一种红麻微卫星DNA标记指纹图谱及其应用的制作方法
本发明属于分子标记技术，具体涉及一种红麻微卫星DNA标记的指纹图谱及其应用。
背景技术：
红麻(Hibiscus cannabinus)是我国重要的天然韧皮纤维作物，主要在中国、泰国和印度种植。生产上栽培红麻染色体数均为2n=2X=36。红麻具有耐旱、耐盐碱、抗逆性强、根系发达、生长速度快、生物产量高、易栽培等特点，作为造纸和麻纺工业的原料，近年来在建材、可降解性塑料、吸污、饲料、麻油和药用等领域都有广泛的应用。
优质红麻品种在红麻单产和质量中的贡献率举足轻重。我国自20世纪20年代就开始红麻的种植，在70年代开始引种育种研究，先后推出了福红1号、福红2号、福红952和福红航992等，其中福红952以其高产、优质、多抗等特征成为我国红麻主产区品种审定的对照品种。
1999年我国签署了《国际植物新品种保护法》，这不仅要求我们尊重其它国家的品种知识产权，同时也要加强保护我们国家自己的品种知识产权，为了建立红麻品种登记制度来真正保护我国的品种产权，必须首先建立成熟的品种鉴定技术，为新品种登记奠定基础。就国内而言，由于20世纪地域间引种利用，红麻品种同种异名现象十分严重，地方品种遗传相似性高，传统的形态学和细胞学鉴定方法很难做到准确而真实的鉴定红麻的品种差别，为此需要在分子水平上进行分析鉴定。
DNA指纹图谱能够从DNA水平上鉴定出品种间的差异或遗传相似性。而微卫星（又称为简单重复序列，SSR）是由1-6个核苷酸组成的短序列串联重复多次而组成的一段DNA。由于微卫星中重复单元的重复次数不同，因而扩增出的微卫星序列的长度呈现多态性。微卫星序列具有多态性较高，重复性和稳定性好等特点，是十分有效的分子标记，被广泛应用于品种的指纹图谱构建等领域。
为了有效保护我国红麻的品种知识产权，有必要在我国开展红麻开发微卫星标记开发，并应用于红麻优良品种 “分子身份证”构建的研究。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种红麻微卫星DNA标记指纹图谱及其应用，该指纹图谱与常规形态学和细胞学检测相比，具有检测时间短，准确性高，重复性好的优点。
本发明提供了一种获取红麻微卫星DNA标记指纹图谱的专用引物，所述引物为64对SSR引物，其SSR引物序列如SEQ ID NO. 1-128所示。
本发明提供了一种红麻微卫星DNA标记指纹图谱，选用如表1所示的来自不同地区的24个红麻品种/系为供试材料.
表1 供试红麻种质资源的品种名称及来源
根据上述24个品种所建立的指纹图谱用数字表示为DNA fingerprint No. 1-24所示（表2）。其中，“1”代表图谱中某个位置上有扩增条带存在，而“0”代表图谱中某个位置上没有扩增条带存在。
表2 利用64对SSR引物构建24份红麻的指纹信息
其中，无条带的记为“0”，有条带的记为“1”。
64对引物产生的215个SSR标记：HcES001-750, HcES005-90, HcES007-250, HcES007-80, HcES008-150, HcES011-650, HcES011-250, HcES011-220, HcES012-850, HcES012-550, HcES012-300, HcES012-190, HcES012-140, HcES013-900, HcES013-850, HcES013-250, HcES013-220, HcES013-150, HcES013-120, HcES013-80, HcES014-900, HcES014-300, HcES014-180, HcES014-80, HcES015-160, HcES015-140, HcES020-500, HcES020-200, HcES020-140, HcES020-120, HcES021-150, HcES021-130, HcES021-120, HcES021-80, HcES029-450, HcES029-210, HcES029-120, HcES029-80, HcES030-210, HcES030-120, HcES030-90, HcES031-280, HcES031-250, HcES031-150, HcES032-280, HcES032-80, HcES034-600, HcES034-500, HcES034-240, HcES034-220, HcES034-150, HcES034-120, HcES037-190, HcES037-90, HcES037-80, HcES039-550, HcES039-180, HcES039-80, HcES041-900, HcES041-300, HcES041-150, HcES043-800, HcES043-650, HcES043-260, HcES043-120, HcES043-80, HcES044-400, HcES044-200, HcES045-220, HcES045-180, HcES045-120, HcES048-500, HcES048-260, HcES048-80, HcES049-180, HcES049-100, HcES049-80, HcES051-500, HcES051-240, HcES051-150, HcES054-220, HcES054-140, HcES054-80, HcES055-900, HcES055-800, HcES055-600, HcES055-550, HcES055-120, HcES055-90, HcES056-600, HcES056-550, HcES056-250, HcES056-120, HcES056-80, HcES059-80, HcES063-900, HcES063-600, HcES063-260, HcES063-140, HcES064-260, HcES064-120, HcES064-80, HcES067-190, HcES067-80, HcES070-350, HcES070-250, HcES070-220, HcES070-200, HcES070-150, HcES070-80, HcES071-300, HcES072-200, HcES072-180, HcES072-120, HcES072-100, HcES073-190, HcES073-180, HcES073-150, HcES073-140, HcES073-120, HcES073-110, HcES075-550, HcES075-280, HcES075-220, HcES075-200, HcES075-150, HcES075-120, HcES077-700, HcES077-80, HcES078-100, HcES078-80, HcES079-700, HcES079-400, HcES079-180, HcES079-140, HcES079-90, HcES079-80, HcES080-200, HcES080-150, HcES080-90, HcES085-500, HcES085-450, HcES085-380, HcES085-260, HcES085-220, HcES085-200, HcES086-150, HcES086-120, HcES086-100, HcES086-80, HcES087-550, HcES087-250, HcES090-250, HcES090-220, HcES090-180, HcES090-160, HcES090-140, HcES090-120, HcES090-100, HcES090-80, HcES091-700, HcES091-260, HcES091-140, HcES091-100, HcES091-80, HcES093-280, HcES093-160, HcES093-90, HcES093-80, HcEMS022-370, HcEMS022-310, HcEMS022-170, HcEMS022-160, HcEMS022-130, HcEMS023-550, HcEMS023-200, HcEMS023-180, HcEMS023-160, HcEMS023-150, HcEMS025-380, HcEMS025-190, HcEMS025-120, HcEMS025-80, HcEMS064-550, HcEMS064-200, HcEMS140-195, HcEMS140-70, HcEMS172-150, HcEMS177-170, HcEMS177-130, HcEMS183-120, HcEMS183-100, HcEMS183-95, HcEMS197-200, HcEMS197-180, HcEMS197-160, HcEMS200-210, HcEMS200-190, HcEMS200-100, HcEMS200-190, HcEMS201-260, HcEMS209-650, HcEMS209-280, HcEMS259-150, HcEMS343-300, HcEMS346-260, HcEMS394-550, HcEMS394-400, HcEMS394-270, HcEMS394-240, HcEMS408-330, HcEMS408-260, HcEMS408-230, HcEMS409-240, HcEMS409-200.
