(Z，E)5‑OH‑3‑(苯基衍生物‑次甲基)‑二氢黄酮‑7‑O‑糖苷及其制备及其应用的制作方法

本发明属于化学、化妆品和医药领域，涉及一种黄酮类化合物及其制备方法及其应用，特别是一种(Z，E)5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氢黄酮-7-O-糖苷及其制备方法及其应用。

背景技术：
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黄酮类化合物在自然界中种类繁多，含量丰富，提取制备工艺简单，价格低廉。由于天然黄酮系植物酶的次生代谢产物，多含有酚羟基。由于酚羟基分布不均匀，分占两个苯环，未形成邻二酚OH，抗氧化性作用较弱，代表性的化合物如橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、地奥司明、野漆树苷、芹菜素、橙皮素、柚皮素、甲基橙皮苷。即使含有邻二酚羟基，由于两个苯环具有较好的共平面性，分子与分子易于层层排列，形成结晶，水溶性低，生物利用度低下，抗氧化能力有限。代表性化合物有黄芩苷、芦丁、灯盏花素、金银花苷、黄芩素、木犀草素。茶多酚中儿茶素的混合物，结构近似，物理化学性质接近，分离较为困难。且活性较强的儿茶酚中表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)，因分子中含有酯键，性质不稳定，应用受到限制。

橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、地奥司明、野漆树苷、芹菜素、橙皮素、柚皮素、甲基橙皮苷、黄芩苷、芦丁、灯盏花素、金银花苷、黄芩素、木犀草素等黄酮类化合物，在抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、扩张心脑血管等作用的强弱，主要依赖于水溶性和清除氧自由基的能力。因此，如何来提高其在上述各领域中的应用效率。首先，引入大的基团，增加空间位阻，破环分子中两个苯环的共平面性，进而增加水溶性；其次，增加酚羟基的基团和双键数目，可以提高抗氧化性；再者增加酚羟基和其他极性基团，也能提高分子的极性，增加水溶性；最后，引入甲氧基，氯素等小极性基团，可以延缓代谢，延长作用时间。

技术实现要素：
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本发明就是要提供一种(Z，E)5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氢黄酮-7-O-糖苷及其制备方法及其应用；是以5-OH二氢黄酮-7-O-糖苷为原料，通过aldol condensation反应，在3-位引入较大的基团，破环分子的平面性，得到水溶性较好或酚羟基较多的化合物，提高黄酮类化合物水溶性及抗氧化性，较EGCG、ECG中酯键稳定性高的化合物，提高清除氧自由基的能力或更好的生物利用度，以其具有较佳的抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌、抗菌、心脑血管保护的化合物，能广泛应用于食品、化妆品、药品等工业中。

发明所述的技术方案为，

本发明(Z，E)5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氢黄酮-7-O-糖苷，其结构通式如(Ⅰ)所示，

其中：R₁可为葡萄糖基(-glucose)、芸香糖基(-[[6-O-(6-Deoxy-alpha-L-mannopyranosyl)-beta-D-glucopyranosyl]oxy])、新橙皮糖基(-[[2-O-(6-Deoxy-alpha-L-mannopyranosyl)-beta-D-glucopyranosyl]oxy])、葡萄糖醛酸基(7-beta-D-glucopyranose acid)；R₂可为-H、-OH、-OCH₃；R₃可为-OH、-OCH₃、-O-glucose、-O-glucuronic、-O-neohesperidose、-F、-Cl、-Br中单基团或多基团；R₄可为-H、-OH、-OCH₃，-Cl、-Br、-NO₂、-COOH、亚甲二氧基中单基团或多基团。

本发明(Z，E)5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氢黄酮-7-O-糖苷的制备方法，其是以5-OH二氢黄酮-7-O-糖苷为原料，在极性溶剂中，以有机碱和有机酸为催化剂，与苯甲醛衍生物通过aldol condensation反应制得，其中5-OH二氢黄酮-7-O-糖苷与苯甲醛衍生物的质量摩尔比例为3:1-1:3。

