发明领域
本发明涉及具有化学式(i)所示结构的、β-分泌酶的2,3,4,5-四氢吡啶-6-胺化合物抑制剂
其中这些基团是如在说明书中所定义的。本发明还涉及包含此类化合物的药物组合物，涉及制备此类化合物和组合物的方法，并且涉及此类化合物和组合物用于预防和治疗其中涉及β分泌酶的失调的用途，这些失调比如阿尔茨海默病(ad)、轻度认知损害、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、与中风相关的痴呆、与帕金森病相关的痴呆和与β-淀粉样蛋白相关的痴呆。
发明背景
阿尔茨海默病(ad)是一种与老化相关的神经退行性疾病。ad患者遭受认知缺陷和记忆丧失连同行为问题，如焦虑。超过90％的罹患ad的那些病例具有散发形式的失调，而不到10％的病例是家族性或遗传性的。在美国，年龄65岁的人约10分之1患有ad，而年龄85岁的每两个的个体中就有1个患有ad。距初次诊断的平均预期寿命是7-10年，并且ad患者需要来自非常昂贵的协助生活机构抑或来自家庭成员的大量护理。随着群体中老年人数量的不断增加，ad成为日益增长的医疗问题。当前可用于ad的疗法只治疗该疾病的症状，并且包括改善认知特性的乙酰胆碱酯酶抑制剂连同控制与这种疾病相关的行为问题的抗焦虑药和抗精神病药。
ad患者脑中的标志性病理特征是由tau蛋白的高度磷酸化产生的神经原纤维缠结以及由β-淀粉样蛋白1-42(aβ1-42)肽聚集形成的淀粉样蛋白斑。aβ1-42形成低聚物并且然后形成原纤维，并且最终形成淀粉样蛋白斑。这些低聚物和原纤维被认为是尤其毒害神经的并且可以引起与ad相关的大多数神经学损伤。预防aβ1-42形成的药剂具有成为用于ad治疗的疾病调修药剂的潜能。aβ1-42产生自淀粉样前体蛋白(app)，由770个氨基酸构成。aβ1-42的n末端被β-分泌酶(bace1)裂解，并且然后γ-分泌酶裂解c-末端。除了aβ1-42之外，γ-分泌酶还释放aβ1-40(主要的裂解产物)、连同aβ1-38和aβ1-43。这些aβ形式也可以聚集以形成低聚物和原纤维。因此，预期bace1抑制剂将预防aβ1-42连同aβ1-40、aβ1-38和aβ1-43的形成，并且将是ad治疗中的潜在治疗剂。
wo-2015/124576(lundbeck&coash)公开了2-氨基-3,5,5-三氟-3,4,5,6-四氢吡啶衍生物及其作为bace抑制剂用于治疗神经退行性疾病的用途。wo-2011/009943(novartisag)公开了具有bace抑制特性的二氢噁嗪衍生物。wo-2014/059185(amgeninc)公开了作为bace抑制剂的二氢噻嗪衍生物。
发明简述
本发明涉及具有化学式的(i)的化合物
以及其互变异构体和立体异构体形式，其中
r1选自下组，该组由以下各项组成：-c1-3烷基、-c1-3烷基-f和氟；
r2选自下组，该组由以下各项组成：-so2c1-3烷基、-so2环丙基、-cn、-oc1-3烷基、cf3和-so(nch3)ch3；
ar是同芳基或杂芳基；
其中同芳基是苯基或被一个、两个或三个各自独立地选自下组的取代基取代的苯基，该组由以下各项组成：卤素、氰基、c1-3烷基、环丙基、c1-3烷基氧基、环丙基氧基、(环丙基)c1-3烷基氧基、单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-环丙基、多卤-环丙基、单卤-c1-3、多卤-c1-3烷基氧基、单卤-环丙基氧基、多卤-环丙基氧基、(c1-3烷基氧基)c1-3烷基氧基、(环丙基氧基)c1-3烷基氧基、和hc≡cch2o；
杂芳基是选自下组，该组由以下各项组成：吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、以及噁二唑基，各自任选地被一个、两个或三个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下各项组成：卤素、氰基、c1-3烷基、环丙基、c2-3炔基、c1-3烷基氧基、环丙基氧基、(环丙基)c1-3烷基氧基、单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-环丙基、多卤-环丙基、单卤-c1-3烷基氧基、多卤-c1-3烷基氧基、单卤-环丙基氧基、多卤-环丙基氧基、(c1-3烷基氧基)c1-3烷基氧基、(环丙基氧基)c1-3烷基氧基和hc≡cch2o；
r3、r4、r5和r6各自独立地选自下组，该组由以下各项组成：氢、氟、甲基和甲氧基；以及
r7是氢或氟；
及其药学上可接受的加成盐和溶剂化物。
本发明例证了一种包含药学上可接受的载体以及任何以上所述的化合物的药物组合物。本发明的一个例证是一种通过混合任何以上所述的化合物与药学上可接受的载体制成的药物组合物。本发明例证了一种用于制备药物组合物的方法，该方法包括将任何以上所述的化合物与药学上可接受的载体混合。
本发明例示了治疗由β-分泌酶介导的失调的方法，该方法包括向有需要的受试者给予治疗有效量的任何以上所述的化合物或药物组合物。
本发明进一步例示了抑制β-分泌酶的方法，该方法包括向有需要的受试者给予治疗有效量的任何以上所述的化合物或药物组合物。
本发明的一个实例是治疗选自下组的失调的方法，该组由以下各项组成：阿尔茨海默病、轻度认知损害、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、与中风相关的痴呆、与帕金森病相关的痴呆以及与β-淀粉样蛋白相关的痴呆，优选地是阿尔茨海默病，该方法包括向有需要的受试者给予治疗治疗有效量的任何上述化合物或药物组合物。
本发明的另一个实例是任何上述化合物在治疗有需要的受试者中的以下疾病中使用：(a)阿尔茨海默病、(b)轻度认知损害、(c)衰老、(d)痴呆、(e)路易体痴呆、(f)唐氏综合征、(g)与中风相关的痴呆、(h)与帕金森病相关的痴呆或(i)与β-淀粉样蛋白相关的痴呆。
发明的详细说明
本发明涉及如在上文中定义的具有化学式(i)的化合物以及其药学上可接受的加成盐和溶剂化物。具有化学式(i)的化合物是β分泌酶(也称作β-位点裂解酶、bace、bace1、asp2或膜天冬氨酸蛋白酶2或bace2)的抑制剂，并且在阿尔茨海默病、轻度认知损害、衰老、痴呆、与中风相关的痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、与帕金森病相关的痴呆以及与β-淀粉样蛋白相关的痴呆，优选地是阿尔茨海默病、轻度认知损害或衰老，更优选地是阿尔茨海默病的治疗中是有用的。
在具体的实施例中，本发明涉及具有化学式(i)的化合物，其中
r1选自下组，该组由以下各项组成：-c1-3烷基、-c1-3烷基-f和氟；
r2选自下组，该组由以下各项组成：-so2c1-3烷基、-so2环丙基、-cn、-oc1-3烷基、cf3和-so(nch3)ch3；
ar是同芳基或杂芳基；
其中同芳基是苯基或被一个、两个或三个各自独立地选自下组的取代基取代的苯基，该组由以下各项组成：卤素、氰基、c1-3烷基、环丙基、c1-3烷基氧基、环丙基氧基、(环丙基)c1-3烷基氧基、单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-环丙基、多卤-环丙基、单卤-c1-3烷基氧基、多卤-c1-3烷基氧基、单卤-环丙基氧基、多卤-环丙基氧基、(c1-3烷基氧基)c1-3烷基氧基、(环丙基氧基)c1-3烷基氧基、和hc≡cch2o；
杂芳基是选自下组，该组由以下各项组成：吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、以及噁二唑基，各自任选地被一个、两个或三个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下各项组成：卤素、氰基、c1-3烷基、环丙基、c2-3炔基、c1-3烷基氧基、环丙基氧基、(环丙基)c1-3烷基氧基、单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-环丙基、多卤-环丙基、单卤-c1-3烷基氧基、多卤-c1-3烷基氧基、单卤-环丙基氧基、多卤-环丙基氧基、(c1-3烷基氧基)c1-3烷基氧基、(环丙基氧基)c1-3烷基氧基和hc≡cch2o；
r3、r4、r5和r6各自独立地选自下组，该组由以下各项组成：氢、氟和甲基；并且
r7是氢或氟；
及其药学上可接受的加成盐和溶剂化物。
在另外的实施例中，本发明涉及具有化学式(i)的化合物，其中r1选自下组，该组由以下各项组成：c1-3烷基和氟，并且r7是氢或氟。
在另一个具体的实施例中，本发明涉及具有化学式(i)的化合物，其中r1选自下组，该组由以下各项组成：c1-3烷基和氟，并且r7是氢。
在具体的实施例中，本发明涉及具有化学式(i)的化合物，这些化合物具有化学式(i-a)
以及其互变异构体和立体异构体形式，其中
r1是c1-2烷基或氟；
r2是-so2c1-3烷基、-so2环丙基、-cn、-oc1-3烷基、cf3或-so(nch3)ch3；
ar是同芳基或杂芳基；
其中同芳基是苯基或被一个、两个或三个各自独立地选自下组的取代基取代的苯基，该组由以下各项组成：卤素、氰基、c1-3烷基、环丙基、c1-3烷基氧基、环丙基氧基、(环丙基)c1-3烷基氧基、单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-环丙基、多卤-环丙基、单卤-c1-3烷基氧基-、多卤-c1-3烷基氧基、单卤-环丙基氧基、多卤-环丙基氧基、(c1-3烷基氧基)c1-3烷基氧基、(环丙基氧基)c1-3烷基氧基和hc≡cch2o-；
杂芳基是选自下组，该组由以下各项组成：吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、以及噁二唑基，各自任选地被一个、两个或三个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下各项组成：卤素、氰基、c1-3烷基、环丙基、c2-3炔基、c1-3烷基氧基、环丙基氧基、(环丙基)c1-3烷基氧基、单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-环丙基、多卤-环丙基、单卤-c1-3烷基氧基、多卤-c1-3烷基氧基、单卤-环丙基氧基、多卤-环丙基氧基、(c1-3烷基氧基)c1-3烷基氧基、(环丙基氧基)c1-3烷基氧基和hc≡cch2o-；
r3、r4、r5和r6各自独立地选自下组，该组由以下各项组成：氢、氟和甲基；
及其药学上可接受的加成盐和溶剂化物。
在实施例中，r1是c1-2烷基，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r1是ch3，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r2是-so2c1-3烷基、-so2环丙基或-cn，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r2是-so2c1-3烷基或-cn，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r2是-so2c1-3烷基，特别是-so2ch3、-so2ch2ch3、-so2ch(ch3)2，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r2是-so2c1-3烷基、特别是-so2ch3，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r2是-cn，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，杂芳基是选自下组，该组由以下各项组成：吡啶基、嘧啶基、吡嗪基和哒嗪基，各自任选地被一个、两个或三个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下各项组成：卤素、氰基、c1-3烷基、环丙基、c2-3炔基、c1-3烷基氧基、环丙基氧基、(环丙基)c1-3烷基氧基、单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-环丙基、多卤-环丙基、单卤-c1-3烷基氧基、多卤-c1-3烷基氧基、单卤-环丙基氧基、多卤-环丙基氧基、(c1-3烷基氧基)c1-3烷基氧基、(环丙基氧基)c1-3烷基氧基和hc≡cch2o-，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，杂芳基是选自下组，该组由以下各项组成：呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、氧氮茂基、异噁唑基以及噁二唑基，各自任选地被一个、两个或三个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下各项组成：卤素、氰基、c1-3烷基、环丙基、c2-3炔基、c1-3烷基氧基、环丙基氧基、(环丙基)c1-3烷基氧基、单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-环丙基、多卤-环丙基、单卤-c1-3烷基氧基、多卤-c1-3烷基氧基、单卤-环丙基氧基、多卤-环丙基氧基、(c1-3烷基氧基)c1-3烷基氧基、(环丙基氧基)c1-3烷基氧基和hc≡cch2o-，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，杂芳基是选自下组，该组由以下各项组成：吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基以及氧氮茂基，，各自任选地被一个、两个或三个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下各项组成：卤素、氰基、c1-3烷基、环丙基、单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-c1-3烷基氧基、多卤-c1-3烷基氧基和c1-3烷基氧基；并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在一个实施例中，杂芳基是选自下组，该组由以下各项组成：吡啶基、嘧啶基、吡嗪基以及哒嗪基，各自任选地被一个、两个或三个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下各项组成：卤素、氰基、c1-3烷基、环丙基、单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-c1-3烷基氧基、多卤-c1-3烷基氧基和c1-3烷基氧基；并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，杂芳基是选自下组，该组由以下各项组成：吡啶基、嘧啶基、吡嗪基以及哒嗪基，各自任选地被一个、两个或三个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下各项组成：卤素、氰基、c1-3烷基、环丙基和c1-3烷基氧基；并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，ar是被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代的吡啶基，该组由以下各项组成：卤素、氰基、c1-3烷基和c1-3烷基氧基；并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，ar是被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代的吡啶基：卤素、氰基和c1-3烷基；并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，ar是被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代的吡啶基，该组由以下各项组成：卤素、c1-3烷基和c1-3烷基氧基，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，ar是被一个或两个独立地选自卤素取代基取代的吡啶基，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，ar是被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代的吡嗪基，该组由以下各项组成：卤素、c1-3烷基、c1-3烷基氧基、单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-c1-3烷基氧基和多卤-c1-3烷基氧基；并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在一个实施例中，ar是被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代的吡嗪基，该组由以下各项组成：卤素、c1-3烷基和c1-3烷基氧基，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在一个实施例中，ar是被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代的吡嗪基：卤素或c1-3烷基氧基，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在一个实施例中，ar是被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代的吡嗪基，该组由以下各项组成：单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-c1-3烷基氧基和多卤-c1-3烷基氧基，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，>cr3r4是选自下组，该组由以下各项组成：>ch2、>chf、>cf2、>c(ch3)f和>c(ch3)(och3)，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)中所定义的。
