本发明涉及一种马泡瓜提取物的制备方法，属于植物提取
技术领域：
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背景技术：
：马泡瓜，又称马宝、小野瓜、小马泡，属于葫芦科黄瓜属，是北方地区普遍生长的一种野生植物。马泡瓜有香有甜，有酸有苦，瓜皮颜色有青的，白的，有带青条的。种子淡黄色，扁平，长椭园形，表面光滑，种仁白色。在过去，马泡瓜被人民当作杂草，锄之唯恐不尽，但是自从搞野生植物综合利用以后，发现马泡瓜是一种一物能自够多用、经济价值高的野生植物，特别是种子里含有大量的油分，可榨油，是一种很好的，极有发展前途的油料作物。中国专利公开号为CN104531340A专利公开了一种马泡籽油提取方法：取秋后发黄的马泡瓜，将果皮内浆汁挤压出来，剔除浆肉，将马泡籽放置在阳光下晾晒，碎过30目筛体，加入乙醇浸提，将浸提液用CO2萃取法进行萃取，得到所述马泡籽油。该提取方法提取率偏低，而且马泡瓜中的许多有效成分未能保留如维生素E、糖类物质等。技术实现要素：针对上述现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提出了一种马泡瓜提取物的制备方法。一种马泡瓜提取物的制备方法，包括以下步骤：1)将风干的马泡瓜果实洗净、消毒，粉碎成100～120目，并在60℃条件下干燥15～20min后，依次加入马泡瓜果实干燥后重量0.02～0.04％的盐酸溶液和5～8倍的60～80％乙醇搅拌，搅拌5～8min后用胶体磨研磨30～40min；2)将步骤1)所得的料液保持在温度40～50℃，并调节pH为4～6，同时加入占马泡瓜果实干燥后重量0.1～0.3％的复合酶酶解2～3h，其中，复合酶是由2～4重量份纤维素酶和1～3重量份果胶酶混合而成；3)将步骤2)所得的酶解液于90～100℃保持6～9min灭菌后，置于超声频率30～50kHz，温度30～40℃下进行超声提取，提取10～15min，过滤，得到滤液1和滤渣1，备用；4)在步骤3)所得的滤渣1中加入滤渣1重量6～8倍的70～80％乙醇搅拌，搅拌10～15min后用胶体磨研磨30～40min，并置于600～700W下进行微波提取，提取3～5min后加热到80～90℃，回流提取1～2h，过滤，得到滤液2和滤渣2，备用；5)在步骤4)所得的滤渣2中加入滤渣2重量6～8倍的水搅拌，搅拌20～25min后用胶体磨研磨40～60min，并加热到90～100℃，回流提取40～60min，过滤，得到滤液3，备用；6)合并滤液1、2、3，并将滤液置于4000～5000转/min的离心机上离心5～10min，过滤，得到马泡瓜提取液1，备用；7)先将占马泡瓜提取液10.3～0.5重量份的聚乙二醇加热50～60℃，至全部熔融，冷却到室温，然后依次加入0.2～0.4重量份的明胶、0.03～0.05重量份的壳聚糖和步骤6)所得的马泡瓜提取液1搅拌均匀，最后静置2～4h，过滤除去沉淀，得到马泡瓜提取液2，备用；8)将步骤7)所得的马泡瓜提取液2依次通过孔径为0.1～1μm的微滤膜、孔径为0.01～0.2μm的超滤膜进行纯化，得到马泡瓜提取液3，备用；9)将步骤8)所得的马泡瓜提取液3通过聚酰胺柱层析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分别用20～30％乙醇水溶液、40～60％乙醇水溶液洗柱，收集40～60％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即可得到马泡瓜提取物。进一步，步骤2)中，将步骤1)所得的料液保持在温度45℃，并调节pH为5，同时加入占马泡瓜果实干燥后重量0.2％的复合酶酶解2.5h，其中，复合酶是由3重量份纤维素酶和2重量份果胶酶混合而成。进一步，步骤4)中，在步骤3)所得的滤渣1中加入滤渣1重量7倍的75％乙醇搅拌，搅拌12min后用胶体磨研磨35min，并置于700W下进行微波提取，提取4min后加热到85℃，回流提取1.5h，过滤，得到滤液2和滤渣2，备用。