本发明属于医药化学领域，涉及具有抗肿瘤活性的5-溴-7-氮杂吲哚啉-2-酮类化合物及其制备方法，以及含有它们的抗肿瘤药物组合物。具体地说，涉及母核3-位取代基中酰胺键与仲胺基之间的连接子为C3～C5-次烷基的5-(5-溴代-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺类化合物及其制备方法。
背景技术：
：多靶点酪氨酸激酶抑制剂是近年来抗肿瘤领域的研究热点，目前已有数个优秀品种获准上市，多个候选物处于临床或临床前研究阶段(JShenyangPharmUniv.2011,28,1005；ChinJOrgChem.2011,31,1595)。作为第一个被美国FDA批准上市的多靶点酪氨酸激酶抑制剂，舒尼替尼(Sunitinib)对多种实体瘤显示明确的抑瘤活性(ChinJNewDrugsClinRem.2007,26,474)，其临床适应症为对标准疗法没有响应或不能耐受之胃肠道基质肿瘤和转移性肾细胞癌。本品对其他实体瘤的研究目前处于II和/或III期临床试验阶段。遗憾的是，舒尼替尼已有耐药性的报道。近年来，本领域科学家对舒尼替尼进行了较全面的结构修饰，并筛选得到若干值得进一步评价的有苗头的化合物或候选物(Bioorg.Med.Chem.Lett.2007,17,3814；Bioorg.Med.Chem.Lett.2007,17,3819；J.Med.Chem.2010,53,8140；Bioorg.Med.Chem.Lett.2011,21,3062；Med.Chem.Res.2013,22,1723)。然而，所有这些修饰均是在保留舒尼替尼母核结构(吲哚啉-2-酮)的基础上，对其1-位、3-位和/或5-位上的取代基进行改造和优化，而未见对舒尼替尼母核结构本身进行修饰的报道。2015年，刘明亮等学者公开了母核3-位取代基中酰胺键与仲胺基之间的连接子为次乙基的5-卤代-7-氮杂吲哚啉-2-酮类化合物的合成与抗肿瘤活性(CN201510229131.1)。未涉及连接子为C3～C5-次烷基的5-卤代-7-氮杂吲哚啉-2-酮类化合物。为了克服上述现有技术所存在的缺陷，本发明人进行了广泛的研究，设计合成了一系列母核3-位取代基中酰胺键与仲胺基之间具有不同连接子的5-卤代-7-氮杂吲哚啉-2-酮类化合物，并测定和比较了它们的抗肿瘤活性。最终发现，不同于以往文献报道的连接子为C3～C5-次烷基的5-(5-溴代-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺类化合物具有意想不到的强抗肿瘤活性，与相应的连接子为次乙基的5-卤代-7-氮杂吲哚啉-2-酮类化合物或同类抗肿瘤药物-舒尼替尼相比，具有更加优越的抗肿瘤活性。技术实现要素：本发明的目的是提供一类由通式(I)表示的5-溴代-7-氮杂吲哚啉-2-酮类化合物及其药用盐，其中：n代表3～5；R代表同时含有二个C1～C3－烷基的仲胺基，其中二个烷基可以是相同的，也可以是不同的，或者R代表环胺基。本发明的式(I)化合物的在药学上可接受的非毒性的药用盐，包括与无机酸，如盐酸、硫酸形成的盐，与有机酸，如乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、马来酸、草酸、琥珀酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、抗坏血酸或苹果酸形成的盐，以及氨基酸，如丙氨酸、天冬氨酸、赖氨酸形成的盐或与磺酸，如甲磺酸、对甲苯磺酸形成的盐。本发明具体包括以下化合物，以及它们的药用盐：(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(二乙胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(吡咯烷-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(吡咯烷-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[5-(吡咯烷-1-基)戊基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-乙基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。优选的，本发明的化合物，如下：(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(吡咯烷-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[5-(吡咯烷-1-基)戊基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。本发明的另一个目的在于提供式(I)化合物及其药用盐的制备方法。如反应路线1所示。反应路线1：在反应路线1中，n和R如前述的定义。在质子溶剂中加入碱，使式(II)化合物与式(III)化合物通过缩合反应来制备式(I)化合物。用于本反应的质子溶剂选自水、醇或醇-水混合溶剂；所述的碱选自三乙胺、吡咯烷、哌啶、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、氢氧化钠或氢氧化钾。在本发明中用作起始物的式(II)化合物为已知化合物,国内有商品供应。式(III)化合物也为已知化合物,并参考现有出版物中已知的方法可容易地制得，例如刘明亮等，CN201510229131.1；LvK等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2011,21：3062；Med.Chem.Res.2013,22：1723以及WangMH等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2015,25:2782。本发明的另一个目的在于提供式(I)所示化合物及其药用盐的药物用途。本发明式(I)所示化合物及其药用盐在制备治疗实体瘤和非实体瘤的药物中的应用。本发明所述实体瘤包括肺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌、头颈癌、食道癌、结肠癌、胰腺癌、肾癌、前列腺癌、骨癌和脑癌；所述非实体瘤指白血病。本发明的另一个目的在于提供一种含有式(I)所示化合物及其药用盐的药物组合物。本发明所述的药物组合物，还含有药物上可接受的载体。本发明所述的药物组合物，以式(I)所示化合物及其药用盐作为抗肿瘤药物的活性成分。