在实施例中，>cr3r4是选自下组，该组由以下各项组成：>ch2、>chf、>c(ch3)f和>c(ch3)(och3)，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)中所定义的。
在实施例中，>cr3r4是选自下组，该组由以下各项组成：>ch2、>chf、>cf2和>c(ch3)f，并且-chr5r6是-ch3、-ch2f或-chf2，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，>cr3r4是选自下组，该组由以下各项组成：>ch2、>chf和>c(ch3)f，并且-chr5r6是-ch3、-ch2f或-chf2，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，>cr3r4是>ch2或>chf，并且-chr5r6是-ch3、-ch2f或-chf2，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，>cr3r4是>ch2，并且-chr5r6是-ch2f，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r7是氢或氟，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)中所定义的。
在实施例中，r7是氟，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)中所定义的。
在实施例中，r1是ch3，r2是-so2c1-3烷基，特别是-so2ch3、-so2ch2ch3或-so2ch(ch3)2，并且ar是吡啶基或吡嗪基，各自任选地被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下各项组成：卤素、氰基、c1-3烷基、环丙基、单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-c1-3烷基氧基、多卤-c1-3烷基氧基和c1-3烷基氧基；并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r1是ch3，r2是-so2c1-3烷基，特别是-so2ch3，并且ar是被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代的吡嗪基：卤素或c1-3烷基氧基，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r1是ch3，r2是-so2c1-3烷基，特别是-so2ch3，并且ar是被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代的吡啶基：卤素或c1-3烷基氧基，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r1是ch3，r2是-so2c1-3烷基，特别是-so2ch3、-so2ch2ch3或-so2ch(ch3)2，并且ar是被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代的吡啶基：卤素、氰基和c1-3烷基；并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r1是ch3，r2是-so2c1-3烷基，特别是-so2ch3、-so2ch2ch3、-so2ch(ch3)2，并且ar是任选地被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代的吡嗪基，该组由以下各项组成：单卤-c1-3烷基、多卤-c1-3烷基、单卤-c1-3烷基氧基和多卤-c1-3烷基氧基；并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r1是ch3，r2是-cn，并且ar是任选地被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代的吡嗪基：卤素或c1-3烷基氧基，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r1是ch3，r2是-so2ch3或-cn，并且ar是5-甲氧基吡嗪-2-基，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r1是ch3，r2是-so2ch3，ar是5-甲氧基吡嗪-2-基，>cr3r4是>ch2，并且-chr5r6是-ch3或-ch2f，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
在实施例中，r1是ch3，r2是-cn，ar是5-甲氧基吡嗪-2-基，>cr3r4是>ch2或>chf，并且-chr5r6是-ch3或-chf2，并且所有其他的变量是如在此的化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的。
如在此化学式(i)或化学式(i-a)中所定义的，被-chr5r6和该
在另一个实施例中，在具有化学式(i)或(i-a)的化合物中，被r1和r2取代的该季碳原子(例如cr1r2，这里被称为c-5)具有如在以下结构(ii)和(iii)中所描绘的构形，其中例如-so2c1-3烷基和-cn分别地投影在该图形平面的下方。在(ii)和(iii)中，所有的变量都是如在此定义的。
具体地，所述具有化学式(ii)和(iii)的化合物分别具有化学式(i’)和(ia’)、以及化学式(i”)和(ia”)。在(i’)、(i”)、(ia’)和(ia”)中，所有的变量都是如在此定义的。
定义
“卤素”应当表示氟、氯以及溴；“c1-2烷基”和“c1-3烷基”应当表示分别具有1个或2个、或1个、2个或3个碳原子的直链或支链饱和烷基基团(例如甲基、乙基、1-丙基和2-丙基)；“c1-3烷基氧基”应当表示醚基，其中c1-3烷基是如前文所定义的；“c2-3炔基”应当表示具有2个或3个碳原子的无环直链或支链的碳氢化合物，并且该碳氢化合物具有碳-碳三键；“单卤-和多卤c1-3烷基”和“单-卤和多卤-环丙基”应该分别指代被1个、2个、3个或在可能时被如之前所定义的更多个卤素原子取代的如以前所定义的c1-3烷基；“单卤-和多卤c1-3烷基氧基”和“单卤-和多卤代-环丙基氧基”应当表示醚基，其中单卤-和多卤c1-3烷基和单卤-和多卤-环丙基是如前文所定义的。
如在此使用的术语“受试者”是指动物，优选地是哺乳动物，最优选地是人类，该受试者是或已经成为治疗、观察或实验的对象。
如在此使用的术语“治疗有效量”表示研究员、兽医、医师或其他临床医生寻找的在组织系统、动物或人类中引出生物学或医学反应的活性化合物或药物试剂的量，该反应包括正在被治疗的疾病或失调的症状的减轻。
如在此使用的，术语“组合物”旨在涵盖包括处于特定量的特定成分的产品，连同直接或间接源于处于特定量的特定成分的组合的任何产品。
在上下文中，术语“具有化学式(i)或具有化学式(i-a)的化合物”意在包括其加成盐、溶剂化物以及立体异构体。
在上下文中，术语“立体异构体”或“立体化学异构形式”可互换地使用。
本发明包括呈纯立体异构体形式抑或呈两种或更多种立体异构体的混合物形式的具有化学式(i)或具有化学式(i-a)的化合物的所有立体异构体。
对映异构体是彼此不可重叠镜像的立体异构体。对映异构体对的1:1混合物是外消旋体或外消旋混合物。非对映体(或非对映异构体)为非对映体的立体异构体，即它们不以镜像形式相关。如果化合物含有双键，那么取代基可以呈e或z构型。如果化合物包含双取代的环烷基，则这些取代基可以处于顺式构型或反式构型。因此，本发明包括对映体、非对映体、外消旋体、e异构体、z异构体、顺式异构体、反式异构体及其混合物。
绝对构型是根据卡恩-英戈尔德-普雷洛格(cahn-ingold-prelog)系统指定的。不对称原子处的构型由r或s规定。绝对构型未知的已拆分的化合物可以根据它们旋转平面偏振光的方向而由(+)或(-)指定。
当鉴定一种特定立体异构体时，这意指所述立体异构体基本上不含其他异构体，即与其他异构体的关联小于50％，优选地小于20％，更优选地小于10％，甚至更优选地小于5％，特别是小于2％并且最优选地小于1％。因此，当具有化学式(i)或具有化学式(i-a)的化合物例如被规定为(r)时，这意指该化合物基本上不含(s)异构体；当具有化学式(i)或具有化学式(i-a)的化合物例如被规定为e时，这意指该化合物基本上不含z异构体；当具有化学式(i)或具有化学式(i-a)的化合物例如被规定为顺式时，这意指该化合物基本上不含反式异构体。
用于在医学中使用，本发明的化合物的加成盐是指无毒性“药学上可接受的加成盐”。然而，其他盐可以适用于制备根据本发明的化合物或其药学上可接受的加成盐。化合物的适合的药学上可接受的加成盐包括可以例如通过将化合物的溶液与药学上可接受的酸的溶液混合而形成的酸加成盐，该药学上可接受的酸是比如盐酸、硫酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸。此外，在本发明的化合物携带酸性部分时，其适合的药学上可接受的加成盐可以包括碱金属盐，例如，钠盐或钾盐；碱土金属盐，里如钙盐或镁盐；以及与适合的有机配体形成的盐，例如季铵盐。
可以用于制备药学上可接受的盐的代表性酸包括但不限于以下各项：乙酸、2,2-二氯乙酸、酰化氨基酸、己二酸、海藻酸、抗坏血酸、l-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、(+)-樟脑酸、樟脑磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环己氨磺酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙烷磺酸、2-羟基-乙烷磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、d-葡萄糖酸、d-葡糖醛酸/l-谷氨酸、β-氧代-戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、(+)-l-乳酸、(±)-dl-乳酸、乳糖酸、马来酸、(-)-l-苹果酸、丙二酸、(±)-dl-扁桃酸、甲烷磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、磷酸、l-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、丹宁酸、(+)-l-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、三氟甲基磺酸以及十一碳烯酸。可以用于制备药学上可接受的加成盐的代表性碱包括但不限于以下各项：氨、l-精氨酸、苯乙苄胺、苯乍生、氢氧化钙、胆碱、二甲基乙醇胺、二乙醇胺、二乙胺、2-(二乙氨基)-乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-甲基-葡糖胺、海巴明、1h-咪唑、l-赖氨酸、氢氧化镁、4-(2-羟乙基)-吗啉、哌嗪、氢氧化钾、1-(2-羟乙基)吡咯烷、仲胺、氢氧化钠、三乙醇胺、缓血酸胺以及氢氧化锌。
本发明的化合物的名称根据由化学文摘社(chemicalabstractsservice)(cas)商定的命名规则或者根据由国际纯粹与应用化学联合会(internationalunionofpureandappliedchemistry)(iupac)商定的命名规则来生成。
根据化学式(i)的化合物，特别是根据化学式(i-a)的化合物，可与他们的互变异构体形式(i*)以动态平衡的形式共存，并且形成不可分离的混合物。尽管这样的互变异构体形式没有明确地表示在上式中，但旨在包括在本发明的范围内。
化合物的制备
实验程序1
根据反应方案(1)，可以通过使具有化学式(ii-a)的中间体化合物与具有化学式(xxiv)的化合物进行反应来制备根据化学式(i)的最终化合物。在适当的反应-惰性溶剂(例如像，1,4-二噁烷/水)中，在适当的碱(例如像，磷酸钾(k3po4))、在铜催化剂(例如像，碘化铜(i)(cui))以及二胺(例如像，(1r,2r)-(-)-1,2-二氨基环己烷)或n,n’-二甲基乙二胺存在下，在热条件(例如像，在100℃加热该反应混合物，持续例如16小时)进行的该反应。在反应方案(1)中，所有变量都如在化学式(i)中定义的，并且z是卤素。
反应方案1
实验程序2
此外，根据反应方案(2)，可以通过使具有化学式(ii-b)的中间体化合物与具有化学式(xxv)的化合物进行反应来制备根据化学式(i)的最终化合物。在适当的反应-惰性溶剂(例如像，甲醇(meoh))中，在酸(例如像，盐酸(hcl))和在羧基活性剂(例如像，1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺[edci、cas1892-57-5])存在下，在适当条件(例如像，在25℃搅拌该反应混合物，持续例如10分钟)进行的该反应。在反应方案(2)中，所有变量都如在化学式(i)中定义的。
反应方案2
实验程序3
根据反应方案(3)，可以通过将具有化学式(iii)的中间体化合物置于还原条件下来制备具有化学式(ii-b)的最终化合物。典型的实例是使用适合的催化剂(例如像，钯碳)、在氢气氛围下或使用还原剂(例如像，二水氯化锡(ii))进行的还原。典型地，可以在一适合的溶剂中(例如像，meoh(甲醇))或在溶剂混合物(例如像，四氢呋喃(thf)/乙醇(etoh))中进行该反应。热条件(例如像，加热该混合物)可以改进反应产出。在反应方案(3)中，所有变量都如在化学式(i)中定义的。