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
红麻基因组DNA的提取，SSR引物扩增与筛选，PCR扩增产物的电泳检测，条带分子量大小的测定及红麻微卫星DNA标记指纹图谱的构建。
具体步骤如下：
DNA提取：采用CTAB大量法提取红麻基因组DNA。
扩增：PCR所用到的引物如表3所示。PCR体系为10ul体系，即2.0ul 红麻DNA，1.0ul 10×TaqBuffer，0.8ul MgCl2，0.2ul dNTPs mixture，0.2ul Taq酶（2.5U），上下游引物各0.5ul 引物（ 引物浓度均为10 umol/L），5.3ul ddH2O，加10.0ul石蜡覆盖，离心混匀。
将配制好的PCR管放入PTC-1000 PCR 仪中进行反应。PCR程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸45s，10个循环，每个循环退火温度降低0.5℃；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸45s，35个循环；72℃延伸10min；4℃保存30℃。PCR扩增反应结束后，每管加入4ul 6×loading Buffer，离心混匀。
PCR扩增产物通过9%聚丙烯酰胺凝胶电泳，每管取7~8ul 扩增产物进行点样，每板胶电压约为200V，电流为100mA，功率不超过20W，电泳时间根据具体情况而定，一般为1.5h~2h。而后进行银染、显影，并做好标记。
表3 红麻新开发的64对SSR引物的编号及序列
数据统计与分析：根据扩增产物的聚丙烯凝胶电泳结果，采用0、1读带，无条带的记为“0”，有条带的记为“1”。每个引物扩增的结果根据片段大小形成不同的等位片段组合，得到0,1数据。SSR引物等位片段组合的0,1数字串作为每一个品种的数字指纹。
本发明的积极效果如下：
(1)分离并鉴定了215个适于红麻品种/系的指纹图谱构建的微卫星DNA标记，标记的编号为HcES001-750, HcES005-90, HcES007-250, HcES007-80, HcES008-150, HcES011-650, HcES011-250, HcES011-220, HcES012-850, HcES012-550, HcES012-300, HcES012-190, HcES012-140, HcES013-900, HcES013-850, HcES013-250, HcES013-220, HcES013-150, HcES013-120, HcES013-80, HcES014-900, HcES014-300, HcES014-180, HcES014-80, HcES015-160, HcES015-140, HcES020-500, HcES020-200, HcES020-140, HcES020-120, HcES021-150, HcES021-130, HcES021-120, HcES021-80, HcES029-450, HcES029-210, HcES029-120, HcES029-80, HcES030-210, HcES030-120, HcES030-90, HcES031-280, HcES031-250, HcES031-150, HcES032-280, HcES032-80, HcES034-600, HcES034-500, HcES034-240, HcES034-220, HcES034-150, HcES034-120, HcES037-190, HcES037-90, HcES037-80, HcES039-550, HcES039-180, HcES039-80, HcES041-900, HcES041-300, HcES041-150, HcES043-800, HcES043-650, HcES043-260, HcES043-120, HcES043-80, HcES044-400, HcES044-200, HcES045-220, HcES045-180, HcES045-120, HcES048-500, HcES048-260, HcES048-80, HcES049-180, HcES049-100, HcES049-80, HcES051-500, HcES051-240, HcES051-150, HcES054-220, HcES054-140, HcES054-80, HcES055-900, HcES055-800, HcES055-600, HcES055-550, HcES055-120, HcES055-90, HcES056-600, HcES056-550, HcES056-250, HcES056-120, HcES056-80, HcES059-80, HcES063-900, HcES063-600, HcES063-260, HcES063-140, HcES064-260, HcES064-120, HcES064-80, HcES067-190, HcES067-80, HcES070-350, HcES070-250, HcES070-220, HcES070-200, HcES070-150, HcES070-80, HcES071-300, HcES072-200, HcES072-180, HcES072-120, HcES072-100, HcES073-190, HcES073-180, HcES073-150, HcES073-140, HcES073-120, HcES073-110, HcES075-550, HcES075-280, HcES075-220, HcES075-200, HcES075-150, HcES075-120, HcES077-700, HcES077-80, HcES078-100, HcES078-80, HcES079-700, HcES079-400, HcES079-180, HcES079-140, HcES079-90, HcES079-80, HcES080-200, HcES080-150, HcES080-90, HcES085-500, HcES085-450, HcES085-380, HcES085-260, HcES085-220, HcES085-200, HcES086-150, HcES086-120, HcES086-100, HcES086-80, HcES087-550, HcES087-250, HcES090-250, HcES090-220, HcES090-180, HcES090-160, HcES090-140, HcES090-120, HcES090-100, HcES090-80, HcES091-700, HcES091-260, HcES091-140, HcES091-100, HcES091-80, HcES093-280, HcES093-160, HcES093-90, HcES093-80, HcEMS022-370, HcEMS022-310, HcEMS022-170, HcEMS022-160, HcEMS022-130, HcEMS023-550, HcEMS023-200, HcEMS023-180, HcEMS023-160, HcEMS023-150, HcEMS025-380, HcEMS025-190, HcEMS025-120, HcEMS025-80, HcEMS064-550, HcEMS064-200, HcEMS140-195, HcEMS140-70, HcEMS172-150, HcEMS177-170, HcEMS177-130, HcEMS183-120, HcEMS183-100, HcEMS183-95, HcEMS197-200, HcEMS197-180, HcEMS197-160, HcEMS200-210, HcEMS200-190, HcEMS200-100, HcEMS200-190, HcEMS201-260, HcEMS209-650, HcEMS209-280, HcEMS259-150, HcEMS343-300, HcEMS346-260, HcEMS394-550, HcEMS394-400, HcEMS394-270, HcEMS394-240, HcEMS408-330, HcEMS408-260, HcEMS408-230, HcEMS409-240, HcEMS409-200。
(2) 本发明提供的指纹图谱在所收集的国内外24个红麻品种（系）中具有特异性，具有良好的应用前景。与常规形态学检测相比，具有检测时间短，准确性高，重复性好的优点。指纹图谱分析结果如表2所示。
附图说明
