骤:(1)分离纯化样品中的微生物,得到菌株;(2)检测所述菌株的形态特征和生理生化特征;(3)提取所述菌株的基因组DNA,获取保守DNA序列;(4)将所述菌株的形态特征、生理生化特征以及所述保守DNA序列与上述系统中所述数据库记载的微生物信息进行比对,确定所述菌株是否为啤酒污染菌,如果所述菌株是污染菌,确定所述菌株的种名;所述样品取自啤酒生产过程的任意环节。上述方法中,所述步骤(4)还包括将步骤(3)中得到的所述菌株的基因组DNA与上述系统中所述啤酒生产过程中污染微生物的DNA样品进行杂交。上述方法中,所述步骤(4)还包括根据比对结果确定所述菌株的发生概率。本发明的有益效果是:由于中国气候与地理位置与欧美国家不同,中国国内的啤酒生产过程污染微生物的种群分布也不同于其他国家,本发明首次在中国全国范围内四个主要啤酒生产密集区域(华北、华东、东南、西北)分季节对不同区域的啤酒厂进行了生产全过程的微生物数据库构建,可通过与数据库中已有的污染菌特征进行比对,结合各区域、各季节及生产过程的污染种群分布特点,快速得出污染菌的鉴定结果。为中国啤酒生产企业啤酒生产过程污染菌鉴定、危害分析、工艺控制、污染微生物预防控制以及监控体系的建立提供了数据支持和理论指导。附图说明图1为肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiellapneumoniaesubsp.ozaenae)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图2为Serratiamarcescenssubsp.Sakuensis的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图3为Aquitaleamagnusonii的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图4为Chryseobacteriumarthrosphaerae的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图5为Enterobacterxiangfangensis的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图6为Macrococcusequipercicus的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图7为Ralstoniainsidiosa的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图8为阿氏肠杆菌(Enterobacterasburiae)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图9为鲍氏不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图10为Acinetobacternosocomialis的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图11为产吲哚金黄杆菌(Chryseobacteriumindologenes)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图12为Xanthomonassacchari的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图13为赫氏埃希氏菌(Escherichiahermannii)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图14为解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种(Bacillusamyloliquefacienssubsp.Amyloliquefaciens)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图15为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillusamyloliquefacienssubsp.plantarum)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图16为巨胞氮单胞菌(Azomonasmacrocytogenes)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图17为抗辐射不动杆菌(Acinetobacterradioresistens)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图18为Bacillussubtilissubsp.inaquosorum的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图19为蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图20为Klebsiellaquasipneumoniaesubsp.quasipneumoniae的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图21为路德维希肠杆菌(Enterobacterludwigii)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图22为木糖葡萄球菌(Staphylococcusxylosus)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图23为皮特不动杆菌(Acinetobacterpittii)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图24为栖木槿假单胞菌(Pseudomonashibiscicola)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图25为乳微球菌(Micrococcuslactis)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图26为沙福芽孢杆菌(Bacillussafensis)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图27为嗜碱微小杆菌(Exiguobacteriumalkaliphilum)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图28为嗜气芽孢杆菌(Bacillusaerophilus)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图29为Burkholderiaarboris的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图30为炭疽杆菌(Bacillusanthracis)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图31为Bacillustequilensis的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图32为土壤短芽孢杆菌(Brevibacillusagri)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图33为Exiguobacteriumindicum的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图34为Deinococcusficus的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图35为Bacillussiamensis的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图36为辛氏不动杆菌(Acinetobacterschindleri)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图37为杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacteryoungae)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图38为Deinococcusradioduran的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图39为Bacillusinfantis的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图40为越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderiavietnamiensis)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图41为Bacillusaryabhattai的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图42为Enterobactermori的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图43为Cronobacterdublinensissubsp.Lausannensis的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图44为Pantoeacalida的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图45为粪短波单胞菌(Brevundimonasfaecalis)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图46为腐生葡萄球菌(Staphylococcussaprophyticussubsp.Saprophyticus)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图47为华癸库特氏菌(Kurthiahuakuii)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图48为吉氏库特氏菌(Kurthiagibsonii)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图49为食甲醇芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图50