反应方案3
实验程序4
根据反应方案(4)，可以从具有化学式(ii-a)的中间体化合物来可替代地制备具有化学式(ii-b)的中间体化合物。在典型的程序中，具有化学式(ii-a)的化合物(其中z是卤素(例如溴))与叠氮化钠(nan3)反应生成具有化学式(ii-b)的中间体化合物。在适当的反应-惰性溶剂(例如像，乙腈)中，在适当的碱(例如像，碳酸钠(na2co3))、在铜(i)催化剂(例如像，cui)以及二胺(例如像，n,n’-二甲基乙二胺)存在下，在热条件(例如像，在100℃加热该反应混合物，持续例如16小时)进行的该反应。在反应方案(4)中，所有变量都如在化学式(i)中定义的。
反应方案4
实验程序5
根据反应方案(5)，可以通过具有化学式(ii)的中间体化合物的硝化来制备根据化学式(iii)的中间体化合物。典型的程序涉及在低温(例如像，0℃)下使用硝鎓离子源(例如像，硝酸钾)处理在硫酸中的溶解的中间体(ii)。在反应方案(5)中，r7是氢并且所有其他变量是如在化学式(i)中所定义的。
反应方案5
实验程序6
根据化学式(ii)和(ii-a)的中间体化合物可以用起始于具有化学式(iv)的适合的化合物(其中pg是一种适合的保护基团(例如像，叔丁氧羰基(boc)、三氟乙酰基或叔丁基亚磺酰基)借助于根据反应方案(6)的一步骤或两步骤程序来制备。在该两步骤程序中，中间体(iv)中的氨基可首先通过本领域的普通技术人员已知的脱保护方法(例如像，使用酸(例如像，甲酸)来处理中间体)以给出中间体(v)。在例如80℃加热该反应混合物，持续例如4小时可以改进反应产出。分离的中间体(v)然后溶解于适合的溶剂(例如像，二氯甲烷(dcm))，并且在路易斯酸(例如像，三甲基铝)的存在下环化成相应的中间体(ii)或(ii-a)。可替代地，可用一锅法在酸(例如甲醇溶液中原位生成的hcl或纯甲酸)存在下、在热条件(例如像，在120℃加热该反应混合物，持续一段时间以保证反应完成)搅拌中间体(iv)以获得相应的中间体(ii)或(ii-a)))。在反应方案(6)中，所有变量都如在化学式(i)中定义的，z是氢或卤素，并且pg是保护基团。
反应方案6
实验程序7
根据反应方案(7)，根据化学式(iv)的中间体化合物可以用起始于具有化学式(vii)的化合物的两步骤来制备。在适合的溶剂(例如像，thf)下用还原剂(例如像，硼氢化钠)处理，可将中间体(vii)转化为中间体(vi)。低温(例如像，0℃)下处理可以改进反应产出。中间体(vi)然后通过标准的甲基化反应转化为中间体(iv)，该甲基化反应例如像用碱(例如像，氢化钠)处理溶解于适合的溶剂中(例如像，thf)的该化合物)并且在低温(例如像，0℃)下将该所得的阴离子用甲基化剂(例如像，碘甲烷)进行骤冷。在反应方案(7)中，所有变量都如在化学式(i)中定义的，z是氢或卤素，并且pg是保护基团(例如像，叔丁氧羰基(boc)、三氟乙酰基或叔丁基亚磺酰基)。
反应方案7
实验程序8
根据反应方案(8)，可以按照六步骤程序获得根据化学式(vii)的中间体化合物，该程序以具有化学式(xiii)的化合物为原料。中间体(xiii)可以通过适合的阴离子的亲核加成反应被转化为中间体(xii)。可以通过本领域的普通技术人员已知的方法给出该阴离子：典型实例是用适合的碱(例如像，氢化钠或二异丙基氨基化锂)、在惰性溶剂(例如像，thf)中、在低温(例如像，在-78℃)下处理所需的醋酸盐(例如像，乙酸叔丁酯丙脂)：或在高温(例如像，在40℃)下在惰性溶剂(例如像，thf)中在cu(i)的存在下，用锌处理相应的-溴乙酸盐，该高温足以促进锌插入碳-溴键中。该阴离子溶液然后可在允许反应顺利进行的温度(例如像，-78℃或0℃)下，与在适当溶剂(例如像，thf)中的中间体(xiii)的溶液反应以提供中间体(xii)。该
反应方案8
实验程序8-a
根据反应方案(8-a)，可替代地，具有化学式(x)的中间体可以用起始于中间体(xii-a)的两个步骤来制备，其中alk1是适合的烷基链(例如像，乙基)。用脂还原剂(例如像，硼氢化锂)、在惰性溶剂中(例如像，thf)、在允许反应顺利进行的温度(例如像，0℃)下处理中间体(xii-a)以获得中间体(xxii)，该中间体(xxii)可通过用适合的酸(例如像，hcl)、在惰性溶剂中(例如像，meoh)处理被进一步脱保护得到中间体(x)。在反应方案(8-a)中，所有变量都如在化学式(i)中定义的，z是氢或卤素，并且alk1是适合的烷基链(例如乙基)。
反应方案8-a
实验程序9
根据反应方案(9)，具有化学式(vii-a)的中间体化合物可以用起始于中间体(xiii)的三个步骤来制备。溶解在适合的溶液(例如像，dcm)中的中间体(xiii)可同适合的亲核试剂(例如像，烯丙基溴化镁)在低温(例如像，-50℃)下反应以给出中间体(xxi)。该
反应方案9
实验程序10
根据反应方案(10)，具有化学式(vii-b)的中间体化合物可以用起始于中间体(xii-a)的四个步骤来制备。中间体(xii-a)可通过标准的脱保护技术(例如像，用酸(例如像，hcl)处理溶解在适合的溶剂中(例如像，meoh)的中间体(xii-a))以给出游离氨基中间体(xviii)。转化成该单-boc衍生物中间体(xvii)可通过使中间体(xviii)经受本领域的普通技术人员已知的条件(例如像，使用boc源(例如像，boc-酸酐)处理溶解在适合的溶剂中(例如像，meoh)的中间体(xviii))来获得。升高温度(例如至60℃)，持续例如7小时可以改进反应产出。溶解在适合的溶剂(例如像，dcm或thf)中的中间体(xvii)可通过选择性的还原剂(例如像，在低温(例如像，-78℃)下的氢化二异丁基铝或在低温(例如像，0℃)下的硼氢化锂)被还原成为相应的醛(xvi)。可能的过度还原的醇副产品可通过标准的氧化剂(例如像，通过使用戴斯-马丁氧化剂的dcm溶液)被转化成为中间体(xvi)。最后，中间体(xvi)可在催化剂(例如像，氧化镁)的存在下、在惰性溶剂(例如像，meoh)中，与适合的活性氢成分(例如像，丙二腈或2-(甲磺酰基)乙腈)通过克内文纳格尔缩合反应(knoevenagelcondensation)转化为中间体(vii-b)。在反应方案(10)中，所有变量都如在化学式(i)中定义的，z是氢或卤素，并且alk1是适合的烷基链。
反应方案10
药理学
本发明的化合物及其药学上可接受的组合物抑制bace，并且因此在治疗或预防阿尔茨海默病(ad)、轻度认知损害(mci)、衰老、痴呆、路易体痴呆、脑淀粉样血管病、阿尔茨海默型痴呆、血管性痴呆、归因于hiv病的痴呆、归因于头部创伤的痴呆、归因于亨廷顿氏病的痴呆、归因于皮克氏病的痴呆、归因于克雅二氏病的痴呆、额颞痴呆、拳击员痴呆以及与β-淀粉样蛋白相关的痴呆中可以有用。
如在此使用的，术语“治疗”旨在是指其中可能存在一种疾病的进展的减缓、中断、遏制或阻止或症状的缓解的所有过程，但未必指示所有症状的全部消除。
本发明还涉及用于在治疗或预防以下疾病或病症中使用的根据通式(i)的化合物、其立体异构体形式或其药学上可接受的酸或碱加成盐或溶剂化物，这些疾病或病症选自下组，该组由以下各项组成：ad、mci、衰老、痴呆、路易体痴呆、脑淀粉样血管病、多发性梗死性痴呆、唐氏综合征、与帕金森病相关的痴呆以及与β-淀粉样蛋白相关的痴呆。
本发明还涉及一种根据通式(i)的化合物、其立体异构形式或其药学上可接受的酸或碱加成盐用于在选自下组的疾病或病症的治疗、预防、改善、控制或风险的降低中使用，该组由以下各项组成：ad、mci、衰老、痴呆、路易体痴呆、脑淀粉样血管病、多发性梗死性痴呆、唐氏综合征、与帕金森病相关的痴呆以及与β-淀粉样蛋白相关的痴呆。
如在上文已经提及的，术语“治疗”未必指示所有症状的全部消除，而是还可以指代在上面提及的任何失调中的对症治疗。鉴于具有化学式(i)的化合物的效用，提供一种治疗罹患任一种上文中提及的疾病的受试者如温血动物(包括人类)的方法，或一种预防受试者如温血动物(包括人类)罹患任一种上文中提及的疾病的方法。
所述方法包括向受试者如温血动物(包括人类)给予，即，全身给予或局部给予，优选口服给予治疗有效量的具有化学式(i)的化合物、其立体异构形式、其药学上可接受的加成盐或溶剂化物。
所以，本发明还涉及一种用于预防和/或治疗任何上文中提及的疾病的方法，该方法包括向对其有需要的受试者给予治疗有效量的根据本发明的化合物。
本发明涉及用于调节β-位点淀粉样蛋白裂解酶活性的方法，该方法包括向需要其的受试者给予治疗有效量的根据本发明所述的和如权利要求书中所定义的化合物或根据本发明所述的和如权利要求书中所定义的药物组合物。
治疗方法还包括以每天一到四次摄入之间的方案给予活性成分。在这些治疗方法中，根据本发明的化合物优选地在给予之前进行配制。如在此下文中所述的，适合的药物配制品通过已知程序使用熟知并且容易可用的成分来制备。
可以适合于治疗或预防阿尔茨海默病或其症状的、本发明的化合物可以单独给予或与一种或多种另外的治疗剂联合给予。联合疗法包括：包含具有化学式(i)的化合物以及一种或多种另外的治疗剂的单个药物剂量配制品的给予，连同具有化学式(i)的化合物和以其自身分开的药物剂量配制品存在的每种另外的治疗剂的给予。例如，可以向患者给予一起处于单个口服剂量组合物(如片剂或胶囊)中的具有化学式(i)的化合物和治疗剂，或可以将每种药剂以分开的口服剂量配制品给予。
熟练人员将熟悉在此提及的疾病或病症的替代性术语表、疾病分类学以及分类系统。例如，美国精神病学协会的《精神失调的诊断与统计学手册》第五版(dsm-5tm)利用术语，如神经认知失调(ncd)(重度和轻度两者)，特别是归因于阿尔茨海默病、归因于创伤性脑损伤(tbi)、归因于路易体疾病、归因于帕金森氏病或血管性ncd(如表现为多发性梗塞的血管性ncd)的神经认知失调。熟练人员可以使用此类术语作为用于一些在此提及的疾病或病症的替代性命名。
药物组合物
本发明还提供了用于预防或治疗其中β-分泌酶的抑制是有益的疾病的组合物，这些疾病是如阿尔茨海默病(ad)、轻度认知损害、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、与中风相关的痴呆、与帕金森病相关的痴呆、以及与β-淀粉样蛋白相关的痴呆。所述组合物包括治疗有效量的根据化学式(i)的化合物以及药学上可接受的载体或稀释剂。
虽然可以单独给予活性成分，但可优选的是以药物组合物形式呈递。因此，本发明进一步提供了一种药物组合物，其包含根据本发明的化合物连同药学上可接受的载体或稀释剂。该载体或稀释剂在与该组合物的其他成分相容的意义上必须是“可接受的”并且对于其接受者是无害的。
可以通过制药领域所熟知的任何方法来制备本发明的药物组合物。治疗有效量的呈碱形式或加成盐形式的作为活性成分的具体化合物与药学上可接受的载体组合成紧密混合物，该载体可以取决于给药所希望的制剂形式而采用多种多样的形式。这些药物组合物期望为适用于系统给药如口服、经皮或肠胃外给药；或局部给药如通过吸入、鼻喷雾、滴眼剂或通过霜剂、凝胶剂、洗发剂等给药的单位剂型。例如，在制备处于口服剂型的组合物中，可使用任何常见药物介质，在口服液体制剂(如悬浮液、糖浆剂、酏剂、乳液以及溶液)的情况下，例如像水，二醇类、油类、醇类等；或在粉剂、丸剂、胶囊和片剂的情况下，固体载体如淀粉、糖、髙岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。因为其容易给予，片剂和胶囊剂代表最有利的口服单位剂型，在该情形下显然采用固体药物载体。对于肠胃外组合物来说，载体通常将包括至少呈大部分的无菌水，但也可以包括其他成分例如以辅助溶解性。例如可制备注射溶液，其中该载体包括盐溶液、葡萄糖溶液或盐水和葡萄糖溶液的混合物。也可以制备可注射悬浮液，在该情况下可以采用适当的液体载体、助悬剂以及类似物。在适合于经皮给予的组合物中，载体任选地包括渗透增强剂和/或适合的可湿润剂，任选地与小比例的具有任何性质的适合添加剂组合，这些添加剂不会对皮肤造成任何显著有害作用。所述添加剂可促进向皮肤给药和/或可有助于制备期望的组合物。这些组合物能够以不同方式，例如作为透皮贴剂、作为滴剂或作为软膏给予。
尤其有利的是将以上提及的药物组合物配制成单位剂型以实现给药简易性和剂量均一性。如本说明书和权利要求书中所用的单位剂型在此是指适合作为单位剂量的物理离散单位，每一单位含有经计算以与所需的药物载体结合而产生所希望的治疗作用的预定量的活性成分。此类单位剂型的实例是片剂(包括刻痕或包衣片剂)、胶囊、丸剂、散剂包、糯米纸囊剂、可注射溶液或悬浮液、茶匙剂、汤匙剂以及类似剂型，及其分开的多个。
如本领域的普通技术人员所熟知的，精确的剂量以及给予的频率取决于具体使用的具有化学式(i)的化合物、进行治疗的具体病症、进行治疗的病症的严重性、具体患者的年龄、体重、性别、失调程度以及总体身体健康状况，连同个体可以服用的其他药物。此外，显而易见的是，所述有效每天量可以取决于所治疗的受试者的应答和/或取决于开处本发明的化合物的医生的评估而减少或增加。
取决于给予模式，该药物组合物将包括按重量计从0.05％至99％，优选地按重量计从0.1％至70％，更优选地按重量计从0.1％至50％的活性成分，以及按重量计从1％至99.95％，优选地按重量计从30％至99.9％，更优选地按重量计从50％至99.9％的药学上可接受的载体，所有的百分数都基于该组合物的总重量。
本发明化合物可以用于全身性给予，如经口、经皮或肠胃外给予；或局部给药如通过吸入、鼻喷雾、滴眼剂或通过霜剂、凝胶剂、洗发剂等给药。这些化合物优选地口服给予。如本领域的普通技术人员所熟知的，给药的精确剂量和频率取决于使用的根据化学式(i)的具体化合物、正在被治疗的具体病症、正在被治疗的病症的严重性、具体患者的年龄、体重、性别、失调程度以及总体身体健康状况，连同个体可以服用的其他药物。此外，显然所述有效每日量可以取决于所治疗的受试者的反应和/或取决于对本发明的化合物开处方的医师的评估而降低或增加。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的具有化学式(i)的化合物的量将取决于治疗的疾病、哺乳动物种类以及具体给药模式而变化。然而，作为一般指导，本发明的这些化合物的适合单位剂量可以例如优选地含有0.1mg至约1000mg之间的活性化合物。优选的单位剂量是在1mg至大约500mg之间。更优选的单位剂量是在1mg至大约300mg之间。甚至更优选的单位剂量是在1mg至大约100mg之间。这样的单位剂量可以每天超过一次地被给予，例如一天2、3、4、5或6次，但是优选每天1次或2次，这样使得对于一个70kg的成人每次给予的总剂量是每kg受试者体重在0.001至大约15mg的范围中。优选的剂量是每次给予每kg受试者体重0.01至约1.5mg，并且此类疗法可以持续多个星期或月，并且在一些情况中，持续多年。然而，应当理解，任何特定患者的具体剂量水平取决于各种因素，包括采用的特定化合物的活性；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药时间和途径；排泄速率；先前给予的其它药物；及进行医疗的特定疾病的严重性，如本领域技术人员所熟知的。
典型剂量可以是一天服用一次或一天多次的一片1mg至约100mg片剂或1mg至约300mg，或者一天一次地服用一粒延时释放的胶囊或片剂，并且包含在比例上含量较高的活性成分的。延时释放效应可以通过在不同的ph值下溶解的胶囊材料、通过经渗透压造成的缓慢释放的胶囊、或者通过控制释放的任何其他已知手段来获得。
如本领域技术人员将理解的，在一些情况下有必要使用这些范围外的剂量。此外，应当注意临床医生或治疗医师结合个体患者反应将知道如何以及何时开始、中断、调节或终止治疗。
对于以上提供的组合物、方法以及试剂盒，本领域技术人员将理解，用于各个的优选化合物是根据以上优选提到的那些化合物。用于组合物、方法和试剂盒的其他优选化合物是在以下非限制性实例中提供的那些化合物。
实验部分
