一种高效扁柏双黄酮的制备方法与流程

本发明涉及一种高效扁柏双黄酮的制备方法，属植物成份提取及技术领域。

背景技术：

目前双黄酮在医药化工领域中有着极为广泛的使用，且需求量巨大，当前提取植物天然双黄酮的工作中，主要以侧柏作为主要的原料，但由于当前的提取工艺限制，在从侧柏中提取双黄酮作业中，主要是以侧柏树叶和枝梢为原料，虽然可以满足使用需要，但对原料要求较为严格，从而导致原料成本相对较高，同时提取作业中，也往往也缺乏有效的提高侧柏有效成份提取作业工作效率和纯度的方法，因此导致当前所制备的双黄酮中往往易含有杂质，或直接导致大量的原料浪费，从而进一步影响了双黄酮提取作业的工作效率、产量和成本，因此针对这一问题，迫切需要开发一种全新的基于侧柏的双黄酮提取方法，以满足实际工作的需要。

技术实现要素：

本发明目的就在于克服上述不足，提供一种高效扁柏双黄酮的制备方法。

为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现：

一种高效扁柏双黄酮的制备方法，包括以下步骤：

第一步，制备提取基体，截取生长旺盛且无病虫害的侧柏树叶及当前生半木质化枝条，然后将截取的植物组织进行-10℃—0℃中风干保存，制备得到提取基体；

第二步，提取基体粉碎，完成第一步后，将获取的提取基体在1—10分钟内将温度下降至-20℃—-10℃并保温，然后将降温后的提取基体放置到粉碎机进行粉碎，制备得到80—250目粉末状提取基体，其中在粉碎过程中，提取基体温度为-10℃—-5℃，然后将粉碎后粉末状提取基体自然升温至-5℃—5℃后保温备用；

第三步，浸渍，将第二步制备得到的粉末状提取基体添加到体积为粉末状提取基体体积5—10倍的石油醚中，然后通过搅拌装置对混合后的混合物进行单向匀速搅拌均匀，其中搅拌速度为50—300转/分钟，搅拌时间为1—3小时，并在搅拌前1—10分钟内将混合物温度升高至58℃—90℃，并对混合物进行回流作业，并分别对回流后的固体残渣和回流后收集的混合溶液进行收集；

第四步，过滤，通过负压过滤装置对第三步收集到的固体残渣和回流后收集的混合溶液分别进行固液分离过滤，然后将分离后的混合溶液进行收集并以20℃—30℃温度进行恒温保存，将固体残渣返回到第三步继续进行浸渍处理，且固体残渣反复进行3—5次浸渍处理，然后分别将各次浸渍后得到的过滤液混合后行独立存放，对经过过滤的固体残渣进行0℃—5℃低温存放，并作为后续作业原料；

第五步，萃取，将第四步制备的固体残渣添加到微波萃取装置中，然后向固体残渣中添加总量为固体残渣总量4—10倍的去离子水并搅拌均匀，然后后通过微波萃取装置对混合物进行萃取作业，萃取作业时的萃取功率为300—600w，萃取时间为5—15分钟，在完成萃取后，对混合物进行固液分离，然后对萃取液进行20℃—30℃温度恒温保存，对分离后的固体残渣连续进行2—5次萃取作业后，将每次萃取作业后的萃取液进行混合，将最后一次萃取后的固体残渣作为废料无害化处理；

第六步，浓缩，将第五步得到的萃取液通过真空减压浓缩设备进行浓缩，并得到浓度为0.1—0.5g/ml的浓缩液，其中真空减压浓缩设备的浓缩压力为-0.08mpa—-0.1mpa，浓缩温度为30℃—60℃，并将浓缩液通过大孔树脂进行吸附，并在大孔树脂吸附完成后，用10℃—30℃去离子水进行清洗除杂；

第七步，洗脱，由60％—80％乙醇首先对第六步制备的浓缩液进行洗脱作业，且60％—80％乙醇量为第六步浓缩液量的3—5倍，然后对洗脱作业后的乙醇洗脱液进行浓缩，然后将乙醇洗脱液加到聚酰胺层析柱上，以比例为3：1的二氯甲烷—甲醇混合溶剂对乙醇洗脱液进行二次洗脱，然后再由聚酰胺膜对二次洗脱后的二次洗脱液进行收集，并对聚酰胺膜上rf＝4—4.5的二次洗脱液进行流份并回收二次洗脱液，然后对回收后的二次洗脱液中添加丙酮并混合均匀后，对二次洗脱液进行洗涤干燥，即可获得成品。

