本发明涉及医药化工领域，具体涉及一种高纯度GCG的制备方法。
背景技术：
表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶叶中的主要儿茶素之一，作为天然抗氧化剂和自由基清除剂，具有明显的抗衰老、抗突变、防癌抗癌、预防心血管疾病、防辐射等多种生物学活性，广泛运用于食品加工、医药保健和日用化工领域。然而，由于其超强的氧化及结构特性，EGCG也极易受到环境因素的影响，如在空气中极易氧化，碱中极易分解，在高温条件下稳定性差，等等。
没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)是EGCG的一种同分异构体，其在天然绿茶之中存在量非常少，很难直接从绿茶中直接得到纯度很高的GCG，进而限制了其应用研究的进展。不难理解，目前对于GCG的研究还是很少，绝大部分研究集中在其异构体EGCG为主。
EGCG研究过程中发现，通过一些特定的条件来处理，能够将EGCG有效地转化成GCG，再通过一系列纯化技术，最终得到纯度高的GCG样品，并初步发现以GCG构型存在的形式下，其稳定性好，更有利于该品种的开发与应用。
技术实现要素：
发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种高纯度GCG的制备方法，通过该制备方法可以得到高纯度GCG，工艺简捷，操作方便，完全能够满足于工业化生产要求。
技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述的一种高纯度GCG的制备方法，包括如下步骤：
(1)以EGCG为原料，加入溶剂溶解后，转移到恒温搅拌器，控制温度在60-100℃中反应4-6天得反应液A，放冷备用；
(2)将反应液A在60-100℃浓缩处理至水溶液，放冷，加入乙酸乙酯进行萃取，合并水液，在60-100℃继续浓缩除去残留的乙酸乙酯，得溶液B，放冷备用；
(3)取溶液B，逐渐加入到装有大孔吸附树脂的层析柱内，依次用水和不同体积分数的乙醇进行梯度洗脱，每个梯度洗脱2-10个柱体积并分别接收各部分洗脱液，选取含有目标成分的洗脱液，浓缩至无醇味，得浓缩液C，备用；
(4)取浓缩液C，加入正丁醇进行萃取，合并正丁醇溶液，在60-100℃浓缩至浸膏，加入水在60-100℃溶解至清，放冷至析晶完全，过滤烘干并粉碎，即得高纯度的GCG粉末。
作为优选，步骤(1)所述EGCG的HPLC纯度≥50％。
作为优选，步骤(1)所述溶剂选自纯化水、甲醇、乙醇或醋酸中的至少一种，原料与溶剂的重量体积比为1：(5-20)g/ml。
作为优选，步骤(2)所述加入乙酸乙酯进行3-5次萃取，每次加入的乙酸乙酯与反应液A体积比为0.2-2。
作为优选，步骤(2)所述溶液B与原料体积重量比为(5-20):1ml/g。
作为优选，步骤(3)所述树脂型号为HPD-100、HPD-200、HPD-400、HPD-826中的至少一种。
作为优选，步骤(3)所述不同体积分数的乙醇为5-20％乙醇、30-40％乙醇和50-90％乙醇。
作为优选，步骤(4)所述加入正丁醇进行3-5次萃取，每次加入的正丁醇与浓缩液C体积比为0.2-2。
步骤(4)所述水与浸膏的体积重量比为(0.5-10)：1ml/g。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1、本发明借助恒温搅拌器对EGCG原料进行处理，操作安全简便，反应温度适中，不仅避免了因温度过高而导致EGCG部分降解为其他非目标成分，而且还保证了构型转化的充分性。
2、本发明充分利用了EGCG、EC、ECG等儿茶素类成分与GCG在乙酸乙酯及水中溶解性的差异，通过乙酸乙酯萃取技术，调节萃取剂比例，并控制目标成分浓度，能够将大部分的儿茶素杂质成分有效分离到乙酸乙酯层，而将GCG保留在水溶液中，从而达到高效分离纯化的目的。