在下文中，术语“m.p.”意指熔点，“min”意指分钟，“aq.”意指水性的，“r.m.”或“rm”意指反应混合物，“r.t.”或“rt”意指室温，“rac”或“rs”意指外消旋体，“sat.”意指饱和的，“sfc”意指超临界流体色谱法，“sfc-ms”意指超临界流体色谱法/质谱法，“lc-ms”意指液相色谱法/质谱法，“hplc”意指高效液相色谱法，“rp”意指反相，“uplc”意指超高效液相色谱法，“dad”意指二极管阵列检测器，“dsc”意指差示扫描量热法，“sqd”意指单四极探测器，“qtof”意指四极杆飞行时间，“beh”意指桥接的乙基硅氧烷/二氧化硅杂化体，“csh”意指带电表面杂化体“rt”意指保留时间(分钟)，“[m+h]+”意指化合物的游离碱的质子化质量，“wt”意指重量，“lihmds”意指双(三甲基硅基)酰胺锂，“m”意指摩尔，“thf”意指四氢呋喃，“tmscl”意指三甲基氯硅烷，“etoac”意指乙酸乙酯，“mecn”意指乙腈，“buli”意指丁基锂，“h”意指小时，“et2o”意指乙醚，“dcm”意指二氯甲烷，“kf”意指氟化钾，“mtbe”：意指甲基叔丁基醚，“bh3thf”意指硼烷四氢呋喃络合物，“meoh”意指甲醇，“et3n”意指三乙胺，“org.”意指有机的，“ol”意指有机层，“n”意指正常，“mei”意指碘甲烷，“accl”意指乙酰氯，“o3/o2”意指臭氧/氧混合物，“sol.”意指溶液，“boc”意指叔丁氧羰基，“tlc”意指薄层色谱法，“pd/c”意指钯碳催化剂，“alme3”意指三甲基铝，“etoh”意指乙醇，“iprnh2”意指异丙胺，“dipe”意指二异丙醚，“nh4ac”意指醋酸铵，“iproh”意指异丙醇，并且“edci”意指1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳化二亚胺，“苏丹iii”意指1-(4-(苯基二氮烯基)苯基)偶氮萘-2-酚，“dibal”意指二异丁基氢化铝，“tfa”意指三氟乙酸，“acn”意指乙腈，“np”意指正相。
无论何时在此表明符号“rs”，它都是指该化合物是在指定中心的一种外消旋混合物，除非外指明。当将该混合物分离时，已经将在一些化合物中心的立体化学构型指定为“r”或“s”；对于一些化合物，尽管该化合物本身已经作为单一的立体异构体被分离并且是对映异构体纯的/非对映构体纯的，但是当绝对立体化学未确定时，已经将在指定中心的立体化学构型指定为“*r”或“*s”。通过由超临界流体色谱法(sfc)分析外消旋混合物，随后sfc比较该一种或多种分离的对映异构体，来确定在此报道的化合物的对映体过量。
手性中心的绝对构型(意指为r和/或s)可以合理化。所有最终化合物的合成从中间体开始，这些中间体具有与文献先例一致(例如中间体20)的已知绝对构型或获得自适当的合成程序中(例如在中间体3中埃尔曼的磺酰胺的形成)。另外的立体中心的绝对构型的分配可以通过标准的nmr方法分配。
a.中间体的制备
实例a1
中间体1的制备
将lihmds(1m在thf中，719ml，719mmol)在thf(2l)中的混合物在-78℃下搅拌30min，在-78℃下经40min逐滴添加5'-溴-2'-氟苯乙酮(120g，553mmol)，然后将该反应混合物在-78℃下搅拌10min。在-78℃下经40min添加tmscl(78g，719mmol)然后在25℃下搅拌30min。添加在冰/水和etoac中的nh4cl。将该混合物用etoac萃取，将有机层干燥，过滤并在真空中浓缩以提供粗品(155g，90％纯度，87％)。
中间体66的制备
从1-(5-溴-2,3-二氟苯基)-乙酮[1600511-63-4]起始，遵循与中间体i-1的制备所描述的程序类似的程序合成i-66。
实例a2
中间体2的制备
将中间体1(310g，1.071mol)在mecn(1.5l)中冷却至5℃。分批添加selectfluortm(417.4g，1.178mol)并且在5℃将该反应混合物搅拌5min，然后在25℃下搅拌80min。将挥发物在真空中去除，并且将该残余物分配在etoac与水之间。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥，过滤并且浓缩。通过柱层析(二氧化硅；石油醚/etoac100/0至20/1)纯化该残余物，以获得所希望的产物(242g，90％纯度，85％)。
可替代的方法(1)用于中间体2的制备
在-70℃下，在氮下，将buli(2.5m在己烷中，20ml，50mmol)滴加到异丙胺(7ml，50mmol)在thf(125ml)中溶液中。30min后逐滴添加4-溴氯苯(5ml，45.5mmol)并且将该反应混合物在-70℃下搅拌30min。然后添加氟乙酸乙酯(5.3ml，54.6mmol)并且在-70℃下搅拌1h。将该反应混合物通过倾倒入nh4cl饱和溶液中进行淬灭。将该产物用et2o萃取并将该有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并在真空中浓缩。通过快速柱层析(二氧化硅；庚烷/dcm100/0至0/100)纯化该粗品。收集所希望的级分并且在真空中蒸发溶剂，产生呈淡黄色固体的产物(5.1g，48％)。
可替代的方法(2)用于中间体2的制备
在室温下，将18-冠-6(185mg，0.7mmol)添加至kf(1.182g，20mmol)在mecn(4ml)中的搅拌混合物中。在90℃下将该反应混合物搅拌30min并且然后分批添加5-溴-2-氟苯乙酰基溴化物(2.959g，10mmol)。将该反应混合物在90℃搅拌18h，然后允许将其冷却至室温并且在真空中蒸发溶剂。将该残余物在水和etoac之间分配，并将有机层经(na2so4)干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过快速柱层析(二氧化硅；庚烷/dcm100/0至60/40)纯化该残余物。收集所希望的级分并且在真空中进行浓缩，以给出所希望的产物(1.1g，47％)。
中间体67的制备
从i-66(13.2g，42.94mmol)起始，遵循与中间体2(第一方法)的制备所描述的程序类似的程序合成i-67，43％产量。
实例a3
中间体3的制备
从中间体2根据实例类似于wo2014/134341a1中描述的一个合成程序制备中间体3。双键的立体化学在这个阶段没有确定。
中间体68-70的制备
中间体68-70从指示的起始材料以类似于中间体3的方式而制备：
实例a4
中间体6的制备
中间体6可以通过遵循如下报告的三步骤程序之一而制备。
程序1：
1)中间体4的制备
在-78℃下，在氮下，将二异丙胺(2.69g，26.6mmol)在thf(50ml)中的混合物进行搅拌。将buli(2.5m在己烷中，10.6ml，26.6mmol)逐滴添加并且在-78℃下搅拌15min。逐滴添加乙酸叔丁酯(3.09g，26.6mmol)并且将该混合物搅拌30min。逐滴添加中间体3(5g，13.3mmol)在thf(50ml)中的溶液并且将该反应混合物在-78℃下搅拌3h，直至tlc显示反应完成。用饱和nh4cl饱和溶液淬灭。随后用etoac萃取。将有机层经(na2so4)干燥，过滤并且浓缩以给出粗产物，通过柱层析(二氧化硅；石油醚/etoac50/1至10/1)将其纯化，以给出所希望的呈油状的产物(4g，90％纯度，60％)。
2)中间体5的制备
将中间体4(200g，396.15mmol)溶解于二噁烷(4m，1.5l)中的hcl中。将该反应混合物在80℃下搅拌5h，直至lc-ms显示反应完成，然后将其冷却至室温。收集固体，用mtbe洗涤，并且在真空中干燥，以给出诸如hcl盐的中间体5(130g，93％纯，92％)。
3)中间体6的制备
在0℃下，在氮下，将在thf(120ml)中的中间体5的混合物(70g，211.8mmol)搅拌。逐滴添加bh3.thf(1m，800ml，800mmol)，将该反应物在室温下搅拌3h并且然后倾倒入nahco3(200g)和冰(2kg)中。添加etoac(1l)，将该混合物在室温下搅拌并且然后用etoac萃取。将有机层干燥(na2so4)。在真空中去除挥发物，得到所希望的化合物(55g)。将这一批通过柱层析纯化并且在使用前用盐酸进行结晶(请参见下面的例子)。
程序2：
1)中间体7的制备
配备有回流冷凝器的3-颈250ml圆底烧瓶和另外的漏斗进行完全干燥，并且然后用在锌尘(11.6g，177.4mmol)和cucl(1.756g，17.74mmol)装填。在缓慢的氮气流下混合两种固体。添加干燥的thf(40ml)产生暗色的泥浆。将所得的反应物加热至回流并且剧烈搅拌30min，在保持剧烈搅拌的同时将加热浴去除并且将加料漏斗用在干燥的thf(20ml)中的溴乙酸乙酯(4.92ml，44.35mmol)装填。缓慢并且小心逐滴添加溶液，直至溶剂回流开始。然后以保持可控回流的速率继续该添加。一旦该添加完成，将该反应混合物在室温搅拌另外的30min，并且然后在50℃下搅拌30min，将混合物冷却至0℃后，将加料漏斗用在中间体3(6g，17.74mmol)和干燥的thf(20ml)装填将这些溶液然后逐滴添加至反应混合物中，将其在0℃下搅拌另外的4h。将后续的过滤通过
2)中间体8的制备
在0℃下，在氮下，将libh4(2m在thf中，1.81ml，3.626mmol)逐滴添加至在thf(8ml)中的中间体7(773mg，1.813mmol)的溶液中。将该反应混合物在0℃下搅拌30min，在室温下搅拌2h，并且然后用在水中(10ml)的乙酸(0.4ml)小心淬灭。添加etoac，将水层用etoac进行萃取，将有机层分离，干燥，过滤并且在真空中浓缩，以给出按原样用在后续的反应步骤中中的粗品(696mg，定量)。
3)中间体6的制备
向中间体8(696mg，1.81mmol)在meoh(5.8ml)中的溶液里添加至hcl(4m在二噁烷中，5.8ml)，并且将该混合物在室温下搅拌1h，然后在真空中浓缩并且和甲苯共蒸发给出粗品，该粗品无需进一步纯化被用于后续步骤(507mg，定量)。
一批15g的中间体6通过硅胶快速柱层析进行纯化，使用梯度(dcm/7nnh3在meoh中，1:0至9:1)。将这些产物级分进行蒸发以提供透明的玻璃，其吸收在6nhcl/2-丙醇中，蒸干并且重溶解在2-丙醇中。将所得的晶体进行过滤并且干燥，以获得中间体6(13.5g，作为hcl盐)。
4)中间体71的制备
在-78℃下，在氮氛围下，向二丙异胺(156.1g，1.54mol)在thf(1l)中的搅拌溶液里逐滴添加n-buli(617.0ml，1.54mol)并且将该混合物在-78℃下搅拌30min，随后逐滴添加乙酸叔丁酯(179.2g，1.54mol)并且将该混合物搅拌30min，然后逐滴添加三异丙氧化氯钛(1.54l，1.54mol)，并且将该混合物进一步搅拌50min。
逐滴添加i-69(160g，0.62mol)在thf中的溶液，并且将该混合物搅拌3h，将该反应物用饱和溶液nh4cl(2l)淬灭，并且用etoac(3x3l)萃取。将合并的有机层进行干燥(na2so4)，过滤并且蒸发以给出粗品，通过柱层析(硅胶；石油醚/etoac5/1)将其纯化，以获得呈白色固体的i-71(135g，53％)。
5)中间体72的制备
从i-71起始，遵循与针对中间体i-5所描述的程序类似的程序来合成中间体i-72。
6)中间体73的制备
从i-72起始，遵循与针对中间体i-6(程序1)所描述的程序类似的程序来合成中间体i-73。
中间体74-75的制备
中间体74-75从指示的起始材料以与i-7类似的方式而制备：
可替代地，i-75的合成如下
在-78℃下，向lda(2m在thf/庚烷/乙苯中，100ml，200mmol)在thf(450ml)中的溶液里中添加至甲氧基乙酸乙酯(25ml，208.9mmol)。将溶液搅拌30min，随后逐滴添加氯三异丙氧基钛(iv)(200ml，200mmol)。在-78℃下，将溶液搅拌另外30min，随后添加在thf中(450ml)中的i-69的溶液(24.5g，79.5mmol)。将溶液在那个温度下搅拌2h，将nh4cl添加至反应混合物，将其搅拌10min，在此之后添加
中间体76-77的制备
以下中间体从指示的起始材料以与i-8类似的方式而制备：
中间体78和73的制备(可替代的程序)
中间体78和73从指示的起始材料以与i-6(程序2)类似的方式而制备：
中间体79的制备
在-78℃下，将lda(2m在thf/己烷中，8.57g，35.52mmol)逐滴添加至甲基2-苄氧基)乙酸酯([31600-43-8]，20g，88.79mmol)在干燥的thf(在分子筛上，130ml)中的溶液中。将溶液在-78℃搅拌30min，逐滴添加三异丙氧化氯钛(1m在己烷中，90ml，90mmol)，并且将所得混合物在-78℃下进一步搅拌55min。将i-70(8.57g，35.52mmol)在干燥的thf(60ml)中的溶液缓慢添加至该溶液中，将其在-78℃下搅拌10min。缓慢添加饱和nh4cl溶液。将该混合物经
实例a5
中间体9的制备
在0℃下，向中间体6(3.20g，11.42mmol)在dcm(1.9ml)中的溶液里添加至et3n，随后逐滴添三氟乙酸酐。将所得混合物在室温下搅拌7h，直至lc-ms显示完全转化。添加水并且将有机层分离，用1nhcl洗涤并且然后用盐水和饱和水性nahco3的混合物洗涤。干燥(mgso4)，过滤并且蒸发溶剂提供黄色晶体，将其在真空中干燥(4.42g，96％纯度，99％)。
中间体9也制备自中间体6盐酸盐：
在0℃下，向中间体6.hcl(12.5g，40mmol)和et3n(11.5ml，83mmol)在dcm(126.5ml)中的溶液添加三氟乙酸酐(6.0ml(43.4mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。添加1nhcl并且将该层分离，然后添加1nnaoh并且将该层分离。将该有机层用饱和水性nahco3洗涤并且然后用盐水洗涤，干燥(mgso4)，过滤并且蒸发，以给出呈白色固体的中间体9(11.5g，77％)。
中间体40的制备
将中间体6(35.5g，112mmol)在提供机械搅拌的三颈圆底烧瓶中溶解于去矿物质水(213ml)中。添加碳酸钠(23.8g，224mmol)并且将该混合物冷却至0℃。然后添加苯甲酸苄酯(24.0ml，168mmol)并将该反应物用机械搅拌16h，下一步，将该反应物过滤。弃去水层。将该滤饼用庚烷研磨，过滤并且在真空中干燥，以给出呈白色固体的中间体40(42.2g，91％)。
中间体80-81的制备
中间体80-81从指示的起始材料以与i-40类似的方式而制备：
实例a6
中间体10的制备
将戴斯-马丁氧化剂(11.43g，26.95mmol)分批添加至中间体9(4.4g，11.23mmol)在dcm中(80ml)中的溶液里。将该反应物在室温下搅拌。4h后lc-ms显示部分转化。另外1.2当量的戴斯-马丁氧化剂分批添加至混合物中，并且将该混合物搅拌2h。lcms显示完全转化。将该反应物用饱和溶液nahco3处理。并且然后与nahso3的10％溶液在室温下搅拌过夜。将有机相然后分离并且将水层用dcm萃取。将合并的有机相干燥(mgso4)，过滤并且蒸发。通过快速柱层析(二氧化硅；庚烷/etoac100/0至0/100)纯化该残余物。将这些产物级分蒸发提供为一种透明油的中间体10(3.74g，89％)。
另一批中间体10的合成也遵循：
将戴斯-马丁氧化剂(19.5g，46mmol)分批添加至中间体9(11.5g，29mmol)在dcm(208.6ml)中溶液中。将该反应物在室温下搅拌，然后用饱和aq.nahco3处理，并且然后用10％na2so3溶液处理，并且在室温下搅拌2h。将有机相然后分离，并且将水层用dcm萃取。将合并的有机相干燥(mgso4)，过滤并且蒸发。通过快速柱层析(硅胶，etoac在庚烷中0/100至40/60)纯化该残余物。收集所希望的级分并且在真空中蒸发，以获得呈浅黄色奶油状的中间体10(10.7g，97％)。
中间体41的制备
将戴斯-马丁氧化剂(59g，140mmol)分批添加至中间体40(37g，89mmol)在dcm(635ml)中的溶液里。将该反应物在室温下搅拌1h45min，下一步，将该反应物用水性饱和nahco3(100ml)处理，然后用水性饱和na2so3(100ml)处理，之后将其在室温下搅拌2h。将有机相然后分离，并且将水层用dcm萃取。将合并的有机相在mgso4上干燥，过滤并且蒸发。通过快速柱层析(硅胶，etoac在庚烷中，梯度：0/100至40/60)纯化该残余物。收集所希望的级分并且在真空中蒸发，以获得呈黄色奶油状的中间体41(27.5g，75％)。