进一步的，所述的第三步浸渍中，另通过超声波震荡装置对混合物进行超声波震荡作业，且超声波震荡频率为18—30khz。

进一步的，所述的超声波设备的声波传播方向与混合物搅拌方向相反，并与混合液搅拌方向间呈30°—70°夹角，且超声波设备至少两个，并环绕混合液搅拌轴线均布。

进一步的，所述的第四步中，对经过过滤的固体残渣存放时间不得超过24小时。

本发明工艺简单，操作简便且操作效率高，一方面可有效的提高侧柏有效利用率，提高原料获取途径，从而达到降低原料成本和拓宽原料来源的目的，另一方面可有效的提高对侧柏有效成份提取作业的精度和效率，从而达到双黄酮提取作业的工作效率和纯度的目的。

附图说明

图1为本发明的结构示意图。

具体实施方式

实施例1

如图1所示，一种高效扁柏双黄酮的制备方法，包括以下步骤：

第一步，制备提取基体，截取生长旺盛且无病虫害的侧柏树叶及当前生半木质化枝条，然后将截取的植物组织进行-10℃风干保存，制备得到提取基体；

第二步，提取基体粉碎，完成第一步后，将获取的提取基体在10分钟内将温度下降至-10℃并保温，然后将降温后的提取基体放置到粉碎机进行粉碎，制备得到150目粉末状提取基体，其中在粉碎过程中，提取基体温度为-10℃，然后将粉碎后粉末状提取基体自然升温至-5℃后保温备用；

第三步，浸渍，将第二步制备得到的粉末状提取基体添加到体积为粉末状提取基体体积5倍的石油醚中，然后通过搅拌装置对混合后的混合物进行单向匀速搅拌均匀，其中搅拌速度为50转/分钟，搅拌时间为2小时，并在搅拌前8分钟内将混合物温度升高至60℃，并对混合物进行回流作业，并分别对回流后的固体残渣和回流后收集的混合溶液进行收集；

第四步，过滤，通过负压过滤装置对第三步收集到的固体残渣和回流后收集的混合溶液分别进行固液分离过滤，然后将分离后的混合溶液进行收集并以30℃温度进行恒温保存，将固体残渣返回到第三步继续进行浸渍处理，且固体残渣反复进行3次浸渍处理，然后分别将各次浸渍后得到的过滤液混合后行独立存放，对经过过滤的固体残渣进行1℃低温存放，并作为后续作业原料；

第五步，萃取，将第四步制备的固体残渣添加到微波萃取装置中，然后向固体残渣中添加总量为固体残渣总量5倍的去离子水并搅拌均匀，然后通过微波萃取装置对混合物进行萃取作业，萃取作业时的萃取功率为600w，萃取时间为10分钟，在完成萃取后，对混合物进行固液分离，然后对萃取液进行30℃温度恒温保存，对分离后的固体残渣连续进行4次萃取作业后，将每次萃取作业后的萃取液进行混合，将最后一次萃取后的固体残渣作为废料无害化处理；

第六步，浓缩，将第五步得到的萃取液通过真空减压浓缩设备进行浓缩，并得到浓度为0.1g/ml的浓缩液，其中真空减压浓缩设备的浓缩压力为-0.08mpa，浓缩温度为50℃，并将浓缩液通过大孔树脂进行吸附，并在大孔树脂吸附完成后，用20℃去离子水进行清洗除杂；

第七步，洗脱，由75％乙醇首先对第六步制备的浓缩液进行洗脱作业，且75％乙醇量为第六步浓缩液量的4倍，然后对洗脱作业后的乙醇洗脱液进行浓缩，然后将乙醇洗脱液加到聚酰胺层析柱上，以比例为3：1的二氯甲烷—甲醇混合溶剂对乙醇洗脱液进行二次洗脱，然后再由聚酰胺膜对二次洗脱后的二次洗脱液进行收集，并对聚酰胺膜上rf＝4.5的二次洗脱液进行流份并回收二次洗脱液，然后对回收后的二次洗脱液中添加丙酮并混合均匀后，对二次洗脱液进行洗涤干燥，即可获得成品。

