本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种木质纤维素高效糖化的预处理方法，尤其涉及一种节能、环保的常温低浓度碱预处理方法。
背景技术：
随着全球石油资源日益枯竭、大气中二氧化碳污染严重以及经济的发展，用生物质原料生产生物能源和生物化工产品替代石化产品已成为当前发展的必然趋势。目前，大多数生物化工产品的生产依赖于甘蔗、玉米等粮食作物原料，存在生产成本过高，只在少数高附加值领域才能有所应用的缺点。另外，以粮食作物为原料进行生物燃料生产，存在引发和加重粮食问题的危险。美国农业部和能源部联合研究报道，木质纤维素能经过糖化产生可发酵糖，然后生产出燃料酒精、糠醛、单细胞蛋白、乙酰丙酸等工业产品。同时因为木质纤维素具有来源广泛、价格低廉、可再生性等优点，使得它的应用前景较粮食作物更为广阔。
木质纤维素主要由纤维素、半纤维素、木质素等组成，对木质纤维素材料进行生物转化时，首先需要对其进行预处理，以此来改变其表面结构，破坏木质素和半纤维素构成的网络结构、脱去木质素、降低纤维素的结晶度。目前木质纤维素预处理的方法有物理法(如粉碎)、化学法(如酸、碱处理)、物理化学法(如蒸汽爆破)和生物法等，但是这些处理方法存在以下问题：物理法如单一的粉碎处理能耗高，约占木质纤维素糖化过程总能耗的50％～60％；化学法预处理需要的酸或碱浓度为10％～77％，处理温度为100℃～120℃，具有能耗高和设备耐腐蚀要求高等缺点；物理化学法如蒸汽爆破法经处理后半纤维素损失达60％～70％，原料的固体收率仅有30％～50％，大大降低了糖收率和原料利用率；生物法的反应周期长，同时菌体会利用部分纤维素和半纤维素，使水解得率降低。
现有技术存在的问题可归结为：(1)均使用了加热处理方法，能耗高、糖收率低；(2)化学处理与蒸汽爆破、超声波、改性酶、减压、臭氧等特殊操作结合，但是生产成本也相应增加；(3)普遍使用了酸解或碱解方法，但酸/碱浓度均高于3％，对设备的维护和保养费用，以及酸/碱的大量使用，以及未反应的酸/碱无法回收等问题，均增加了生产成本；(4)有的方法使用了廉价易得的ca(oh)2进行碱解，且工艺中产生的caso4等副产物，造成了环保负担。因此，改进预处理方法是目前木质纤维素预处理的关键问题以及发展方向。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种木质纤维素的预处理方法，通过该方法可以提高原料的酶解效率，提高原料得糖率，有效降低成本，提高经济性，以此改进现有木质纤维素预处理方法中能耗大，糖收率低和对设备要求高等不足。
为实现本发明的技术目的，本发明的技术方案为：
一种木质纤维素高效糖化的预处理方法，其特征在于包括粗粉碎、碱液湿磨、碱回收和酶解步骤，将粗粉碎后的木质纤维素原料与浓度为0.1％～3％的一价金属碱液混合，常温下进行湿磨粉碎后将固液分离，液体用于回收一价金属碱，固体即改性木质纤维素进一步酶解，制得糖液。
本发明技术方案的具体步骤如下：
a.木质纤维素原料的粗粉碎
对干燥木质纤维素原料进行粗粉碎至过20～60目筛，并室温保存；
b.原料的碱液湿磨
将粗粉碎后的原料与浓度为0.1％～3％的一价金属碱液溶液按一定液料质量比混合，常温下对其进行湿磨粉碎一定时间，离心后分别收集离心液和改性木质纤维素；
c.碱液回收
将离心液电渗析后回收一价金属碱液；
d.改性木质纤维素的酶解
向改性木质纤维素中加水至一定料液质量百分比浓度，并用酸调整料液的ph值到所用纤维素酶作用的最佳值；向料液中加入纤维素酶，保持一定温度下搅拌料液，控制酶解时间，制得糖液。
本发明步骤b所述的一价金属碱液溶液包括naoh溶液、koh溶液；
本发明步骤b所述的粗粉碎后的原料与一价金属碱液溶液的液料质量比为4～12；
本发明步骤b所述的湿法粉碎时间为1h～4h；
本发明步骤d所述的改性木质纤维素料液的质量百分比浓度为1％～4％；
本发明步骤d所述的调整料液ph值的酸为硫酸、盐酸；