中间体82-84和112的制备
中间体82-84和112从指示的起始材料以与i-41类似的方式而制备：
实例a7
中间体11的制备
将中间体10(3.73g，9.97mmol)溶解在meoh(56ml)中。添加mgo(243mg，6.037mmol)，随后添加2-(甲磺酰基基)乙腈(1.425g，11.97mmol)。在室温下搅拌1h，然后经
中间体42的制备
将2-(甲磺酰基)乙腈(15.9g，133mmol)和氧化镁(4.0g，100mmol)添加至中间体41(27.5g，66.7mmol)在meoh(344ml)中的溶液里。将该混合物在60℃下搅拌7h。将该反应物然后允许到达室温，经
中间体85-87的制备
中间体85-87从指示的起始材料以与i-42类似的方式而制备：
实例a8
中间体12的制备
将中间体11(2.63g，5.53mmol)在thf(53ml)中搅拌，并且冷却至0℃。添加nabh4(314mg，8.3mmol)，并且将反应混合物在0℃下搅拌3h。添加冰，过量hcl(1n)和水，随后添加etoac。将冰冷的混合物用naoh(1n)进行碱化，并且将有机层分离并且用etoac萃取水层。将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤并且在真空中去除溶剂。通过快速柱层析(二氧化硅；dcm/(7nnh3在meoh中)100/0至90/10)纯化该残余物，以给出12(678mg，57％纯度，15％)。
中间体88的制备
i-88从i-86以类似于i-12的方式而制备。
实例a9
中间体13的制备
将中间体12(830mg，1.74mmol)溶解在thf(26ml)中，并且在0℃下，在氮氛围下搅拌。添加nah(60％在矿物油中的悬浮液，83mg，2.09mmol)，并且将该混合物在0℃下搅拌15min。最终添加mei(0.13ml，2.09mmol)并且将该反应混合物在0℃下搅拌2h。用水淬灭该反应并且用etoac进行萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且将溶剂在真空中去除。通过快速柱层析(二氧化硅；dcm/meoh100/0至90/10)纯化该残余物。在蒸发溶剂之后，获得透明玻璃状的中间体13(845mg，99％)。
中间体113的制备
在0℃下，将i-121(298mg，0.83mmol)在thf(10ml)中的溶液添加至ch3i(0.10ml，1.65mmol)和cs2co3(295.5mg，0.91mmol)中。将该反应混合物在0℃下搅拌1.5h，添加nh4cl和etoac，并且将该层分离。将有机层用etoac萃取，并且将合并的有机层干燥(mgso4)，并且浓缩，以给出通过快速柱层析(瑞瑟谱金(redisepgold)，24g；庚烷/etoac100/0至60/40)纯化的残余物，以获得呈无色油状的i-113(254mg，82％)。
中间体43的制备
将中间体42(28.0g，54.3mmol)溶解在thf中(808ml)，并且在10℃下，在氮氛围下搅拌。添加nah(60％分散于矿物油中，3.91g，97.8mmol)，并且在10℃下，在氮氛围下继续搅拌15min。下一步，添加ch3i(3.72ml，59.8mmol)，再次在10℃下继续搅拌45min。下一步，将该反应物用h2o淬灭并且用etoac萃取。将有机层分离，用mgso4干燥，过滤，并且将溶剂在减压下蒸发。通过快速柱层析(硅胶，etoac在庚烷中，梯度：0/100至30/70)纯化该粗混合物。收集所希望的级分并且在真空中蒸发，以获得呈白色泡沫的中间体43(26.6g，92％)。
中间体89-91的制备
中间体89-91从指示的起始材料以与i-43类似的方式而制备：
实例a10
中间体14的制备
将accl(1.5ml，21.1mmol)添加至冰冷的meoh(8ml)溶液中。将中间体13(558mg，1.136mmol)溶解在meoh(2ml)中的溶液里，然后添加并且将该反应混合物在密封
制备中间体14的可替代的方法
将hcl(37％在水中，1.2ml，14.8mmol)添加至中间体13(391mg，0.80mmol)在meoh(1ml)中的溶液里，并且将该混合物在130℃下加热48h，直至lc-ms显示完全转化。冷却至室温后，将该混合物中倾倒入冰冷naoh溶液(1n)中并且用etoac(x3)萃取。将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤并且在真空中蒸发溶剂，以给出非对映异构体的混合物。
分离成中间体14a和中间体14b
中间体14可以通过快速柱层析(二氧化硅；庚烷/etoac100/0至0/100)分离成非对映异构体中间体14a(28％-31％，从中间体13获得)和中间体14b(36％-37％，从获得中间体13)。
制备中间体14a和14b的可替代的方法
将hcl(9m在h2o中，44.8ml)添加至在提供机械搅拌的哈氏合金中(耐酸)高压釜中的中间体43(6.4g，12.1mmol)在乙酸(34.6ml)中溶液中。将所得浆液在140℃下加热4h，内部温度(180°夹套温度)。冷却至室温后，用1nnaoh和etoac稀释反应混合物，并且在室温下搅拌1h。下一步，将该混合物过滤，并且将剩余的固体用etoac和水洗涤，直至在固体中没有化合物剩余。将滤液的有机层分离并且将水层再一次用etoac萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经mgso4干燥，过滤并且蒸发。通过柱层析(硅胶，etoac在庚烷中，梯度：0/100至50/50)纯化该残余物。将所希望的级分(第一级分)收集，并且在真空中蒸发，以给出呈白色固体的中间体14a(1.84g，38％)。将第二级分收集并且蒸发，以给出透明玻璃状的中间体14b(1.46g，31％)。
中间体92a和92b的制备
步骤1：在0℃下，在氮氛围下，将i-90(301mg，0.55mmol)溶解在hbr(33％在acoh中，44.5mg，0.55mmol)中，并且将所得混合物在0℃下搅拌1.5h。将该混合物用etoac稀释，并且添加饱和nahco3溶液。将有机层萃取，干燥(mgso4)，在真空中浓缩，并且通过柱层析(硅胶；庚烷/etoac1/0至5/5)纯化。收集这些产物级分，并且蒸发，产生207mg(91％)橘色油。
步骤2：将hcl(9m在h2o中，1.85ml，16.6mmol)添加至步骤1中分离的油(206mg，0.5mmol)在acoh(1.43ml)中在微波管中的溶液中，并且将该混合物在微波辐射下在140℃下搅拌10h。将etoac和水添加至该混合物，然后添加na2co3，直至ph碱性。将有机层分离并且将水层再一次用etoac萃取。将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤并且蒸发，产生棕色油，其通过制备型hplc进行纯化(固定相：rpxbridge制备型c18obd-10μm，30x150mm；流动相：在水中的0.25％nh4hco3溶液，meoh)产生呈浅白色固体的i-92a(20mg，10％)和i-92b(34mg，17％)。
中间体93的制备
从i-89(n.b.步骤2在微波中的反应时间＝2h)起始，遵循与针对中间体i-92a和b的制备所描述的程序类似的程序合成i-93。
实例a11
中间体15的制备
在将温度保持在约-50℃的速率下，在氮下，将烯丙基溴化镁(1m在et2o中，25.1ml，25.1mmol)逐滴添加至中间体3(5g，14.78mmol)在dcm中的溶液里。完成添加后，将该反应物在-50℃下搅拌30min，并且然后允许到达-20℃。将nh4cl10％水性溶液在氮氛围下逐滴添加。将有机层分离并且将水层用dcm萃取，将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤并且在真空中去除溶剂，以给出通过快速柱层析(二氧化硅；庚烷/etoac100/0至50/50)纯化的粗品。
收集这些产物级分，并且在真空中去除溶剂，以给出中间体15(3.6g，64％)。
实例a12
中间体16的制备
向中间体15(1.42g，3.734mmol)在丙酮(150ml)和水(7.5ml)的混合物中的溶液添加少量苏丹iii。将溶液冷却至0℃，并且将o3/o2混合物通过烧瓶，直至红色消失(2h)。将该反应物用氮净化2min，并且用水和dcm稀释。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中去除溶剂，以获得中间体16(1.2g，84％)。
实例a13
中间体17的制备
将中间体16(2.05g，5.363mmol)溶解在meoh(30ml)中。添加mgo(131mg，3.25mmol)，随后添加氰乙酸甲酯(425mg，6.435mmol)，并且在室温下搅拌8h。将该混合物然后经
实例a14
中间体18的制备
通过遵循与所述的用于合成中间体13的顺序相似的合成顺序，从中间体17起始获得中间体18。
实例a15
中间体19的制备
将中间体18(380mg，0.851mmol)溶解在甲酸中(11.2ml)。将该反应混合物在80℃下加热12h。在真空中去除溶剂，并且将该残余物溶解在dcm中。添加na2co310％水性溶液，直至水层碱化。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且蒸发溶剂。通过快速柱层析(二氧化硅；dcm/(7nnh3在meoh中)100/0至90/10)纯化该残余物，以获得中间体19(160mg，55％)。
中间体94，114和115的制备
中间体94，114和115从指示的起始材料以与i-19类似的方式而制备：
实例a16
中间体20的制备
通过遵循与文献中所述的那种类似的合成途径(参见例如wo2011138293a1)，从可商购的2’-氟苯乙酮(cas：445-27-2)起始，中间体20在两个步骤中获得。基于文献中的数据指定立体化学。
实例a17
中间体21的制备
中间体20(789.43g，2.045mol)溶解在meoh(3.31l)中，并且然后在21℃下经60min添加hcl(4m在二噁烷中，639ml，2.556mol)。将该混合物在室温下搅拌30min，然后允许静置过夜。然后将溶剂蒸发，并且将该残余物吸收于2ldcm中。添加2l水，将各相分离并且将有机层再一次用hcl(1n在水中，500ml)洗涤。将该酸性的水层用dcm(2l)搅拌并且添加nahco3饱和溶液sol.(3l)直至达到碱性，然后ph用46ml浓缩hcl被带至ph6-7，以打破乳液并且获得不同的层。将有机层分离，并且将水层再一次用dcm(600ml)和nahco3溶液(100ml)处理。将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤并且在真空中浓缩。将该粗材料照这样用在后续的步骤中(390g，78％)。
中间体95的制备
从i-79起始，遵循与中间体i-21的制备所描述的程序类似的程序来合成i-95。
实例a18
中间体22的制备
讲中间体21(26g，106.88mmol)溶解在meoh(116ml)中，然后添加boc-酸酐(69.98g，320.65mmol)。将该混合物在60℃下搅拌7h，然后将溶剂蒸发并且通过快速柱层析(二氧化硅；庚烷/etoac100/0至80/20)纯化该残余物。这些产物获得为呈浅黄色的油(36g，98％)。
中间体96的制备
从i-95起始，遵循与中间体i-22的制备所描述的程序类似的程序来合成i-96。
中间体45的制备
将乙基(3r)-3-{[(r)-叔-丁基亚磺酰基]氨基}-2,2-二氟-3-(2-氟苯基)丁酸酯(15.1g，41.32mmol，cas：1393802-40-8，描述于us2015/0232449和wo2012/110459中)溶解在67mlmeoh中，并且然后添加在二噁烷中(20.7ml，82.65mmol)4mhcl。将该混合物在室温下搅拌30min。将溶剂蒸发。将该残余物吸收于水和dcm中，滴加一些额外的hcl。将有机层再一次用1nhcl萃取和洗涤。将有机层去除。将合并的酸性的水性层用dcm稀释并且添加nahco3水性饱和溶液直至碱性。将有机层分离，并且将水层再一次用etoac萃取。将合并的有机层经mgso4干燥，过滤并且在真空中浓缩，以提供呈黄色油状的中间体45(7.8g，29.86mmol)。
中间体46的制备
将中间体45(7.6g，29.1mmol)溶解在meoh(33ml)中，然后添加boc-酸酐(19.048g，87.3mmol)。将该混合物在60℃下搅拌11h，然后在室温下搅拌11小时。将溶剂在真空中蒸发，并且通过快速柱层析(二氧化硅；庚烷/etoac100/0至80/20)纯化该粗产物，以获得中间体46(7.56g，74％纯度，71％)。
实例a19
中间体23和中间体24的制备
在5l四颈圆底烧瓶中，将中间体22(40g，116.492mmol)溶解在dcm(400ml)中，并且将该混合物冷却至-78℃。逐滴添加dibal(1m在庚烷中，384.4ml，384.4mmol)，完成添加后，lc-ms和tlc显示这些起始材料完全消耗。在水(1.8l)中和etoac(700ml)中添加四水合酒石酸钾钠(494g，1.75mol)，并且将该混合物搅拌80min。将各相然后分离并且将水层再一次用etoac萃取。将有机层合并，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中去除挥发物。通过快速柱层析(二氧化硅；庚烷/etoac100/0至80/20)纯化该粗品，以获得中间体23(26g，75％)和中间体24(5g，14％)。
在适合的吡啶存在下，通过用与所报导的用于合成中间体10的程序相似的合成程序，中间体24可以转化成中间体23。
中间体23的可替代的制备方法
在0℃下，在氮氛围下，将libh4(2m在thf中，1.657ml，3.314mmol)逐滴添加至中间体22(569mg，1.657mmol)在thf(7.4ml)中的溶液里。将该混合物在0℃下搅拌90min，直至lc-ms显示完全转化，然后将该混合物小心用乙酸(0.4ml在10ml水中)淬灭。添加etoac，将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中浓缩，以给出呈灰白色油状的中间体23，其按原样用在后续的步骤中(499mg，定量)。
中间体97和116的制备
中间体97和116从指示的起始材料以与i-23(可替代地方法)类似的方式而制备：
中间体47的制备
在-78℃下，在氮下，将dibal(1m在己烷中，33.588ml，33.6mmol)逐滴添加至中间体46(3.678g，10.2mmol)在dcm(40ml)中的搅拌溶液里。将该混合物在-78℃下搅拌2h。将该混合物用罗谢尔盐饱和溶液处理，并且用etoac稀释。将该混合物在室温下搅拌45min，将该混合物用盐水处理并且用etoac萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中浓缩。通过快速柱层析(二氧化硅；庚烷/etoac100/0至60/40)纯化该粗产物，以获得中间体47(2.36g，100％纯度，73％)。
实例a20
中间体25的制备
通过遵循与所述的用于合成(按顺序)中间体17，中间体12，中间体13和中间体19的那种类似的合成途径，从中间体23起始获得中间体25。观察到在位置3上的外消旋作用。
实例a21
中间体26的制备
将中间体25(320mg，1.215mmol)溶解在h2so4(13.6ml)中，并且在0℃下搅拌。添加kno3(135mg，1.337mmol)，将该反应物在0℃下搅拌15min，并且然后用dcm稀释。在0℃下，使用na2co3水性溶液和固体na2co3将该混合物小心碱化。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中去除溶剂，以给出固体按原样用于后续的步骤中(250mg，67％)。
