本发明属于生物技术领域，具体涉及一种对人体体表有保护作用的益生菌群及其制备方法。
背景技术：
与人体相关的微生物这群始终保持不断变化的状态。其中，常驻微生物区系的组成响应于对宿主而言内在和外在的因素而变化，也随着时间变化。微生物在人体体内和体表的定植一般开始于出生后不久，人体益生菌是定植于人体肠道、生殖系统内等内部管道，更定植于人体表面，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。人体和动物体内、体表有益的细菌或真菌主要有：酪酸梭菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌、酵母菌等。例如，通常存在于人类胃肠道的某些微生物提供的健康有益效果已被很好地研究。已有研究显示：人体肠道及体表栖息着数以亿计的细菌，其种类多达400余种，鲜重可达数公斤！这当中有对人有害的，有些则是有益的。有关宿主的健康状态和宿主的胃肠道微生物组的健康状态之间关系的知识，已产生了市场定位于改善或维持人类胃肠道微生物组中的一个或多个成员的健康状态的多种可商购获得的产品。这些可商购获得的产品称为益生菌。益生菌就是所谓的“好”微生物，其活着被人摄入，使得所引入的微生物能够定植在此人的胃肠道中。当人体住满足够的益生菌时，人就会处于健康的状态，但是一旦体内菌群失去平衡。比如，菌种间比例发生大幅变化或者超出正常数值时，那么腹泻、胃口不佳、免疫力低等一系列病症就会随之而来，人体的健康就会亮红灯。这时如果适当服用一些含有益生菌的产品可以协助体内菌群平衡。对于肠道和体内益生菌，目前已经有多种活菌和菌制剂，对于肠道保护和菌群恢复有明显效果。
相对于人体体内尤其是肠道微生物而言，人体体表微生物的研究和病原微生物预防措施还非常欠缺。但是，体表微生物的稳定性往往比较差，容易受到不良环境的影响，如紫外线、螨虫侵害、杀菌液、肥皂和水冲洗等都会显著改变体表微生物菌群的格局。同时体表接触有害微生物的机会更高，风险更大。随着城镇人口密度的不断增加，人与人，人与动物（宠物）交叉接触的机会也在不断增加。因此，关注、保护和维护体表微生物菌群，尤其是补充利用益生菌更有必要，效果也将更显著。
针对以上需求，本发明设计制作了用于人体体表的微生物益生菌群，提供一种功效多，效果好、存活率高的益生菌群的制备方法，适用于商业广泛推广，以填补目前市场空缺，并满足对体表进行保护日益增长的需要。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是，提供一种功效多，效果好、成活率高的益生菌群适用于商业广泛推广。
为了解决上述问题，本发明采用的技术方案是，该益生菌群由芽孢杆菌、乳酸杆菌、酪酸梭菌、双歧杆菌、粪链球菌、放线菌、酵母菌和光合细菌中的3种或3种以上的益生菌组成稳定制剂。通过上述技术方案，采用三种或三种以上的益生菌混合制成的益生菌群相比单个益生菌，能够产生协同作用，从而提高益生菌对人体的保健功效，治疗多种病症。
本发明进一步改进在于，所述益生菌群通过单独发酵与混合发酵相结合而制得。
本发明进一步改进在于，所述放线菌采用单独发酵，所述芽孢杆菌采用混合发酵。
本发明进一步改进在于，所述益生菌群采用避光密封无氧保存，保存温度为3~35℃。
本发明进一步改进在于，所述益生菌群保存温度为4~25℃。
本发明进一步改进在于，所述益生菌群为水剂或冻干粉。
本发明的益生菌群的应用，制备用于治疗脚气、妇科病、性传播疾病、皮炎病症的产品。
本发明的益生菌群的应用，所述皮炎病症包括湿疹或瘙痒皮肤不适应症。
本发明的益生菌群的应用，所述益生菌群为水剂时，在使用时，先将益生菌群稀释5~500倍后，再采用浸泡或擦洗或涂抹或喷雾的方法使用；所述益生菌群为冻干粉时，在使用时，采用冷水溶解后再稀释5~500倍，再采用浸泡或擦洗或涂抹或喷雾的方法使用；使用稀释液直接对皮肤或发病部位进行浸泡或涂抹或喷雾；用于脚气时，在足疗之后，接对脚部进行浸泡或涂抹或喷雾。