进一步的控制所述的反应温度在室温至120℃。

本发明所述的5-OH二氢黄酮-7-O-糖苷，其结构式见(II)，

其中：R₁、R₂、R₃与结构(I)中的R₁、R₂、R₃基团含义相同，代表性化合物有橙皮苷(Cas:520-26-3)、柚皮苷(CAS:10236-47-2)、新橙皮苷(CAS:13241-33-3)、甲基橙皮苷、二氢黄芩苷、二氢灯盏花素、圣草酚-7-O-glucose、橙皮素-7-O-glucose、柚皮素-7-O-glucose、二氢野黄芩素、二氢汉黄芩苷。

本发明所述的苯甲醛衍生物，见结构式(III)

其中：R₄与结构(I)中的R₄基团含义相同。

本发明所述的极性溶剂为DMSO、DMF、THF、醇类中任意一种或几种；所述的醇类为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇中任意一种。

本发明所述的有机碱为二甲胺、二乙胺、四氢吡咯、哌啶、哌嗪、吗啉中任意一种；进一步的优选为四氢吡咯。

本发明所述的有机酸，为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、苯甲酸、苯乙酸、苯丙酸，乳酸、琥珀酸、酒石酸中任意一种，进一步的优选为冰醋酸。

本发明一种(Z，E)5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氢黄酮-7-O-糖苷，应用于抗炎、抗氧化食品、化妆品组合物及抗菌、抗肿瘤、心脑血管保护的药物的组合物。

本发明所述的(Z，E)-5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氢黄酮-7-O-糖苷为一种药物组合物。

本发明反应条件温和，可在醇、THF、DMSO、DMF中进行，aldol condensation反应部位单一，产物易于提纯，整个制备工艺简单，有利于工业化生产。

本发明所述的化合物，水溶性、醇溶性、抗氧化能增加，在抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒、心脑血管保护等保护，较原有的黄酮具有先天优势，更易制备成合适的制剂，使其具有进一步应用于食品、药品、化妆品领域，具有潜在的临床应用前景及潜在的经济效益和社会效益。

如果苯甲醛衍生物中含有卤素，有利提高亲脂性，进中枢能力增强，在中枢系统发挥作用也将增加；如果苯甲醛衍生物含有-COOH、-CH₂-N(CH₃)₂、-SO₃H、-OSO₃H可以提高极性，并且通过酸或碱制备相应的盐，进一步增加水溶性；如果苯甲醛上的-NH₂、-OH预先制备成酰化物，在缩合产物中含有这些酰基团，可以延缓代谢速度，有利于增加作用时间。

本发明的原理：

需要指出的是，理论上是生成反式(E)，但由于二氢黄酮分子中2-位为苯基或苯基衍生物，4-位为吡咯基团，其基团较大，当在二氢黄酮3-位引入较大基团，其空间位阻的特别明显，导致新成键难以自由旋转，生成两种中间体产物，反应分子式如下：

两种中间体产物脱水亦形成顺反两种异构体，反应式如下：

由于糖苷极性较大，采用硅胶柱不易将上述两种化合物分离开来；最后需要指出的醛基的正电性越高，越容易参与反应；当用无机碱，容易引起二氢黄酮开环，生成查尔酮，查尔酮难以进行上述反应。

具体实施方式：

本发明实施例公开了(Z，E)5-OH-二氢黄酮7-O-糖苷-3-次甲基苯衍生物的制备的方法；本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。

实施例1：3-(4-羟基苯次甲基)-橙皮苷的制备：

称取含量为95％的橙皮苷1.0 g，对羟基苯甲醛0.20 g，加入DMSO 3.0 mL四氢吡咯137μL，冰醋酸100μL，70℃搅拌反应24h，加入硅胶拌样，以氯仿-甲醇梯度洗脱，得黄色粉末775 mg，为3-(4-羟基苯次甲基)-橙皮苷(cpd 1)。¹H NMR(400 MHz,DMSO)δ12.63(d,1H：5-OH)，10.27(s,1H：3'-OH)，9.17(s,1H：15-OH)，[8.32+7.94(d,1H：11-H)]，7.27-7.31(2H：13-H+17-H)，6.75-7.00(m,5H:14-H+16-H+2'-H+5'-H+6'-H)，6.66(d,1H：2-H)，6.05-6.12(dd,J＝2.0,2H：H-6+H-8)，3.74(s,3H：4'-OCH₃)，5.36(1H：Gly-1”)，4.90(1H：Rha-1”')，1.10(dd,3H：Rha-6”')；¹³C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ185.81(d,C-4)，165.97(d,C-7)，164.34(C-9)，160.46(C-5)，148.55(C-4')，147.75(C-3')，133.42(C-1')，130.38(C-3)，118.93(C-6')，115.01(C-2')，112.85(C-5')，103.94(C-10)，97.29(C-6)，96.80(C-8)，79.62(C-2)，55.94(4'-OCH3)；159.91(C-15)、139.62(C-11)、127.87(C-13+C-17)、124.76(C-12)，116.56(C-14+C-16)；Gly：101.09(Gly-1”)、73.51(Gly-2”)、76.82(Gly-3”)、71.19(Gly-4”)、76.04(Gly-5”)、66.65(Gly-6”)；Rha：99.87(Rha-1”')、70.09(Rha-2”')、70.64(Rha-3”')、72.65(Rha-4”')、68.80(Rha-5”')、18.29(Rha-6”')。MS(ES-)3.25e5，m/z：714.15[M]-，608.96[M-(4-OH-C₆H₄-CH-)]-，405.48[M-Gly-Rha]-，301.90[M-Gly-Rha-(4-OH-C₆H₄-CH-)+2H+]-，300.58(100％)[M-Gly-Rha-(4-OH-C₆H₄-CH-)+H+]-；MS(ES+)4.856e，m/z：737.57[M+Na+]，738.55[M+H++Na+]，739.49[M+2H++Na+]，475.45[M-Rha-(4-OH-C₆H₄-)+H+]，476.45(100％)M-Rha-(4-OH-C₆H₄-)+2H+]，477.36[M-Rha-(4-OH-C₆H₄-)+3H+]，407.31[M-Rha-Gly+2H+]，calc.for：C₃₅H₃₈O₁₆，反应式如下：

实施例2：3-(3,4-羟基苯次甲基)-橙皮苷的制备：

称取含量为95％的橙皮苷1.5 g，加入四氢吡咯200μL，DMSO 4.0 mL溶解，加入冰醋酸150μL，于60℃搅拌反应3h后，分次加入3,4-羟基苯甲醛0.25 g，8h内加完，继续反应3h，加入硅胶拌样，以氯仿-甲醇梯度洗脱，得黄色粉末803mg，为3-(3,4-羟基苯次甲基)-橙皮苷(cpd 2)。¹H NMR(400 MHz,DMSO)δ12.63(d,1H：5-OH)，9.17(s,1H：3'-OH)，[8.31+7.85(d，1H：11-H)]，6.99–6.70(m,6H：2'-H+5'-H+6'-H+13-H+16-H+17-H)，6.56(d,1H：2-H)，6.09(d,2H：6-H+8-H)，5.37(s,1H：2-H)，3.74(s,3H：4'-OCH₃)；5.37(s,1H：Gly-1”'-H)，4.95(d,1H：Rha-1”'-H)，1.10(d,3H：Rha-6”')。¹³C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ185.79(C-4)，165.92(C-7)，164.34(C-9)，160.20(C-5)，149.21(C-4')，148.51(C-3')，147.14(C-15)，146.07(C-14)，139.97(C-11)，130.34(C-1')，130.21(C-3)，127.77(C-12)，125.20(C-17)，124.44(C-6')，118.23(C-16)，116.49(C-13)，114.99(C-2')，112.70(C-5')，103.89(C-10)，97.29(C-6)，96.81(C-8)，79.83(C-2)，55.95(4'-OCH₃)；101.10(Gly-1”)，73.52(Gly-2”)，76.04(Gly-3”)，71.21(Gly-4”)，76.71(Gly-5”)，66.81(Gly-6”)；99.86(Rha-1”')，70.64(Rha-2”')，70.79(Rha-3”')，72.57(Rha-4”')，68.78(Rha-5”'),18.32(Rha-6”')。MS(ES-)8.18e6，m/z：729.64(100％)[M-H]-，730.65[M]-，731.6[M+H]-；MS(ES+)1.17e7，m/z：753.58(100％)[M+Na+]，754.31[M+H++Na+]，755.63[M+2H++Na+]。calc.for：C₃₅H₃₈O₁₇，反应式如下：