图1:红麻品种k79的特征引物HcEMS140电泳扩增图。其中，M为100 bp marker。（每条电泳带代表SCS-11-06-1，Taihong，KO3-2，K79，IDN147，India S1，闽红312，福红4号，福红5号，T19，福红优2号选，福红优5号选，浙江 142-20，R2，ZH-01，Taihong Z，BG52-135，ID85，阿联红麻，722-3，NA126，Ecerglades41，赞引1号，金山无刺）。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步的说明，其目的仅在于更好理解本发明的内容而非限制本发明的保护范围。
实施例1红麻微卫星DNA标记指纹图谱的构建：按照上述表2中各材料各引物(64对SSR引物)扩增情况，绘制24个红麻品种(系)的DNA指纹图谱。在该DNA指纹图谱中，每个红麻品种(系)均有其特异的DNA指纹，可以把这24个品种(系)彼此区分开(见图1与表2)。24个品种(系)的名称、来源等见表1。
SEQUENCE LISTING
<110> 福建农林大学
<120> 一种红麻微卫星DNA标记指纹图谱及其应用
<130> 128
<160> 128
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
atatttgttt gatcacaccg tgt 23
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ccttatcagc gttcagggca 20
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
acgcggtaaa aacattggag a 21
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
tgcaaacgaa atgtggcgat 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
cgtgaggaag gttctgcgaa 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
ttttgcaata ccagggacga 20
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
cagaattcca gagcccttcg a 21
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
ggccccaacc cttcttcttt 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
gctaagctgg gtttctggga 20
<210> 10
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
cccaacagct tctattcact gc 22
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
ccccctccat ttgggtttct 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
aacccagcaa tcccttggtt 20
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
ggcaaaccct ccgagaagaa 20
<210> 14
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
ggaaacaaga gaaagaagcc gt 22
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
cgtgcatgtc gtgaaatccg 20
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
attacaaagt gggcaggcga 20
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 17
tgggaaaggg attggaacca 20
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
acaattccgt caccacctcc 20
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 19
cacgtgtgac cacagagcta 20
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 20
aacaaaacat gcagctcccg 20
<210> 21
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 21
caccctccat atgccaccaa 20
<210> 22
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 22
atctgcaagc caagggtctc 20
<210> 23
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 23
acgcccagaa aaatcaagct c 21
<210> 24
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 24
tggaagcgtt ggagaagctt 20
<210> 25
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 25
aagcatgatc cagtcgcaca 20
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 26
accatatagc aacctggcgg 20
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 27
agcttgtaca cgatgtggaa 20
<210> 28
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 28
ctggtgattg gctttgtgca 20
<210> 29
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 29
aaacgcagaa agccgtaaaa a 21
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 30
cgttggacct cacactctcc 20
<210> 31
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 31
agttaaagca taggagagaa agtga 25
<210> 32
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 32
ccaagggcaa ggagactgag 20
<210> 33
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 33
ctgcatgcta cagcgttgtg 20
<210> 34
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 34
tcgggcttcc ttttcccttc 20
<210> 35
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 35
ccattgcgag cattgagtgg 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 36
gcttcgattg ctgcacttca 20
<210> 37
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 37
atccaatcca atccaaactc ct 22
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 38
tcaggtataa gtcggggcgt 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 39
tgacaaagtg ccgaggaaca 20
<210> 40
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 40
agtgccattt tactccttgg ga 22
<210> 41