本发明还要解决的一个技术问题是，提供一种功效多，效果好、培养存活率高的益生菌群的制备方法，适用于商业广泛推广。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是，该益生菌群粉的制备方法，具体步骤如下：
a、使用多层TPY 培养基划线接种双歧杆菌， 培养基pH值为6.8~7.2，37℃条件厌氧培养50h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成双岐杆菌细菌悬液；使用多层MRS 培养基划线接种乳酸杆菌种，培养基pH值为6.4~6.6，37℃条件厌氧培养30h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/1ml 悬浮于灭菌后的生理盐水中制成乳酸杆菌细菌悬液；使用高氏一号培养基划线接种放线菌，培养基pH值为7.3~7.6，37℃条件厌氧培养48 h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成放线菌细菌悬液；使用YPD培养基划线接种酵母菌，培养基pH值为5.3~5.5，37℃条件厌氧培养36 h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成酵母菌细菌悬液；使用THB培养基划线接种粪链球菌，培养基pH值为7.5~7.9，37℃条件厌氧培养40h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成粪链球菌细菌悬液；使用J-琼脂培养基接种芽孢杆菌或酪酸梭菌，培养基pH值为7.5~7.9，37℃条件厌氧培养40h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成芽孢杆菌或酪酸梭菌细菌悬液；
b、准备水浴式冷冻干燥装置，所述水浴式冷冻装置包括可抽真空的壳体、设置在所述壳体内部的盐水池和悬于所述盐水池上方并可自由升降的挂架，所述盐水池内盛放有饱和盐水，所述盐水池的外壁上蜿蜒附着有制冷剂管道，所述制冷制管道的两端分别延伸到所述壳体的外部，所述位于壳体外部的管道上设置有压缩机和散热器；分别选取至少三种所述步骤（a）中所得到的细菌悬液均匀地分装到至少三组安瓿瓶中，并将至少所述三组安瓿瓶分别挂到所述挂架上，将所述饱和盐水的水温降低并维持在-18℃，下降所述挂架至所述安瓿瓶内的细菌悬浮液的液面位于所述饱和盐水的液面以下时止，并将所述盛放有细菌悬液的安瓿瓶浸在所述饱和盐水中冻结3h ；
c、将所述盐水池内饱和盐水排空，将所述壳体内抽真空干燥，干燥压力10Pa，干燥温度25 ℃，分别收集干燥后益生菌粉；
d、以等重比例重量份配比称取至少三种益生菌粉，并混合均匀，得到混合益生菌群；
e、将混合益生菌群，加入三维混合机中，密封好混合罐，把混合速度调到20r/min，连续混合50min，制成益生菌群粉成品；
f、将所述益生菌群粉成品通过自动颗粒包装机按预设重量分装成袋，并置于低温保存。
本发明还要解决的一个技术问题是，提供一种功效多，效果好、培养存活率高的益生菌群水剂，适用于商业广泛推广。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是，将包括1种芽孢杆菌、2种乳酸杆菌、1种双歧杆菌、1种放线菌和2种光合细菌的复合菌制成益生菌群粉，将制得的益生菌群粉溶于水制成益生菌群水剂；保存温度4-6℃，保质期6个月；用于预防和治疗包括湿疹或瘙痒的皮肤不适应症。
采用本发明的技术方案，与现有技术相比，其产生的有益效果是：采用三种或三种以上的益生菌混合制成的益生菌群相比单个益生菌，能够产生协同作用，从而可以用于人类保健以及治疗脚气、妇科病、性传播疾病和皮炎病症等，制备益生菌群粉的方法工艺简单，可控性强，培养繁殖率及存活率高，适用于商业广泛推广。
