一种用于测定和/或遗传改良猪生长性状的SNP标记的制作方法

本申请涉及一种用于测定和/或遗传改良猪生长性状的snp标记。

背景技术：

生长性状是猪经济性状中的重要指标，因此是种猪遗传改良研究中的重要生产性状，它主要包括猪胴体体长、胴体斜长、胴体重、胸背膘厚、颈椎总长中的一种或多种重等。传统的猪育种方法是通过对猪种人工测量和肉眼观察后，淘汰“不合格”种猪。此传统育种方法有一定成效，但是容易误淘汰真正有价值的种猪，且连续性不强，无长远规划。基于主效基因分子标记的遗传改良方法科学长效而经济快捷，是对传统猪育种的必要补充。

我国悠久的农耕历史和独特的饮食文化造成了我国人民对猪肉的偏爱，有猪乃六畜之首，粮猪安天下之说。今年来，由于市场的剧烈波动，我国生猪存栏量下滑，猪肉产量出现小幅下降的现象。因此通过科技创新，培育优良品种，提高养猪生产效率，促进产业升级和科技进步是保证养猪业可持续增长的必经之路。

目前我国市场出栏生猪大多为杜长大三元杂交猪，但迄今为止，尚未通过科学技术手段鉴定过与其生长性状相关的主效基因和分子标记。

技术实现要素：

本申请之一提供了一种猪的snp标记，所述snp标记包括如下14种snp标记中的至少一种，

第一snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第16806345位点的核苷酸y¹，对应于seqidno:1上的从5’端起的第346位点的核苷酸y¹，所述y¹选自g或a；

第二snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第16940077位点的核苷酸y²，对应于seqidno:2上的从5’端起的第578位点的核苷酸y²，所述y²选自c或t；

第三snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第17473931位点的核苷酸y³，对应于seqidno:3上的从5’端起的第501位点的核苷酸y³，所述y³选自g或a；

第四snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第17013787位点的核苷酸y⁴，对应于seqidno:4上的从5’端起的第301位点的核苷酸y⁴，所述y⁴选自c或t；

第五snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第17096014位点的核苷酸y⁵，对应于seqidno:5上的从5’端起的第301位点的核苷酸y⁵，所述y⁵选自g或a；

第六snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第17007981位点的核苷酸y⁶，对应于seqidno:6上的从5’端起的第301位点的核苷酸y⁶，所述y⁶选自a或g；

第七snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第16916995位点的核苷酸y⁷，对应于seqidno:7上的从5’端起的第301位点的核苷酸y⁷，所述y⁷选自c或t；

第八snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第17102194位点的核苷酸y⁸，对应于seqidno:8上的从5’端起的第301位点的核苷酸y⁸，所述y⁸选自c或t；

第九snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第17114026位点的核苷酸y⁹，对应于seqidno:9上的从5’端起的第301位点的核苷酸y⁹，所述y⁹选自g或a；

第十snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第16682972位点的核苷酸y¹⁰，对应于seqidno:10上的从5’端起的第301位点的核苷酸y¹⁰，所述y¹⁰选自g或c；

第十一snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第16765047位点的核苷酸y¹¹，对应于seqidno:11上的从5’端起的第301位点的核苷酸y¹¹，所述y¹¹选自g或a；

第十二snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第16788727位点的核苷酸y¹²，对应于seqidno:12上的从5’端起的第301位点的核苷酸y¹²，所述y¹²选自g或t；

第十三snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第16767555位点的核苷酸y¹³，对应于seqidno:13上的从5’端起的第301位点的核苷酸y¹³，所述y¹³选自a或g；

第十四snp标记：10.2版本国际猪基因组的17号染色体上的从5’端起的第17472686位点的核苷酸y¹⁴，对应于seqidno:14上的从5’端起的第301位点的核苷酸y¹⁴，所述y¹⁴选自g或c。

在一个具体实施例中，所述snp标记选自第一snp标记、第二snp标记、第三snp标记、第四snp标记、第五snp标记、第六snp标记、第七snp标记和第八snp标记中的至少一种。