为Pseudomonasgraminis的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图51为简单芽孢杆菌(Bacillussimplex)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图52为Lysinibacillusxylanilyticus的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图53为Chryseobacteriumhispalense的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图54为Kocuriamarina的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图55为Pseudomonaskunmingensis的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图56为Paenibacillushumicus的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图57为美棒杆菌(Corynebacteriumcallunae)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图58为奈氏西地西菌(Cedeceaneteri)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图59为耐寒短杆菌(Brevibacteriumfrigoritolerans)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图60为柠檬色短小杆菌(Curtobacteriumcitreum)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图61为Bacilluspanaciterrae的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图62为Chryseobacteriumhominis的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图63为少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaspaucimobilis)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图64为Erwiniatasmaniensis的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图65为铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图66为伪血鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaspseudosanguinis)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图67为烟酸芽孢杆菌(Bacillusniacini)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图68为乙酰微小杆菌(Exiguobacteriumacetylicum)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图69为Deinococcuscaeni的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图70为Deinococcusgrandis的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图71为植物短小杆菌(Curtobacteriumplantarum)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图72为肠膜明串珠菌右旋葡聚糖亚种(Leuconostocmesenteroidessubsp.dextranicun)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图73为短乳杆菌(lactobacillusbrevis)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图74为格氏乳球菌(Lactococcusgarvieae)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图75为Lactobacillusparacaseisubsp.tolerans的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图76为食窦魏斯氏菌(Weissellacibaria)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图77为Pediococcusclaussenii的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图78为Pediococcuslolii的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图79为乳明串珠菌(Leuconostocholzapfelii)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图80为Lactococcuslactissubsp.tructae的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图81为乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcuslactissubsp.cremoris)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图82为戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图83为植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillusplantarumsubsp.plantarum)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图84为假肠膜明串珠菌(Leuconostocpseudomesenteroides)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图85为拜氏梭菌(Clostridiumbeijerinckii)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图86为解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultellaornithinolytica)的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图87为Aureobasidium的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图88为Rhodotorulamucilaginosa的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图89为Cryptococcusrajasthanensis的菌落特征和细胞特征。其中,A为菌落特征;B为在×1000倍显微镜下的细胞特征。图90为华北、华东、东南和西北地区的划分示意图。具体实施方式下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述,给出的实施例仅为了阐明本发明,而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。实施例1、鉴定或辅助鉴定啤酒生产过程中微生物的系统一种鉴定或辅助鉴定啤酒生产过程中微生物的系统包括所述肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiellapneumoniaesubsp.ozaenae)、Serratiamarcescenssubsp.Sakuensis、Aquitaleamagnusonii、Chryseobacteriumarthrosphaerae、Enterobacterxiangfangensis、Macrococcusequipercicus、Ralstoniainsidiosa、阿氏肠杆菌(Enterobacterasburiae)、鲍氏不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)、Acinetobacternosocomialis、产吲哚金黄杆菌(Chryseobacteriumindologenes)、Xanthomonassacchari、赫氏埃希氏菌(Escherichiahermannii)、解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种(Bacillusamyloliquefacienssubsp.Amyloliquefaciens)、解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillusamyloliquefacienssubsp.plantarum)、巨胞氮单胞菌(Azomonasmacrocytogenes)、抗辐射不动杆菌(Acinetobacterradioresistens)、Bacillussubtilissubsp.inaquosorum、蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)、Klebsiellaquasipneumoniaesubsp.quasipneumoniae、路德维希肠杆菌(Enterobacterludwigii)、木糖葡萄球菌(Staphylococcusxylosus)、皮特不动杆菌(Acinetobacterpittii)、栖木槿假单胞菌(Pseudomonashibiscicola)、乳微球菌(Micrococcuslactis)、沙福芽孢杆菌(Bacillussafensis)、嗜碱微小杆菌(Exiguobacteriumalkaliphilum)、嗜气芽孢杆菌(Bacillusaerophilus)、Burkholderiaarboris、炭疽杆菌(Bacillusanthracis)、Bacillustequilensis、土壤短芽孢杆菌(Brevibacillusagri)、Exiguobacteriumindicum、Deinococcusficus、Bacillussiamensis、辛氏不动杆菌(Acinetobacterschindleri)、杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacteryoungae)、Deinococcusradioduran、Bacillusinfantis、越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderiavietnamiensis)、Bacillusaryabhattai、Enterobactermori、Cronobacterdublinensissubsp.Lausannensis、Pantoeacalida、粪短波单胞菌(Brevundimonasfaecalis)、腐生葡萄球菌(Staphylococcussaprophyticussubsp.Saprophyticus)、华癸库特氏菌(Kurthiahuakuii)、吉氏库特氏菌(Kurthiagibsonii)、食甲醇芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)、Pseudomonasgraminis、简单芽孢杆菌(Bacillussimplex)、Lysinibacillusxylanilyticus、Chryseobacteriumhispalense、Kocuriamarina、Pseudomonaskunmingensis、Paenibacillushumicus、美棒杆菌(Corynebacteriumcallunae)、奈氏西地西菌(Cedeceaneteri)、耐寒短杆菌(Brevibacteriumfrigoritolerans)、柠檬色短小杆菌(Curtobacteriumcitreum)、Bacilluspanaciterrae、Chryseobacteriumhominis、少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaspaucimobilis)、Erwiniatasmaniensis、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、伪血鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaspseudosanguinis)、烟酸芽孢杆菌(Bacillusniacini)、乙酰微小杆菌(Exiguobacteriumacetylicum)、Deinococcuscaeni、Deinococcusgrandis、植物短小杆菌(Curtobacteriumplantarum)、肠膜明串珠菌右旋葡聚糖亚种(Leuconostocmesenteroidessubsp.dextranicun)、短乳杆菌(Lactobacillusbrevis)、格氏乳球菌(Lactococcusgarvieae)、Lactobacillusparacaseisubsp.tolerans、食窦魏斯氏菌(Weissellacibaria)、Pediococcusclaussenii、Pediococcuslolii、乳明串珠菌(Leuconostocholzapfelii)、Lactococcuslactissubsp.tructae、乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcuslactissubsp.cremoris)、戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarumsubsp.plantarum)、假肠膜明串珠菌(Leuconostocpseudomesenteroides)、拜氏梭菌(Clostridiumbeijerinckii)、解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultellaornithinolytica)、Aureobasidium、胶红酵母(Rhodotorulamucilaginosa)和Cryptococcusrajasthanensis等89种微生物的DNA样品以及承载有这些微生物信息和这些微生物发生概率的数据库。其中微生物信息如下:A1为肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiellapneumoniaesubsp.ozaenae);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图1中A):乳白色,圆形,边缘整齐,表面有光泽,湿润,易挑起,易溶于水;细胞特征(图1中B):短杆,大小0.5~0.8μm×1~2μm,单独、成双或短链状排列;无芽胞无鞭毛,不运动,有较厚的荚膜,多数有菌毛;生理生化特征:革兰氏阴性,KOH拉丝阳性,产生2,3-丁二醇作为葡萄糖发酵的主要末端产物,VP试验阳性;与混合酸发酵形成少的乳酸、乙酸和甲酸,形成多的乙醇;发酵肌醇,水解尿素,不产生鸟氨酸脱羧酶或H2S;DNA序列如序列表序列1所示;分布特点:夏季,华东地区,高泡期发酵液。A2为Serratiamarcescenssubsp.Sakuensis;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图2中A):乳白色,圆形,表面光滑,有光泽,边缘整齐,易挑取,易溶于水;细胞特征(图2中B):短杆,单独或成对存在,不运动;DNA序列如序列表中序列2所示;分布特点:夏季,华北地区,过滤水。A3为Aquitaleamagnusonii;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图3中A):黄色半透明,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图3中B):短杆,单独或成对存在,运动;生理生化特征:革兰氏阴性,KOH拉丝试验阳性,过氧化氢酶阳性,氧化酶阳性,对氯化钠敏感,属于奈瑟氏菌科;DNA序列如序列表序列3所示;分布特点:夏季,华北地区,稀释出口脱氧水。A4为Chryseobacteriumarthrosphaerae;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图4中A):黄色,小菌落,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图4中B):短杆,单独存在,不运动,无芽孢,1μm×2μm;生理生化特征:革兰氏阴性,KOH拉丝实验阳性,氧化酶阳性,过氧化氢酶阳性,不能在4℃和45℃下生长,发酵葡萄糖,麦芽糖,甘露糖少量产酸,发酵乳糖,蔗糖,山梨醇等不产酸;DNA序列如序列表序列4所示;分布特点:夏季,东南地区,未杀菌清酒。A5为Enterobacterxiangfangensis;菌种类别:好氧细菌:培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时:菌落特征(图5中A):黄色(后面橙红色),扁平片状,中间带白色,边缘不齐,表面光滑,湿润,易挑起,易溶于水;细胞特征(图5中B):短杆,不运动;生理生化特征:肠杆菌属xiangfangensis是一株发现于黑龙江省,在酸面包中分离的革兰氏阴性菌;DNA序列如序列表序列5所示;分布特点:夏季,华北地区,清酒液。A6为Macrococcusequipercicus;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图6中A):橘黄色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图6中B):细胞球状,直径1.0~2.0μm,单独或成对存在,偶见四联,不运动;生理生化特征:革兰氏阳性到革兰氏可变;以极少鞭毛运动;不生芽孢;好氧;呼吸代谢的化能异养菌;接触酶阳性;最适30~37℃;中等嗜盐,培养基需加0.5%~20%NaCl;发现于海和含盐的土壤中;DNA序列如序列表序列6所示;分布特点:夏季,华北地区,包装车间环境空气。A7为Ralstoniainsidiosa;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图7中A):半透明白色,圆形,小菌落,边缘整齐,表面光滑,易挑取,易溶于水;细胞特征(图7中B):中杆,单独或成对存在,运动;DNA序列如序列表序列7所示;分布特点:夏季,华北地区,脱氧水。A8为阿氏肠杆菌(Enterobacterasburiae);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图8中A):白色,圆形,边缘整齐,表面光滑,水润,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图8中B):短杆,单独存在,运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列8所示;分布特点:夏季,华北地区,灌酒机管路清酒。A9为鲍氏不动杆菌(Acinetobacterbaumannii);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图9中A):圆形,乳白色,菌落略大,边缘整齐,表面光滑,有光泽,水润,粘稠,易挑取,易溶于水;细胞特征(图9中B):球型,单独存在,不运动;生理生化特征:革兰氏阴性,KOH阳性,过氧化氢酶阳性DNA序列如序列表序列9所示;分布特点:夏季,东南地区,过滤机空气沉降。A10为Acinetobacternosocomialis;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图10中A):乳白色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图10中B):球菌,单独或成对存在,不运动;生理生化特征:革兰阴性球杆菌,氧化酶阴性,动力阴性,硝酸盐试验阴性;DNA序列如序列表序列10所示;分布特点:夏季,华北地区,环境空气。A11为产吲哚金黄杆菌(Chryseobacteriumindologenes);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图11中A):黄色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图11中B):中杆,不运动,无芽孢;生理生化特征:革兰氏阴性,直杆状,端圆,通常为0.5μm×1.0~3.0μm,不运动,无滑动或泳动,严格好氧,外环境分离物可在37℃生长。在固体培养基上生长,菌落圆形(直径1~2nm),隆起,光滑且有光泽,全缘,接触酶、氧化酶、磷酸酶均阳性,不消化琼脂,有机化能营养,在低浓度蛋白胨培养基中由碳水化合物产酸不产气;DNA序列如序列表序列11所示;分布特点:夏季,东南地区,过滤机沉降。