具体实施方式
实施例1：选取芽孢杆菌、乳酸杆菌和酪酸梭菌为原料；
该益生菌群粉的制作方法，包括以下步骤：
a、使用多层MRS 培养基划线接种乳酸杆菌种，培养基pH值为6.4，37℃条件厌氧培养30h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/1ml 悬浮于灭菌后的生理盐水中制成乳酸杆菌细菌悬液；使用J-琼脂培养基接种芽孢杆菌或酪酸梭菌，培养基pH值为7.8，37℃条件厌氧培养40h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成芽孢杆菌或酪酸梭菌细菌悬液；
b、准备水浴式冷冻干燥装置，所述水浴式冷冻装置包括可抽真空的壳体、设置在所述壳体内部的盐水池和悬于所述盐水池上方并可自由升降的挂架，所述盐水池内盛放有饱和盐水，所述盐水池的外壁上蜿蜒附着有制冷剂管道，所述制冷制管道的两端分别延伸到所述壳体的外部，所述位于壳体外部的管道上设置有压缩机和散热器；分别将所述步骤（a）中所得到的乳酸杆菌和芽孢杆菌和酪酸梭菌细菌悬液均匀地分装到三组安瓿瓶中，并将所述三组安瓿瓶分别挂到所述挂架上，将所述饱和盐水的水温降低并维持在-18℃，下降所述挂架至所述安瓿瓶内的细菌悬浮液的液面位于所述饱和盐水的液面以下时止，并将所述盛放有细菌悬液的安瓿瓶浸在所述饱和盐水中冻结3h ；
c、将所述盐水池内饱和盐水排空，将所述壳体内抽真空干燥，干燥压力10Pa，干燥温度25 ℃，分别收集干燥后的乳酸杆菌和芽孢杆菌和酪酸梭菌益生菌粉；
d、以等重比例重量份配比称取乳酸杆菌和芽孢杆菌和酪酸梭菌三种益生菌粉，并混合均匀，得到混合益生菌群；
e、将混合益生菌群，加入三维混合机中，密封好混合罐，把混合速度调到20r/min，连续混合50min，制成益生菌群粉成品；
f、将所述益生菌群粉成品通过自动颗粒包装机按预设重量分装成袋；并置于低温保存。
实施例2：选取芽孢杆菌、乳酸杆菌和双歧杆菌为原料；
该益生菌群粉的制作方法，包括以下步骤：
a、使用多层TPY 培养基划线接种双歧杆菌，培养基pH值为7.0，37℃条件厌氧培养50h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成双岐杆菌细菌悬液；使用多层MRS 培养基划线接种乳酸杆菌种，培养基pH值为6.4，37℃条件厌氧培养30h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/1ml 悬浮于灭菌后的生理盐水中制成乳酸杆菌细菌悬液；使用J-琼脂培养基接种芽孢杆菌，培养基pH值为7.8，37℃条件厌氧培养40h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成芽孢杆菌细菌悬液；
b、准备水浴式冷冻干燥装置，所述水浴式冷冻装置包括可抽真空的壳体、设置在所述壳体内部的盐水池和悬于所述盐水池上方并可自由升降的挂架，所述盐水池内盛放有饱和盐水，所述盐水池的外壁上蜿蜒附着有制冷剂管道，所述制冷制管道的两端分别延伸到所述壳体的外部，所述位于壳体外部的管道上设置有压缩机和散热器；分别将所述步骤（a）中所得到的芽孢杆菌、乳酸杆菌和双歧杆菌细菌悬液均匀地分装到三组安瓿瓶中，并将所述三组安瓿瓶分别挂到所述挂架上，将所述饱和盐水的水温降低并维持在-18℃，下降所述挂架至所述安瓿瓶内的细菌悬浮液的液面位于所述饱和盐水的液面以下时止，并将所述盛放有细菌悬液的安瓿瓶浸在所述饱和盐水中冻结3h ；
c、将所述盐水池内饱和盐水排空，将所述壳体内抽真空干燥，干燥压力10Pa，干燥温度25 ℃，分别收集干燥后芽孢杆菌、乳酸杆菌和双歧杆菌益生菌粉；
d、以等重比例重量份配比称取芽孢杆菌、乳酸杆菌和双歧杆菌三种益生菌粉，并混合均匀，得到混合益生菌群；