药物组合物含有的式(I)所示化合物及其药用盐在组合物中的重量比为0.1～99.9％，药物可接受的载体在组合物中的重量比为0.1～99.9％。药物组合物以适合药用的制剂形式存在。药用的制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、混悬剂、注射剂、粉针剂、栓剂、霜剂、滴剂或贴剂。其中，所述片剂为糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂或缓释片剂；所述胶囊剂为硬胶囊剂、软胶囊剂、缓释胶囊剂；所述粉针剂为冻干粉针剂。本发明的药物组合物，作为制剂形式，每剂中含有的发明化合物的有效量为0.1～1000mg，所述每剂指的是，每一制剂单位，如片剂的每片，胶囊的每粒，也可指每次服用剂量，如每次服用100mg。本发明的药物组合物在制备成粉剂、片剂、可分散粉剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和软膏形式的固体或半固体药物制剂时，可使用固体载体。可使用的固体载体优选为选自稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、膨胀剂等中的一种或多种物质，或可为包封物质。在粉状制剂中，在载体中含有5～70％的微粒化活性成分。适宜的固体载体包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低沸点蜡、可可脂等。由于它们易于给药，片剂，粉剂、扁囊剂和胶囊等代表最有利的口服固体制剂。本发明的液体制剂包括溶液、悬液和乳液。例如，非胃肠道给药的注射制剂可为水或水-丙二醇溶液形式，调节其等渗度，pH等使适于活体的生理条件。液体制剂还可制成在聚乙二醇、水溶液中的溶液形式。可通过将活性成分溶解在水中，再加入适量的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂，来制备口服水溶液。可将微粒化的活性成分分散在粘性物质如天然和合成胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它已知悬浮剂中制备适于口服的水悬液。为了易于给药及剂量均一，将上述药物制剂配制成剂量单位形式是特别有利的。制剂的剂量单位形式指适于作为单一剂量的物理分离单位，每个单位含有产生所期望的治疗效果的计算好的预定量的活性成分。这种剂量单位形式可为包装形式，如片剂、胶囊或装在小管或小瓶中的粉剂，或装在管或瓶中的软膏、凝胶或霜剂。虽然剂量单位形式中所含活性成分的量可以变化，但一般根据所选择活性成分的效力，调节在1～800mg范围内。本领域技术人员可按常规方法确定适于某种情况的优选剂量。一般，开始治疗的量低于活性成分的最佳剂量，然后逐渐增加给药剂量，直到达到最佳治疗效果。为治疗需要，总的日剂量可一次给药或分数次给药。本发明式(I)所示5-溴-7-氮杂吲哚啉-2-酮类化合物，与现有的同类抗肿瘤药物-舒尼替尼相比，具有更加优越的抗肿瘤活性。而且，本发明的药物安全性更高，有效的降低药物的毒副作用。同时，本发明的制备方法工艺简单，用时短，大大降低药品的成本，适合大规模生产。具体实施方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例1(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸(167mg,1mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(230mg,1.2mmol)、1-羟基苯并三唑(162mg，1.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)搅拌反应20min后，加入N,N-二异丙基乙胺(365ml，2.2mmol)，N,N-二甲氨基丙胺(205mg，2mmol)，室温反应12h以上。加10ml蒸馏水稀释，10ml饱和食盐水，10ml饱和碳酸钠,用氢氧化钠溶液调pH＝10-11，用含10％甲醇的二氯甲烷萃取15mLx3次，水洗1次，饱和食盐水洗1次，无水硫酸钠干燥。抽滤，滤液减压浓缩得红色油状液体(收率57％)。将上述油状液体和5-溴-7-氮杂吲哚-2-酮(100mg,0.46mmol)溶于无水乙醇(8mL)，加入6滴哌啶于室温搅拌反应2h。过滤,滤饼用乙醇洗涤，后经硅胶柱(二氯甲烷：甲醇＝20:1，加少量三乙胺)分离纯化，得橘黄色固体(收率：54％)，mp:258-260℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.61(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.73(t,J＝5.2Hz,1H),3.25(q,J＝12.4Hz,2H),2.45(s,3H),2.42(s,3H),2.30(t,J＝6.5Hz,2H),2.16(s,6H),1.62-1.68(m,2H).MS-ESI(m/z):446.3(M+H)+,448.3(M+H)+.(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺盐酸盐搅拌下,向上述橘黄色固体(100mg，0.224mmol)的甲醇混悬液中，通入干燥盐酸气30min，后回流搅拌30min。降至室温，抽滤，干燥，得类白色固体(收率40％)。C20H24BrN5O2·HClCHNBrCl计算值49.755.2214.5116.557.34实测值49.745.2314.5016.537.34类似地也可以制备下述的盐，例如：(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺苹果酸盐。实施例2(Z)-N-[3-(二乙胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同实施例1化合物的制备方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先与3-二乙胺基丙胺发生缩合反应，然后再与5-溴-7-氮杂吲哚-2-酮缩合，得橘黄色固体(收率：56％)，mp:234-236℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.45(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.0Hz,1H),8.11(d,J＝2.0Hz,1H),7.86(s,1H),7.74(t,J＝5.3Hz,1H),3.25-3.31(m,2H),3.06-3.15(m,6H),2.47(s,3H),2.44(s,3H),1.86-1.92(m,2H),1.21(t,J＝7.2Hz,6H).MS-ESI(m/z):474.3(M+H)+,476.3(M+H)+.