A12为Xanthomonassacchari;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图12中A):柠檬黄,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图12中B):短杆,成对存在,大小0.4~1.0μm×1.2~3.0μm,单端极生鞭毛,运动;生理生化特征:革兰氏阴性菌,KOH拉丝阳性,氧化酶反应弱或阴性,过氧化氢酶阳性,专性好氧,对营养要求不高,但生长较缓慢,不能利用明胶、淀粉等大分子物质,生长需提供谷氨酸和甲硫氨酸,不进行硝酸盐呼吸;DNA序列如序列表序列12所示;分布特点:夏季,华北地区,脱氧水罐脱氧水。A13为赫氏埃希氏菌(Escherichiahermannii);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图13中A):白色半透明,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图13中B):短杆,单独存在,不运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列13所示;分布特点:夏季,华北地区,环境空气。A14为解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种(Bacillusamyloliquefacienssubsp.Amyloliquefaciens);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图14中A):白色,菌落呈片状,中央鼓泡有光泽,边缘不齐,扁平,无光泽,粘稠,易挑取,易溶于水;细胞特征(图14中B):短杆,成对;DNA序列如序列表序列14所示;分布特点:夏季,华东,洗瓶机出口。A15为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillusamyloliquefacienssubsp.plantarum);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图15中A):白色,圆形,边缘整齐,表面粗糙,中央有年轮状褶皱并凸起;细胞特征(图15中B):中杆,呈链状,产芽孢,不运动;生理生化特征:革兰氏阳性,KOH阴性;DNA序列如序列表序列15所示;分布特点:夏季,东南地区,过滤机沉降。A16为巨胞氮单胞菌(Azomonasmacrocytogenes);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图16中A):白色偏淡黄色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图16中B):菌落外层有膜,膜部分细胞形态为球状至粗杆状,密集排列;内有液体,液体部分细胞形态为短杆,单独或成对或成堆存在,皆不运动,不形成芽孢和胞囊;生理生化特征:革兰氏染色通常为阴性,有时可变;好氧,但能在低氧压下生长;几乎所有菌株产生水溶性或荧光色素;化能异养菌;能利用糖、醇和有机酸和盐类生长;固氮,通常非共生固氮,不解酪素,但能利用氨盐和一些氨基酸作为氮源;接触酶阳性;DNA序列如序列表序列16所示;分布特点:夏季,华北地区,灌酒机备压二氧化碳。A17为抗辐射不动杆菌(Acinetobacterradioresistens);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图17中A):圆形,乳白色,边缘整齐,湿润,易挑取,较易溶于水;细胞特征(图17中B):球状菌,成对生长,不运动(易被认为是球菌),无芽孢;生理生化特征:革兰氏阴性,无芽胞及鞭毛,无动力,有荚膜。专性需氧,硝酸盐反应及氧化酶试验阴性;DNA序列如序列表序列17所示;分布特点:夏季,华北地区,麦芽。A18为Bacillussubtilissubsp.inaquosorum;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图18中A):乳白色,圆形,菌落大,外层有膜,内有粘稠液体,边缘不齐或略微不齐,表面无光泽,易挑取,不易溶于水;细胞特征(图18中B):中杆,成对或链状排列,运动,产芽孢;DNA序列如序列表序列18所示;分布特点:夏季,华北地区,环境链道环境发酵管板环境发酵罐区。A19为蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图19中A):白色,圆形,边缘不齐,表面粗糙无光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图19中B):中粗杆,成对或单独或链状,运动,产芽孢;生理生化特征:革兰氏阳性,KOH阴性;DNA序列如序列表序列19所示;分布特点:夏季,东南地区,清酒罐空气、过滤机空气、清酒沉降、清酒罐沉降。A20为Klebsiellaquasipneumoniaesubsp.quasipneumoniae;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图20中A):乳白色,圆形,边缘整齐,不易挑取,有光泽,表面湿润,粘稠水感,不易溶于水;细胞特征(图20中B):短粗杆,运动,大小0.5~0.8×1~2μm,单独、成双或短链状排列。无芽胞,无鞭毛,有较厚的荚膜,多数有菌毛;生理生化特征:革兰氏阴性杆菌,过氧化氢酶阳性,较在肠道杆菌选择性培养基上能发酵乳糖,呈现有色菌落;DNA序列如序列表序列20所示;分布特点:夏季,华东地区,包装压盖清酒。A21为路德维希肠杆菌(Enterobacterludwigii);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图21中A):白色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图21中B):短杆,单独或成对存在,运动;生理生化特征:革兰氏阴性,KOH拉丝实验阳性;DNA序列如序列表序列21所示;分布特点:夏季,华北地区,满罐发酵液。A22为木糖葡萄球菌(Staphylococcusxylosus);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图22中A):圆形,乳黄色,边缘整齐,中央凸起,表面光滑,湿润,易挑取,易溶于水,质地密实;细胞特征(图22中B):球形,不运动,单个生长,0.8-1.0μm;生理生化特征:革兰氏阳性菌,KOH拉丝实验阴性,在厌氧环境能生长。过氧化氢酶阳性,氧化酶阴性,发酵产酸于葡萄糖,产酸于木糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、甘露醇、半乳糖、山梨醇、水杨素、麦芽糖、乳糖、海藻糖和甘油,V-P阳性,7%氯化钠肉汤生长,45℃生长,明胶酶阳性,碱性磷酸酶阳性,精氨酸水解阳性。葡萄球菌凝固酶阴性,团块因子阴性,不可发酵松三糖、蔗糖、棉子糖、木糖醇、纤维二糖,硝酸盐还原阴性,不可在10%氛化钠肉汤生长,脲酶阴性,DNase阴性,酩肮消化阴性,卵磷脂酶阴性,吐温80水解阴性;DNA序列如序列表序列22所示;分布特点:夏季,华北地区,包装车间洗瓶机。A23为皮特不动杆菌(Acinetobacterpittii);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图23中A):乳白色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,粘稠,易挑取,易溶于水;细胞特征(图23中B):球杆状,成对,不运动;生理生化特征:革兰阴性球杆菌,氧化酶阴性,动力阴性,硝酸盐试验阴性;分布特点:夏季,东南地区,膜前清酒。A24为栖木槿假单胞菌(Pseudomonashibiscicola);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图24中A):白色略微发黄,半透明,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图24中B):短杆,0.5-1μm×1.5-4μm,单独或成对存在,运动;生理生化特征:革兰氏阴性,KOH拉丝实验阳性,接触酶阳性,氧化酶阳性;需氧,化能异养。明胶不能液化;硝酸盐可以还原成亚硝酸盐;甲基红、V-P阴性,不产生吲哚,不产硫化氢,不能淀粉水解;不需要生长因子;能够利用葡萄糖、乳酸盐、琥珀酸盐等碳源;DNA序列如序列表序列23所示;分布特点:夏季,东南地区,麦芽酿造车间空气沉降、洗瓶机。A25为乳微球菌(Micrococcuslactis);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图25中A):柠檬黄色,圆形,边缘整齐,表面光滑、易挑取、易溶于水;细胞特征(图25中B):球菌,直径约1.0μm,不运动;生理生化特征:革兰氏阳性,不运动,专性好氧,在10℃至40℃,超过42℃则不能生长,在pH4.5-9.5范围内可生长,最适pH为7.5,耐0%至4%的氯化钠,在麦康凯琼脂不生长,过氧化氢酶阳性,氧化酶阴性,分泌脲酶,不能分解淀粉、七叶苷和吐温20、40、60或80;不能利用乳糖、蔗糖、棉籽糖、山梨糖醇、水杨苷、d-甘露糖、海藻糖、d-半乳糖、n-乙酰-d-氨基葡萄糖、甲基β-d-喃葡萄糖或支链淀粉;DNA序列如序列表序列24所示;分布特点:夏季,华东地区,灌装机周围空气。A26为沙福芽孢杆菌(Bacillussafensis);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图26中A):乳白色,不规则,边缘整齐,中央凹陷无光泽,边缘隆起有光泽,易挑取,较易溶于水;细胞特征(图26中B):短杆,0.5-0.7μm×1.0-1.2μm单独或成对存在,运动;生理生化特征:革兰氏阳性,KOH拉丝阴性,过氧化氢酶阳性,氧化酶阳性,耐pH5.6的0%-10%的氯化钠,生长温度10-50℃,最适生长温度30-37℃,不能生长于4℃或50℃;DNA序列如序列表序列25所示;分布特点:夏季,华北地区,二次残酒、脱氧水罐脱氧水、环境清酒管板。A27为嗜碱微小杆菌(Exiguobacteriumalkaliphilum);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图27中A):乳白色,边缘整齐,表面光滑,粘稠,易挑取,易溶于水;细胞特征(图27中B):革兰氏阳性菌,兼性厌氧,幼龄培养物为短杆菌,老培养物为球状,1.1~1.2μm×1.4~3.2μm,不生孢,不抗酸,以周生鞭毛运动;生理生化特征:嗜碱,能在pH6.5~11.5生长;化能异养菌,发酵代谢;从葡萄糖、蔗糖、半乳糖和一些其他糖产酸;嗜碱,主要产物是乳酸、乙酸和甲酸;接触酶阳性,氧化酶阴性;还原硝酸盐;水解明胶、淀粉和酪素;最适生长温度37℃;DNA序列如序列表序列26所示;分布特点:夏季,华东地区,灌装机周围空气。