e、将混合益生菌群，加入三维混合机中，密封好混合罐，把混合速度调到20r/min，连续混合50min，制成益生菌群粉成品；
f、将所述益生菌群粉成品通过自动颗粒包装机按预设重量分装成袋；并置于低温保存。
实施例3：选取双歧杆菌、粪链球菌、有益放线菌和有益酵母菌为原料；
该益生菌群粉的制作方法，包括以下步骤：
a、使用多层TPY 培养基划线接种双歧杆菌， 培养基pH值为7.0，37℃条件厌氧培养50h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成双岐杆菌细菌悬液；使用高氏一号培养基划线接种放线菌，培养基pH值为7.4，37℃条件厌氧培养48 h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成放线菌细菌悬液；使用YPD培养基划线接种酵母菌，培养基pH值为5.4，37℃条件厌氧培养36 h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成酵母菌细菌悬液；使用THB培养基划线接种粪链球菌，培养基pH值为7.8，37℃条件厌氧培养40h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成粪链球菌细菌悬液；
b、准备水浴式冷冻干燥装置，所述水浴式冷冻装置包括可抽真空的壳体、设置在所述壳体内部的盐水池和悬于所述盐水池上方并可自由升降的挂架，所述盐水池内盛放有饱和盐水，所述盐水池的外壁上蜿蜒附着有制冷剂管道，所述制冷制管道的两端分别延伸到所述壳体的外部，所述位于壳体外部的管道上设置有压缩机和散热器；分别将所述步骤（a）中所得到的四种细菌悬液均匀地分装到四组安瓿瓶中，并将所述四组安瓿瓶分别挂到所述挂架上，将所述饱和盐水的水温降低并维持在-18℃，下降所述挂架至所述安瓿瓶内的细菌悬浮液的液面位于所述饱和盐水的液面以下时止，并将所述盛放有细菌悬液的安瓿瓶浸在所述饱和盐水中冻结3h ；
c、将所述盐水池内饱和盐水排空，将所述壳体内抽真空干燥，干燥压力10Pa，干燥温度25 ℃，分别收集干燥后益生菌粉；
d、以等重比例重量份配比称取四种益生菌粉，并混合均匀，得到混合益生菌群；
e、将混合益生菌群，加入三维混合机中，密封好混合罐，把混合速度调到20r/min，连续混合50min，制成益生菌群粉成品；
f、将所述益生菌群粉成品通过自动颗粒包装机按预设重量分装成袋；并置于低温保存。
实施例4：选取乳酸杆菌、双歧杆菌、粪链球菌和有益放线菌为原料；
该益生菌群粉的制作方法，包括以下步骤：
a、使用多层TPY 培养基划线接种双歧杆菌， 培养基pH值为7.0，37℃条件厌氧培养50h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成双岐杆菌细菌悬液；使用多层MRS 培养基划线接种乳酸杆菌种，培养基pH值为6.4，37℃条件厌氧培养30h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/1ml 悬浮于灭菌后的生理盐水中制成乳酸杆菌细菌悬液；使用高氏一号培养基划线接种放线菌，培养基pH值为7.4，37℃条件厌氧培养48 h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成放线菌细菌悬液；使用THB培养基划线接种粪链球菌，培养基pH值为7.8，37℃条件厌氧培养40h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成粪链球菌细菌悬液；