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 41
acaaattata cccttagtca aaatcca 27
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 42
acaacaactg taccagcggt 20
<210> 43
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 43
gaatctgccc acccagcata 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 44
gtgtggtctc gttcgttcct 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 45
ggctattgca ccgtttagcg 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 46
gcctccatct ttgccctcaa 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 47
tgagaccatc aattatctct agacgg 26
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 48
agctggctca ttatcttcgg a 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 49
acaaaaccag aggacgaagg a 21
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 50
tgaactgcct ggctacttgg 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 51
attcctcgcg atccgttctc 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 52
gaggcgggga gaatcgattt 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 53
tggcggggtt tgcttagaat 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 54
tgatcgcccg attgtttcca 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 55
agtgcaattg gttgggatag a 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 56
cttgagtggt gttaccccac a 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 57
gaaaaacgtc gtcgcaccaa 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 58
aaggggcttg tatcgatggc 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 59
agttgggatc tgctgacacg 20
<210> 60
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 60
ctgaaccgaa atcaaggcac a 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 61
ccactagaag tttatcgttg gcc 23
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 62
agagtatgtg cacgggaagc 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 63
acccctcact tcccctgatt 20
<210> 64
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 64
atgtaaaccc cgctcgttgt 20
<210> 65
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 65
aggctgttgc tgagctgaat 20
<210> 66
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 66
cgccgttagc aatagcaacc 20
<210> 67
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 67
cagctgaccc tgcatcttga 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 68
taacatagcc ggagcagcag 20
<210> 69
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 69
tcattaaacc aggccaccgt 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 70
tgcttctact ttagcaaaac cact 24
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 71
ccctgtcctc ccacttgaaa 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 72
ccagccgacg acacgatatt 20
<210> 73
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 73
caggaaggaa atgggcagga 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 74
atcgaccgaa actcgagagc 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 75
agattgtcga cgtagcgaat 20
<210> 76
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 76
tagagcagga acaacagccg 20
<210> 77
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 77
acggcattcc atcccatgaa 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 78
catcgatgca ggaatgtcgc 20
<210> 79
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<212> DNA
<213> 人工序列
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cgagactcgg attgaagggt 20
<210> 80
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 80
agggtagaag gtggaggcat 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 81
tcgcttgacc gaggagtttc 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 82
ccggctctcc ctaaatggtc 20
<210> 83
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 83
agccatccca ttgcaagaca 20
<210> 84
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 84
tcactgcatc acccttccaa 20
<210> 85
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 85
ggggtaaagc tcgggtcttt 20
<210> 86
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 86
tggtgtccat ctagctccca 20