实施例3：3-(3,4-羟基苯次甲基)-柚皮苷的制备

称取含量为98％的柚皮苷1.5g，加入四氢吡咯200μL，DMSO 4.0 mL溶解，加入冰醋酸150μL，于60℃搅拌反应3h后，分次加入3，4-羟基苯甲醛0.30 g，8h内加完，继续反应3h，加入硅胶拌样，以氯仿-甲醇梯度洗脱，得黄色粉末845mg，为3-(3,4-羟基苯次甲基)-柚皮苷(cpd 3)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ12.70(d,1H：5-OH)，9.65(br,1H：15-OH)，9.13(br,1H：14-OH)，[8.31+7.85(d,1H：11-H)]，7.17-7.30(2H：13-H+17-H),6.68-6.90(m,5H：2'-H+3'-H+5'-H+6'-H+16-H)，6.50-6.65(d,1H：2-H)，5.32(1H：2-H)；5.0-5.20(2H：Gly-1”'-H+Rha-1”'-H)1.17(d,3H：Rha-6”')。¹³C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ185.76(C-4)，165.27(C-7)，164.14(C-9)，160.12(C-5)，158.24(C-4')，133.48 C-3)，129.23(C-1')，128.93((C-2'+C-6')，116.24(C-3'+C-5')，103.86(C-10)，97.31(C-6)，96.65(C-8)，79.63(C-2)；146.54(C-15)，146.08(C-14)，139.97(C-11)，127.74(C-12)，125.15(C-17)，116.17(C-16)，115.27(C-13)；Gly：101.20(Gly-1”)，77.54(Gly-2”)，77.31(Gly-3”)，72.28(Gly-4”)，76.63(Gly-5”)，60.79(Gly-6”)；Rha：100.91(Rha-1”')，70.02(Rha-2”')，70.87(Rha-3”')，72.34(Rha-4”')，68.78(Rha-5”')，18.49(Rha-6”')。MS(ES-)3.51e，m/z：699.82(100％)[M-H]-，700.78[M]-，701.77[M+H]-；MS(ES+)1.90e7，m/z：723.77[M+Na+]，724.72[M+H++Na+]，475.53(100％)[M+3H+-C₁₄H₁₂O₃]，476.52M+4H+-C₁₄H₁₂O₃]，497.55[M+Na++2H+-C₁₄H₁₂O₃]，498.51[M+Na++3H+-C₁₄H₁₂O₃]，499.48[M+Na++4H+-C₁₄H₁₂O₃]。(calc.for：C₃₄H₃₆O₁₆)，反应式如下：