A28为嗜气芽孢杆菌(Bacillusaerophilus);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图28中A):乳黄色,圆形,中央褶皱,菌落小,干燥,易挑取,较难溶于水;细胞特征(图28中B):中杆,运动,有鞭毛;生理生化特征:革兰氏阳性菌,KOH阴性,接触酶阳性,最适生长温度为30℃;DNA序列如序列表序列27所示;分布特点:夏季,华北地区,发酵环境空气。A29为Burkholderiaarboris;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图29中A):黄绿色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图29中B):中杆,单独存在,运动,无芽孢;生理生化特征:革兰氏阴性,KOH拉丝实验阳性,氧化酶阳性,过氧化氢酶阳性,硝酸盐还原阳性。可在30℃与37℃温度下生长,少数可在42℃下生长。发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖和核糖醇产酸。DNA序列如序列表序列28所示;分布特点:夏季,东南地区,膜后清酒。A30为炭疽杆菌(Bacillusanthracis);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图30中A):白色,圆形,边缘略微不齐,中央微凸起,表面无光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图30中B):粗杆,不运动,产芽孢,链状排列;DNA序列如序列表序列29所示;分布特点:夏季、冬季,华北地区,粗滤出口最后冲洗水、清酒罐清酒、洗瓶机、未杀菌酒脱氧水罐脱氧水、制酒空气。A31为Bacillustequilensis;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图31中A):白色,呈片状,扁平,中央白色微凸起且无光泽,边缘不齐且较光泽,而中心与边缘之间的部分有光泽,表面光滑,易挑取,易溶于水,产孢区域集中,无膨胀的芽孢囊;细胞特征(图31中B):中杆,0.9μm×4.0μm,单独或成对,产芽孢,不运动;生理生化特征:革兰氏阳性,KOH拉丝阴性,过氧化氢酶阳性,氧化酶阳性,可于pH5.5-8.0、25-50℃范围内生长,发酵甘油、木糖、葡萄糖等产酸;DNA序列如序列表序列30所示;分布特点:夏季,华北地区,空瓶、酵培风。A32为土壤短芽孢杆菌(Brevibacillusagri);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图32中A):圆形,乳白色,小菌落,边缘整齐,有光泽,湿润,易溶于水,易挑取;细胞特征(图32中B):短杆,运动,成对生长,芽孢中生,不膨大,孢子椭圆形;生理生化特征:kOH阴性,革兰氏阳性,V-P阴性;不水解淀粉但液化明胶;能在营养肉汤中生长;葡萄糖产酸不产气;DNA序列如序列表序列31所示;分布特点:夏季,华北地区,二包管路清酒。A33为Exiguobacteriumindicum;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图33中A):半透明,淡黄色,扁平,不规则,边缘不齐,表面光滑,易挑取,易溶于水;细胞特征(图33中B):杆状,呈链状或节状,不运动,幼龄培养物为杆菌,老培养物为球状;生理生化特征:革兰氏阳性,KOH拉丝实验阴性,过氧化氢酶阳性,氧化酶阳性,生长在5-30℃和pH值6-10;最适温度是25℃和最适pH值为7.0;耐5.8%的生理盐水,也可在无盐的环境生长;DNA序列如序列表序列32所示;分布特点:夏季、冬季,东南地区,过滤机出口清酒、清酒罐周围环境空气、洗瓶机沉降、洗瓶水。A34为Deinococcusficus;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图34中A):圆形,微红色,表面光滑,边缘整齐,易挑取,不粘稠,易溶于水;细胞特征(图34中B):中杆,单独或成对,不运动,无芽孢;生理生化特征:革兰氏阳性菌,KOH实验阴性,氧化酶阳性;耐紫外线辐照(254nm,8-10厘米10分钟),可利用以下化合物作为唯一碳源:糊精、吐温40、吐温80、果糖、麦芽糖、麦芽三糖、山梨糖醇、水苏糖、蔗糖、醋酸、乳酸、丙酮酸甲酯,琥珀酸单甲酯、丙酸、丙酮酸、琥珀酸、丙氨酸等;DNA序列如序列表序列33所示;分布特点:夏季,华北地区,包装环境空气。A35为Bacillussiamensis;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图35中A):乳白色,边缘不齐并呈发散状,圆形,中间白色比边缘明亮,易挑取,不干燥,易溶于水;细胞特征(图35中B):中长杆,运动,单独、成对或成串生长,周生鞭毛,0.3-0.6μm×1.5-3.5μm,椭圆形孢子于菌体中间或末端膨胀;生理生化特征:革兰氏阳性,KOH阴性,兼性厌氧,周生鞭毛,可生长于MacConkey琼脂但不能生长于胆盐介质,过氧化氢酶阳性,氧化酶阴性,水解酪蛋白、七叶苷、明胶、DNA和淀粉;DNA序列如序列表序列34所示;分布特点:夏季,华东地区,包装车间压缩CO2。A36为辛氏不动杆菌(Acinetobacterschindleri);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图36中A):白色半透明,圆形,边缘略不齐,表面光滑,易挑取,易溶于水;细胞特征(图36中B):球状,单独或成对存在,不运动;生理生化特征:革兰阴性球杆菌,氧化酶阴性,动力阴性,硝酸盐试验阴性革兰阴性球杆菌,氧化酶阴性,动力阴性,硝酸盐试验阴性,发酵葡萄糖不产酸;DNA序列如序列表序列35所示;分布特点:夏季,华北地区,发酵管板。A37为杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacteryoungae);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图37中A):圆形,乳白色,菌体较小,边缘整齐,水润,有光泽,易溶于水,易挑取;细胞特征(图37中B):中杆,单个和成对,直径约1.0,长2.0~6.0μm,运动,有周生鞭毛;生理生化特征:革兰氏阴性菌,KOH实验阳性,氧化酶阴性,接触酶阳性,能利用柠檬酸盐作为惟一碳源。不产生苯丙氨酸脱氨酶、明胶酶、脂肪酶和DNA酶。发酵葡萄糖产酸产气,甲基红试验阳性,VP试验阳性;DNA序列如序列表序列36所示;分布特点:夏季,华北地区,清酒罐环境空气。A38为Deinococcusradioduran;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图38中A):橙红色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图38中B):细胞球状,直径0.5~3.5μm,成对或四联,比其他球菌为大;不运动,不产芽孢;生理生化特征:革兰氏阳性,但细胞壁组成较复杂,有几层的结构,具呼吸代谢的化能异养菌,对糖类趋不活跃倾向;接触酶阳性;高度抗γ-射线,含有大量的棕榈酸盐。最适温度30~37℃;分布特点:夏季,华北地区,环境精滤。A39为Bacillusinfantis;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图39中A):粉红色,不规则,扁平,表面光滑,易挑取,易溶于水;细胞特征(图39中B):中短杆,单独存在,不运动,产芽孢;生理生化特征:革兰氏阳性,KOH拉丝试验阴性,过氧化氢酶阳性,氧化酶阴性,可以利用半乳糖、葡萄糖、果糖、甘露糖醇、山梨糖醇、七叶树素,水杨苷,麦芽糖,蜜二糖、蔗糖、海藻糖、棉子糖、淀粉、糖原、葡萄糖酸,纤维二糖,乳糖和菊粉等,不利于利用甘油、核糖、甘露糖、肌醇、木糖醇、龙胆二糖等;DNA序列如序列表序列37所示;分布特点:夏季,华北地区,罐精滤。A40为越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderiavietnamiensis);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图40中A):乳白色,圆形,菌落生长1d时较小,表面有细小褶皱,但有光泽,菌落生长2d以上时菌落饱满,表面光滑,褶皱消失,有光泽;细胞特征(图40中B):短杆,单独或成对存在,运动,无芽孢;生理生化特征:革兰氏阴性,KOH拉丝实验阳性,化能异养,可还原硝酸盐成亚硝酸盐;氧化酶阳性,精氨酸双水解酶阴性;可液化明胶,不产生吲哚,不产生H2S;从葡萄糖产酸;能够利用柠檬酸盐、己二酸盐、D-丙氨酸、L-缬氨酸、亮氨酸和邻氨基苯甲酸,不能利用鼠李糖、麦芽糖、酒石酸盐和赤藓糖醇;DNA序列如序列表序列38所示;分布特点:夏季,华北地区,残酒。A41为Bacillusaryabhattai;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图41中A):白色,圆形,中央有圆盘状轻微凸起,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图41中B):长粗杆,成对或链状排列,不运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列39所示;分布特点:冬季,华北地区,制酒车间空气、包装空气。A42为Enterobactermori;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图42中A):白色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图42中B):短杆,单独或成对存在,运动;DNA序列如序列表序列40所示;分布特点:冬季,东南地区,粉碎前麦芽。A43为Cronobacterdublinensissubsp.Lausannensis;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图43中A):乳白色,圆形,边缘整齐,表面光滑,菌落略微隆起,内部中央有不明显圆环,无褶皱,易挑取,易溶于水;细胞特征(图43中B):短杆,运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列41所示;分布特点:冬季,华北地区、东南地区,清酒罐周围环境空气、二次残酒、粉碎前麦芽、膜粗(精)清酒。A44为Pantoeacalida;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图44中A):乳白色,圆形,边缘整齐,菌落边缘透明,表面光滑,水润,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图44中B):短杆,单独或成对存在,运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列42所示;分布特点:冬季,东南地区,杀菌机周围环境空气。