进一步，步骤9)中，将步骤8)所得的马泡瓜提取液3通过聚酰胺柱层析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分别用25％乙醇水溶液、50％乙醇水溶液洗柱，收集50％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即可得到马泡瓜提取物。与现有技术相比，本发明的有益效果是：1、本发明采用胶体磨研磨、纤维素酶和果胶酶酶解技术、超声提取技术、微波提取技术、乙醇回流以及滤膜和聚酰胺柱纯化技术等，使马泡瓜保留许多有效成分如油类物质、维生素E和糖类物质等，且能提高马泡瓜有效成分的提取率和效率。其中，多次胶体磨研磨，提高了细胞破碎率，且粒度均匀，从而提高提取效率；滤膜和聚酰胺柱纯化技术，提高了除杂率，从而提高提取物纯化率。2、本发明采用整个马泡瓜的果实(包括果皮、果肉、籽)来提取马泡瓜，使马泡瓜提取物的有效成分更加丰富，同时达到了合理利用原料的目的，避免浪费。3、本发明在马泡瓜提取液中加入聚乙二醇、明胶和壳聚糖，减少了马泡瓜提取物中油类物质、维生素E和糖类物质等有效成分因氧化、挥发等因素而导致的损失，同时，也延长了马泡瓜提取物的贮存期。具体实施方式实施例1一种马泡瓜提取物的制备方法，包括以下步骤：1)将风干的马泡瓜果实洗净、消毒，粉碎成120目，并在60℃条件下干燥18min后，依次加入马泡瓜果实干燥后重量0.03％的盐酸溶液和7倍的70％乙醇搅拌，搅拌7min后用胶体磨研磨35min；2)将步骤1)所得的料液保持在温度45℃，并调节pH为5，同时加入占马泡瓜果实干燥后重量0.2％的复合酶酶解2.5h，其中，复合酶是由3重量份纤维素酶和2重量份果胶酶混合而成；3)将步骤2)所得的酶解液于95℃保持8min灭菌后，置于超声频率40kHz，温度35℃下进行超声提取，提取12min，过滤，得到滤液1和滤渣1，备用；4)在步骤3)所得的滤渣1中加入滤渣1重量7倍的75％乙醇搅拌，搅拌12min后用胶体磨研磨35min，并置于700W下进行微波提取，提取4min后加热到85℃，回流提取1.5h，过滤，得到滤液2和滤渣2，备用；5)在步骤4)所得的滤渣2中加入滤渣2重量7倍的水搅拌，搅拌22min后用胶体磨研磨50min，并加热到95℃，回流提取50min，过滤，得到滤液3，备用；6)合并滤液1、2、3，并将滤液置于5000转/min的离心机上离心8min，过滤，得到马泡瓜提取液1，备用；7)先将占马泡瓜提取液10.4重量份的聚乙二醇加热55℃，至全部熔融，冷却到室温，然后依次加入0.3重量份的明胶、0.04重量份的壳聚糖和步骤6)所得的马泡瓜提取液1搅拌均匀，最后静置3h，过滤除去沉淀，得到马泡瓜提取液2，备用；8)将步骤7)所得的马泡瓜提取液2依次通过孔径为1μm的微滤膜、孔径为0.2μm的超滤膜进行纯化，得到马泡瓜提取液3，备用；9)将步骤8)所得的马泡瓜提取液3通过聚酰胺柱层析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分别用25％乙醇水溶液、50％乙醇水溶液洗柱，收集50％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即可得到马泡瓜提取物。实施例2一种马泡瓜提取物的制备方法，包括以下步骤：1)将风干的马泡瓜果实洗净、消毒，粉碎成100目，并在60℃条件下干燥15min后，依次加入马泡瓜果实干燥后重量0.02％的盐酸溶液和5倍的60％乙醇搅拌，搅拌5min后用胶体磨研磨30min；2)将步骤1)所得的料液保持在温度40℃，并调节pH为4，同时加入占马泡瓜果实干燥后重量0.1％的复合酶酶解2h，其中，复合酶是由2重量份纤维素酶和1重量份果胶酶混合而成；3)将步骤2)所得的酶解液于90℃保持6min灭菌后，置于超声频率30kHz，温度30℃下进行超声提取，提取10min，过滤，得到滤液1和