需要指出的是质谱裂解规律可能如下：

实施例4：3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-橙皮苷的制备，

称取含量为95％的橙皮苷1.5 g 3,4-二甲氧基苯甲醛0.402g，加入无水DMSO 4.5ml，

加入四氢吡咯200μL，加入冰醋酸150μL，于70℃搅拌反应12h后，加入硅胶拌样，以氯仿-甲醇梯度洗脱，得黄色粉末1045 mg，为3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-橙皮苷(cpd 4)。¹H NMR(400 MHz,DMSO)δ12.63(d，1H：5-OH)，9.19(s,1H：3'-OH)，[8.32+7.99(d，1H：11-H)],7.10–6.80(m,6H：2'-H+5'-H+6'-H+13-H+16-H+17-H),6.65(d,1H：2-H),6.20-6.00(d,2H：6-H+8-H)，3.74(s,3H：4'-OCH3)，3.80(s,3H：15-OCH3)，3.64(s,3H：14-OCH3)；5.35(s,1H：Gly-1”'-H)，4.95(d,1H：Rha-1”'-H)，1.10(d,3H：Rha-6”')。¹³C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ185.62(d，C-4)，166.13(C-7)，164.37(C-9)，160.30(C-5)，149.12(C-4')，148.66(C-3')，130.57(C-1')，128.85(C-3)，124.42(C-6')，115.21(C-2')，112.74(C-5')，103.94(C-10)，97.20(C-6)，96.77(C-8)，79.63(C-2)，55.98(4'-OCH₃)；151.36(C-15)，147.20(C-14)，139.54(C-11)，126.38(C-12)，119.24(C-17)，114.40(C-16)，122.35(C-16)，55.80(14-OCH₃)，56.12(15-OCH₃)；101.11(Gly-1”)，73.52(Gly-2”)，76.06(Gly-3”)，71.19(Gly-4”)，76.82(Gly-5”)，66.63(Gly-6”)；99.88(Rha-1”')，70.10(Rha-2”')，70.79(Rha-3”')，72.58(Rha-4”')，68.80(Rha-5”')，18.30(d，Rha-6”')。MS(ES-)3.65e6，m/z：757.69(100％)[M-H]^-，739.69[M+Na⁺-3CH₃]^-，713.32[M-3CH₃]^-，699.42[M-2CH₃-OCH₃+H⁺]^-，698.50[M-2CH₃-OCH₃]-，610.34[M-Rha-H]^-；MS(ES+)6.41e5，m/z：781.61(100％)[M+Na+]，782.60[M+H++Na+]，783.52[M+2H++Na+]，759.85[M+H+]，759.85[M+H+]，613.54[M-Rha+2H+]。(calc.for：C₃₇H₄₂O₁₇)，反应式如下：

实施例5：3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷的制备：

称取含量为98％的柚皮苷1.0 g，加入DMSO 4 mL溶解，3,4-二甲氧基苯甲醛0.35 g，四氢吡咯210μL，加入冰醋酸160μL，60℃密闭搅拌反应20h，加入正丁醇60ml，加入0.5％盐酸水溶液60 mL稀释，弃去水液，用水15ml分次洗脱正丁醇层，旋干，以甲醇溶剂，硅胶拌样，氯仿-甲醇梯度洗脱，得黄色粉末896mg，为3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷(cpd 5)。¹H NMR(400 MHz,DMSO)δ12.63(d，1H：5-OH)，9.69(s,1H：3'-OH)，[8.30+7.99(d，1H：11-H)],7.30–7.23(2H：13-H+17-H),7.10–6.70(m,5H：2'-H+3'-H+5'-H+6'-H+16-H),6.65(d,1H：2-H),6.20-5.90(d,2H：6-H+8-H)，3.79(s,3H：15-OCH3)，3.61(s,3H：14-OCH3)；5.30(s,1H：Gly-1”'-H)，5.07(1H：Rha-1”'-H)，1.15(d,3H：Rha-6”')。¹³C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ185.49(d,C-4)，165.67(C-7)，164.29(C-9)，160.20(C-5)，158.52(C-4')，133.50(C-3)，129.53(C-1')，128.79(C-2'+C-6')，116.27(C-3'+C-5')，103.35(C-10)，97.33(C-6)，96.57(C-8)，78.02(C-2)；151.35(C-15)，149.09(C-14)，139.58(C-11)，126.37(C-12)，125.18(C-16)，112.38(C-16)，111.20.35(C-13)，55.72(14-OCH3)，56.12(15-OCH3)；101.12(Gly-1”)，77.51(Gly-2”)，76.60(Gly-3”)，72.27(Gly-4”)，77.32(Gly-5”)，60.82(Gly-6”)；100.00(Rha-1”')，70.05(Rha-2”')，70.87(Rha-3”')，72.32(Rha-4”')，68.80(Rha-5”'),18.45(d，Rha-6”')；MS(ES-)1.03e7，m/z：727.66(100％)[M-H]-，728.54[M]-，729.60[M+H]-，730.51[M+2H]-；MS(ES+)1.04e6，m/z：751.52(100％)[M+Na+]，752.54[M+H++Na+]，753.59[M+2H++Na+]，754.67[M+3H++Na+]，767.53[M+K+]，768.52[M+H++K+]，730.56[M+2H+]，728.20[M+]，700.45[M-2CH₃+2H+]。(calc.for：C₃₇H₄₂O₁₇)，反应式如下：