本申请之二提供了一种核酸序列，所述核酸序列为包含如本申请之一所述的snp标记的核酸序列，所述核酸序列选自dna序列、cdna序列和rna序列中的至少一种。所述核酸序列位于10.2版本国际猪基因组的17号染色体上。举例来说，所述核酸序列只要包括所述的snp标记，不论其长度是多少bp，例如其长度可以是10bp、15bp、20bp、30bp、50bp、80bp、100bp、120bp、150bp、180bp、200bp、250bp、300bp、400bp、500bp、600bp、700bp、800bp、1000bp、1200bp、1500bp、2000bp等等，均是本申请所要求保护的核酸序列，但所述核苷酸序列并不限于所列举的长度。另外，所述snp标记一般位于所选定的所述的核酸序列的中心位置或比较靠近中心的位置，例如，在20bp的选定片段中，所述snp一般在这个20bp的dna片段中的第7-14位中的一个位置；在1500bp的dna片段中，所述snp所处的位置的选择余地大大增大，其可以是在第100-1400位中的一个位置，优选在300-1200位中的一个位置，更优选在500-700位中的一个位置，这样设计的目的是有利于更加准确的检测所述的snp标记；但是，在检测技术特别灵敏和/或特异性非常强的情况下，所述snp标记也可以靠近所选定的核酸序列的两端中的一端，甚至是位于第一位或者末位。

在一个具体实施例中，所述核酸序列选自seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13和seqidno:14中的至少一种。

在一个具体实施例中，所述核酸序列选自seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7和seqidno:8中的至少一种。

本申请之三提供了一种如本申请之一所述的snp标记在测定和/或遗传改良猪的生长性状中的应用，所述生长性状包括猪胴体体长、猪胴体斜长、猪胴体重、猪胸背膘厚和猪颈椎总长中的至少一种。

在一个具体实施例中，所述猪选自纯种长白猪、纯种大白猪、含有长白血统的合成系、含有长白血统的配套系、含有长白血统的杂交猪、含有大白血统的合成系、含有大白血统的配套系、含有大白血统的杂交猪中的至少一种。

在一个优选地具体实施例中，所述猪选自纯种长白猪、纯种大白猪、杜洛克猪和长白猪的杂交猪、杜洛克猪和大白猪的杂交猪，以及杜洛克猪、长白猪和大白猪三种猪的杂交猪种的至少一种。

为了获得更长的猪胴体体长，更长的猪胴体斜长，更重的猪胴体重，更薄的猪胸背膘厚，更长的猪颈椎总长这些猪的生长性状，本申请之四提供了一种猪的遗传改良的方法，所述方法包括：确定种猪核心群中的种猪的如权本申请之一所述的snp标记，并根据所述snp标记做出相应的选择：

对于第一snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第16806345位点为aa和ga基因型的种猪个体，淘汰在该位点为gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因a的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第16806345位点为aa基因型的种猪个体，淘汰在该位点为ga和gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因a的频率；

对于第二snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第16940077位点为tt和ct基因型的种猪个体，淘汰在该位点为cc基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因t的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第16940077位点为tt基因型的种猪个体，淘汰在该位点为ct和cc基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因t的频率；

在对于第三snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第17473931位点为aa和ga基因型的种猪个体，淘汰在该位点为gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因a的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第17473931位点为aa基因型的种猪个体，淘汰在该位点为ga和gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因a的频率；

对于第四snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第17013787位点为tt和ct基因型的种猪个体，淘汰在该位点为cc基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因t的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第17013787位点为tt基因型的种猪个体，淘汰在该位点为ct和cc基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因t的频率；

对于第五snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第17096014位点为aa和ga基因型的种猪个体，淘汰在该位点为gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因a的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第17096014位点为aa基因型的种猪个体，淘汰在该位点为ga和gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因a的频率；

对于第六snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第17007981位点为gg和ga基因型的种猪个体，淘汰在该位点为aa基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因g的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第17007981位点为gg基因型的种猪个体，淘汰在该位点为ga和aa基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因g的频率；

对于第七snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第16916995位点为tt和ct基因型的种猪个体，淘汰在该位点为cc基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因t的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第16916995位点为tt基因型的种猪个体，淘汰在该位点为ct和cc基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因t的频率；

对于第八snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第17102194位点为tt和ct基因型的种猪个体，淘汰在该位点为cc基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因t的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第17102194位点为tt基因型的种猪个体，淘汰在该位点为ct和cc基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因t的频率；

对于第九snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第17114026位点为aa和ga基因型的种猪个体，淘汰在该位点为gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因a的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第17114026位点为aa基因型的种猪个体，淘汰在该位点为ga和gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因a的频率；