<210> 87
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 87
cctctgatgc atccgcttct 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 88
atctccaggg tgttgcgttt 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 89
aaaagtccac tccgtcgtcg 20
<210> 90
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 90
accaagaatc ccaaacccca 20
<210> 91
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 91
catgaaagcg aaggcagcaa 20
<210> 92
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 92
acttctcagc atttccgaga gt 22
<210> 93
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 93
cggtgttctg cggtaaaagc 20
<210> 94
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 94
tcgtcgtgca tcaaagctct 20
<210> 95
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 95
tggcgggaaa atgagggaaa 20
<210> 96
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 96
agaagaaatc ccagggaaag aaaga 25
<210> 97
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 97
cgtgcaccaa acagacaagg 20
<210> 98
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 98
aacagccccc attgtggaaa 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 99
acacagaggg gagtgaatat ga 22
<210> 100
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 100
cgcgatcgat ggctacagat 20
<210> 101
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 101
gatgcccaca gctttgcaat 20
<210> 102
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 102
tgttaagtca cttgaaagtt cagg 24
<210> 103
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 103
gggagacttg gtccagttcc 20
<210> 104
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 104
tcttcacccc cacaaaagca 20
<210> 105
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 105
atacgatagc ccgccagagg 20
<210> 106
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 106
atcgtggggg taacacttgg 20
<210> 107
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 107
gcttgaaagg gattggtgcg 20
<210> 108
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 108
agcaatgaaa ccggaaaagg a 21
<210> 109
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 109
aatcaagcaa tgccccttgc 20
<210> 110
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 110
aaccatgaag gcggacaatg 20
<210> 111
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 111
cccgacactt gaccattcca 20
<210> 112
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 112
cacgagaact gcttcaacgc 20
<210> 113
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 113
cgttcacagt aatggcgttc a 21
<210> 114
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 114
tgcaaaaggt tttggtggca 20
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 115
tgtccaagtc atatgaagcc ct 22
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 116
agagccggag aggaggaatt 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
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ctcgttacag aagtggtcaa aca 23
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 118
tggtacaagt ctcccagcat g 21
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 119
tgcccgcgat cataaactca 20
<210> 120
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 120
gtaaacccgg agctagaccc 20
<210> 121
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 121
catgctacag atcggtaccg t 21
<210> 122
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 122
ttgatgcagt tccaccccaa 20
<210> 123
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 123
ggtttgggtg gtcgtagagg 20
<210> 124
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 124
gcaccaactg aattgtagcc a 21
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 125
aacaccccga gtacgttcac 20
<210> 126
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 126
agccatgctc tgcttctctt 20
<210> 127
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 127
aacatctgcc atctgctgct 20
<210> 128
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 128
gttggtgggg gttggttttg 20
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