中间体98的制备
从i-93起始，遵循与中间体i-26的制备所描述的程序类似的程序来合成i-98。
实例a22
中间体27的制备
在氮气流下，pd/c(10％wt/wt，86mg，0.08mmol)悬浮于meoh(30ml)中。在氢氛围下，添加中间体26(250mg，0.81mmol)并且将该反应混合物在室温下搅拌3h，直至lc-ms显示反应完成，在氮氛围下经
实例a23
中间体28的制备
通过遵循与所述的用于合成(按顺序)中间体15，中间体11，中间体12和中间体31的那种类似的合成途径，从已知的(r,e)-n-(1-(2-氟苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(cas：1312718-98-1)起始获得中间体28。
中间体50的制备
中间体50可以通过遵循如下报告的三步骤程序之一而制备。
1)中间体48的制备
在60℃下，将中间体47(2.36g，7.4mmol)在meoh(70ml)中搅拌。添加mgo(449.65mg，11.2mmol)和ti(ipro)4(10.9ml，37.2mmol)添加在thf(15ml)中的2-(甲磺酰基)乙腈(2.658g，22.3mmol)。将溶液在60℃下搅拌2h，将该反应混合物经
2)中间体49的制备
将中间体48(3.052g，7.3mmol)溶解在meoh(10ml)和thf(50ml)中，在10℃下搅拌。添加氰基硼氢化钠(458.36mg，7.3mmol)，并且在10℃下搅拌2.5h。添加nh4cl饱和溶液和etoac。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中浓缩。通过快速柱层析(二氧化硅；n-庚烷/etoac100/0至60/40)纯化该粗产物，以获得中间体49(1.48g，100％纯度，48％)。
3)中间体50的制备
将中间体49(1.48g，3.5mmol)溶解在thf(40ml)中，在0℃下，在氮氛围下搅拌。添加nah(323.811mg，8.1mmol)，在0℃下，在氮氛围下搅拌15min。添加mei(0.4ml，6.0mmol)，在0℃下搅拌2.5h。添加h2o和etoac。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中浓缩。中间体50按原样用于后续的步骤中(1.680g，83％纯度，110％)。
中间体117的制备
从i-112起始，中间体117可以通过应用与合成i-50所报告的类似的三步骤程序而获得。
实例a24
中间体29的制备
中间体29可以通过将针对合成中间体19而报道的条件应用于获得中间体28来获得(定量)。
中间体51的制备
将中间体50(1.680g，3.9mmol)溶解在甲酸(21ml)中，并且在室温下搅拌2h。溶液被带至80℃持续5h，将其在室温下搅拌过夜。将溶液在真空中浓缩。将该残余物溶解在dcm中，并且用nahco3饱和溶液洗涤，将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中浓缩。通过快速柱层析(二氧化硅；dcm/meoh.nh3100/0至96/4)纯化反应混合物，以得到中间体51(778mg，93％纯度，60％)。
实例a25
中间体30的制备
在室温下，将中间体29(700mg，2.346mmol)溶解在dcm(40.6ml)中，并且添加alme3(2m在甲苯中，3.52ml，7.038mmol)。将该反应混合物搅拌16h，然后用na2co3饱和溶液稀释。将水层用etoac(x3)萃取，将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤，在真空中去除溶剂。通过快速柱层析(二氧化硅；dcm/(7nnh3在meoh中)100/0至90/10)纯化该粗品。蒸发溶剂后，得到呈浅黄色油状的中间体30。
中间体52的制备
将中间体51(314mg，0.1mmol)溶解在甲苯(6ml)中，在50℃下，在氮下搅拌溶液。添加三甲基铝(1.409ml，2m在甲苯中，2.8mmol)，并且搅拌1.5h，将该混合物用dcm稀释并且用na2co3饱和溶液淬灭。将有机层分离并且将水层用dcm萃取。将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤并且在真空中浓缩。通过快速柱层析(二氧化硅；dcm/7nnh3在meoh中，100/0至98/2)纯化该粗产物，以得到中间体52(184mg，100％纯度，59％)。
实例a26
中间体31的制备
通过遵循与所描述的用于合成中间体26的程序类似的程序，从中间体30(94％)起始获得中间体31。
中间体53的制备
在0℃下，将中间体52(239mg，0.7mmol)溶解在tfa(1.6ml)中，然后冷却至-10℃。添加h2so4(0.381ml，7.1mmol)并且在-10℃下搅拌溶液。缓慢添加kno3(79.495mg，0.8mmol)，并且将该混合物搅拌10min，将该反应混合物倾倒入冰/nh3/etoac乳液(2ml)。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中浓缩。中间体53按原样用于后续的步骤中(285mg，93％纯度，定量)。
中间体118-119的制备
从指示的起始材料以与i-53类似的方式而制备中间体118-119：
实例a27
中间体32的制备
向中间体31(465mg，1.355mmol)在thf(18ml)和etoh(3.6ml)中的溶液添加sncl2(2.57g，13.55mmol)。将该反应混合物在55℃下搅拌70min，然后在真空中去除溶剂，并且将该粗品在etoac和na2co3饱和溶液之间分配。将水层再一次用dcm萃取，将合并的有机层用盐水和水洗涤，干燥(mgso4)，并且在真空中浓缩，以给出呈白色固体的中间体32(471mg，定量)，将该中间体32不进行另外纯化地用在后续步骤中。
中间体99的制备
从i-98起始，遵循与针对i-32的制备所描述的程序类似的程序来合成i-99。
中间体54的制备
向中间体53(285mg，0.751mmol)在thf(9ml)和etoh(2ml)中的溶液添加氯化亚锡(1.425g，7.5mmol)。将该无色溶液在55℃下搅拌2.5h，将溶液用na2co3饱和溶液处理。将水层用etoac萃取。将合并的有机层用盐水和水洗涤，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中浓缩。通过快速柱层析(二氧化硅；dcm/7nnh3在meoh中从100/0至98/2)纯化该粗产物，以得到中间体54(113mg，98％纯度，43％)。
中间体100和120的制备
中间体100和120从指示的起始材料以与i-54类似的方式而制备：
实例a28
中间体33的制备
通过遵循与所描述的用于合成中间体15的程序相似的合成程序，从已知的叔丁基n-[1-(5-溴-2-氟-苯基)-2,2-二氟-亚乙基]氨基甲酸酯(cas：1262858-99-0)(89％)起始获得中间体33。
实例a29
中间体34的制备
通过遵循与所描述的用于合成(按顺序)中间体16，中间体17，中间体18和中间体19的程序相似的合成程序，从中间体33起始可以获得中间体34。
实例a30
中间体35的制备
将(3s)-3-氨基-3-(5-溴-2-氟苯基)丁-1-醇(cas：1194044-45-5，10g，38.15mmol)在thf(174ml)中搅拌。boc-酸酐(15g，68.67mmol)连同nahco3水性溶液(80ml)一起添加，并且将该反应混合物在室温下搅拌过夜。然后添加dcm，将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中去除溶剂。通过柱层析(二氧化硅；庚烷/etoac，100/0至50/50)纯化该残余物。收集这些产物级分，并且在真空中去除溶剂，以给出中间体35(13.5g，98％)。
实例a31
中间体36的制备
通过遵循与所描述的用于合成(按顺序)中间体10，中间体17，中间体12和中间体13的程序相似的合成程序，从中间体35起始可以获得中间体36。
实例a32
中间体37和38的制备
将中间体36(1.5g，3.535mmol)在室温下在甲酸中(25ml)中搅拌3小时。在此之后，lc-ms分析显示boc-断裂。将该反应混合物在70℃下，在真空中蒸发。添加另外的10ml甲酸，并且在70℃下，在真空中进行溶剂的新蒸发。lc-ms显示转化为环化产物，形成两种非对映异构体。添加dcm和na2co310％水性溶液，将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中蒸发溶剂。通过柱层析(二氧化硅；dcm/(7nnh3在meoh中)100/0至90/10)进行纯化，获得中间体37(200mg，17％)，中间体38(130mg，11％)和几个可以丢弃的混合级分。
实例a33
中间体39的制备
通过遵循与所描述的用于合成(按顺序)中间体11，中间体12，中间体13，中间体19，中间体26和中间体32的程序相似的合成程序，从中间体23起始可以获得中间体39。
实例a34
中间体44的制备
中间体44(游离碱)/(.hcl)
将叠氮化钠(1.06g，16.3mmol)，cui(1.11g，5.82mmol)和碳酸钠(0.99g9.31mmol)添加至中间体14a(1.84g，4.66mmol)在acn(55ml)中的溶液里。将该混合物用氮很好的净化后，添加n,n'-二甲基乙二胺(0.88ml8.15mmol)，并且将该混合物在100℃下搅拌16h(封闭式容器)。将该反应物倾倒入25％水性nh3中，并且在室温下搅拌1h。下一步，将该混合物用etoac萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，并且用mgso4干燥，在此之后在减压下蒸发溶剂。通过柱层析(80g硅胶，dcm/7nnh3在meoh中，梯度：1:0至9:1)纯化该残余物两次。在蒸发这些产物级分后，将该残余物重新溶解在dcm中，并且添加6nhcl/2-丙醇(2ml)。将溶剂蒸发，并且将该残余物重新溶解在甲醇中，并且再次蒸发。在50℃下，将该残余物在真空中干燥过夜，提供呈粉色固体的中间体44.hcl(810mg，43％，92％纯)。中间体44进一步通过制备型hplc(固定相：rpxbridge制备型c18obd-10μm，30x150mm，流动相：0.25％nh4hco3溶液在水中，meoh)产生呈白色固体的中间体44(游离碱)(289mg，30％来自中间体14a)。
实例a35
中间体55的制备
叔丁基[(2s)-2-(5-溴-2-氟苯基)-4-氧杂杂丁-2-基]氨基甲酸酯(10.27g，28.51mmol，cas：1374001-20-3，描述于wo2012057247)溶解在173mlmeoh中。下一步，添加mgo(696mg，17.26mmol)和(甲磺酰基)乙腈(6114mg，51.32mmol)。将该反应混合物然后在室温下搅拌2h，并且经
中间体56的制备
将中间体55(13.2g，18.51mmol)在529mlthf中搅拌，将该反应混合物冷却至-5℃，添加nabh4(1.62g，42.77mmol)，将该反应混合物在0℃下搅拌30分钟。添加水性nh4cl(1m)和dcm，并且将该混合物搅拌一周末。将有机层分离，用mgso4干燥，过滤，并且将溶剂在减压下蒸发。通过柱层析用80g硅胶(梯度n-庚烷到100％etoac)纯化反应混合物两次。收集这些产物级分，并且在减压下蒸发溶剂，产生为透明玻璃状的中间体56(3.23g，31％)。
中间体121的制备
从i-122起始，遵循与针对i-56的制备所描述的程序类似的程序来合成i-121。
中间体57的制备
将中间体56(1g，2.16mmol)溶解在1,4-二噁烷(27ml)中，添加甲醛(37％在水中，0.4ml，5.39mmol)和三乙胺(1m在thf中，0.1ml，0.11mmol)。将该反应混合物在38℃下搅拌48h，直至lc-ms显示完全反应，然后冷却至室温。添加etoac和水，并且将有机层分离。将有机层用etoac萃取，将有机层合并、干燥(mgso4)，并且在真空中浓缩。通过快速柱层析(二氧化硅；庚烷/etoac1/0至5/5)纯化该残余物，以获得呈白色固体的中间体57(893mg，80％)。
实例a36
中间体58的制备
在0℃下，在氮下，将dast(0.79ml，6.49mmol)逐滴添加至中间体56(400mg，0.81mmol)在dcm(15ml)中的溶液里。将该反应混合物加温至室温，并且搅拌1h，然后将温度增加至50℃，并且将该反应混合物搅拌20h。添加nahco3饱和溶液，将该混合物用dcm萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中浓缩，以获得呈橙色油的中间体58，将其不经进一步纯化而用于下一步骤(440mg，定量)。
实例a37
中间体59的制备
将中间体58(440mg，0.89mmol)溶解在tfa(11ml)中，并且将后续的混合物在室温下搅拌45min，直至lcms显示反应完成。将该反应混合物吸收于dcm和nahco3饱和溶液中。将有机层分离，并且将水层用dcm(3x)和etoac(1x)萃取。将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤并且在真空中浓缩，以给出通过柱层析(二氧化硅；dcm/meoh1/0至9/1)纯化的粗材料，以给出呈棕色固体的中间体59(317mg，78％)。
实例a38
中间体60的制备
将中间体59(280mg，0.71mmol)溶解在微波管中的乙酸(14ml)和hcl(9m在水中，2ml)中，然后将该反应混合物在160℃下搅拌12h。将该反应混合物浓缩，将该残余物吸收于冰和etoac中，并且然后添加na2co3，直至碱性。将有机层分离，并且再一次用etoac萃取。将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤并且蒸发，以获得呈橙色的油，将该油通过柱层析(二氧化硅；庚烷/etoac1/0至5/5)进行纯化以给出非对映异构体混合物。
分离成中间体60a和中间体60b：
中间体60可以通过制备型hplc(固定相：rpxbridge制备型c18obd-10μm，30x150mm，流动相：0.25％nh4hco3溶液在水中，meoh)分离成非对映异构体中间体60a和中间体60b，以获得中间体60a(70mg，25％)和中间体60b(40mg，14％)。
实例a39
中间体61的制备
向[s(r)]-n-[(1r,2r)-2-氟-1-(2-氟苯基)-3-羟基-1,2-二甲丙基]-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(5g，0.0157mol；cas：1402412-96-7，描述于wo2012/156284)在dcm(54ml)中的溶液里以小部分地添加至戴斯-马丁氧化剂(8g，0.0189mol)。在室温下5h后，将该反应混合物用饱和na2s2o3和饱和nahco3处理(注意：气流释放)。将该双相混合物剧烈搅拌1h。将有机层然后分离，用na2co3溶液(x3)洗涤，并且将水层用dcm萃取。将合并的有机层经mgso4干燥并且蒸发。将该残余物不经进一步纯化使用(3.4g，69％)。
实例a40
中间体62的制备
在0℃下，向中间体61在meoh(90ml)中的搅拌溶液中添加氧化镁(590mg，14.6mmol)和异丙氧基钛(iv)(8.7ml，23.3mmol)，随后添加丙二腈(1.29g，19.5mmol)和氰基硼氢化钠(614mg，9.8mmol)。将该反应物在0℃下搅拌30min，将该残余物经
中间体122的制备
从i-107起始，遵循与针对i-62的制备所描述的程序类似的程序来合成i-22。
实例a41
中间体63的制备
