本发明属于生物领域，具体涉及一种真菌菌悬液的制备方法及其应用。
背景技术：
担子菌都有很发达的菌丝体，菌丝有隔膜。目前担子菌尤其是食用菌菌种主要以固体菌种和液体菌种两种形式存在。固体菌种虽然接种简便，但是发菌慢，培养周期较长，且存在隐形污染的概率较大。而液体菌种虽然发菌快，培养周期短，但是由于含糖量高，菌种较粘稠，渗透性不好，且大批次污染的概率很大。
目前，除了传统的固体菌种和液体菌种外，还有一种特殊的菌种——固种液化菌种。具体制备方法为：首先制备液体菌种，然后将所得液体菌种接种于固体培养料进行培养，培养20-30天菌种长满菌瓶，最后，挑选长满无杂菌的菌瓶在粉碎机中粉碎、过筛后接种到无菌水中，直接生产接种。此种液化菌种虽然活力好，渗透性强，萌发点多，产量高，但是由于该技术液化的是固体菌种，存在隐形污染的概率很高，且该技术液化前的步骤繁琐，耗时较久，成本较高。另外，整个的生产周期还有缩短的空间。
技术实现要素：
为此，本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术的不足和问题，从而提出一种生产周期短、生产成本低、污染风险小的真菌菌悬液的制备方法及其应用。
为解决上述技术问题，本发明公开了一种真菌菌悬液的制备方法，所述方法包括如下步骤：1)制备液体菌种：取母种接种于灭菌冷却的液体培养基，摇床培养，得到液体菌种；
2)过滤洗脱：将步骤1)所得液体菌种过筛，洗脱，得到纯菌丝球；
3)加水粉碎：将步骤2)所得的菌丝球加入无菌水粉碎，得到菌悬液备用。
优选的，步骤3)中所述菌丝球与所述无菌水的质量比为1：100。
优选的，所述摇床培养的温度为20-25℃，摇床转速为180-220rpm。
优选的，所述的液体培养基为玉米/豆饼粉液体培养基，制备方法如下：
将25重量份的玉米粉在1000重量份的冷水中搅拌，加热至沸腾，持续加热20分钟，然后加入10重量份的豆饼粉、20重量份的白糖，再加1000重量份的水，搅拌混匀，进行分装。
优选的，所述母种为真菌中的担子菌。
本发明还公开了所述的菌悬液在食用菌制备领域和液体菌丝球制备领域中的应用。
优选的，所述食用菌的制备方法为:
将10-20重量份的菌悬液接种至100重量份的固体农废物培养料，搅拌混匀，培养处理，得到所述食用菌。
优选的，所述液体菌丝球的制备方法为:
将5重量份的菌悬液接种至100重量份的液体培养基，摇床培养，得到液体菌丝球。
更为优选的，所述摇床培养处理的温度为20-25℃，湿度为60-70％，避光培养，培养时间为7天。
本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：菌悬液不同于传统的固体菌种和深层发酵的液体菌种，也不同于特殊的固种液化菌种。它是将精制的液体菌种过滤、稀释、粉碎后制成的特殊菌种。除具有现有技术菌种活力好，发菌快，渗透性强，萌发点多，产量高的优势外，还具有如下显著优势：
(1)操作简便：液化前的处理步骤为“母种→液体菌种”，操作简单方便；
(2)接种方便：现有技术得到的液化菌种均含有一定量菌渣，不利于接种，而本发明完全此方面的担忧；
(3)菌龄一致：由于菌悬液的渗透性很强，且是以菌丝片段而非菌丝球的形式存在，可以使绝大部分材料都能接种到菌丝；发菌一致，从而使菌袋内的菌丝菌龄比较一致；
(4)培养周期短：利用菌悬液制备菌袋或菌瓶的整个生长周期为21天(包括母种制备7天，液体菌种制备7天，接种生产7天)，比固体菌种接种提前30天左右(固体接种包括母种制备7天，原种制备20天，接种生产25天左右)，比传统液体菌种接种提前15天左右(液体接种包括母种制备7天，液体菌种制备7天，接种生产25天左右)，比固种液化菌种接种提前了20天左右(液化菌种接种包括母种制备7天，液体菌种制备7天，固体菌种制备20天，接种生产10天左右)。