对于第十snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第16682972位点为cc和gc基因型的种猪个体，淘汰在该位点为gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因c的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第16682972位点为cc基因型的种猪个体，淘汰在该位点为gc和gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因c的频率；

对于第十一snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第16765047位点为aa和ga基因型的种猪个体，淘汰在该位点为gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因a的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第16765047位点为aa基因型的种猪个体，淘汰在该位点为ga和gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因a的频率；

对于第十二snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第16788727位点为tt和gt基因型的种猪个体，淘汰在该位点为gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因t的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第16788727位点为tt基因型的种猪个体，淘汰在该位点为gt和gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因t的频率；

对于第十三snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第16767555位点为gg和ga基因型的种猪个体，淘汰在该位点为aa基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因g的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第16767555位点为gg基因型的种猪个体，淘汰在该位点为ga和aa基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因g的频率；

对于第十四snp标记，在所述种猪核心群中选择在所述第17472686位点为cc和gc基因型的种猪个体，淘汰在该位点为gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因c的频率；优选在所述种猪核心群中选择在所述第17472686位点为cc基因型的种猪个体，淘汰在该位点为gc和gg基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因c的频率。

在一个具体实施例中，利用分析所述种猪的核酸序列来确定所述种猪的如本申请之一所述的snp标记，其中所述核酸序列选自如本申请之二所述的核酸序列。其中，分析所述核酸序列的具体的方法包括pcr-rflp和pcr-测序以及如上所述的检测snp的方法中的至少一种。

此外，常用的检测snp的方法有：1)基于杂交方法，其至少分为a)利用△tm法，b)杂交加荧光探针的方法；2)基于酶的方法，其至少分为a)dna聚合酶法，例如利用dna聚合酶进行pcr扩增，b)连接酶法，c)限制性内切酶法，d)外切酶fen法，e)rnaseh法；3)电泳法，其至少分为sscp单链构象多态性和dgge/tgge变性梯度凝胶电泳；4)直接测序法。

本申请之五提供了一种确定猪的生长性状优劣的方法，所述方法包括：确定所述猪的如本申请之一所述的snp标记，并根据所述snp标记确定所述猪的生长性状：

对于第一snp标记，在所述第16806345位点为aa和ga基因型的猪的生长性状优于gg基因型的猪的生长性状；

对于第二snp标记，在所述第16940077位点为tt和ct基因型的猪的生长性状优于cc基因型的猪的生长性状；

在对于第三snp标记，在所述第17473931位点为aa和ga基因型的猪的生长性状优于gg基因型的猪的生长性状；

对于第四snp标记，在所述第17013787位点为tt和ct基因型的猪的生长性状优于cc基因型的猪的生长性状；

对于第五snp标记，在所述第17096014位点为aa和ga基因型的猪的生长性状优于gg基因型的猪的生长性状；

对于第六snp标记，在所述第17007981位点为gg和ga基因型的猪的生长性状优于aa基因型的猪的生长性状；

对于第七snp标记，在所述第16916995位点为tt和ct基因型的猪的生长性状优于cc基因型的猪的生长性状；

对于第八snp标记，在所述第17102194位点为tt和ct基因型的猪的生长性状优于cc基因型的猪的生长性状；

对于第九snp标记，在所述第17114026位点为gg和ga基因型的猪的生长性状优于aa基因型的猪的生长性状；

对于第十snp标记，在所述第16682972位点为gg和gc基因型的猪的生长性状优于cc基因型的猪的生长性状；

对于第十一snp标记，在所述第16765047位点为gg和ga基因型的猪的生长性状优于aa基因型的猪的生长性状；

对于第十二snp标记，在所述第16788727位点为gg和gt基因型的猪的生长性状优于tt基因型的猪的生长性状；

对于第十三snp标记，在所述第16767555位点为gg和ga基因型的猪的生长性状优于aa基因型的猪的生长性状；

对于第十四snp标记，在所述第17472686位点为gg和gc基因型的猪的生长性状优于cc基因型的猪的生长性状；

所述生长性状包括猪胴体体长、猪胴体斜长、猪胴体重、猪胸背膘厚和猪颈椎总长中的至少一种，且长的猪胴体体长优于短的猪胴体体长，长的猪胴体斜长优于短的猪胴体斜长，重的猪胴体重优于轻的猪胴体重，薄的猪胸背膘厚优于厚的猪胸背膘厚，长的猪颈椎总长优于短的猪颈椎总长。