b、准备水浴式冷冻干燥装置，所述水浴式冷冻装置包括可抽真空的壳体、设置在所述壳体内部的盐水池和悬于所述盐水池上方并可自由升降的挂架，所述盐水池内盛放有饱和盐水，所述盐水池的外壁上蜿蜒附着有制冷剂管道，所述制冷制管道的两端分别延伸到所述壳体的外部，所述位于壳体外部的管道上设置有压缩机和散热器；分别将所述步骤（a）中所得到的四种细菌悬液均匀地分装到四组安瓿瓶中，并将所述四组安瓿瓶分别挂到所述挂架上，将所述饱和盐水的水温降低并维持在-18℃，下降所述挂架至所述安瓿瓶内的细菌悬浮液的液面位于所述饱和盐水的液面以下时止，并将所述盛放有细菌悬液的安瓿瓶浸在所述饱和盐水中冻结3h ；
c、将所述盐水池内饱和盐水排空，将所述壳体内抽真空干燥，干燥压力10Pa，干燥温度25 ℃，分别收集干燥后的四种益生菌粉；
d、以等重比例重量份配比称取四种益生菌粉，并混合均匀，得到混合益生菌群；
e、将混合益生菌群，加入三维混合机中，密封好混合罐，把混合速度调到20r/min，连续混合50min，制成益生菌群粉成品；
f、将所述益生菌群粉成品通过自动颗粒包装机按预设重量分装成袋；并置于低温保存。
实施例5：选取乳酸杆菌、酪酸梭菌、双歧杆菌、粪链球菌和有益酵母菌为原料；
该益生菌群粉的制作方法，包括以下步骤：
a、使用多层TPY 培养基划线接种双歧杆菌， 培养基pH值为7.0，37℃条件厌氧培养50h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成双岐杆菌细菌悬液；使用多层MRS 培养基划线接种乳酸杆菌种，培养基pH值为6.4，37℃条件厌氧培养30h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/1ml 悬浮于灭菌后的生理盐水中制成乳酸杆菌细菌悬液；使用YPD培养基划线接种酵母菌，培养基pH值为5.4，37℃条件厌氧培养36 h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成酵母菌细菌悬液；使用THB培养基划线接种粪链球菌，培养基pH值为7.8，37℃条件厌氧培养40h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成粪链球菌细菌悬液；使用J-琼脂培养基接种酪酸梭菌，培养基pH值为7.8，37℃条件厌氧培养40h，取出在3℃条件下5000r/min 离心25min 收集菌体，并将离心收集的菌体以0.15g/ml悬浮于灭菌后的生理盐水中制成酪酸梭菌细菌悬液；
b、准备水浴式冷冻干燥装置，所述水浴式冷冻装置包括可抽真空的壳体、设置在所述壳体内部的盐水池和悬于所述盐水池上方并可自由升降的挂架，所述盐水池内盛放有饱和盐水，所述盐水池的外壁上蜿蜒附着有制冷剂管道，所述制冷制管道的两端分别延伸到所述壳体的外部，所述位于壳体外部的管道上设置有压缩机和散热器；分别将所述步骤（a）中所得到的五种细菌悬液均匀地分装到五组安瓿瓶中，并将所述五组安瓿瓶分别挂到所述挂架上，将所述饱和盐水的水温降低并维持在-18℃，下降所述挂架至所述安瓿瓶内的细菌悬浮液的液面位于所述饱和盐水的液面以下时止，并将所述盛放有细菌悬液的安瓿瓶浸在所述饱和盐水中冻结3h ；
c、将所述盐水池内饱和盐水排空，将所述壳体内抽真空干燥，干燥压力10Pa，干燥温度25 ℃，分别收集干燥后的五种益生菌粉；
d、以等重比例重量份配比称取五种益生菌粉，并混合均匀，得到混合益生菌群；
e、将混合益生菌群，加入三维混合机中，密封好混合罐，把混合速度调到20r/min，连续混合50min，制成益生菌群粉成品；
f、将所述益生菌群粉成品通过自动颗粒包装机按预设重量分装成袋并置于低温保存。
实施例6.
一种益生菌群水剂，将包括1种芽孢杆菌、2种乳酸杆菌、1种双歧杆菌、1种放线菌和2种光合细菌的复合菌制成益生菌群粉，将制得的益生菌群粉溶于水制成益生菌群水剂；保存温度4-6℃，保质期为6个月；用于预防和治疗包括湿疹或瘙痒的皮肤不适应症，使用时将益生菌群水剂直接涂抹在患处或用棉纱布湿敷于患处保持5分钟以上。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。