一种高纯度大蒜三硫二丙烯的制备方法与流程

本发明涉及大蒜油的提纯方法领域，具体涉及一种高纯度大蒜三硫二丙烯的制备方法。

背景技术：

大蒜三硫二丙烯是大蒜的主要活性成分，来源于百合科葱属植物大蒜（Allium sativum L）的地下鳞茎。它的杀菌作用在高等植物中最强，能够杀灭很多病源菌及人体内的寄生虫，在西欧被称为“天然盘尼西林”；具有较强的抗癌效果；还可以增加血浆中胰岛素的含量，降低血糖水平，被科学家誉为植物黄金。大蒜素注射液为国家食品药品监督管理局通报的高风险品种之一，引起不安全的因素主要是含有二硫二丙烯等易降解的杂质；工业生产中也有合成大蒜三硫二丙烯，但其中含有的氯丙烯等杂质很难除去，不应代替天然大蒜三硫二丙烯入药。

对于大蒜三硫二丙烯的提取工艺，孙淑爱，胡秀沂，刘丽梅等分别用水蒸汽蒸馏的方法进行了提取；李瑜，梁永清，杨锐，李志东等人分别采用不同的溶剂进行了萃取研究；彭力宏和毕艳红等人分别研究过用超临界CO₂萃取及分子蒸馏技术提取大蒜三硫二丙烯；H.B. Sowbhagya等人用酶辅助法提取过大蒜三硫二丙烯。用这些方法分离得到的大蒜三硫二丙烯纯度均相对较低。

专利105461604A用固相萃取技术对大蒜素进行了纯化，该专利存在以下问题：国家药品标准中大蒜素【性状】项下规定：“本品能与无水乙醇或氯仿混溶，在水中几乎不溶”，该专利采用冷水溶解提取大蒜素，提取的物质可能是蒜氨酸，与本专利目标化合物不同；再者，纯化时洗脱液为甲醇-水，得到的大蒜素含有较多甲醇，不适合医用。

技术实现要素：

本发明提出了一种高纯度大蒜三硫二丙烯制备方法，解决了大蒜三硫二丙烯纯度低、不适合医用、去除大蒜二硫二丙烯等杂质的问题，且制备的产品中不含有甲醇残留。

实现本发明的技术方案是：一种高纯度大蒜三硫二丙烯制备方法，步骤如下：

（1）大蒜去皮粉碎、置于空气中10-15分钟，采用水蒸汽蒸馏技术提取大蒜挥发油，蒸馏时间为30-45分钟；

（2）将步骤（1）中的大蒜挥发油加入到C₁₈或C₈色谱柱中，用体积比为60~90%的甲醇-水溶液洗脱，得到大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液；

（3）用HPLC法检测步骤（2）中得到的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液的纯度，将纯度大于90%的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液收集起来；

（4）用注射用大豆油或玉米油分三次萃取步骤（3）收集的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液，得到大蒜三硫二丙烯油溶液；

（5）用水对步骤（4）得到的大蒜三硫二丙烯油溶液进行萃取，萃取三次，得到不含甲醇的大蒜三硫二丙烯油溶液。

所述步骤（1）中水蒸汽蒸馏技术为：向粉碎的大蒜中加入三倍量的蒸馏水，用挥发油提取装置加热至沸腾，收集馏出物大蒜挥发油。

所述步骤（3）中HPLC法检测色谱条件为：

流动相为甲醇：水：甲酸=80：20：0.1；色谱柱为Hypersil-ODS(5µm，250mm×4.6mm)；柱温为室温；流速为1ml/min；UV检测波长为252 nm；进样量为10µl。

步骤（3）浓度低于90%的部分另外收集，重复步骤（2），（3）的操作，直到大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液的浓度高于90%。

所述步骤（4）中大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液与注射用大豆油或玉米油的体积比为10-20。

所述步骤（5）中用水的用量为步骤（4）中注射用大豆油或玉米油体积的5~10倍。

对最终制备的三硫二丙烯利用GC检测，参考《中国药典》（2015版，第四部 0871，采用乙醇做溶剂）GC色谱条件：空气流速：400ml/min，氢气和氮气流速：40ml/min；色谱柱：TG-WAXMS（30m×0.32mm，0.5μm）；气化室温度：100℃，柱温：50℃维持1min，20℃/min升至150℃，检测器温度：200℃。分流比：50：1。

本发明的有益效果是：本法中选择的色谱条件能够将大蒜三硫二丙烯与大蒜二硫二丙烯等杂质很好的分离，降低大蒜二硫二丙烯的含量，且最终制备的产品中不含甲醇残留。本方法可为油针剂或其它制剂提供纯度较高的天然大蒜油，本发明也适合合成大蒜三硫二丙烯中氯丙烯的去除，本发明制备的高纯度的三硫二丙烯适合医用。

附图说明

图1是实施例1中大蒜素对照品HPLC图（保留时间10.886 min）；

图2是实施例1步骤（4）萃取后甲醇-水溶液的HPLC图，

图3是实施例1中甲醇对照溶液GC图（保留时间3.902 min的峰为甲醇）；

图4是实施例1步骤（5）制备的大蒜三硫二丙烯油溶液GC图；

图5是纯度检查HPLC色谱图。

具体实施方式

实施例1

本实施例中高纯度大蒜三硫二丙烯制备方法如下：

（1）大蒜去皮粉碎，置于空气中10分钟，采用水蒸汽蒸馏技术提取大蒜油，直接让粉碎的大蒜与三倍质量的水混合，用挥发油提取装置加热至沸腾，收集大蒜挥发油，蒸馏时间为30分钟；