实施例6：3-(4-N,N二甲基苯次甲基)-橙皮苷的制备：

称取含量为95％的橙皮苷1.5 g，4-N,N二甲基苯0.402 g，加入无水DMSO 5.0 mL，四氢吡咯170μL，加入冰醋酸150μL，充氮气保护下，于70℃搅拌反应24 h后，加入硅胶拌样，以氯仿-甲醇梯度洗脱，得红色粉末0.762 mg，为3-(4-N,N二甲基苯次甲基)-橙皮苷(cpd 6)。¹H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ12.86(d，1H：5-OH)，9.14(s,1H：3'-OH)，7.93(s，1H：11-H),δ7.29(2H：13-H+17-H),6.98–6.77(m,3H：2'-H+5'-H+6'-H)，6.74(2H：14-H+16-H)，6.60(s,1H：2-H)，6.12-6.00(3H：6-H+8-H)3.74(s,3H：4'-OCH₃)，2.99(s,6H：15-N(CH₃)₂)，5.37(s,1H：Gly-1”'-H)，4.94(dd,1H：Rha-1”'-H)，1.10(d,3H：Rha-6”')。13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ185.37(C-4)，165.63(C-7)，164.06(C-9)，160.10(C-5)，148.50(C-4')，147.10(C-3')，133.59(C-1')，130.68(C-3)，118.87(C-6')，115.13(C-2')，112.67(C-5')，103.85(C-10)，97.21(C-6)，96.81(C-8)，79.83(C-2)，55.95(4'-OCH3)；152.14(C-15)，140.19(C-11)，125.05(C-13+C17)，120.084(C-12)，112.37(C-14+C16)；Gly：101.11(Gly-1”)，73.52(Gly-2”)，76.83(Gly-3”)，71.22(Gly-4”)，76.97(Gly-5”)，66.82(Gly-6”)；Rha：99.87(Rha-1”')，70.19(Rha-2”')，70.64(Rha-3”')，72.63(Rha-4”')，68.78(Rha-5”')，18.32(Rha-6”')。MS(ES-)1.57e6，m/z：740.64(100％)[M-H]-，741.54[M]-，742.51[M+H]-，714.61[M-2CH₃+3H]-；MS(ES+)4.67e5，m/z：764.60(100％)[M+Na+]，765.63[M+H++Na+]，766.53[M+2H++Na+]，742.57[M+H+]，773.42[M+H+]，744.23[M+2H+]，728.713[M-CH₃+2H+]，701.71[M-CH₃+2H+-CO]，701.71[M+H+]。(calc.for：C₃₇H₄₃ N O₁₅)，反应式如下：

实施例7：3-(3,4-二甲氧基苯亚甲基)-柚皮苷的制备，

照实施例5，将溶剂DMSO换成THF，THF量为20ml，温度为60℃，其它条件不变，反应时间为36h，反应完毕旋干，加入甲醇溶解，硅胶拌样，以氯仿-甲醇梯度洗脱，得3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷黄色粉末782 mg。

实施例8：3-(3,4-二甲氧基苯亚甲基)-柚皮苷的制备，

照实施例5，将溶剂DMSO换成丙三醇-甲醇(3:1)混合溶液20ml，温度为80℃，其它条件不变，反应时间为10h，反应完毕,加入正丁醇80ml，加入0.5％盐酸水溶液60 mL稀释，弃去水液，用水15ml分次洗脱正丁醇层，旋干，以甲醇溶剂，硅胶拌样，氯仿-甲醇梯度洗脱，得3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷黄色粉末672mg。

实施例9：3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷的制备，

照实施例5，将溶剂DMSO换成乙二醇溶剂12ml，将四氢吡咯换成哌啶，哌啶量为240μL温度为80℃，其它条件不变，反应时间为15h，反应完毕,加入正丁醇80ml，加入0.5％盐酸水溶液60 mL稀释，弃去水液，水15ml分次洗脱正丁醇层，旋干，以甲醇溶剂，硅胶拌样，氯仿-甲醇梯度洗脱，得3-(3,4-二甲氧基苯亚甲基)-柚皮苷黄色粉末512mg。