本发明步骤d所述的纤维素酶既包括市售的各种纤维素酶、微生物直接发酵得到的纤维素酶液；
本发明步骤d所述的纤维素酶的加入量为0.01～0.125g/g底物，ph值为4.6～4.9，酶解温度为45℃～55℃，酶解时间为96～120小时；
本发明所述木质纤维素原料包括秸秆类、草类、木材类、玉米芯、甘蔗渣、以及其它各种粮食和水果加工残渣。
酶解过程中，按一定时间间隔取糖液样10ml，利用生物传感分析仪分析酶解过程中液料的葡萄糖浓度，利用dns法分析酶解过程中液料的总还原糖浓度，利用hplc分析糖液组成。
本发明得到的木质纤维素的综纤维素转化率在48.1％～50.8％。经hplc分析糖液，改性木质纤维素经纤维素酶酶解后得到的糖液中主要含有葡萄糖和木糖两种可发酵单糖。
本发明的常温低浓度碱处理法对木质纤维素进行预处理工艺，取得了突出的有益效果：首先，常温低浓度碱预处理法的适用范围十分广泛，该方法可以将所有木质纤维素作为预处理原料；其次，本方法在常温条件操作，无需严格控制温度参数，不仅能大大降低生产能耗，而且能降低生产过程中的操作控制要求，即减少生产操作人员的培训成本及生产安全隐患；再次，本方法中使用的一价金属碱溶液浓度极低，节省了生产和碱液回收成本；最后，采用电渗析法对碱液进行回收，避免了现有技术中酸中和等操作带来的副产物引入问题，环保经济。
总的来说，与已有的木质纤维素预处理技术相比，本发明的常温低浓度碱预处理木质纤维素工艺能耗低、设备投资小，降低了生产成本；综纤维素转化率高，提高了原料利用率；木质纤维素预处理过程不仅可以与燃料酒精、糠醛、单细胞蛋白、乙酰丙酸等工业产品后续生产过程的耦合，能大大降低化学品生产成本，而且常温低浓度碱预处理后的得到的改性木质纤维素除了可被酶解糖化以外，还可作为微生物生长的碳源，用于生产饲料、生物乙醇等产品，用途极为广泛。
下面的实施例对本发明方法作详细说明，但对本发明没有限制。
具体实施方式
实施例1
对干燥的玉米秸秆原料进行粗粉碎至过20目筛后备用。取40g原料，按照碱液与木质纤维素的质量比为10，naoh溶液浓度按质量体积比为2％混合；所得料液采用行星式球磨机(xqm-4l，南京科析实验仪器研究所)进行碱液粉碎1h，将得到的浆料以5,000rpm，30min的条件离心，分别收集全部离心液和改性木质纤维素；离心液在电渗析仪(microacilyzers3，ashahichemicalindustryco.，ltd.，japan)中回收液体中的碱；称取相当于干物质量4g的上述改性木质纤维素于容器中，加水调制浓度为1％的改性木质纤维素料液；用硫酸溶液将料液的ph值调整至4.7；向料液中加入纤维素酶(肇东国科北方酶制剂有限公司，酶活为10,000u/g)0.125g/g(改性木质纤维素干物基准)；将容器置于50℃的水浴锅中，每隔4h搅拌，酶解时间控制在120小时；按10小时间隔取样10ml，利用生物传感分析仪(sba型葡萄糖传感仪，山东省科学生物研究所)分析酶解过程中液料的葡萄糖浓度，利用dns法分析酶解过程中液料的总还原糖浓度；利用hplc(agilent1100)分析酶解糖液组成，分析条件为：色谱柱zorbaxnh2(4.6mm×250mm，5μm)；流动相乙腈∶水＝85∶15；流动相流速1.2ml/min；柱压105bar。得到预处理固体收率为87.0％，酶解总还原糖收率为44.9％，计算得到综纤维素转化率为50.8％。
实施例2
对干燥的稻草原料进行粗粉碎至过60目筛后备用。取100g原料，按照碱液与木质纤维素的质量比为6，koh溶液浓度按质量体积比为3％混合；所得料液采用行星式球磨机(xqm-8l，南京科析实验仪器研究所)进行碱液粉碎1h，将得到的浆料以9,000rpm，10min的条件离心，分别收集全部离心液和改性木质纤维素；离心液通过电渗析回收液体中的碱，方法同实施例1；称取相当于干物质量8g的上述改性木质纤维素于容器中，加水调制浓度为2％的改性木质纤维素料液；用硫酸溶液将料液的ph值调整至4.9；向料液中加入纤维素酶(宁夏和氏璧生物技术有限公司，酶活为10,000u/g)0.08g/g(改性木质纤维素干物基准)；将容器置于55℃的水浴锅中，每隔4h搅拌，酶解时间控制在120小时；按10小时间隔取样10ml，葡萄糖浓度分析方法同实施例1，总还原糖浓度分析方法同实施例1；酶解糖液组成分析方法同实施例1。得到预处理固体收率为91.1％，酶解总还原糖收率为23.3％，计算得到综纤维素转化率为49.9％。