A45为粪短波单胞菌(Brevundimonasfaecalis);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图45中A):粉色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图45中B):球至短杆,单独、成对或链状排列,不运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列43所示;分布特点:冬季,华北地区,发酵清酒罐空间。A46为腐生葡萄球菌(Staphylococcussaprophyticussubsp.Saprophyticus);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图46中A):乳白色,圆形,小菌落,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,不易溶于水;细胞特征(图46中B):球菌,呈葡萄串状,不运动;DNA序列如序列表序列44所示;分布特点:冬季,华北地区,无菌风。A47为华癸库特氏菌(Kurthiahuakuii);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图47中A):白色,片状,扁平,边缘不齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图47中B):白色,片状,扁平,边缘不齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;DNA序列如序列表序列45所示;分布特点:冬季,东南地区,粉碎前麦芽。A48为吉氏库特氏菌(Kurthiagibsonii);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图48中A):柠檬黄,不规则,扁平,边缘不齐,表面较光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图48中B):短杆,单独存在,运动(旋转),无芽孢;DNA序列如序列表序列46所示;分布特点:冬季,华北地区,发酵环境空气。A49为食甲醇芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图49中A):白色,片状,不规则,边缘不齐,表面哑光,无光泽,易挑取,不易溶于水;细胞特征(图49中B):中长杆,长链状,不运动,有芽孢;DNA序列如序列表序列47所示;分布特点:冬季,华东地区,酿造水。A50为Pseudomonasgraminis;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图50中A):乳白色,圆形,小菌落,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图50中B):中粗杆,单独或成对存在,运动,有芽孢;DNA序列如序列表序列48所示;分布特点:冬季,华北地区,发酵环境空气。A51为简单芽孢杆菌(Bacillussimplex);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图51中A):白色,圆形,扁平,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图51中B):长杆,成对或链状排列,不运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列49所示;分布特点:冬季,华北地区,制酒车间空气。A52为Lysinibacillusxylanilyticus;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图52中A):白色,扁平,不规则,边缘不齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图52中B):中长杆,不运动,单端芽孢并膨大,单独存在,少见成对存在;DNA序列如序列表序列50所示;分布特点:冬季,东南地区,灌酒机周围环境空气。A53为Chryseobacteriumhispalense;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图53中A):橘黄色,圆形,边缘整齐,表面光滑,水润,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图53中B):短杆,不运动,单独存在;DNA序列如序列表序列51所示;分布特点:冬季,华东地区,清酒管路。A54为Kocuriamarina;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图54中A):柠檬黄,圆形,菌落小,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图54中B):球菌,单独或成对存在,不运动,无芽孢;分布特点:冬季,东南地区,洗瓶机、灌酒机周围环境空气。A55为Pseudomonaskunmingensis;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图55中A):乳黄色,不规则,边缘不齐向周围发散生长,表面粗糙,有光泽,易挑取易溶于水;细胞特征(图55中B):短杆,单独或成对存在,运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列52所示;分布特点:冬季,华北地区,灌酒机备压二氧化碳。A56为Paenibacillushumicus;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图56中A):白色,圆形,边缘整齐,表面光滑,水润,有光泽,菌落内部呈浑浊样,易挑取,易溶于水;细胞特征(图56中B):短杆,运动,单独,有芽孢;DNA序列如序列表序列53所示;分布特点:冬季,华东地区,成品酒。A57为美棒杆菌(Corynebacteriumcallunae);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图57中A):柠檬黄,小菌落,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图57中B):球至短杆或弯曲杆状,单独、成对或成串排列,不运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列54所示;分布特点:冬季,华北地区,制酒车间空气。A58为奈氏西地西菌(Cedeceaneteri);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图58中A):白色,不规则,边缘不齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图58中B):短至中杆,单独或成对排列,运动(游动),无芽孢;DNA序列如序列表序列55所示;分布特点:冬季,华北地区,杀菌次酒。A59为耐寒短杆菌(Brevibacteriumfrigoritolerans);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图59中A):乳白色,圆形,边缘整齐,表面有圆环状凸起,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图59中B):中长杆,链状排练,不运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列56所示;分布特点:冬季,华北地区,制酒车间空气。A60为柠檬色短小杆菌(Curtobacteriumcitreum);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图60中A):乳白偏淡黄色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图60中B):短杆,单独或成对存在,运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列57所示;分布特点:冬季,东南地区,清酒罐周围环境空气。A61为Bacilluspanaciterrae;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图61中A):白色,菌落呈片状,不规则,边缘不齐,表面粗糙,中央凸起,有褶皱,易挑取,易溶于水;细胞特征(图61中B):长杆,链状排列,不运动,产芽孢;DNA序列如序列表序列58所示;分布特点:冬季,华东地区,洗瓶机周围环境空气。A62:Chryseobacteriumhominis;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图62中A):白色,圆形,小菌落,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,不易溶于水;细胞特征(图62中B):中杆,单独或成对存在,不运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列59所示;分布特点:冬季,华北地区,包装空气。A63:少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaspaucimobilis);菌种类别:好氧细菌;培养条件(图63中A):平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图63中B):柠檬黄,圆形,菌落小,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征:短杆,单独或成对存在,运动;DNA序列如序列表序列60所示;分布特点:冬季,华东地区,成品酒。A64为Erwiniatasmaniensis;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图64中A):黄色半透明,生长初期为淡黄色,扁平,中央有年轮状凹陷,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图64中B):短杆,单独或成对存在,不运动;DNA序列如序列表序列61所示;分布特点:冬季,东南地区,粉碎前麦芽。A65为铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图65中A):乳黄色,半透明,片状,不规则,边缘不齐,表面光滑,有光泽,在反射光照射下菌落周围呈蓝色,产色素,培养基颜色变深,易挑取,易溶于水;细胞特征(图65中B):短杆,单独或成对存在,运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列62所示;分布特点:冬季,东南地区,酿造水。