一种促进草莓生长的复合乳酸菌菌剂及其应用的制作方法

本发明涉及一种微生物菌剂，尤其涉及一种能显著促进草莓产量和品质提升的复合乳酸菌菌剂，属于微生物技术领域。

背景技术：

随着社会经济的发展和人民生活水平的普遍提高，人们对果品数量和种类的需求日益增长,对果品的质量也提出了更高的要求。草莓是蔷薇科草莓属的多年生草本植物，其果实酸甜可口、风味独特、色泽鲜艳，再加之其营养价值高，尤其富含丰富的维C和多种矿物质，一直受到消费者的青睐，具有“水果皇后”的美誉。在小浆果生产中，草莓的产量和栽培面积均居世界首位，且有逐年扩大的趋势,但草莓的单产不高，糖酸比较低(影响甜度的主要指标)，过量施用化肥再加上草莓连作的弊端，使土壤板结、污染严重、微生物活性降低，病虫害发生频繁，从而导致草莓的产量和营养品质提升难度较大。因此，对于草莓产量和品质的提升是近年来人们关注的热点研究领域。

技术实现要素：

本发明的目的在于通过探究不同乳酸菌对草莓的生长性状及品质的影响，确定适宜在草莓中应用的乳酸菌制剂，通过大量的试验研究，确定了一种能显著促进草莓生长的复合乳酸菌菌剂及其应用。

为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究并不懈努力，最终获得了如下技术方案：

一种促进草莓生长的复合菌剂，该复合菌剂由植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)P-8、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang和嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188组成。

需要说明的是，本发明所采用的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)P-8，分离自内蒙古传统自然发酵酸牛奶中，具有优异的抗胃肠道消化液耐受能力，能够存活于动物肠道内；该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2012年06月28日，保藏号为CGMCC No.6312。另外，本发明所采用的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang，是从酸马奶中分离的耐酸和耐胆汁酸的益生菌菌株；该菌株于2006年4月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号CGMCC No.1697。嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)，具有发酵剂的能力，它是从青藏高原牧区发酵牦牛奶中分离提取出来的益生菌，该菌株于2014年12月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号为CGMCC NO.10188。

如上所述促进草莓生长的复合菌剂，该菌剂由植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)P-8和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang和嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188按(1.5-2)：(1.5-2)：1的活菌数比例组成。

本发明人在筛选抑制草莓病原菌的拮抗菌时意外发现，含有植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)P-8、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang和嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188的复合菌液对病原菌没有明显抑制作用，但对草莓的生长代谢有明显的影响，尤其可以促进草莓生长。基于此发现，本发明人通过接种于MRS培养液中培养发酵，将这三种菌制备成了复合菌剂。因此，本发明提供了上述复合菌剂的应用，即：上述的复合菌剂在促进草莓生长中的应用。以及，上述的复合菌剂在制备草莓生长液中的应用。

本发明涉及的复合菌剂可以采用如下方法制备：

(1)首先将所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)P-8和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang各4-10％(v/w)的接种量接种于MRS液体培养基中，在37±1℃条件下培养26-28小时，用无菌生理盐水离心洗涤2-4次，在菌体沉淀上加入8％-12％灭菌脱脂乳液，并调整其菌数为1.8-2.0×10⁹cfu/ml，混匀后培养；

(2)将步骤(1)得到的菌株培养物与嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCCNO.10188进行混合，并以8-12％(v/w)的接种量接种于MRS培养液，在37±1℃条件下培养12-24小时，调整其菌数为2.5-3.0×10⁹cfu/mL，pH值为4.2-5.5。

与现有技术相比，本发明涉及的复合菌剂由植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)P-8、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang和嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188组成，这三种菌对草莓的生长代谢有明显的影响，尤其可以协同促进草莓糖度的提高，改善草莓的生长状况，使增产效果明显，最终并提高品质、增加种植效益。

附图说明

图1不同乳酸菌对草莓株高的影响；

图2不同乳酸菌对草莓茎粗的影响；

图3不同乳酸菌对草莓叶绿素含量的影响；

图4不同乳酸菌对草莓产量的影响；

图5不同乳酸菌对草莓糖酸比和可溶性固形物的影响。

具体实施方式

以下通过实施案例的形式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。另外，下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。

实施例1：不同乳酸菌对草莓生长的影响试验

一、试验目的

草莓作为一种果肉肥厚、口感清甜的水果，不仅营养价值较高，还具有较高的药用和医疗价值，近些年来受到人们越来越多的喜爱。现在市民对生活品质的要求越来越高，草莓的产量及口感还有待进一步提高。因此，本试验用3种不同乳酸菌对大棚草莓进行喷施试验，并对各项生长指标进行测定，研究其对草莓产量和品质的影响，以期为草莓的提质增产，降低环境污染提供科学依据。