实施例3
对干燥的柏树皮原料进行粗粉碎至过40目筛后备用。取200g原料，按照碱液与木质纤维素的质量比为6，naoh溶液浓度按质量体积比为1％混合；所得料液采用行星式球磨机(xqm-12l，南京科析实验仪器研究所)进行碱液粉碎1h，将得到的浆料以9,000rpm，10min的条件离心，分别收集全部离心液和改性木质纤维素；离心液通过电渗析回收液体中的碱，方法同实施例1；称取相当于干物质量8g的上述改性木质纤维素于容器中，加水调制浓度为2％的改性木质纤维素料液；用硫酸溶液将料液的ph值调整至4.8；向料液中加入纤维素酶(宁夏和氏璧生物技术有限公司，酶活为10,000u/g)0.12g/g(改性木质纤维素干物基准)；将容器置于50℃的水浴锅中，每隔4h搅拌，酶解时间控制在110小时；按10小时间隔取样10ml，葡萄糖浓度分析方法同实施例1，总还原糖浓度分析方法同实施例1；酶解糖液组成分析方法同实施例1。得到预处理固体收率为93.1％，酶解总还原糖收率为23.4％，计算得到综纤维素转化率为48.6％。
实施例4
对干燥的椰壳原料进行粗粉碎至过40目筛后备用。取800g原料，按照碱液与木质纤维素的质量比为10，naoh溶液浓度按质量体积比为1％混合；所得料液采用行星式球磨机(xqm-60l，南京科析实验仪器研究所)进行碱液粉碎2h，将得到的浆料以7,000rpm，15min的条件离心，分别收集全部离心液和改性木质纤维素；离心液通过电渗析回收液体中的碱，方法同实施例1；称取相当于干物质量8g的上述改性木质纤维素于容器中，加水调制浓度为2％的改性木质纤维素料液；用盐酸溶液将料液的ph值调整至4.8；向料液中加入纤维素酶(celluclast1.5190)0.1g/g(改性木质纤维素干物基准)；将容器置于55℃的水浴锅中，每隔4h搅拌，酶解时间控制在120小时；按10小时间隔取样10ml，葡萄糖浓度分析方法同实施例1，总还原糖浓度分析方法同实施例1；酶解糖液组成分析方法同实施例1。得到预处理固体收率为79.3％，酶解总还原糖收率为38.5％，计算得到综纤维素转化率为48.5％。
实施例5
对干燥的玉米芯原料进行粗粉碎至过20目筛后备用。取900g原料，按照碱液与木质纤维素的质量比为8，koh溶液浓度按质量体积比为1％混合；所得料液采用行星式球磨机(xqm-60l，南京科析实验仪器研究所)进行碱液粉碎4h，将得到的浆料以5,000rpm，30min的条件离心，分别收集全部离心液和改性木质纤维素；离心液通过电渗析回收液体中的碱，方法同实施例1；称取相当于干物质量8g的上述改性木质纤维素于容器中，加水调制浓度为2％的改性木质纤维素料液；用盐酸溶液将料液的ph值调整至4.8；向料液中加入纤维素酶(celluclast1.5190)0.125g/g(改性木质纤维素干物基准)；将容器置于45℃的水浴锅中，每隔4h搅拌，酶解时间控制在110小时；按10小时间隔取样10ml，葡萄糖浓度分析方法同实施例1，总还原糖浓度分析方法同实施例1；酶解糖液组成分析方法同实施例1。得到预处理固体收率为78.1％，酶解总还原糖收率为53.3％，计算得到综纤维素转化率为50.1％。
实施例6