实施例10：3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷的制备，

照实施例5，将溶剂DMSO换成DMF，将四氢吡咯换成二乙胺，二乙胺量为230μL，冰乙酸用量为300μL，温度为90℃，其它条件不变，反应完毕,加入正丁醇80ml，加入水溶液60 mL稀释，弃去水液，水15ml分次洗脱正丁醇层，旋干，以甲醇溶剂，硅胶拌样，氯仿-甲醇梯度洗脱，得3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷黄色粉末486mg。

实施例11：3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷的制备，

照实施例5，将冰乙酸换成乳酸，其它条件不变，得3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷黄色粉末742mg。

实施例12：3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷的制备，

照实施例5，将冰乙酸换成丙酸，其它条件不变，得3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷黄色粉末796mg。

实施例13：3-(4-Cl苯次甲基)-柚皮苷的制备，

照实施例5，将3,4-二甲氧基苯甲醛换成4-Cl苯甲醛，温度降为常温搅拌反应，反应时间为72h，其它条件不变，反应完毕,加入硅胶拌样，氯仿-甲醇梯度洗脱，得3-(4-Cl苯次甲基)-柚皮苷黄色粉末922 mg(cpd 7)。702.17[M-]，(calc.for：C₃₄H₃₅ClO₁₄)。

实施例14：3-(3,4,5-三甲氧基苯次甲基)-橙皮苷的制备，

照实施例4，将3,4-二甲氧基苯甲醛换成3,4,5-三甲氧基苯甲醛，反应时间为72h，其它条件不变，反应完毕,加入硅胶拌样，氯仿-甲醇梯度洗脱，得3-(3,4,5-三甲氧基苯次甲基)-橙皮苷黄色粉末786 mg(cpd 8)。788.25[M-]，(calc.for：C₃₈H₄₄O₁₈)。

下述实施例主要是对本发明所述的5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氢黄酮-7-O-糖苷，应用于抗炎、抗氧化食品、化妆品组合物及抗菌、抗肿瘤、心脑血管保护的药物的组合物的使用情况的说明。

实施例15：

本实施例的目的是测定其结构修饰产物后溶解度的变化，以橙皮苷、柚皮苷及其结构修饰产物为例说明。根据药典对极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、难溶的规定。取供实验化合物10mg，用移液枪或移液管加入不同溶剂，密闭超声20s，密闭放置1h后观察溶解现象，如果不溶，继续增加溶剂体积用量，重复上述操作记录溶液体积用量。根据药典规定，判断化合物溶解性能，见表1，

表1橙皮苷、甲基橙皮苷、柚皮苷及其结构修饰产物在不同溶剂中溶解度对照

说明：表1表明橙皮苷经过结构3-次甲基苯衍生物的结构修饰，新引入的D环，含有极性基团，如羟基、胺基，甲氧基等，增大了同溶剂的作用力；此外，因空间位阻作用，B、D环发生发生扭曲，共平面变差，结晶形成难度增加，显著增加了溶解性，溶解性能优良。当然，也给纯化带来困难，不易结晶来提纯。此外，含有羟基的苯甲醛与橙皮苷缩合，对橙皮苷一定的增溶作用，另其在水中、醇中、丙酮中有一定溶解度。