将中间体62(1.4g，3.81mmol)溶解在干燥的thf(100ml)中，并且在0℃下在氮下搅拌。添加nah(60％在矿物油中)(213mg，5.3mmol)，并且在0℃下在氮氛围下搅拌15min。添加mei(0.474ml，7.62mmol)，在0℃下搅拌30min，然后在室温下搅拌120min。在氮氛围下，小心添加h2o并且添加dcm，将有机层分离，用mgso4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂，以获得中间体63(0.6g，57％)。不经进一步纯化而使用该产物
实例a42
中间体64的制备
在0℃下，将硝酸钾(212mg，2.1mmol)添加至中间体63(530mg，1.9mmol)在h2so4(10.2ml，191.1mmol)中的混合物中，并且将该反应混合物在0℃下搅拌15分钟。将该反应混合物倾倒入冰和na2co3饱和溶液中。然后添加dcm，随后添加另外的h2o。在搅拌下小心添加na2co3固体，将该反应混合物碱化至ph>8。添加另外的dcm。将有机相分离并且将水层用dcm萃取。将合并的有机层经mgso4干燥，过滤并且蒸发，以获得粗产物(600mg，97％)，将其不经进一步纯化而使用。
中间体101的制备
从i-104起始，遵循与针对i-64的制备所描述的程序类似的程序来合成i-101。
实例a43
中间体65的制备
将中间体64(600mg，1.86mmol)溶解在meoh(9ml)和h2o(2ml)中的混合物中。添加铁(832mg，14.9mmol)，随后添加另外的氯化铵(1081mg，20.2mmol)。将该反应混合物在70℃下搅拌1h，然后允许冷却至室温。添加meoh和dcm，并且将该混合物经
中间体123的制备
从i-118起始，遵循与针对i-65的制备所描述的程序类似的程序来合成i-123(nb：反应时间23h)。
实例a44
中间体102的制备
在0℃下，向i-94(1.9g，4.70mmol)在dcm(45ml)中的溶液中添加三溴化硼(1m在dcm中，12ml，12mmol)，并且将该混合物在室温下搅拌4h。在室温下，添加另外的三溴化硼(1m在dcm中，4ml，4mmol)，并且将该反应混合物在室温下搅拌16h。将其用饱和水性nahco3溶液淬灭，并且用在meoh中的dcm中的10％7nnh3萃取两次。
将合并的有机层干燥(na2so4)，过滤并且在真空中浓缩。通过快速柱层析(二氧化硅；7nnh3在meoh中在dcm中0/100至7/93)纯化该残余物。收集所希望的级分，并且在真空中浓缩，以获得i-102(1.4g，95％)。
实例a45
中间体103的制备
在室温下，向i-102(900mg，2.86mmol)在meoh(8.2ml)中的搅拌溶液里添加至boc-酸酐(1.87g，8.59mmol)，并且在室温下将该反应混合物搅拌4h。将溶剂通过蒸发去除。将该残余物吸收于dcm中，并且用nahco3饱和溶液洗涤。将有机层干燥(mgso4)，过滤并且蒸发，以获得i-103(1.1g，93％)，将其不经进一步纯化而使用。
实例a46
中间体104的制备
在氮氛围下，将i-103(675mg，1.63mmol)溶解在thf(33ml)中，然后冷却至10℃，在10℃下，添加nah(60％分散于矿物油中，195mg，4.89mmol)，并且在此温度下搅拌15min，然后在10℃下添加ch3i(101μl，1.63mmol)，添加另外的nah(60％分散于矿物油中，52.1mg，1.30mmol)，并且搅拌1h，随后添加另外的nah(60％分散于矿物油中，65.1mg，1.63mmol)，并且将该反应混合物搅拌48h，将该反应混合物用饱和nahco3溶液处理。将水层用etoac萃取，并且将有机层用盐水洗涤，干燥(mgso4)并且过滤。将滤液在真空中浓缩，并且通过快速柱层析(二氧化硅；dcm/meoh100/0至98/2)纯化该粗产物。收集这些产物级分，并且在真空中浓缩，以获得两种级分，它们中的一种需要通过快速柱层析(二氧化硅；庚烷/etoac100/0至50/50)进一步纯化。收集纯的产物级分，合并并且在真空中浓缩，以获得i-104(103mg，15％)。
实例a47
中间体105的制备
在氮下，将pd/c(10％，703.6mg，16.53mmol)添加至i-96(6.9g，16.53mmol)在meoh(413ml)中的溶液里。在室温下，将该混合物进行氢化(大气压力)过夜。
将该混合物通过
实例a48
中间体106的制备
将i-105(10g，30.55mmol)溶解在dmf(200ml)中，然后添加ag2o(7.08g，30.55mmol)和ch3i(3.80ml，61.10mmol)。将该反应混合物加热至60℃，并且搅拌过夜。将该混合物倾倒于h2o中，并且用etoac萃取，干燥(mgso4)并且浓缩，并且通过快速柱层析(redisep，120g二氧化硅；庚烷/etoac100/0至70/30)纯化该残余物，产生i-106(9.01g，80％)。
中间体107的制备
向i-116(483mg，1.54mmol)，4-甲基吗啉n-氧化物一水化物(270.84mg，2.31mmol)和分子筛(粉末状，750mg)在dcm(9.5ml)中的悬浮液溶液里添加至四丙基过钌酸铵(27.1mg，0.08mmol)，并且将该反应混合物在室温下搅拌30min，然后将其过滤，用dcm洗涤并且浓缩。通过快速柱层析(庚烷/etoac100/0至50/50)纯化该残余物，给出呈无色油状的i-107(364mg，76％)。
中间体108的制备
向i-97(9.5g，24.39mmol)在dmf(80ml)中的搅拌溶液里添加咪唑(5.81g，85.37mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(596mg，4.88mmol)，并且将该反应混合物冷却至10℃，在10℃下，然后添加叔丁基二甲基氯硅烷(7.35g，48.79mmol)。24h后，再次添加相同量的叔丁基二甲基氯硅烷，咪唑，和4-(二甲基氨基)吡啶，并且将该反应混合物在室温下搅拌48h，然后用h2o淬灭，用etoac(3x)萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤并且通过蒸发浓缩，以获得通过快速柱层析(硅胶，isco纯化系统，redisep柱，330g，40min；庚烷/etoac100/0至80/20)纯化的残余物。
收集这些产物级分，并且通过蒸发浓缩，以获得i-108(8.5g，69％)。
中间体109的制备
在14℃下，将i-108(7.2g，14.29mmol)用pd/c(10％，331.8mg，0.31mmol)和在etoac(141ml)中的h2进行氢化。在吸收h2后，将该反应混合物经
中间体110的制备
将i-109(4g，9.67mmol)溶解在甲苯(80ml)中。添加naoh(50％在h2o中，24.05ml，455.5mmol)，然后添加苄基三乙基氯化铵(220.3mg，0.97mmol)，并且然后在室温下添加硫酸二甲酯(1.19ml，12.57mmol)，并且搅拌3.5h，将该反应混合物用饱和nh4cl溶液处理。将水层用etoac萃取，并且将有机层用盐水洗涤，干燥(mgso4)并且过滤。将滤液在真空中浓缩，并且通过快速柱层析(二氧化硅，np，快速纯化系统；庚烷/etoac100/0至90/10)纯化该粗产物。收集纯的产物级分，合并，并且在真空中浓缩，以获得i-110(3.88g，94％)。
中间体111的制备
在0℃下，向i-110(3.62g，8.47mmol)在thf(34ml)中的混合物中添加至四丁基氟化铵(1m在thf中，12.70ml，12.70mmol)。在0℃下搅拌1h后，将该反应混合物用nahco3处理，并且将水层用etoac萃取。将有机层用h2o和盐水洗涤，干燥(mgso4)并且过滤。将滤液在真空中浓缩，以获得i-111(3.92g)，将其不经进一步纯化而使用。
最终化合物的制备
实例b1
化合物1和2的制备
将微波管用在二噁烷(5.1ml)中中间体14(195mg，0.493mmol)、5-甲氧基-2-吡嗪甲酰胺(91mg，0.592mmol)，cui(103mg，0.543mmol)和k3po4(209mg，0.987mmol)装载。将小瓶通过氮气鼓泡脱气几分钟。然后，添加反式-n,n'-二甲基环己烷-1,2-二胺(84mg，0.592mmol)，并且在室温下搅拌2min后，将该混合物在100℃加热持续16h。将该混合物倾倒入在meoh中的7nnh3中，并且搅拌1h，下一步，添加水和dcm，并且将有机层分离。将水层用dcm萃取两次。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中浓缩，以提供粗品，将该粗品通过制备型sfc(固定相：chiralceldiacelod20x250mm；流动相：co2，etoh+0.4％iprnh2)进行纯化，以获得两种级分，它们中的每种单独通过快速柱层析(二氧化硅；dcm/(7nnh3在meoh中)100/0至90/10)进一步纯化。将溶剂去除之后，获得呈白色晶体的所希望的化合物(化合物1：52mg，22％，化合物2：58mg，25％)。
实例b2
化合物3，4和5的制备
在氮氛围下，将5-甲氧基-2-吡嗪甲酰胺(76mg，0.494mmol)添加至在二噁烷(10ml)中的中间体19(130mg，0.38mmol)的搅拌溶液里。随后添加k2co3(157mg，1.14mmol)，cui(72mg，0.38mmol)和n,n'-二甲基乙二胺(61μl，0.57mmol)，并且将该得到的混合物在100℃下搅拌16h，将该反应混合物然后用dcm稀释，并且用在水(28％)中的nh3洗涤。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并且在真空中去除溶剂。通过快速柱层析(二氧化硅；dcm/(7nnh3在meoh中)100/0至93/7)纯化所得到的粗品。收集纯的级分，并且在真空中去除溶剂。在dipe中悬浮并且在50℃下在氮气流下干燥后，获得化合物3(化合物4和化合物5的混合物)。通过制备型hplc(固定相：rpxbridge制备型c18odb5μm30x250mm；流动相：0.5％nh4ac溶液，在水中+10％mecn，mecn)进一步纯化该混合级分产生化合物4(22mg，14％)和化合物5(30mg，19％)。
实例b3
化合物6，7和8的制备
在室温下，将中间体27(230mg，0.826mmol)在meoh(19.2ml)中搅拌。并且添加hcl(6m在iproh中，0.206ml，1.24mmol)。在搅拌5min后，添加5-甲氧基吡嗪-2-甲酸(140mg，0.91ml)，5min后，随后添加edci(206mg，1.07mmol)。10min后反应完成，并且在真空中去除溶剂。将该残余物吸收于dcm中并且用水性na2co3溶液洗涤。将有机层干燥(mgso4)，过滤并且蒸发。通过快速柱层析(二氧化硅；dcm/(7nnh3在meoh中)100/0至90/10)纯化该残余物。收集包含产物的级分并且通过制备型sfc(固定相：kromasil(r,r)whelk-o120x250mm；流动相：co2，etoh+0.4％iprnh2)进一步纯化，产生化合物6(87mg，25％)，化合物7(42mg，12％)和化合物8(72mg，21％)。
实例b4
化合物9和10的制备
通过遵循与实例b3中所报导的那种类似的合成程序，从中间体32起始获得化合物9和10的混合物。通过制备型sfc(固定相：chiralpakdiacelad20x250mm；流动相：co2，etoh)进一步纯化，得到呈白色固体的化合物9(180mg，28％)和化合物10(112mg，17％)。
实例b5
化合物11，12，13和14的制备
通过遵循与实例b2中所报导的那种类似的合成程序，从中间体34起始获得两种级分，每者包含化合物11，12，13和14的混合物。随后通过制备型hplc(固定相：rpxbridge制备型c18odb-5μm30x250mm；流动相：0.25％nh4hco3溶液在水中，mecn)和制备型sfc(固定相：chiralpakdiacelad20x250mm；流动相：co2，meoh+0.4％iprnh2)纯化，产生4种级分，它们中的每种包含一种化合物。将溶剂去除之后，在50℃下在氮下浓缩，用dipe研磨并且在50℃下在氮下进一步浓缩，获得所希望的化合物11(8mg，2％)，化合物12(10mg，3％)，化合物13(33mg，9％)和化合物14(39mg，10％)。
实例b6
化合物17和18的制备
通过遵循与实例b3中所报导的那种类似的合成程序，从中间体39起始获得粗品，将其通过制备型sfc(固定相：chiralceldiaceloj20x250mm；流动相：co2，etoh-iproh(50-50)+0.4％iprnh2)纯化，将获得的两种级分分离，通过快速柱层析(二氧化硅；dcm/(7nnh3在meoh中)100/0至98/2)进一步纯化，溶解在dipe/dcm中，在genevactm中干燥并且然后在50℃下在真空中过夜。最终获得呈白色固体的化合物17(7.6mg，7％)和化合物18(24mg，21％)。
实例b7
化合物19的制备
通过遵循与实例b1中所报导的那种类似的合成程序，从中间体14b和5-氟-2-吡啶甲酰胺起始获得粗品，将其通过制备型hplc(rpxbridge制备型c18obd-10μm30x250mm；流动相：0.25％nh4hco3溶液在水中，meoh)进一步纯化。获得呈白色结晶固体的化合物19(25mg，25％)。
实例b8
化合物20的制备
通过遵循与实例b1中所报导的那种类似的合成程序，从中间体14a和5-氟-2-吡啶甲酰胺起始获得粗品，将其通过制备型hplc(rpxbridge制备型c18obd-5μm30x250mm；流动相：0.25％nh4hco3溶液在水中，meoh)进一步纯化。获得呈白色结晶固体的化合物20(34mg，25％)。
实例b9
化合物21的制备
在室温下，将中间体44(游离碱)(100mg，0.25mmol)在甲醇(3.13ml)中搅拌，在此之后添加hcl(5m在2-丙醇中，0.057ml，0.29mmol)。将该反应混合物搅拌5min，然后添加edci(94.8mg，0.50mmol)，并且5min后添加5-氰基-3-甲基吡啶-2-甲酸(80.2mg0.50mmol)。在15min后将该反应混合物浓缩。添加dcm，随后添加饱和水性na2co3。将有机层分离，并且将水层用dcm萃取。将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤并且蒸发。通过柱层析(硅胶，dcm/(7nnh3在meoh中)，梯度：100/0至98/2)纯化该残余物。在50℃下，收集这些产物级分，蒸发并且在真空中干燥，产生呈白色固体的化合物21(107mg，91％)。
化合物41的制备
在室温下，将中间体44(游离碱)(119mg，0.359mmol)在meoh(4.5ml)中搅拌。添加hcl(5m在2-丙醇中，0.060ml，0.360mmol)。将该反应混合物搅拌5min，然后添加5-(氟甲氧基)吡嗪-2-甲酸(116mg，0.677mmol)，并且5min后，添加edci(138mg0.718mmol)。lcms在15min后显示完全转化，将该反应混合物进行蒸发。添加dcm随后添加水性na2co3溶液。将有机层分离并且将水层用dcm萃取。将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤并且蒸发。通过柱层析(硅胶，dcm/(7nnh3在meoh中)，梯度100/0至95/5)纯化该残余物，收集产物级分并且蒸发。将该残余物吸收于二乙醚中，并且添加庚烷。下一步，将该醚缓慢蒸发，直至形成白色固体，将其过滤并且用庚烷，水和再次庚烷洗涤。下一步，在55℃下，在真空中将固体干燥过夜，并且然后在75℃下干燥2h，提供呈白色粉末状的化合物41(150mg，86％)。
实例b10
化合物46的制备