A66为伪血鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaspseudosanguinis);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图66中A):黄色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图66中B):短至中杆,单独存在,运动DNA序列如序列表序列63所示;分布特点:冬季,东南地区,二次残酒。A67为烟酸芽孢杆菌(Bacillusniacini);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图67中A):白色,不规则,边缘整齐,表面光滑,无光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图67中B):中长杆,单独或成对存在,不运动;DNA序列如序列表序列64所示;分布特点:冬季,华北地区,制酒车间空气。A68为乙酰微小杆菌(Exiguobacteriumacetylicum);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图68中A):半透明,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图68中B):短粗至长粗杆或弯曲状,成对或链状排列,不运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列65所示;分布特点:冬季,华北地区,包装空气。A69为Deinococcuscaeni;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图69中A):橘黄色,圆形,较扁平,边缘整齐,表面有轻微褶皱,较有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图69中B):中粗杆,单独、成对或链状排列,不运动;DNA序列如序列表序列66所示;分布特点:冬季,华北地区,包装车间环境空气。A70为Deinococcusgrandis;菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图70中A):橘黄色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图70中B):短粗杆,单独或成对存在,不运动;DNA序列如序列表序列67所示;分布特点:冬季,东南地区,过滤机出口清酒。A71为植物短小杆菌(Curtobacteriumplantarum);菌种类别:好氧细菌;培养条件:平板计数琼脂培养基,37℃培养24小时;菌落特征(图71中A):淡黄色,半透明,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图71中B):短杆,单独或成对存在,运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列68所示;分布特点:冬季,华东地区,成品清酒、粉碎前麦芽、灌酒机周围环境空气。B1为肠膜明串珠菌右旋葡聚糖亚种(Leuconostocmesenteroidessubsp.dextranicun);菌种类别:厌氧细菌;培养条件:NBBA培养基,28℃培养5-7天;菌落特征(图72中A):圆形,乳白色,表面光滑,边缘整齐,易挑取,易溶于水;细胞特征(图72中B):短杆,成对存在,细胞大小为0.5~0.7×0.7~1.2mm,不运动,无芽孢;生理生化特征:革兰氏阳性菌,KOH阴性,接触酶阴性,发酵葡萄糖、果糖、乳糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露糖、海藻糖,不水解精氨酸;生长温度范围2℃-53℃,最适生长温度3O℃-40℃;耐酸性强,生长最适pH为5.5~6.2,在pH≤5的环境中可以生长,而在中性或初始碱性条件下生长速率降低;DNA序列如序列表序列69所示;分布特点:夏季,华北地区,包装洗瓶机环境空气。B2为短乳杆菌(lactobacillusbrevis);菌种类别:厌氧细菌;培养条件:NBBA培养基,28℃培养5-7天;菌落特征(图73中A):圆形,乳白色,边缘不齐,表面粗糙,湿润,易挑取,易溶于水;细胞特征(图73中B):中长杆,不运动,单个生长;生理生化特征:革兰氏阳性,KOH阴性,过氧化氢酶阴性,能利用果糖、阿拉伯糖、蜜二糖、木糖产酸;DNA序列如序列表序列70所示;分布特点:夏季、冬季,华北地区,空气、稀释后清酒、管路清酒、粗滤机出口清酒、发酵环境空气、C0代酵母高泡期、包装链道环境空气、稀释后入清酒罐清酒、清酒罐清酒。B3为格氏乳球菌(Lactococcusgarvieae);菌种类别:厌氧细菌;培养条件:NBBA培养基,28℃培养5-7天;菌落特征(图74中A):乳白色,圆形,表面光滑,易挑取、易溶于水,菌体较小;细胞特征(图74中B):短杆、不运动;生理生化特征:无芽孢,G+球菌,菌落表面光滑有光泽,低凸起,边缘完整,粘稠淡黄色不透明圆形菌落;菌体为椭球,成对、成链排列;能从葡萄糖产酸不产气,不能利用淀粉,能使牛奶酸化;耐4%NaCl;DNA序列如序列表序列71所示;分布特点:夏季冬季灌装机备压CO2。B4为Lactobacillusparacaseisubsp.tolerans;菌种类别:厌氧细菌;培养条件:NBBA培养基,28℃培养5-7天;菌落特征(75中A):圆形,白色,表面光滑,边缘整齐,易挑取,易溶于水;细胞特征(75中B):中长杆,弯曲,单独生长,不运动;生理生化特征:可在10℃和37℃生长,40℃则不能生长,72℃、40s仍可存活,发酵产乳酸,发酵葡萄糖、果糖、乳糖、甘露糖、乙酰氨基葡糖等产酸。脲酶阴性,不水解七叶苷;DNA序列如序列表序列72所示;分布特点:夏季,华北地区,管路清酒。B5为食窦魏斯氏菌(Weissellacibaria);菌种类别:厌氧细菌;培养条件:MRS琼脂培养基,28℃培养5天;菌落特征(图76中A):白色,圆形,菌落小,表面光滑,边缘整齐;细胞特征(图76中B):短杆,不运动,单独或成对存在;生理生化特征:革兰氏阳性菌,不形成芽孢,不运动,不利用鼠李糖,能利用大多数碳源,利用精氨酸,分解葡萄糖产生CO2,耐酸,最适pH5.5-6.2;DNA序列如序列表序列73所示;分布特点:夏季,东南地区,清酒罐空气。B6为Pediococcusclaussenii;菌种类别:兼性厌氧;培养条件:MRS琼脂培养基,28℃培养5d;菌落特征(图77中A):乳白色、圆形、边缘整齐、易溶于水、易挑取;细胞特征(图77中B):球形、不运动,直径1.2~2.0μm;DNA序列如序列表序列74所示;分布特点:夏季,华东地区,满罐清酒。B7为Pediococcuslolii;菌种类别:厌氧细菌培养条件:NBBA培养基,28℃培养5-7天菌落特征(图78中A):乳白色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水细胞特征(图78中B):球菌,单独、成对或四联排列,不运动DNA序列如序列表序列75所示;分布特点:夏季,东南地区,灌酒机水。B8为乳明串珠菌(Leuconostocholzapfelii);菌种类别:厌氧细菌;培养条件:NBBA培养基,28℃培养5-7天;菌落特征(图79中A):乳白色,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图79中B):球菌,呈链状排列,不运动;生理生化特征:革兰氏阳性,KOH拉丝实验阴性,接触酶阴性,发酵葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、半乳糖;不发酵纤维二糖、木糖;不水解精氨酸,兼性厌氧;DNA序列如序列表序列76所示;分布特点:夏季,华北地区,粉碎前麦芽。B9为Lactococcuslactissubsp.tructae;菌种类别:厌氧细菌;培养条件:NBBA培养基,28℃培养5-7天;菌落特征(图80中A):白色,半透明,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图80中B):球菌,0.5-1.2μm×0.5-1.5μm呈链状排列,不运动;生理生化特征:革兰氏阳性,兼性厌氧,化能异养,发酵代谢,以一些碳水化合物发酵产酸,以L(+)-乳酸为主,不产气。营养要求复杂,接触酶阴性,氧化酶阴性;最适温度30℃,耐4%的氯化钠,发酵麦芽糖、乳糖、核糖、蔗糖、甘露醇等产酸;DNA序列如序列表序列77所示;分布特点:夏季,华北地区,环境粗滤。B10为乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcuslactissubsp.cremoris);菌种类别:兼性厌氧;培养条件:NBBA培养基,28℃培养5-7天;菌落特征(图81中A):圆形,小菌落,白色,表面光滑,边缘整齐,易挑取,不粘稠,易溶于水;细胞特征(图81中B):球菌,成对或成串,0.5~1.2μm×0.5~1.5μm,不运动,不生芽孢,无荚膜;生理生化特征:革兰氏阳性菌,KOH实验阴性,接触酶阴性,氧化酶阴性,化能异养,发酵代谢,以一些碳水化合物发酵产酸,以L(+)-乳酸为主,不产气。营养要求复杂,。最适温度30℃,能在10℃生长,不能在45℃条件下生长,不耐4%的NaCl,能利用葡萄糖,半乳糖,麦芽糖和甘露醇,不能利用菊糖,生产胞外多糖。分布特点:夏季,华北地区,麦汁充氧无菌风。B11为戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus);菌种类别:厌氧细菌;培养条件:NBBA培养基,28℃培养5-7天;菌落特征(图82中A):圆形,白色,边缘整齐,表面光滑,湿润,易挑取,易溶于水;细胞特征(图82中B):球菌,四联或呈葡萄串状;生理生化特征:革兰氏阳性,KOH阴性最适生长温度35℃,最高生长温度42-45℃;DNA序列如序列表序列78所示;分布特点:夏季,华北地区,粉碎前麦芽。B12为植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillusplantarumsubsp.plantarum)菌种类别:厌氧细菌;培养条件:NBBA培养基,28℃培养5-7天;菌落特征(图83中A):圆形,乳白色,菌落饱满,表面光滑,边缘整齐,易挑取,易溶于水;细胞特征(图83中B):直或弯的杆状,单个、有时成对或成链状,不运动;生理生化特征:革兰氏阳性菌,KOH实验阴性,过氧化氢酶阴性,最适生长温度为30~35,最适pH6.5左右,属于同型发酵乳酸菌;DNA序列如序列表序列79所示;分布特点:夏季,华北地区,发酵环境空气、粗滤机出口最后冲洗水、C0代酵母高泡期、发酵脱氧水。