在一个优选地具体实施例中，利用分析所述猪的核酸序列来确定所述猪的如本申请之一所述的snp标记，其中所述核酸序列选自如本申请之二所述的核酸序列。

本申请的有益效果：

本申请的14个snp标记紧密连锁，特别是第一snp标记、第二snp标记、第三snp标记、第四snp标记、第五snp标记、第六snp标记、第七snp标记和第八snp标记的紧密连锁程度更高，连锁程度(r2)达到0.6。并且这些紧密连锁的snp标记与包括猪胴体体长、猪胴体斜长、猪胴体重、猪胸背膘厚和猪颈椎总长在内的生长性状紧密相关，因此可以通过这14个snp标记中的至少一个来检测猪的相关指标，或者通过这14个snp标记中的至少一个来进行遗传改良。

附图说明

图1显示了杜长大商品猪60kgwas分析结果图。

图2显示了qtl区域内196个snp位点关联性分析结果。

图3显示的显著性snp与周边snps连锁不平衡程度(ld)的分析结果。

具体实施方式

以下通过优选的实施例的形式对本申请的上述内容再作进一步的详细说明，但不构成对本申请的限制。

本申请中的杜长大商品猪是指长白猪为父本与大白猪为母本杂交后的母猪再与杜洛克公猪杂交的后代。

1、猪全基因组60ksnp芯片扫描、质控及判型

从上述的第一批杜长大群体中的每个个体采集一小块耳组织样，以标准酚氯仿方法提取基因组dna，将dna溶解于te缓冲液中。用nanodrop-nd1000分光光度计检测质量，使其a260/280比值在1.8-2.0，a260/230比值在1.7-1.9左右。将符合标准的dna样品的浓度稀释至50ng/μl，利用illuminainfiniumsnp分型平台，订购porcinesnp60dnaanalysiskit芯片，根据illuminainfiniumsnp的使用说明和标准流程进行芯片杂交与结果扫描，通过genomestudio软件读取基因型数据。用plinkv1.07对获得的基因型数据进行质量控制，剔除检出率<97％，次等位基因频率(minorallelefrequency，maf)<0.01，排除检出率<90％、家系孟德尔错误率高于0.1的个体，最后有46351个snp和610个个体用于数据分析。

2、全基因组关联(gwas)分析

使用r软件包genabel中的混合线性模型，利用第一批610头杜长大三元杂群体的60ksnp标记基因型数据和胴体表型数据进行gwas分析，表达式如下：y＝μ+xb+kw+sc+za+e。其中，y代表表型值向量，μ代表总体均值，x为固定效应指示矩阵，b代表批次和性别的固定效应，向量k为协变量指示矩阵，w为个体屠宰体重协变量，s为snp基因型指示矩阵，c是检测snp的加性效应，z为随机效应关联矩阵，a代表服从a～n(0,gσα2)随机加性遗传效应向量(其中g为亲缘关系矩阵，σα2为加性遗传方差)，e为残差。全基因组关联分析结果的显著性阈值用bonferroni方法确定。

3、60kgwas分析结果

gwas结果显示，猪17号染色体上存在与杜长大商品猪胴体直长显著关联的snp位点rs16767555(图1)。此位点对应于国际猪基因组参考序列(10.2版本)17号染色体上的16767555bp，并发现该位点上gg基因型个体比aa型个体多2cm的胴体直长(表1)。

表1.snprs16767555对第一批杜长大猪胴体直长的影响效应

4、目标区域高密度snp标记关联分析(qtl精细定位)

由于猪60k芯片标记密度较为稀疏，为了进一步缩小qtl置信区间和搜寻影响杜长大商品猪胴体长的因果突变位点或与其强连锁snp位点，申请人在gwas最高点rs16767555的1mb周围根据本实验室重测序的60头猪及网上公开的重测序数据挑选此qtl区域内的所有snps，再次选出在大白猪和长白猪中有分离，在杜洛克中没有分离的snps，最终共增加了近200个snp位点进行精细定位，标记平均密度达到1个snp/2kb。选取500头表型较为极端的杜长大个体进行基因分型。通过质检后剩下196个位点进行关联分析。