(5)节约成本：由于菌悬液的制备中菌丝球(湿重)与无菌水的质量比为1：100，菌种用量少，100mL的液体菌种可以接种15Kg材料，而制作100mL液体菌种所需的营养成分成本只有0.3元；
(6)污染概率低：由于菌悬液几乎不含糖分类的营养物质，大大降低了污染概率，且液化的是液体菌种的菌丝球而非固体菌种，几乎不存在隐形污染，从而降低了整个生产过程的污染概率。
具体实施方式
实施例1
本实施例公开了一种真菌(平菇)菌悬液的制备方法，所述方法包括如下步骤：
(1)制备液体菌种：首先制备“玉米粉+豆饼粉”液体培养基300mL，分装至250mL三角瓶，每瓶100mL，121℃高压蒸汽灭菌30分钟。冷却后，取2-3块黄豆大小且不带培养基的试管母种接种，摇床培养，培养条件：温度：20-25℃，转速：180-220rpm。培养7天即可获得液体菌种；
(2)过滤、洗脱：将步骤(1)所得液体菌种过10目筛，并用无菌水洗脱3次，得到纯菌丝球45g；
(3)加水粉碎：将步骤(2)所得的纯菌丝球加入无菌粉碎机，并加4500mL无菌水，粉碎1分钟左右，即得菌悬液备用。
本实施例还公开了由所得的菌悬液用制备食用菌的方法，所述方法步骤如下：
接种生产：首先按照如下配方—小麦秸秆40％，棉籽壳20％，玉米芯30％，麦麸9％，生石灰1％，称取共20Kg固体培养料置于搅拌机中，并加入17.5Kg的自来水，充分搅拌混匀，121℃高压蒸汽灭菌1.5小时。冷却后，接种10％的菌悬液，用无菌搅拌机搅拌混匀，装袋培养，500g/袋。培养条件为：温度：20-25℃，湿度：60％-70％，避光；培养7天后菌丝即可长满菌袋。
培养结束后菌袋用于食用菌生产或友好型生物材料的制作。
本实施例中，300mL的液体菌种可以接种45Kg材料，而制作300mL液体菌种所需的营养成分成本只有0.87元。
另外，本发明制得的菌悬液7天即可满瓶或满袋，整个生长周期为21天(包括母种制备7天，液体菌种制备7天，接种生产7天)，比固体菌种接种提前30天左右(固体接种包括母种制备7天，原种制备20天，接种生产25天左右)，比液体菌种接种提前15天左右(液体接种包括母种制备7天，液体菌种制备7天，接种生产25天左右)。
以上所有的步骤均在无菌环境中操作。
实施例2
本实施例公开了一种真菌(金针菇)菌悬液的制备方法，所述方法包括如下步骤：
(1)制备液体菌种：首先制备“玉米粉+豆饼粉”液体培养基300mL，分装至250mL三角瓶，每瓶100mL，121℃高压蒸汽灭菌30分钟。冷却后，取2-3块黄豆大小且不带培养基的试管母种接种，摇床培养，培养条件：温度：20-25℃，转速：180-220rpm。培养7天即可获得液体菌种；
(2)过滤、洗脱：将步骤(1)所得液体菌种过10目筛，并用无菌水洗脱3次，得到纯菌丝球45g；
(3)加水粉碎：将步骤(2)所得的纯菌丝球加入无菌粉碎机，并加4500mL无菌水，粉碎1分钟左右，即得菌悬液备用。
本实施例还公开了所述用菌悬液制备液体菌种的方法，具体步骤如下：将5mL菌悬液接种至100mL灭菌冷却的液体培养基，摇床培养，培养条件为20-25℃，180-220rpm。培养4-5天培养基中即可充满洁白均匀的菌丝球。制得的液体菌种又可循环用于菌悬液的制备，从而使整个的生产周期缩短2-3天。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。