一种荧光素类半胱氨酸荧光探针的制作方法

本发明涉及一种荧光素类半胱氨酸荧光探针以及其在检测半胱氨酸中的应用。

背景技术：

半胱氨酸(cysteine)属于20种天然氨基酸之一，是一种含硫的非必需氨基酸。动物体内可经由蛋氨酸和丝氨酸合成。具有缓解修复放射线对人体的损伤作用。半胱氨酸是不稳定的化合物，容易氧化还原，与胱氨酸相互转换。可与有毒的芳香族化合物缩合成硫醚氨酸(mercapturicacid)而起解毒作用。半胱氨酸在食品加工中具有许多用途，它主要用于焙烤制品，作为面团改良剂的必需成分，它作为一种还原剂，它可以促进面筋的形成，减少混合所需的时间和所需药用的能量，半胱氨酸通过改变蛋白质分子之间和蛋白质分子内部的二硫键，减弱了蛋白质的结构，这样蛋白质就伸展开来。

目前，半胱氨酸含量测定的方法有气相色谱-质谱联用法、高效液相色谱法、全自动的荧光偏振免疫测定、高效毛细管电泳法、有机小分子荧光探针检测法等。在各种方法中有机小分子荧光探针检测法由于其具有简单、便捷、成本低、快速、灵敏及其潜在的细胞内成像等特性，已被证明是一种非常有效的检测方法，目前许多的有机小分子荧光探针被开发出来。

荧光素具有较强的荧光强度、优良的溶解性、易于制备等特征，因此成为荧光探针使用非常广泛的荧光基团之一。

技术实现要素：

本发明目的是提供一种荧光素类半胱氨酸荧光探针，它适于在食品、药品、化妆品等产品中检测半胱氨酸。

更具体的是，本发明涉及一种荧光素类半胱氨酸荧光探针，它通过下式表示：

附图说明

图1是在磷酸缓冲盐溶液中，本发明的荧光探针(10μm)在半胱氨酸(30μm)加入前后的颜色变化。

图2是在磷酸缓冲盐溶液中，随着不同浓度半胱氨酸的加入，本发明的荧光探针(10μm)的荧光强度变化。嵌入图：半胱氨酸的浓度。

图3是在磷酸缓冲盐溶液中，本发明的荧光探针(10μm)荧光强度随着半胱氨酸浓度变化的标准曲线。

具体实施方式

实施例1.荧光素类半胱氨酸荧光探针的制备

合成路线如下式所示：

将1g(3mmol)a荧光素与0.8g(3mmol)b2，4-二硝基苯磺酰氯加入到50ml三口烧瓶中，再将一滴三乙胺加入到其中，加入10ml三氯甲烷，加热回流5h。后将温度将至室温，旋蒸浓缩，柱层析分离纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)，得白色晶体105mg。

产物经过核磁氢谱及核磁碳谱表征。

¹hnmr(300mhz，dmso)，δ(ppm)：10.25(s，1h)，8.91(d，j＝2.7hz，1h)，8.48(dd，j＝9.3，2.7hz，1h)，8.00(d，j＝7.2hz，1h)，7.72-7.85(m，2h)，7.42(d，j＝9.3hz，1h)，7.26-7.36(m，2h)，7.00(dd，j＝8.7，2.4hz，1h)，6.91(d，j＝8.7hz，1h)，6.70(d，j＝0.9hz，1h)，6.61(s，2h).

¹³cnmr(300mhz，dmso)：δ(ppm)：169.1，160.2，156.1，154.2，152.8，152.4，151.9，142.8，140.5，136.4，136.4，130.9，130.3，129.7，126.3，125.4，124.6，122.5，121.5，117.0，116.2，113.7，109.6，108.5，102.8，82.4.

如图1所示，随着半胱氨酸的加入，本发明的荧光探针溶液的颜色由浅黄色变为黄绿色，该颜色变化可以在自然光下用人眼直接观察到，表明本发明的荧光探针可用于半胱氨酸的定性检测。本发明的荧光探针的荧光强度随着半胱氨酸浓度的变化如图2所示，依据该变化可作出该荧光探针(10μm)荧光强度随着半胱氨酸浓度变化的标准曲线，标准曲线如图3所示，通过该标准曲线的建立，本发明的荧光探针可用于半胱氨酸的定量检测。