本发明涉及植物源杀菌剂，具体的说是一种别异欧前胡内酯衍生物的制备及其应用。
背景技术：
苹果是我国的主要经济作物，尤其胶东苹果享誉全国，给当地带来巨大经济效益，但同时，苹果病害对苹果品质与产量的影响也日趋严重。苹果腐烂病能够直接侵害果树皮层，使苹果树日渐衰弱，严重的甚至枯死；苹果轮纹病又名粗皮病、轮纹烂果病，在我国苹果园区普遍发生，常与苹果炭疽病等混合发病。苹果轮纹病与苹果炭疽病不但危害苹果的生长过程，也能够影响苹果采后储藏，造成巨大的经济损失。
近年来，随着化学农药大量使用，上述苹果病害抗药性日益严重，随之也带来农残超标、环境污染甚至人畜中毒等问题。与化学农药相比，植物源农药具有选择性高、毒性较低、易于降解及病虫害不易产生抗性等优点，成为未来绿色友好农药发展的重要方向。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种别异欧前胡内酯衍生物的制备及其应用。为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：
一种别异欧前胡内酯衍生物，别异欧前胡内酯衍生物结构如式（一）所示。
一种别异欧前胡内酯衍生物的制备方法，其特征在于：
1）取羌活notopterygiumincisumtingexh.chang的干燥根茎，粉碎，过筛，并经有机溶剂提取，获得提取物，待用；
2）将上述提取物进行硅胶柱层析，以石油醚–乙酸乙酯及氯仿–甲醇进行梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液经薄层层析检测；
3）将上述步骤2）中石油醚–乙酸乙酯体积比1:1梯度的洗脱组分，依次进行反相硅胶柱层析、sephadexlh-20凝胶柱层析与制备高效液相色谱法分离纯化，收集保留时间tr值为14.1-16.1min的组分，即得式（一）所示别异欧前胡内酯衍生物。
所述步骤3）收集保留时间tr值为15.3min的组分，即得式（一）所示别异欧前胡内酯衍生物。
所述步骤1）羌活notopterygiumincisumtingexh.chang的干燥根茎，粉碎，过20~30目筛，经甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、水中的一种或几种作为有机溶剂进行提取，获得提取物。
所述步骤2）中石油醚–乙酸乙酯洗脱梯度为80:1至1:1，氯仿–甲醇洗脱梯度为40:1至1:1。
所述步骤3）中反向硅胶柱层析洗脱液为体积比4:1的甲醇–水，sephadexlh-20凝胶柱层析洗脱液为丙酮，制备高效液相色谱条件为体积比3:2的乙腈–水，流速为3ml/min，检测波长为230nm。
一种别异欧前胡内酯衍生物的应用，所述式（一）所示别异欧前胡内酯衍生物可用于防治苹果病害的活性先导化合物或新农药成分的制备。
所述苹果病害为苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌或苹果炭疽病菌。
本发明所具有的优点：式（一）所示别异欧前胡内酯衍生物对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌与苹果炭疽病菌等苹果主要病害具有较好抑制活性，最小抑制浓度分别为0.256、0.128与0.128mg/ml，可以用于防治苹果病害的活性先导化合物或新农药成分的制备；式（一）所示别异欧前胡内酯衍生物由羌活notopterygiumincisumtingexh.chang的干燥根茎经提取、分离得到，作为植物源天然产物，具有不易产生抗药性、对非靶标生物安全、环境相容性好等优点。
具体实施方式
为阐明对本发明特征的理解，下面结合一些非限定性的实施例对本发明做进一步阐述。
实施例1：别异欧前胡内酯衍生物如式（一）所示（结构中的阿拉伯数字为碳原子的标位）。
实施例2：别异欧前胡内酯衍生物的制备
1）分离纯化
取羌活notopterygiumincisumtingexh.chang的干燥根茎，粉碎，过20目筛，并经乙酸乙酯超声提取3次，合并提取液，减压蒸馏得到提取浸膏。将其进行硅胶vlc（vacuumliquidchromatography）快速柱层析，按照洗脱液极性递增顺序，以体积比80:1至1:1的石油醚—乙酸乙酯（流速为120ml/min），体积比40:1至1:1的氯仿—甲醇（流速为120ml/min）进行梯度洗脱。收集洗脱液，并经薄层层析检测，检测时以茴香醛-浓硫酸作为显色剂，根据rf值以及显色情况来合并相同或类似部分。收集石油醚—乙酸乙酯体积比1:1梯度的洗脱组分，将收集的组分进行反相硅胶柱层析，以体积比1:9至1:0的甲醇—水（流速为5ml/min）依次进行梯度洗脱，收集体积比为4:1的甲醇—水洗脱组分。该组分经凝胶柱层析，以丙酮为洗脱溶液（流速为1ml/min），最后经制备高效液相色谱分离纯化（色谱条件为体积比3:2的乙腈—水，流速3ml/min，检测波长230nm），收集保留时间tr值为15.3min的组分，即得式（一）所示别异欧前胡内酯衍生物。
2）结构鉴定
式（一）所示别异欧前胡内酯衍生物，淡黄色晶体，hresimsm/z359.1155[m+na]+，提示分子式为c21h20o4，其1h-和13c-nmr数据见表1。
实施例3：抑菌活性试验
采用微量稀释法，测定式（一）所示化合物对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌与苹果炭疽病菌的抑菌活性（《从天然产物到新农药创制-原理方法》，吴文君，2006，化学工业出版社）。
1）菌悬液的制备
将供试真菌接种于pda培养基表面于28℃培养72h后，吸取2ml无菌0.85%nacl溶液（含0.25%吐温-20）洗涤培养物，并用玻璃刮刀将菌落轻轻刮下。吸取适量菌悬液于无菌试管中，调至0.5麦氏比浊（相当于1.5×108cfu/ml）备用。
2）样品的配制
取1mg待测样品（式（一）所示化合物），溶解于100μl50%dmso中，充分混匀后，吸取50μl样品溶液到另一只离心管中，接着加入50μl50%dmso，得到浓度减半的样品溶液。按照此方法，得到6组浓度依次减半的样品溶液。
3）mic测定方法
（1）采用无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的样品溶液分别加到无菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第6孔各加5μl的样品溶液，并以不加样品孔作为空白对照，加5μl50%dmso溶液孔为溶剂对照。
（2）将相当于0.5麦氏比浊度的指示菌悬液，经pdb培养基稀释1000倍后，取95μl依次加入到96孔板中，使得第1至第6孔的样品浓度依次为512、256、128、64、32、16μg/ml。以上所有样品均重复三次。轻轻震荡混匀后，将96孔板密封置于28℃生化培养箱中培养72h。
（3）在600nm波长下使用酶标仪测定每孔的吸光值，以在小孔内完全抑制指示菌生长的最低样品浓度为该化合物的mic。（注意：当阴性对照孔内指示菌明显生长实验才有意义；当实验出现单一的跳孔时，应记录抑制菌株生长的最高药物浓度；如出现多处跳孔，则不应报告结果，需重复实验。）
试验结果为：式（一）所示化合物对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌与苹果炭疽病菌等苹果主要病害具有较好抑制活性，最小抑制浓度分别为0.256、0.128与0.128mg/ml，具有较好抑菌活性。
上述实验结果证明本发明所涉及的化合物具有较好抑菌活性，可以用于防治苹果病害的活性先导化合物或新农药成分的制备。