实施例3(Z)-N-[3-(吡咯烷-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同实施例1化合物的制备方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先与1-(3-氨丙基)吡咯烷发生缩合反应，然后再与5-溴-7-氮杂吲哚-2-酮缩合，得橘黄色固体(收率：54％)，mp:222-224℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.0Hz,1H),8.10(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(s,1H),7.74(t,J＝5.4Hz,1H),3.26(q,J＝12.6Hz,2H),2.46-2.47(m,6H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),1.65-1.71(m,6H).MS-ESI(m/z):472.3(M+H)+,474.3(M+H)+.实施例4(Z)-N-[4-(吡咯烷-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同实施例1化合物的制备方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先与1-(4-氨丁基)吡咯烷发生缩合反应，然后再与5-溴-7-氮杂吲哚-2-酮缩合，得橘黄色固体(收率：56％)，mp:230-232℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.74(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.3Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.37-2.40(m,6H),1.65-1.67(m,4H),1.48-1.53(m,4H).MS-ESI(m/z):486.3(M+H)+,488.3(M+H)+.实施例5(Z)-N-[5-(吡咯烷-1-基)戊基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同实施例1化合物的制备方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先与1-(5-氨戊基)吡咯烷发生缩合反应，然后再与5-溴-7-氮杂吲哚-2-酮缩合，得橘黄色固体(收率：55％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.43(s,1H),11.64(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.76(t,J＝6.5Hz,1H),3.24(q,J＝12.6Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.33-2.40(m,8H),1.66-1.68(m,4H),1.48-1.52(m,4H).MS-ESI(m/z):500.3(M+H)+,502.3(M+H)+.实施例6(Z)-N-[3-(哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同实施例1化合物的制备方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先与1-(3-氨丙基)哌啶发生缩合反应，然后再与5-溴-7-氮杂吲哚-2-酮缩合，得橘黄色固体(收率：56％)，mp:236-238℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.64(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.56(t,J＝6.3Hz,1H),3.24(q,J＝12.6Hz,2H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.17-2.37(m,6H),1.38-1.67(m,8H).MS-ESI(m/z):486.3(M+H)+,488.3(M+H)+.实施例7(Z)-N-[4-(哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同实施例1化合物的制备方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先与1-(4-氨丁基)哌啶发生缩合反应，然后再与5-溴-7-氮杂吲哚-2-酮缩合，得橘黄色固体(收率：58％)，mp:238-240℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.64(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.73(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.1Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.22-2.37(m,6H),1.43-1.53(m,8H),1.33-1.40(m,2H).MS-ESI(m/z):500.3(M+H)+,502.3(M+H)+.实施例8(Z)-N-[3-(哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同实施例1化合物的制备方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先与1-(3-氨丙基)哌嗪发生缩合反应，然后再与5-溴-7-氮杂吲哚-2-酮缩合，得橘黄色固体(收率：50％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6+D2O)δ:8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),3.22(q,J＝12.8Hz,2H),2.42(s,3H),2.22-2.35(m,10H),2.13(s,3H),1.62-1.68(m,2H).MS-ESI(m/z):487.3(M+H)+,489.3(M+H)+.