在室温下，将中间体53(113mg，0.323mmol)在meoh(2.5ml)中搅拌。添加hcl(63.176μl，6m，0.4mmol)。将该溶液搅拌5min，然后添加5-(氟甲氧基)吡嗪-2-甲酸(133.603mg，0.8mmol)，并且5min后，添加edci(161.209mg，0.8mmol)，并且搅拌溶液1.5h，添加dcm，随后添加na2co3饱和溶液。将有机层分离并且将水层用dcm萃取，将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤并且将滤液在真空中浓缩。通过快速柱层析(硅胶，梯度dcm/(7nnh3在meoh中)从100/0至98/2)纯化该粗产物，以得到化合物46(34mg，100％纯度，21％)。
分离成化合物23和化合物24
将化合物46(34mg)的非对映异构体经制备型hplc(固定相：rpxbridge制备型c18obd-10μm，30x150mm，流动相：0.25％nh4hco3溶液在水中，meoh)分离。将所希望的化合物级分蒸发至干燥，并且用acn共蒸发以去除残余的碳酸氢铵。将dipe添加至化合物并且通过氮气流过夜去除，产生呈粘性粉末状的化合物24(16.7mg，49％)和化合物23(1.1mg，3.2％)。
实例b11
化合物26的制备
将微波管用在1,4-二噁烷(1.8ml)中的中间体60a(70mg，0.18mmol)，5-氟吡啶-2-甲酰胺(59mg，0.42mmol)，cui(71mg，0.37mmol)和k3o4p(113mg，0.53mmol)装载。将该管通过鼓泡n2脱气几分钟。然后添加(1r,2r)-n,n'-二甲基环己烷-1,2-二胺(61μl，0.39mmol)，在室温下搅拌2min后，将该反应混合物在130℃下加热过夜，直至lcms显示反应完成。将该混合物倾倒入在meoh中的7nnh3里，并且搅拌1h，下一步，添加水和dcm并且将有机层分离。将水层用dcm萃取两次。将有机层分离，经mgso4干燥，过滤并且在真空中浓缩，产生棕色油。经制备型hplc(固定相：rpxbridge制备型c18obd-10μm，30x150mm，流动相：0.25％nh4hco3溶液在水中，meoh)进行纯化，产生固体，将其溶解在meoh中，蒸发并且然后在50℃下，在烘箱中干燥，以获得化合物26(27mg，33％)。
实例b12
化合物27和化合物28的制备
在室温下，向中间体65(300mg.1.02mmol)在meoh中的搅拌溶液里添加hcl(6m在iproh中)(0.257ml，1.54mmol)，并且将该反应混合物搅拌5min，然后添加5-甲氧基吡嗪-2-甲酸(175mg，1.1mmol)并且5min后添加edci(256mg，1.33mmol)。将该反应搅拌10min，然后将溶剂通过蒸发去除。将该残余物吸收于dcm中并且用水性na2co3溶液洗涤。将有机层干燥(mgso4)，过滤并且蒸发。通过快速柱层析(dcm:meoh(nh3(7n)在dcm中)100/0至95/5)纯化该残余物。收集纯的产物级分(非对映异构体化合物)并且蒸发。
经制备型sfc(固定相：chiralpakdiacelad20x250mm，流动相：co2，etoh+0.4iprnh2)进行纯化。收集不同的产物级分，并且将溶剂在减压下蒸发。将产物从dipe悬浮，并且在50℃下在氮气流下干燥，产生化合物28(63mg，14％)和化合物27(56mg，13％)。
实例b13
化合物29a和29b的制备
通过遵循与实例b3中所报导的那种类似的合成程序，从i-99(45mg，0.13mmol)和5-氟吡啶-2-甲酸([107504-08-5]，21mg，0.15mmol)起始，获得化合物29a和29b的混合物。通过制备型sfc(固定相：chiralpakdiacelas20x250mm；流动相：co2，etoh+0.4iprnh2)纯化，产生化合物29a(7mg，12％)和化合物29b(15，25％)。
可替代地，化合物29a/b可以通过遵循与实例b1中所报导的那种类似的合成程序而制备。
实例b14
化合物47的制备
通过遵循与实例b11中所报导的那种类似的合成程序，从i-92a(47mg，0.11mmol)和5-氟吡啶-2-甲酰胺(7.3mg，0.05mmol)起始，获得化合物47(53mg，99％)。经制备型hplc(固定相：rpxbridge制备型c18obd-10μm，30x150mm，流动相：0.25％nh4hco3溶液在水中，ch3cn)进行纯化，随后蒸发洗脱液并且与meoh(x2)共蒸发，产生呈白色固体的化合物47(5.5mg，26％)。
实例b15
化合物48a和48b的制备
通过遵循与实例b12中所报导的那种类似的合成程序，从i-120(100mg，0.29mmol)和5-(氟甲氧基)吡嗪-2-甲酸(120.28mg，0.70mmol)起始，随后经制备型hplc(固定相：rpxbridge制备型c18obd-10μm，30x150mm；流动相：0.25％nh4hco3溶液在h2o中，meoh)纯化，以获得被浓缩的两种级分。添加acn并且在真空中去除溶剂。将这些级分在55℃下在烘箱中保留48h，将dipe添加至这些级分中，并且用氮风吹，产生呈白色粉末状的化合物48a(43.3mg，42％)或48b(33.3，32％)。
实例b16
化合物49a和49b的制备
通过遵循与实例b12中所报导的那种类似的合成程序，从i-123(84mg，0.29mmol)和5-(氟甲氧基)-2-吡嗪甲酸(54.78mg，0.32mmol)起始，随后通过制备型hplc(固定相：rpxbridge制备型c18obd-5μm，30x250mm；流动相：0.25％nh4hco3溶液在水中，meoh)纯化，产生化合物编号49a(13mg，10％)和化合物编号49b(14mg，11％)。
在表1a和表1b中的化合物1至化合物49列出了通过与以上实例之一的类似方式制备的化合物。中间体化合物(其中r2是例如so2et，so2ipr，so2cpr)可以通过分别在与例如中间体11、42和48的制备中所描述的类似的程序中替换2-(甲磺酰基)乙腈为可商购的2-(乙基磺酰基)乙腈，2-[(1-甲基乙基)磺酰基]-乙腈和2-(环丙基磺酰基)-乙腈而制备。在没有指明盐形式的情况下，该化合物作为游离碱获得。‘ex.no.’是指合成该化合物所依据的方案的实例编号。‘co.no.’意指化合物编号。
表1a
cpr意指环丙基，ipr意指异丙基。
表1b
分析部分
lc-ms(液相层析/质谱)
lc-ms通用程序
使用lc泵、二极管阵列(dad)或uv检测器以及如在对应的方法中所指定的柱进行高效液相层析(hplc)测量。若需要，包括其他检测器(参见下文的方法表格)。
使流自柱通入配置有大气压离子源的质谱仪(ms)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(mw)的离子和/或精确质量单-同位素分子量的离子在技术人员的知识内。利用适宜软件进行数据获取。
通过其实验保留时间(rt)和离子描述化合物。如果未在数据表中不同地指定，那么报道的分子离子对应于[m+h]+(质子化的分子)和/或[m-h]-(去质子的分子)。在该化合物不是直接可电离的情况下，指定该加合物的类型(即[m+nh4]+、[m+hcoo]-、[m+ch3coo]-等)。对于具有多种同位素模式的分子(例如br、cl)来说，报道的值是针对最低同位素质量获得的值。获得的所有结果具有与使用的方法通常相关的实验不确定性。
表2.lcms方法代码(以ml/min表示流量；以℃表示柱温度(t)；以分钟表示运行时间)
熔点
值是峰值亦或熔融范围，并且所获得的值具有通常与这种分析方法相关的实验不确定性。
dsc823e(指示为dsc)
对于多种化合物，熔点是用dsc823e(梅特勒-托利多(mettler-toledo))来确定的。使用10℃/分钟的温度梯度来测量熔点。最高温度是300℃。
表3.分析数据-熔点(m.p.)和lc/ms：rt意指保留时间(以分钟计)，[m+h]+意指该化合物的质子化质量，[m-h]-意指该化合物的去质子化质量，方法是指用于(lc)ms的方法。对于一些化合物，确定其准确质量。
sfc-ms方法
使用分析型超临界流体层析(sfc)系统来进行sfc测量，该系统由以下构成：用于递送二氧化碳(co2)和改性剂的二元泵、自动进样器、柱烘箱、配备有经得起400巴的高压流动池的二极管阵列检测器。如果配置有质谱仪(ms)，来自该柱的流被引至该(ms)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴别化合物的标称单一同位素分子量(mw)的离子在技术人员的知识内。使用适当的软件进行数据采集。
表4.分析型sfc-ms方法(以ml/min表示流量；以℃表示柱温度(t)；以分钟表示运行时间，以巴表示背压(bpr))。
表5.分析的sfc数据-rt意指保留时间(以分钟计)，[m+h]+意指该化合物的质子化质量，方法是指用于对映异构体纯的化合物的(sfc)ms分析的方法。
异构体洗脱顺序：a意指第一洗脱异构体；b意指第二洗脱异构体；等等。
nmr
对许多化合物来说，在400mhz处操作的brukerdpx-400光谱仪上、在360mhz处操作的brukerdpx-360上、或在600mhz处操作的brukeravance600光谱仪上记录1hnmr光谱，使用氯仿-d(氘代氯仿，cdcl3)或dmso-d6(氘代dmso，二甲基-d6亚砜)或苯-d6(氘代苯，c6d6)或丙酮-d6(氘代丙酮，(cd3)2co)作为溶剂。化学位移(δ)被报道为相对于四甲基硅烷(tms)(将其用作内标)的百万分率(ppm)。
表6.1hnmr结果
药理学实例
在本发明中提供的化合物是β-位点app-裂解酶1(bace1)的抑制剂。bace1(一种天冬氨酸蛋白酶)的抑制被认为是与阿尔茨海默病(ad)的治疗有关的。来自β-淀粉样前体蛋白(app)的β-淀粉样蛋白肽(aβ)的产生和累积被认为在ad的发作和进展中发挥关键作用。通过在aβ结构域的n末端和c末端分别由β分泌酶和γ-分泌酶引起连续裂解而从淀粉样前体蛋白(app)产生aβ。
具有化学式(i)的化合物凭借它们抑制酶活性的能力而被预期基本上对bace1具有作用。使用下文描述的并且适于此类化合物(并且更具体地，根据化学式(i)的化合物)的鉴定的基于生物化学荧光共振能量转移(fret)的测定和sknbe2细胞中的细胞αlisa测定而测试的此类抑制剂的行为示于表8和表9中。
基于bace1生物化学fret的测定
此测定是一种基于荧光共振能量转移测定(fret)的测定。用于此测定的底物是含有淀粉样前体蛋白(app)β-分泌酶裂解位点的‘瑞典(swedish)’lys-met/asn-leu突变的app源的13个氨基酸的肽。此底物还含有两个荧光团：(7-甲氧基香豆素-4-基)乙酸(mca)是一种具有320nm的激发波长和405nm的发射波长的荧光供体并且2,4-二硝基苯基(dnp)是一种专有的淬灭剂受体。已选择这两个基团之间的距离，以使得在光激发后，供体荧光能量通过共振能量转移被受体显著地淬灭。在被bace1裂解后，荧光团mca与淬灭基团dnp分离，恢复供体的全荧光产额。荧光的增加与蛋白水解速率线性相关。
方法1
简言之，在384孔规格中，在化合物不存在或存在下，将1μg/ml最终浓度的重组bace1蛋白在室温下与10μm底物一起在孵育缓冲液(ph5.0的40mm柠檬酸盐缓冲液，0.04％peg，4％dmso)中孵育120分钟。接下来，通过在t＝0和t＝120处的荧光测量(在320nm处激发并且在405nm处发射)而直接测量蛋白水解的量。结果以rfu(相对荧光单位)表示为t120与t0之间的差异。
通过最小二乘法根据对照最小％对化合物浓度图拟合最佳拟合曲线。由此可以获得ic50值(引起50％活性抑制的抑制浓度)。
lc＝低对照值的中位值
＝低对照：没有酶的情况下的反应
hc＝高对照值的中位值
＝高对照：有酶的情况下的反应
作用％＝100-[(样品-lc)/(hc-lc)*100]
对照％＝(样品/hc)*100
对照最小％＝(样品-lc)/(hc-lc)*100
以下示例性化合物基本上如以上所述地进行测试并且展现以下活性：
表7.
sknbe2细胞中的细胞αlisa测定
在两个αlisa测定中，对产生并分泌到人神经母细胞瘤sknbe2细胞的培养基中的aβ1-42水平进行定量。该测定是基于表达野生型淀粉样前体蛋白(happ695)的人神经母细胞瘤sknbe2。将这些化合物稀释并且添加到这些细胞中，孵育18小时并且随后进行aβ1-42的测量。通过夹入心αlisa测量aβ1-42。αlisa是一种针对aβ1-42的检测分别使用附接到链霉亲和素包被的珠球上的生物素化抗体abn/25和偶联受体珠球的抗体cab42/26的夹心测定。在aβ1-42的存在下，这些珠球紧密靠近。供体珠球的激发引起单线态氧分子的释放，这触发受体珠球中的级联能量转移，从而导致光发射。在孵育1小时之后测量光发射(在650nm处激发并且在615nm处发射)。
通过最小二乘法根据对照最小％对化合物浓度图拟合最佳拟合曲线。由此可以获得ic50值(引起50％活性抑制的抑制浓度)。
lc＝低对照值的中位值
＝低对照：在没有化合物的情况下预孵育的细胞，在αlisa中没有生物素化的ab
hc＝高对照值的中位值
＝高对照：在没有化合物的情况下预孵育的细胞
作用％＝100-[(样品-lc)/(hc-lc)*100]
对照％＝(样品/hc)*100
对照最小％＝(样品-lc)/(hc-lc)*100
以下示例性化合物基本上如以上所述地进行测试并且展现以下活性：
表8.
基于bace2生物化学fret的测定
此测定是一种基于荧光共振能量转移测定(fret)的测定。用于此测定的底物包含淀粉样前体蛋白(app)β-分泌酶裂解位点的‘瑞典’lys-met/asn-leu突变。此底物还含有两个荧光团：(7-甲氧基香豆素-4-基)乙酸(mca)是一种具有320nm的激发波长和405nm的发射波长的荧光供体并且2,4-二硝基苯基(dnp)是一种专有的淬灭剂受体。已选择这两个基团之间的距离，以使得在光激发后，供体荧光能量通过共振能量转移被受体显著地淬灭。在被β-分泌酶裂解后，荧光团mca与淬灭基团dnp分离，恢复供体的全荧光产额。荧光的增加与蛋白水解速率线性相关。
简言之，在384孔规格中，在化合物不存在或存在下，将0.4μg/ml最终浓度的重组bace2蛋白在室温下与10μm底物一起在孵育缓冲液(ph5.0的50mm柠檬酸盐缓冲液，0.05％peg，无dmso)中孵育450分钟。接下来，通过在t＝0和t＝450处的荧光测量(在320nm处激发并且在405nm处发射)而直接测量蛋白水解的量。结果以rfu(相对荧光单位)表示为t450与t0之间的差异。
通过最小二乘法根据对照最小％对化合物浓度图拟合最佳拟合曲线。由此可以获得ic50值(引起50％活性抑制的抑制浓度)。
lc＝低对照值的中位值
＝低对照：没有酶的情况下的反应
hc＝高对照值的中位值
＝高对照：有酶的情况下的反应
作用％＝100-[(样品-lc)/(hc-lc)*100]
对照％＝(样品/hc)*100
对照最小％＝(样品-lc)/(hc-lc)*100
以下示例性化合物基本上如以上所述地进行测试并且展现以下活性：
表9.
比格犬中的药理学
与药代动力学(pk)随访和限值安全评估组合使用，对测试化合物进行测试以评估单次剂量后对犬脑脊液(csf)中β-淀粉样蛋白分布的影响。
对于化合物20、21、22或41中的任一种来说，将四只比格犬(2雄，2雌)给予运载体(1ml/kg20％环糊精水溶液)并将12只比格犬(每个剂量组2雄和2雌)给予如下测试化合物：
在化合物39、33和31的情况下，将两只比格犬(1雄，1雌)空腹给予运载体(1ml/kg20％环糊精水溶液)并将4只比格犬(2雄2雌)空腹给予测试化合物(2，39，33，31或32)(0.31mg/kg，以0.31mg/ml的20％环糊精水溶液)。
给药之前和之后的4、8、25和49小时，通过用螺丝固定在颅骨中的和被皮下组织和皮肤覆盖的插管，在有意识的动物中直接从侧脑室取csf。给药八小时后，这些动物获得30分钟的常规进食时间。取血样用于pk随访(0.5、1、2、4、8、25和49小时)并于给药之前和之后8h和25h取血清样品用于生物化学。这些csf样本用来测量aβ1-37、aβ1-38、aβ1-40和aβ1-42。这些结果概括在以下表10中：
表10.
在8h和在最后的时间点(在此处观察到相关下降(>20％下降))指示的下降百分比。