（2）将步骤（1）中的大蒜挥发油加入到C₁₈色谱柱中，用体积比为60%的甲醇-水溶液洗脱，得到大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液；

（3）用HPLC法检测步骤（2）中得到的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液的纯度，将纯度大于90%的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液收集起来；将检测到的纯度低于90%的三硫二丙烯的甲醇-水溶液另外收集，重复步骤2的操作；

HPLC法色谱条件：流动相为甲醇：水：甲酸=80：20：0.1，色谱柱为Hypersil-ODS(5 µm，250 mm × 4.6 mm)，柱温为室温，流速为1ml/min，UV检测波长为252 nm，进样量为10 µl；

（4）用注射用大豆油分三次萃取步骤（3）收集的三硫二丙烯的甲醇-水溶液，大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液与注射用大豆油或玉米油的体积比为10-20倍，得到大蒜三硫二丙烯油溶液，利用HPLC检测，萃取三次后甲醇-水中几乎无大蒜三硫二丙烯，色谱图如图1、2所示；

（5）用水对步骤（4）得到的大蒜三硫二丙烯油溶液进行萃取，水的用量为注射用大豆油体积的5~10倍，萃取三次，得到大蒜三硫二丙烯溶液。

对步骤（5）得到的大蒜三硫二丙烯溶液进行GC检测，对照品溶液（分析甲醇配制的乙醇溶液）和大蒜三硫二丙烯的浓度均参考《中国药典》（2015版，第四部0871，采用乙醇做溶剂）GC色谱条件：空气流速：400ml/min，氢气和氮气流速：40ml/min；色谱柱：TG-WAXMS（30m×0.32mm，0.5μm）；气化室温度：100℃，柱温：50℃维持1min，20℃/min升至150℃，检测器温度：200℃，分流比为50：1。

检测结果见图3和图4，从图中可以看出得到的大蒜三硫二丙烯溶液中无甲醇残留；从图5可看出，所得大蒜三硫二丙烯的纯度超过92%。

实施例2

本实施例中高纯度大蒜三硫二丙烯制备方法如下：

（1）大蒜去皮粉碎，置于空气中12分钟，采用水蒸汽蒸馏技术提取大蒜油，直接让粉碎的大蒜与三倍质量的水混合，用挥发油提取装置加热至沸腾，收集大蒜挥发油，蒸馏时间为40分钟；

（2）将步骤（1）中的大蒜挥发油加入到C₈色谱柱中，用体积比为80%的甲醇-水溶液洗脱，得到大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液；

（3）用HPLC法检测步骤（2）中得到的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液的纯度，将纯度大于90%的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液收集起来；将检测到的纯度低于90%的三硫二丙烯的甲醇-水溶液另外收集，重复步骤2的操作；

HPLC色谱条件：流动相为甲醇：水：甲酸=80：20：0.1，色谱柱为Hypersil-ODS(5 µm，250 mm × 4.6 mm)，柱温：室温，流速：1ml/min，UV检测波长：252 nm，进样量：10 µl；

（4）用注射玉米油分三次萃取步骤（3）收集的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液，大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液与注射用大豆油或玉米油的体积比为15倍，得到大蒜三硫二丙烯油溶液，利用HPLC检测，萃取三次后水中几乎无大蒜三硫二丙烯；

（5）用水对步骤（4）得到的大蒜三硫二丙烯油溶液进行萃取，水的用量为注射用大豆油体积的10倍，萃取三次，得到大蒜三硫二丙烯溶液。

对步骤（5）得到的三硫二丙烯溶液进行GC检测，检测方法同实施例1，结果显示无甲醇残留，终产物中大蒜三硫二丙烯的纯度超过90%。

实施例3

本实施例中高纯度大蒜三硫二丙烯制备方法如下：

（1）大蒜去皮粉碎，置于空气中15分钟，采用水蒸汽蒸馏技术提取大蒜油，直接让粉碎的大蒜与三倍质量的水混合，用挥发油提取装置加热至沸腾，收集大蒜挥发油，蒸馏时间为45分钟；

（2）将步骤（1）中的大蒜油加入到C₁₈色谱柱中，用体积比为90%的甲醇-水溶液洗脱，得到三硫二丙烯的甲醇-水溶液；

（3）用HPLC法检测步骤（2）中得到的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液的纯度，将纯度大于90%的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液收集起来；将检测到的纯度低于90%的三硫二丙烯的甲醇-水溶液另外收集，重复步骤2的操作；

HPLC色谱条件：流动相为甲醇：水：甲酸=80：20：0.1，色谱柱为Hypersil-ODS(5 µm，250 mm × 4.6 mm)，柱温：室温，流速：1ml/min，UV检测波长：252 nm，进样量：10 µl；

（4）用注射玉米油分三次萃取步骤（3）收集的三硫二丙烯的甲醇-水溶液，注射用大豆油的的体积为三硫二丙烯的甲醇-水溶液的100倍，得到大蒜三硫二丙烯油溶液，利用HPLC检测，萃取三次后水中几乎无大蒜三硫二丙烯；

（5）用水对步骤（4）得到的大蒜三硫二丙烯油溶液进行萃取，水的用量为注射用大豆油体积的10倍，萃取三次，得到大蒜三硫二丙烯溶液。

对步骤（5）得到的三硫二丙烯溶液进行GC检测，检测方法同实施例1，结果显示无甲醇残留，终产物中大蒜三硫二丙烯的纯度超过90%。