对干燥的甘蔗渣原料进行粗粉碎至过20目筛后备用。取1kg原料，按照碱液与木质纤维素的质量比为12，koh溶液浓度按质量体积比为0.5％混合；所得料液采用行星式球磨机(xqm-80l，南京科析实验仪器研究所)进行碱液粉碎2h，将得到的浆料以5,000rpm，30min的条件离心，分别收集全部离心液和改性木质纤维素；离心液通过电渗析回收液体中的碱，方法同实施例1；称取相当于干物质量8g的上述改性木质纤维素于容器中，加水调制浓度为2％的改性木质纤维素料液；用硫酸溶液将料液的ph值调整至4.9；向料液中加入纤维素酶(celluclast1.5190)0.125g/g(改性木质纤维素干物基准)；将容器置于45℃的水浴锅中，每隔4h搅拌，酶解时间控制在96小时；按10小时间隔取样10ml，葡萄糖浓度分析方法同实施例1，总还原糖浓度分析方法同实施例1；酶解糖液组成分析方法同实施例1。得到预处理固体收率为75.0％，酶解总还原糖收率为52.7％，计算得到综纤维素转化率为49.0％。
实施例7
对干燥的棉花秸秆原料进行粗粉碎至过60目筛后备用。取7kg原料，按照碱液与木质纤维素的质量比为12，naoh溶液浓度按质量体积比为0.5％混合；所得料液采用行星式球磨机(xqm-100l，南京科析实验仪器研究所)进行碱液粉碎2h，将得到的浆料以5,000rpm，30min的条件离心，分别收集全部离心液和改性木质纤维素；离心液通过电渗析回收液体中的碱，方法同实施例1；称取相当于干物质量8g的上述改性木质纤维素于容器中，加水调制浓度为2％的改性木质纤维素料液；用硫酸溶液将料液的ph值调整至4.7；向料液中加入纤维素酶(青霉penicillium发酵酶液，酶活3500u/g)0.125g/g(改性木质纤维素干物基准)；将容器置于45℃的水浴锅中，每隔4h搅拌，酶解时间控制在96小时；按10小时间隔取样10ml，葡萄糖浓度分析方法同实施例1，总还原糖浓度分析方法同实施例1；酶解糖液组成分析方法同实施例1。得到预处理固体收率为88.1％，酶解总还原糖收率为53.3％，计算得到综纤维素转化率为50.7％。
实施例8
对干燥的稻草原料进行粗粉碎至过60目筛后备用。取8kg原料，按照碱液与木质纤维素的质量比为4，koh溶液浓度按质量体积比为0.1％混合；所得料液采用行星式球磨机(xqm-100l，南京科析实验仪器研究所)进行碱液粉碎4h，将得到的浆料以7,000rpm，20min的条件离心，分别收集全部离心液和改性木质纤维素；离心液通过电渗析回收液体中的碱，方法同实施例1；称取相当于干物质量16g的上述改性木质纤维素于容器中，加水调制浓度为4％的改性木质纤维素料液；用盐酸溶液将料液的ph值调整至4.6；向料液中加入纤维素酶(里氏木霉trichodermareesei发酵酶液，酶活5000u/g)0.01g/g(改性木质纤维素干物基准)；将容器置于50℃的水浴锅中，每隔4h搅拌，酶解时间控制在100小时；按10小时间隔取样10ml，葡萄糖浓度分析方法同实施例1，总还原糖浓度分析方法同实施例1；酶解糖液组成分析方法同实施例1。得到预处理固体收率为85.3％，酶解总还原糖收率为43.5％，计算得到综纤维素转化率为48.6％。
实施例9
对干燥的水稻壳原料进行粗粉碎至过40目筛后备用。取40g原料，按照碱液与木质纤维素的质量比为10，naoh溶液浓度按质量体积比为1％混合；所得料液采用行星式球磨机(xqm-4l，南京科析实验仪器研究所)进行碱液粉碎1h，将得到的浆料以5,000rpm，30min的条件离心，分别收集全部离心液和改性木质纤维素；离心液通过电渗析回收液体中的碱，方法同实施例1；称取相当于干物质量4g的上述改性木质纤维素于容器中，加水调制浓度为1％的改性木质纤维素料液；用硫酸溶液将料液的ph值调整至4.7；向料液中加入纤维素酶(肇东国科北方酶制剂有限公司，酶活为10,000u/g)0.125g/g(改性木质纤维素干物基准)；将容器置于50℃的水浴锅中，每隔4h搅拌，酶解时间控制在120小时；按10小时间隔取样10ml，葡萄糖浓度分析方法同实施例1，总还原糖浓度分析方法同实施例1；酶解糖液组成分析方法同实施例1。得到预处理固体收率为79.3％，酶解总还原糖收率为46.7％，计算得到综纤维素转化率为48.1％。