实施例9(Z)-N-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同实施例1化合物的制备方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先与1-(3-氨丙基)-4-甲基哌嗪发生缩合反应，然后再与5-溴-7-氮杂吲哚-2-酮缩合，得橘黄色固体(收率：57％)，mp:238-240℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.62(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.8Hz,2H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.22-2.35(m,10H),2.13(s,3H),1.62-1.68(m,2H).MS-ESI(m/z):501.3(M+H)+,503.3(M+H)+.实施例10(Z)-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同实施例1化合物的制备方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先与1-(4-氨丁基)-4-甲基哌嗪发生缩合反应，然后再与5-溴-7-氮杂吲哚-2-酮缩合，得橘黄色固体(收率：55％)，mp:238-240℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.43(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.73(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.0Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.16-2.37(m,10H),2.13(s,3H),1.45-1.50(m,4H).MS-ESI(m/z):515.3(M+H)+,517.3(M+H)+.实施例11(Z)-N-[3-(4-乙基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同实施例1化合物的制备方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先与1-(3-氨丙基)-4-乙基哌嗪发生缩合反应，然后再与5-溴-7-氮杂吲哚-2-酮缩合，得橘黄色固体(收率：53％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.62(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.5Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.22-2.35(m,12H),1.62-1.68(m,2H),1.16(t,J＝7.0HZ,3H).MS-ESI(m/z):515.3(M+H)+,517.3(M+H)+.试验例1对实体瘤细胞的抗肿瘤活性(IC50：μM)本实验例在于研究本发明化合物对实体瘤细胞的抗肿瘤活性，试验方法采用SRB(磺酰罗丹明)法。根据肿瘤细胞生长速率，将处于对数生长期的贴壁实体瘤细胞以170μL/孔接种于96孔培养板，贴壁生长24h后加药(30μL/孔)，每个浓度设3复孔。并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞调零孔。肿瘤细胞在37℃、5％CO2条件下培养48h。培养后，取出培养板，每孔加入50％(m/v)的三氯乙酸(TCA)50uL4℃放置lh，固定细胞。弃固定液，用蒸馏水洗涤5次，在空气中干燥后，每孔加SRB溶液100uL，室温下放置10-30min，进行染色。去上清液，用1％醋酸洗涤5次，空气中自然干燥后，加入150μL/孔的Tris溶液，在平板振荡器上振荡10min。用酶联免疫检测仪测定570nm处的OD值，用空白对照调零。按以下公式计算肿瘤细胞生长的抑制率：抑制率＝[(OD570对照孔－OD570给药孔)/OD570对照孔]×100％。根据各浓度抑制率，采用Logit法计算半数抑制浓度IC50。以上每个实验重复2～3次，求出2～3次实验的平均IC50值作为最终指标。表1列出了本申请的式(Ⅰ)化合物中的若干代表化合物对三种实体瘤细胞(HepG2/肝癌,A549/肺癌，SKOV-3/卵巢癌)的抗肿瘤活性，并与同类抗肿瘤药物-舒尼替尼以及CN201510229131.1中描述的结构近似的代表化合物进行比较。表1实施例1、3、5、6、7、9、10化合物对实体瘤细胞的抗肿瘤活性(IC50：μM)*化合物A为CN201510229131.1中描述的实施例1化合物，即(Z)-N-[2-(二甲胺基)乙基]-5-(5-氟-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。*化合物B为CN201510229131.1中描述的实施例8化合物，即(Z)-N-[2-(吡咯烷-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亚甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。由表1可见，本申请的式(Ⅰ)化合物中的实施例1、3、5、6、7、9、10化合物对三种实体瘤细胞(HepG2/肝癌,A549/肺癌，SKOV-3/卵巢癌)的抗肿瘤活性(IC50：4.075–11.229μM)均优于CN201510229131.1中描述的两个结构近似化合物(IC50：11.836–14.922μM)以及舒尼替尼(IC50：31.594–49.036μM)。其中，活性最强的式(Ⅰ)化合物中的实施例5化合物对三种实体瘤细胞的活性是CN201510229131.1中描述的两个结构近似化合物的1.9–3.7倍，而是舒尼替尼的5.2–12.1倍。尽管上述实验中，本发明只选取部分实施例进行实验测试，但是实际上，本发明的其他药物也能取得和上述药物相同或者相近的治疗效果。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。当前第1页1 2 3