实施例16：

本实施方式的目的：是初步评价结构修饰产物对抗氧化能力的影响：采用DPPH法和Fenton反应法，以橙皮苷、柚皮苷及其结构修饰产物为例说明。

对DPPH·清除试验：DPPH·是一种稳定的自由基，其醇溶液呈深紫色，在517nm处有一吸收峰。反应系统中的自由基清除剂可以和DPPH的单电子配对而使A_517nm降低，因此，根据A_517nm的变化来检测自由基的清除情况，评价样品的抗氧化能力。甲基橙皮苷设置6个梯度的浓度，为5、10、15、20、25、30、60μg/mL的样品50％乙醇溶液，取2.0 mL样品，加人1.0mLDPPH甲醇溶液(3.0×10^-4 mol/L)，混合30min后在520nm处测定各样品吸光值(A_i)，每份样品平行操作3次，最后取其平均值。DPPH·自由基清除率K按公式计算：K(％)＝[1-(A_i-A_j)/Ac]×100式中：Ac为2.0 mL50％乙醇加入1.0mL DPPH甲醇溶液(3.0×10^-4 mol/L)混合后的吸光度，Aj为2.0mL样品加入1.0mL甲醇混合后的吸光度。待测样品简写不变，样品如下：橙皮苷、柚皮苷、cpd 1-8，结果见表2：

表2橙皮苷、甲基橙皮苷、柚皮苷及其结构修饰产物的抗DPPH·的能力

说明：清除DPPH·自由基的剂量，主要和供电子有关，增加双键，对抗氧化能力略有增加，增加能够和羰基共轭的羟基，胺基，可以显著提升抗氧化能力。如3,4-二羟基，抗氧化能力增加了近1倍。特别是随浓度增加，溶解度较大，共轭能力增加的，其抗氧化能力的优势更加明显。

对·OH清除试验：参照Fenton反应，利用H₂0₂，与Fe²+混合产生·OH，但·OH活性很高，存活时间短，在体系内加入水杨酸，能与·0H有效结合，产生有色化合物，在产物在510nm下有强吸收。若在体系中加入抗氧化物质，便会与水杨酸竞争·OH，从而使有色物质减少。在固定反应时间的前提下，向相同的反应体系(8.8mmo1/L的H₂0₂溶液2mL，9mmol/L的FeSO₄溶液2mL，9mo1/L的水杨酸-乙醇溶液2mL)加入不同浓度的甲基橙皮苷溶液2 mL。最后加H₂0₂开始反应，37℃反应0.5h，以蒸馏水为参比，与试剂的空白液做比对，在510 nm处测量各浓度下的吸光度，便能测定甲基橙皮苷溶液对·OH的清除作用，其清除率计算公式：清除率(％)＝[1-(Ax-Axo)/Ao]×100％式中：Ao为空白对照液的吸光度；Ax为加入样品溶液后的吸光度；Axo为不加显色剂H₂0₂样品溶液本底的吸光度。待测样品不变。结果见表3：

表3橙皮苷、甲基橙皮苷、柚皮苷及其结构修饰产物的抗·OH的能力

说明：从表3表明，橙皮苷、柚皮苷分子中引入供电子基，可以提高其清除自由基的能力，特别是3-(3,4-羟基苯次甲基)-柚皮苷、3-(3,4-羟基苯次甲基)-橙皮苷抗氧化能力远高于甲基橙皮苷，可以代替后者，可作为食品、药品、化妆品中抗氧剂。

实施例17

本实施例的目的：初步评价结构修饰产物对抗炎化能力的影响：采用二甲苯诱导小鼠耳肿胀实验法，以橙皮苷、柚皮苷及其结构修饰产物为例说明。

二甲苯诱导小鼠耳肿胀：取昆明种小鼠132只,按体重随机分为22组,每组6只,雌雄各半,即模型组(灌服0.5％CMC液0.4mL/20g)，阳性药组(萘普生45mg/kg)，橙皮苷、柚皮苷、cpd1-8化合物各为两组(分别灌服0.6％及0.3％药品)。以上各组小鼠每日给药1次/d,连续5 d,于末次给药后30min,于小鼠右耳前后两面均匀涂抹二甲苯50μL,右耳作对照,致炎后30min脱颈椎处死小鼠,以7mm直径打孔器取下耳缘左、右片,分别用电子天平称重,以左、右耳片重量差表示肿胀度,并计算抑制率(％)＝(模型组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/模型组平均肿胀度×100％。进行组间显著差比较实验结果见表4：

表4橙皮苷、柚皮苷衍生物对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的影响

与阴性组比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

说明，本发明所述黄酮类化合物，对抗炎化能力的影响显著。