本实施例中，所述的第三步浸渍中，另通过超声波震荡装置对混合物进行超声波震荡作业，且超声波震荡频率为18khz。

本实施例中，所述的超声波设备的声波传播方向与混合物搅拌方向相反，并与混合液搅拌方向间呈30°夹角，且超声波设备至少两个，并环绕混合液搅拌轴线均布。

本实施例中，所述的第四步中，对经过过滤的固体残渣存放时间不得超过24小时。

实施例2

如图1所示，一种高效扁柏双黄酮的制备方法，包括以下步骤：

第一步，制备提取基体，截取生长旺盛且无病虫害的侧柏树叶及当前生半木质化枝条，然后将截取的植物组织进行0℃中风干保存，制备得到提取基体；

第二步，提取基体粉碎，完成第一步后，将获取的提取基体在5分钟内将温度下降至10℃并保温，然后将降温后的提取基体放置到粉碎机进行粉碎，制备得到100目粉末状提取基体，其中在粉碎过程中，提取基体温度为-5℃，然后将粉碎后粉末状提取基体自然升温至0℃后保温备用；

第三步，浸渍，将第二步制备得到的粉末状提取基体添加到体积为粉末状提取基体体积7倍的石油醚中，然后通过搅拌装置对混合后的混合物进行单向匀速搅拌均匀，其中搅拌速度为300转/分钟，搅拌时间为2小时，并在搅拌前3分钟内将混合物温度升高至58℃，并对混合物进行回流作业，并分别对回流后的固体残渣和回流后收集的混合溶液进行收集；

第四步，过滤，通过负压过滤装置对第三步收集到的固体残渣和回流后收集的混合溶液分别进行固液分离过滤，然后将分离后的混合溶液进行收集并以30℃温度进行恒温保存，将固体残渣返回到第三步继续进行浸渍处理，且固体残渣反复进行5次浸渍处理，然后分别将各次浸渍后得到的过滤液混合后行独立存放，对经过过滤的固体残渣进行0℃—5℃低温存放，并作为后续作业原料；

第五步，萃取，将第四步制备的固体残渣添加到微波萃取装置中，然后向固体残渣中添加总量为固体残渣总量10倍的去离子水并搅拌均匀，然后通过微波萃取装置对混合物进行萃取作业，萃取作业时的萃取功率为600w，萃取时间为5分钟，在完成萃取后，对混合物进行固液分离，然后对萃取液进行30℃温度恒温保存，对分离后的固体残渣连续进行4次萃取作业后，将每次萃取作业后的萃取液进行混合，将最后一次萃取后的固体残渣作为废料无害化处理；

第六步，浓缩，将第五步得到的萃取液通过真空减压浓缩设备进行浓缩，并得到浓度为0.5g/ml的浓缩液，其中真空减压浓缩设备的浓缩压力为-0.1mpa，浓缩温度为60℃，并将浓缩液通过大孔树脂进行吸附，并在大孔树脂吸附完成后，用30℃去离子水进行清洗除杂；

第七步，洗脱，由70％乙醇首先对第六步制备的浓缩液进行洗脱作业，且70％乙醇量为第六步浓缩液量的5倍，然后对洗脱作业后的乙醇洗脱液进行浓缩，然后将乙醇洗脱液加到聚酰胺层析柱上，以比例为3：1的二氯甲烷—甲醇混合溶剂对乙醇洗脱液进行二次洗脱，然后再由聚酰胺膜对二次洗脱后的二次洗脱液进行收集，并对聚酰胺膜上rf＝4的二次洗脱液进行流份并回收二次洗脱液，然后对回收后的二次洗脱液中添加丙酮并混合均匀后，对二次洗脱液进行洗涤干燥，即可获得成品。

本实施例中，所述的第三步浸渍中，另通过超声波震荡装置对混合物进行超声波震荡作业，且超声波震荡频率为30khz。

本实施例中，所述的超声波设备的声波传播方向与混合物搅拌方向相反，并与混合液搅拌方向间呈30°夹角，且超声波设备至少两个，并环绕混合液搅拌轴线均布。

本实施例中，所述的第四步中，对经过过滤的固体残渣存放时间不得超过24小时。

本发明工艺简单，操作简便且操作效率高，一方面可有效的提高侧柏有效利用率，提高原料获取途径，从而达到降低原料成本和拓宽原料来源的目的，另一方面可有效的提高对侧柏有效成份提取作业的精度和效率，从而达到双黄酮提取作业的工作效率和纯度的目的。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。