3、本发明还应用了大孔树脂技术对目标成分进行纯化，不仅去除了绝大部分色素，还通过不同的洗脱梯度，将目标成分纯度进一步提高。
4、本发明所涉及的方法可以以等效方式进行放大，工艺简捷，操作方便，完全能够满足于工业化生产要求。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
(1)称取HPLC纯度为55％的EGCG粉末50g为原料，加入10％甲醇1000ml溶解后，转移到80℃恒温搅拌器水浴中，共反应5天，得反应液A，放冷备用；
(2)将反应液A在70℃浓缩处理至无醇味水溶液，放冷后加入乙酸乙酯进行3萃取，每次加入的乙酸乙酯与反应液A体积比为0.5，合并水液，在70℃继续浓缩除去残留的乙酸乙酯，补纯化水使最终溶液总体积为500ml，得溶液B，放冷备用；
(3)取溶液B，逐渐加入到装有1000g大孔吸附树脂的层析柱内(树脂型号为HPD-100与HPD-400按质量1:1混合)，依次用水、20％乙醇、40％乙醇和60％乙醇进行梯度洗脱，每个梯度洗脱4个柱体积并分别接收各部分洗脱液，选取含有目标成分的洗脱液，浓缩至无醇味，得浓缩液C，备用；
(4)取浓缩液C，加入正丁醇进行3次萃取，每次加入的正丁醇与浓缩液C体积比为0.2，合并正丁醇溶液，在80℃浓缩至浸膏，加水在80℃溶解至清，(水与浸膏的体积重量比为2ml/g)，放冷至析晶完全，过滤烘干并粉碎，即得白色粉末6.1g，经鉴别，确定为GCG，经HPLC检测，其纯度为92.3％。
实施例2
(1)称取HPLC纯度为60％的EGCG粉末50g为原料，加入10％乙醇250ml溶解后，转移到60℃恒温搅拌器水浴中，共反应4天，得反应液A，放冷备用；
(2)将反应液A在60℃浓缩处理至无醇味水溶液，放冷后加入乙酸乙酯进行5次萃取，每次加入的乙酸乙酯与反应液A体积比为0.2，合并水液，在60℃继续浓缩除去残留的乙酸乙酯，补纯化水使最终溶液总体积为250ml，得溶液B，放冷备用；
(3)取溶液B，逐渐加入到装有1000g大孔吸附树脂的层析柱内(树脂型号为HPD-200)，依次用水、5％乙醇、30％乙醇和50％乙醇进行梯度洗脱，每个梯度洗脱2个柱体积并分别接收各部分洗脱液，选取含有目标成分的洗脱液，浓缩至无醇味，得浓缩液C，备用；
(4)取浓缩液C，加入正丁醇进行5次萃取，每次加入的正丁醇与浓缩液C体积比为0.5，合并正丁醇溶液，在60℃浓缩至浸膏，加水在60℃溶解至清，(水与浸膏的体积重量比为10ml/g)，放冷至析晶完全，过滤烘干并粉碎，即得白色粉末5.4g，经鉴别，确定为GCG，经HPLC检测，其纯度为94.5％。
实施例3
(1)称取HPLC纯度为58％的EGCG粉末50g为原料，加入10％醋酸500ml溶解后，转移到100℃恒温搅拌器水浴中，共反应6天，得反应液A，放冷备用；
(2)将反应液A在100℃浓缩处理至水溶液，放冷后加入乙酸乙酯进行4萃取，每次加入的乙酸乙酯与反应液A体积比为2，合并水液，在100℃继续浓缩除去残留的乙酸乙酯，补纯化水使最终溶液总体积为1000ml，得溶液B，放冷备用；
(3)取溶液B，逐渐加入到装有1000g大孔吸附树脂的层析柱内(树脂型号为HPD-826)，依次用水、20％乙醇、40％乙醇和90％乙醇进行梯度洗脱，每个梯度洗脱2个柱体积并分别接收各部分洗脱液，选取含有目标成分的洗脱液，浓缩至无醇味，得浓缩液C，备用；
(4)取浓缩液C，加入正丁醇进行4次萃取，每次加入的正丁醇与浓缩液C体积比为2，合并正丁醇溶液，在100℃浓缩至浸膏，加水在100℃溶解至清，(水与浸膏的体积重量比为0.5ml/g)，放冷至析晶完全，过滤烘干并粉碎，即得白色粉末7.2g，经鉴别，确定为GCG，经HPLC检测，其纯度为90.3％。