结果为：(1)由图2可知，共有81个snp位点与胴体长度关联显著程度超过p<2.77e-05。(2)最强关联位点为rs16806345，其p值为5.22e-23，其有利等位基因a增加近4.2cm胴体直长，a等位基因频率仅为22.19％(表2)，同时其p值比上述60kgwas发现的最强关联位点rs16767555(3.2e-17)更显著，高出rs16767555位点6个数量级。(3)在rs16806345位点上ag基因型个体较gg型个体胴体斜长长4.28cm，胴体重增加近7.0kg，背膘厚减少0.28cm，颈椎总长增加1.3cm(表2)，因此该标记位点具有重大的育种价值。

表2.snprs16806345对表型极端的杜长大猪生长性状的影响效应

5、连锁不平衡(ld)分析

采用haploviewversion4.1分析软件构建单倍型框，对显著性snp与周边snps连锁不平衡程度(ld)进行分析。结果见图3。

实施例2

本实施例为了验证实施例1中得到的关联显著性程度排前14位的snp标记的效应，将它们扩大到总计1847头杜长大商品猪群体中进行基因检测。虽然这1847个个体来自于不同时期、不同猪场的群体，但其关联分析的结果发现rs16806345与体长关联性(p值)达到3.082e-23；即使rs17472686位点，与体长关联性(p值)也达到2.45e-12(表3)。在生物统计学意义上，当snp位点与表型的关联性达到1×10^-5，认为该位点与表型存在相关性，可见，此结果表明rs16806345位点等14个snp标记与猪胴体长的关联性极其显著，而且在例如rs16806345位点的有利等位基因a可增加约2.41cm的胴体直长，其在杜长大猪中的频率仅为18.28％(表4)，故具有很大的选育空间。

实施例3

以rs16806345位点的检测为例，评估实施例2中的14个紧密连锁的snp标记中的一个与猪的生长性状的相关性。

申请人再检测rs16806345位点在长白和大白商业纯种猪中的分离状况并评估其对它们体长的影响，以便为这两个品种的生长性状分子选育提供理论与技术支持。

用rs16806345位点特异性检测探针(序列：fam-tagtacacagtggccccacttc-mgb，vic-tagtacacagtagccccacttc-mgb)对297头纯种大白和163头纯种长白样本进行基因分型检测后，发现该位点有利等位基因在大白中的频率仅为9.9％，但表型与基因相关性仍然达到极显著(p＝0.00164，表5)；而在长白中有利等位基因频率达到63.8％，其基因型与表型也呈极显关联(p＝0.00341)，且有利等位基因具有提高1.27cm活体体长的作用(表6)。此结果验证了该rs16806345标记位点对大白和长白的体长都有明显效应，适用于这两个品种及含它们血缘的猪种的体长选育。

表3.关联分析最显著的14个snp位点信息

表4.snprs16806345对所有杜长大猪胴体直长的影响效应

表5.snprs16806345对大白纯种猪活体体长的影响效应

表6.snprs16806345对长白纯种猪活体体长的影响效应

虽然本申请已经参照其优选地具体实施方式进行了描述，但是本领域的技术人员应该理解在没有脱离本申请的真正的精神和范围的情况下，可以进行的各种改变。例如，可以对本申请的主体、精神和范围进行多种改变以适应特定的情形、材料、材料组合物或方法步骤。所有的这些改变均包括在本申请明的权利要求的范围内。并且利用上述揭示的技术内容做出些许的变动或修饰均等同于等效实施案例，均属于技术方案范围内。

lha1760162核苷酸序列表

<110>江西农业大学

<120>一种用于测定和/或遗传改良猪生长性状的snp标记

<130>lha1760162

<160>14

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>846

<212>dna

<213>猪（susscrofa）

<400>1

tacactgtgactttcagggcaagggtggcaaactgtcttcttgcattggggtttgattgatagacggcatgag

ccaggctaattaaggaggagcctgggataaggggcctccaacacccagagcagcagatgtttctcaccccagg

actcctgtaatgcctgctgtggaacccccaagattccaggagattggcttcttctgggaaggcttgtcatggc

agcagcatgttgggccagaatccatgacccctgaggctcagtgcatctcagcccagcctttccctgacctcca

tcaggactcacacttactctccacatgcagccacaaccacagtagtacacagty1gccccacttcacctacac

atacatcaggcctggccctggtcctgagtgtcctgtgtgatgttcaaagaggagaacattccctgatggaggg

gtttgggcgaagaggccagctacctatggccgggtactggcagtgggactgggttaaaggagggagcaatgtg

ccgaggctgttcgttggggtaaaggccccaggagtaggtagtggtggtctcagggacaaatctgactcaggtt

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