二、试验时间

2016年3月-5月

三、试验地点

青岛城阳区夏庄镇菜盛源蔬菜基地

四、试验材料与分组处理

试验材料：以草莓为试验材料，供试品种为章姬。

分组：

空白对照组：喷施清水；

嗜酸乳杆菌：喷施嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188(活菌总数含量0.8-1.0×10⁹cfu/ml)；

复合菌1：喷施植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum P-8)+干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang菌液(活菌总数含量1.8-2.0×10⁹cfu/ml，两种菌的数量比为1:1)；

复合菌2：喷施植物乳杆菌+干酪乳杆菌液+嗜酸乳杆菌(活菌总数含量1.8-2.0×10⁹cfu/ml，三种菌的数量比为2:2:1)。

施用方法：从3月份草莓的现蕾期开始，2次/月，每次按1L/亩的量，按照1:2000的比例稀释，采用滴灌的形式进行施用。

五、试验结果

(1)对株高的影响

如图1、表1所示，3种乳酸菌对草莓株高较空白对照组均有不同程度的提高，3月和4月份的效果也很明显，在5月份分别达到23.45cm、24.65cm、26.89cm，其中，复合菌2对株高的提升作用最大，较对照组提高了17.12％，甚至相比复合菌1或嗜酸乳杆菌的差异均有极显著的统计学意义(P＜0.01)。不同乳酸菌对草莓株高的影响表现为复合菌2>复合菌1>嗜酸乳杆菌>空白对照组。

(2)对茎粗的影响

施加不同乳酸菌对草莓茎粗的影响如图2、表1所示。结果表明，复合菌的乳酸菌对草莓茎粗的促进效果最佳，3月份，3种乳酸菌对草莓茎粗的影响均比较明显，到了4、5月份，嗜酸乳杆菌和复合菌1对草莓茎粗的影响差别不大，而复合菌2对其影响较明显，较对照组分别提高了13.29％、8.72％；尤其是5月份相比复合菌1或嗜酸乳杆菌的差异均有极显著的统计学意义(P＜0.01)。不同乳酸菌对草莓茎粗的影响表现为复合菌2>复合菌1>嗜酸乳杆菌>空白对照组，与对株高的影响结果一致。

(3)对叶绿素含量的影响

如图3、表1所示，乳酸菌对草莓叶绿素含量的影响较明显，尤其是复合菌2，在4月份和5月份较对照组分别提高了7.41％、6.59％。而嗜酸乳杆菌和复合菌1在5月份对草莓叶绿素含量较对照组分别提高了0.61％和1.67％，在3个时期相对复合菌2的影响作用均较弱，其差异具有极显著的统计学意义(P＜0.01)。不同乳酸菌对草莓叶绿素含量的影响分别为复合菌2>复合菌1>嗜酸乳杆菌>空白对照。

(4)对产量的影响

乳酸菌对草莓产量的影响如图4、表1所示，3种乳酸菌在4月份对草莓产量的影响较明显，较对照组分别提高了8.32％、16.24％、21.92％，到了5月份，施用3种乳酸菌的草莓产量分别达到4001.30kg/亩、4202.50kg/亩、4456.00kg/亩，较对照组(3925.10kg/亩)分别提高了1.94％、7.07％、13.53％，尤其相比复合菌1或嗜酸乳杆菌的差异均有极显著的统计学意义(P＜0.01)。因此，复合菌2对草莓产量的提高效果最好。

(5)对糖酸比和可溶性固形物的影响

如图5、表1所示，复合菌2对草莓糖酸比和可溶性固形物的提高作用最大，较对照组分别提高了16.69％、27.74％。嗜酸乳杆菌、复合菌1对草莓糖酸比的影响较对照组分别提高了2.25％、6.63％，对草莓可溶性固形物的影响较对照组分别提高了2.15％和15.59％。相比复合菌1或嗜酸乳杆菌，复合菌2对草莓可溶性固形物的提高均有极显著的统计学意义(P＜0.01)。因此3种乳酸菌联用对草莓糖酸比和可溶性固形物的影响分别为复合菌2>复合菌1>嗜酸乳杆菌>空白对照。

表1乳酸菌对草莓各项指标的影响(n＝36)

注：与空白对照组比较，^▲P＜0.01；复合菌2与嗜酸乳杆菌组比较，P＜0.01；复合菌2与复合菌1组比较，^■P＜0.01。

六、结论与讨论

不同乳酸菌对草莓生长的影响不同，总体表现为复合菌2>复合菌1>嗜酸乳杆菌>空白对照组。结果表明，复合乳酸菌2对草莓提质增产能起到明显的提升作用。