B13为假肠膜明串珠菌(Leuconostocpseudomesenteroides);菌种类别:厌氧细菌;培养条件:NBBA培养基,28℃培养5-7天;菌落特征(图84中A):白色,微黄,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图84中B):短杆,单独或成对存在,不运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列80所示;分布特点:冬季,华北地区,精滤出口酒液。B14为拜氏梭菌(Clostridiumbeijerinckii);菌种类别:厌氧细菌;培养条件:NBBA培养基,28℃培养5-7天;菌落特征(图85中A):白色,不规则,边缘不齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图85中B):长杆,少数长粗杆,单独或成对存在,运动(游动),无芽孢;DNA序列如序列表序列81所示;分布特点:冬季,华北地区,精滤出口酒液。B15为解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultellaornithinolytica);菌种类别:厌氧细菌;培养条件:NBBA培养基,28℃培养5-7天;菌落特征(图86中A):白色,半透明,圆形,边缘整齐,表面光滑,有光泽,易挑取,易溶于水;细胞特征(图86中B):中粗杆,单独存在,不运动,无芽孢;DNA序列如序列表序列82所示;分布特点:冬季,华北地区,包装清酒管路清酒。C1为Aureobasidium;菌种类别:真菌;培养条件:马铃薯葡萄糖琼脂培养基,27℃培养7天;菌落特征(图87中A):白色,不规则或圆形,边缘整齐,表面光滑,易挑取,易溶于水;细胞特征(图87中B):细胞呈椭圆形两端略尖;DNA序列如序列表序列83所示;分布特点:冬季,东南地区,发酵车间环境空气。C2为Rhodotorulamucilaginosa;菌种类别:真菌;培养条件:马铃薯葡萄糖琼脂培养基,27℃培养7天;菌落特征(图88中A):7d,13mm,乳白色,圆形,边缘整齐,水润,表面光滑,有光泽,质地膏状,易挑取,不易溶于水(酵母);细胞特征(图88中B):圆形菌体,单端芽殖;DNA序列如序列表序列84所示;分布特点:冬季,沈阳,环境清酒管板。C3为Cryptococcusrajasthanensis;菌种类别:真菌;培养条件:马铃薯葡萄糖琼脂培养基,27℃培养7天;菌落特征(图89中A):7d,10mm,红色,不规则,边缘不齐,表面有褶皱,无光泽;细胞特征(图89中B):酵母,菌体为椭圆形至圆形,无假丝DNA序列如序列表序列85所示;分布特点:冬季,华北地区,瓶盖。微生物的发生概率为冬夏两季华北、华东、东南和西北地区(图90)生产过程中各阶段主要污染菌的占比。其中生产过程中的各阶段为已发生污染的生产工序,并非是全部工序。华北地区包括北京市、内蒙古自治区、河北省、山西省、山东省、辽宁省、黑龙江省和吉林省;华东地区包括福建省、浙江省、湖南省、湖北省、江西省、河南省、安徽省、江苏省和上海市;东南地区包括广西壮族自治区、广东省、云南省、贵州省、四川省和重庆市;西北地区包括新疆维吾尔自治区、西藏自治区、宁夏回族自治区、青海省、甘肃省和陕西省。微生物的发生概率具体包括:华北地区夏季好氧菌在各生产工序发生概率:盖箱或盖仓瓶盖:枯草芽孢杆菌11%,成团泛菌55%,土壤芽孢杆菌13%;稀释用脱氧水罐:不动杆菌25%;稀释用脱氧机出口脱氧水:地衣芽孢杆菌40%,短小芽孢杆菌17.5%,植生拉乌尔菌17.3%;精滤机出口最后冲洗水:解淀粉芽孢杆菌50%,凝结芽孢杆菌45%;粗滤机出口清酒液:枯草芽孢杆菌38%;贮酒期发酵液:解淀粉芽孢杆菌20%,巴氏醋酸杆菌15%;高泡期发酵液:解淀粉芽孢杆菌36%;满罐发酵液:解淀粉芽孢杆菌35%,枯草芽孢杆菌19%;软化水(酿造用水):凝结芽孢杆菌30%,嗜热链球菌7%。华北地区夏季厌氧菌在各生产工序发生概率:压盖后清酒:运动发酵单胞菌45%;清酒管路:林德奈氏乳杆菌23%,短乳杆菌20%,布氏乳杆菌10%;二次残酒:运动发酵单胞菌28%,短乳杆菌23%;稀释后入清酒罐清酒液:林德奈氏乳杆菌46%,成团泛菌45%,布氏乳杆菌15%;贮酒期发酵液:运动发酵单胞菌6%,林德奈氏乳杆菌10%;满罐发酵液:运动发酵单胞菌8%,果胶杆菌23%;软化水:明串珠菌10%。华北冬季好氧菌在各生产工序发生概率:膜后清酒:植生拉乌尔菌66%;激沫水:凝结芽孢杆菌9%;二次残酒:凝结芽孢杆菌83%;稀释用脱氧机出口脱氧水:凝结芽孢杆菌7%;精滤机出口最后冲洗水:凝结芽孢杆菌33%;粗滤机出口最后冲洗水:不动杆菌20%;过滤机出口最后冲洗水:凝结芽孢杆菌33%;CIP热水罐热水:凝结芽孢杆菌1%,解淀粉芽孢杆菌11%,短小芽孢杆菌1%;软化水(酿造用水):纹膜醋酸杆菌6%。华北地区冬季厌氧菌在各生产工序发生概率:膜后清酒:林德奈氏乳杆菌26%;灌酒机备压二氧化碳、压缩空气:果胶杆菌13%;二次残酒:林德奈氏乳杆菌55%;满罐发酵液:短乳杆菌14%;Co代酵母扩培液:果胶杆菌20%。华东地区夏季好氧菌在各生产工序发生概率:压盖后清酒:成团泛菌20%;清酒管路:成团泛菌54%,解淀粉芽孢杆菌32%,巴氏醋酸杆菌24%;二次残酒:嗜热链球菌24%;稀释后入清酒罐清酒液:植生拉乌尔菌36%;满罐发酵液:成团泛菌10%,巴氏醋酸杆菌6%,凝结芽孢杆菌6%;软化水:植生拉乌尔菌32%。华东地区夏季厌氧菌在各生产工序发生概率:灌酒机备压二氧化碳、压缩空气:运动发酵单胞菌36.25%;二次残酒:戊糖片球菌12%,丘状乳杆菌10%;稀释后入清酒罐清酒液:运动发酵单胞菌57%,短乳杆菌26%;过滤机出口清酒液:短乳杆菌4%,成团泛菌17%;贮酒期发酵液:运动发酵单胞菌44%,短乳杆菌19%,布氏乳杆菌5%;高泡期发酵液:运动发酵单胞菌5%,有害片球菌25%,干酪乳杆菌9%;满罐发酵液:短乳杆菌30%。华东地区冬季好氧菌在各生产工序发生概率:高泡期发酵液:植生拉乌尔菌76%,短小芽孢杆菌2%;满罐发酵液:巴氏醋酸杆菌88%,环状芽孢杆菌6%;CIP热水罐热水:环状芽孢杆菌34%;无菌水罐:枯草芽孢杆菌25%。华东地区冬季厌氧菌在各生产工序发生概率:清酒管路:短乳杆菌5%,干酪乳杆菌18%;二次残酒:林德奈氏乳杆菌23%,布氏乳杆菌35%;满罐发酵液:干酪乳杆菌59%,林德奈氏乳杆菌19%;无菌水罐:短乳杆菌83%。东南地区夏季好氧菌在各生产工序发生概率:膜前清酒:不动杆菌36%;盖箱或盖仓瓶盖:短小芽孢杆菌13%,巴氏醋酸杆菌13%,假单胞菌6%;激沫水:地衣芽孢杆菌26%;二次残酒:地衣芽孢杆菌7%,嗜热链球菌36%,短小芽孢杆菌16%;稀释后入清酒罐清酒液:地衣芽孢杆菌20%,枯草芽孢杆菌23%,产吲哚金黄杆菌6%;软化水:凝结芽孢杆菌70%,不动杆菌13%,产吲哚金黄杆菌10%。东南地区夏季厌氧菌在各生产工序发生概率:二次残酒:短乳杆菌69%,魏斯氏菌3%,林德奈氏乳杆菌9%;稀释后入清酒罐清酒液:短乳杆菌59%;贮酒期发酵液:运动发酵单胞菌13%;高泡期发酵液:干酪乳杆菌10%。东南地区冬季好氧菌在各生产工序发生概率:成品酒:凝结芽孢杆菌16%,植生拉乌尔菌8%;激沫水:纹膜醋酸杆菌72%;二次残酒:解淀粉芽孢杆菌80%,皮基诺伊芽孢杆菌5%;无菌水罐:枯草芽孢杆菌24%。东南地区冬季厌氧菌在各生产工序发生概率:成品酒:短乳杆菌19%,植物乳杆菌19%;压盖后清酒:短乳杆菌25%,布氏乳杆菌25%;二次残酒:巨球菌56%,有害片球菌38%;稀释后入清酒罐清酒液:短乳杆菌63%,干酪乳杆菌13%,成团泛菌13%;高泡期发酵液:运动发酵单胞菌38%。西北地区冬夏季好氧菌在各生产工序发生概率:洗瓶机出口空瓶:地衣芽孢杆菌67%,迟钝爱德华氏菌8%,蜡样芽孢杆菌7%;稀释后入清酒罐清酒液:凝结芽孢杆菌25%,嗜热链球菌45%;稀释用脱氧机出口脱氧水:凝结芽孢杆菌5%,植生拉乌尔菌40%;精滤机出口清酒液:地衣芽孢杆菌72%;CIP热水罐热水:凝结芽孢杆菌40%;软化水:地衣芽孢杆菌34%。西北地区冬夏季厌氧菌在各生产工序发生概率:洗瓶机出口空瓶:成团泛菌76%;稀释后入清酒罐清酒液:林德奈氏乳杆菌32%;精滤机出口清酒液:林德奈氏乳杆菌49%;稀释后入清酒罐清酒液:林德奈氏乳杆菌32%;精滤机出口清酒液:林德奈氏乳杆菌49%。实施例2、啤酒生产过程中污染微生物的鉴定采集燕京啤酒赤峰公司包装车间洗瓶机周围环境空气进行微生物培养,获得微生物培养物。将微生物培养物进行分离纯化,得到微生物的纯培养物,取一种微生物的纯培养物按照如下方法进行鉴定。1、微生物纯培养物的形态特征观察和生理生化特征鉴定将微生物纯培养物在平板计数琼脂培养基上继续培养,观察并记录微生物纯培养物的形态特征,同时对微生物纯培养物进行生理生化特征鉴定。结果表明:微生物纯培养物的菌落特征(图1)为圆形,乳白色,表面光滑,边缘整齐,易挑取,易溶于水。细胞呈短杆状,大多成对存在,细胞大小为0.5~0.7×0.7~1.2mm,不运动,无芽孢。革兰氏阳性菌,KOH酶阴性,接触酶阴性,发酵葡萄糖、果糖、乳糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露糖、海藻糖,不水解精氨酸;生长温度范围2℃~53℃,最适生长温度3O℃~40℃;耐酸性强,生长最适pH为5.5~6.2,在pH≤5的环境中可以生长,而在中性或初始碱性条件下生长速率降低。将上述结果与实施例1中系统中的模块所承载的生物信息进行比对,初步判断其为Lactobacillusparacaseisubsp.tolerans。2、微生物纯培养物的分子生物学鉴定提取分离纯化的微生物纯培养物的基因组DNA。以微生物纯培养物的基因组DNA为模板,利用通用引物27F和1492R进行PCR扩增,得到PCR扩增产物。通用引物27F和1492R的序列如下:27F:5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’;1492R:5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’。其中,50μLPCR反应体系由5μL10×buffer、1uLdNTPs(10μmol\/ml)、1μL上游引物27F(10μmol\/100uL)、1μL下游引物1492R(10μmol\/100uL)、3μLDNA模板、0.5μLTaq聚合酶和38.5μLddH2O组成。PCR反应条件为:94℃预变性3min;94℃1min,55℃1min,72℃2min,30个循环;72℃延伸10min。将PCR产物进行测序,双向测通,并将测序结果拼接,得到微生物纯培养物的DNA信息。将获得的测序结果与实施例1中系统中的模块所承载的生物信息进行比对。结果表明:微生物纯培养物的基因组DNA序列与实施例1中系统的Lactobacillusparacaseisubsp.tolerans的同一性为100%。根据序列比对结果表明,从燕京啤酒赤峰公司包装车间洗瓶机周围环境空气中分离获得的微生物纯培养物为Lactobacillusparacaseisubsp.tolerans,其易污染清酒管路及膜过滤后清酒,易检出于华北赤峰地区。...
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