滤渣1，备用；4)在步骤3)所得的滤渣1中加入滤渣1重量6倍的70％乙醇搅拌，搅拌10min后用胶体磨研磨30min，并置于600W下进行微波提取，提取3min后加热到80℃，回流提取1h，过滤，得到滤液2和滤渣2，备用；5)在步骤4)所得的滤渣2中加入滤渣2重量6倍的水搅拌，搅拌20min后用胶体磨研磨40min，并加热到90℃，回流提取40min，过滤，得到滤液3，备用；6)合并滤液1、2、3，并将滤液置于4000转/min的离心机上离心5min，过滤，得到马泡瓜提取液1，备用；7)先将占马泡瓜提取液10.3重量份的聚乙二醇加热50℃，至全部熔融，冷却到室温，然后依次加入0.2重量份的明胶、0.03重量份的壳聚糖和步骤6)所得的马泡瓜提取液1搅拌均匀，最后静置2h，过滤除去沉淀，得到马泡瓜提取液2，备用；8)将步骤7)所得的马泡瓜提取液2依次通过孔径为0.1μm的微滤膜、孔径为0.01μm的超滤膜进行纯化，得到马泡瓜提取液3，备用；9)将步骤8)所得的马泡瓜提取液3通过聚酰胺柱层析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分别用20％乙醇水溶液、40％乙醇水溶液洗柱，收集40％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即可得到马泡瓜提取物。实施例3一种马泡瓜提取物的制备方法，包括以下步骤：1)将风干的马泡瓜果实洗净、消毒，粉碎成120目，并在60℃条件下干燥20min后，依次加入马泡瓜果实干燥后重量0.04％的盐酸溶液和8倍的80％乙醇搅拌，搅拌8min后用胶体磨研磨40min；2)将步骤1)所得的料液保持在温度50℃，并调节pH为6，同时加入占马泡瓜果实干燥后重量0.3％的复合酶酶解3h，其中，复合酶是由4重量份纤维素酶和3重量份果胶酶混合而成；3)将步骤2)所得的酶解液于100℃保持9min灭菌后，置于超声频率50kHz，温度40℃下进行超声提取，提取15min，过滤，得到滤液1和滤渣1，备用；4)在步骤3)所得的滤渣1中加入滤渣1重量8倍的80％乙醇搅拌，搅拌15min后用胶体磨研磨40min，并置于700W下进行微波提取，提取5min后加热到90℃，回流提取2h，过滤，得到滤液2和滤渣2，备用；5)在步骤4)所得的滤渣2中加入滤渣2重量8倍的水搅拌，搅拌25min后用胶体磨研磨60min，并加热到100℃，回流提取60min，过滤，得到滤液3，备用；6)合并滤液1、2、3，并将滤液置于5000转/min的离心机上离心10min，过滤，得到马泡瓜提取液1，备用；7)先将占马泡瓜提取液10.5重量份的聚乙二醇加热60℃，至全部熔融，冷却到室温，然后依次加入0.4重量份的明胶、0.05重量份的壳聚糖和步骤6)所得的马泡瓜提取液1搅拌均匀，最后静置4h，过滤除去沉淀，得到马泡瓜提取液2，备用；8)将步骤7)所得的马泡瓜提取液2依次通过孔径为1μm的微滤膜、孔径为0.2μm的超滤膜进行纯化，得到马泡瓜提取液3，备用；9)将步骤8)所得的马泡瓜提取液3通过聚酰胺柱层析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分别用30％乙醇水溶液、60％乙醇水溶液洗柱，收集60％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即可得到马泡瓜提取物。另外，申请人对实施例1～3和
背景技术：
(CN104531340A)制备的提取物进行油类物质测定，测定结果如表1所示。表1提取物的油类物质测定结果类型油类物质得率(％)实施例117.2实施例215.6实施例316.0
背景技术：
8.2当然，上面只是本发明优选的具体实施方式作了详细描述，并非以此限制本发明的实施范围，凡依本发明的原理、构造以及结构所作的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围内。当前第1页1 2 3