一种鹿骨蛋白多肽及应用的制作方法

文档序号:11212308

本发明涉及保健用品技术领域,尤其涉及一种鹿骨蛋白多肽及应用。



背景技术:

动物骨活性成分主要为多肽类及某些蛋白质如骨发生蛋白及骨骼生长因子等。鹿骨多为鹿科梅花鹿和马鹿动物的骨骼。中医资料记载,具有补虚赢、强筋骨、益气补血、祛风除湿的功能,用于风湿疼痛、阳萎、遗尿、水肿等症。鹿骨胶对久病体弱、精髓不足、贫血、风湿、四肢疼痛等症有较好的临床疗效。

由于鹿骨胶具有巨大的分子量,在酒精水溶液中形成的胶体稳定性较差,遇温度、氧化还原电位等的变化稳定性容易受到破坏,产生失光、浑浊、沉淀现象,这在餐饮酒(露酒)中是不能容忍的。另一方面,由于鹿骨胶具有巨大的分子量,在鹿龟酒配制过程中可能造成的损失如下:1)与中药材中的单宁和多酚类物质形成沉淀;2)在一定酒精浓度下形成沉淀;3)在陈酿过程中形成沉淀;4)在气温骤然下降时形成失光、浑浊沉淀,影响酒质。

胶原多肽是胶原或明胶经过蛋白酶降解处理得到的产物,与明胶相比具有较强的水溶性,易被人体吸收。随着研究的进展,人们发现胶原多肤具有较多的生理功能,例如抗高血压、预防与治疗骨关节炎和骨质疏松、治疗胃溃疡等疾病、抗衰老和抗氧化等。

现代研究发现鹿骨中的抗炎活性成分均为多肽类。



技术实现要素:

为了克服现有技术的不足,本发明的目的之一在于提供一种鹿骨蛋白多肽。

本发明的目的之二在于提供该鹿骨蛋白多肽的应用。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现:

一种鹿骨蛋白多肽,其特征在于,其制备方法依次包括:

脱脂步骤:将鹿骨料粉碎至60-80目,装入滤网,用蒸馏水反复冲洗后,使用脱脂剂进行脱脂,干燥,得到脱脂骨粉;

脱钙步骤:将脱脂骨粉用脱钙剂进行洗涤,得到脱钙骨粉;

提取步骤:向脱钙骨粉中加入稀NaOH溶液至pH=12-13,50-60℃微波辅助进行提取,得到初提液;

碱酶解步骤:向初提液中加入稀盐酸至pH=9-10,加入碱性蛋白酶,55-65℃微波辅助酶解,得到初级酶解液;

再次酶解步骤:向初级酶解液中加入中性蛋白酶和胰蛋白酶,45-55℃微波辅助酶解,加热至80-90℃灭活,静置,过滤,得到蛋白多肽液;

浓缩步骤:将精提液减压浓缩至Brix为45-55°,即得鹿骨胶原蛋白多肽的膏状体。

进一步地,脱脂步骤中,脱脂剂为三氯甲烷:乙醇:水=(1-2):(1-2):1。

进一步地,脱钙步骤中,脱钙剂为0.5mol/L的EDTA。

进一步地,脱钙步骤中,脱钙剂为0.5mol/L的稀盐酸。

进一步地,提取步骤和/或碱酶解步骤和/或再次酶解步骤中,微波频率为1500-3000MHz,功率为5kW。

进一步地,碱酶解步骤中,碱性蛋白酶的加入量为2000-3000U/g脱钙骨粉。

进一步地,再次酶解步骤中,中性蛋白酶的加入量为2000-3000U/g脱钙骨粉。

进一步地,再次酶解步骤中,胰蛋白酶的加入量为3000-4000U/g脱钙骨粉。

进一步地,采用微孔过滤。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现:

该鹿骨蛋白多肽在制备保健品上的应用。

相比现有技术,本发明的有益效果在于:

(1)本发明提供的鹿骨蛋白多肽的分子结构较均一,寡肽的占比高,易于吸收;该鹿骨蛋白多肽具有较好的抗疲劳和抗氧化活性,具有较好的功效;

(2)本发明提供的鹿骨蛋白多肽用于制备养生酒之后具有较高的稳定性,不易沉淀,品质佳。

具体实施方式

下面,结合具体实施方式,对本发明做进一步描述,需要说明的是,在不相冲突的前提下,以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。

以下具体实施方式中,如未特殊说明,所采用的试剂或材料均可通过市售或常规试验手段的方式获得。

本发明提供一种鹿骨蛋白多肽,其制备方法依次包括:

脱脂步骤:将鹿骨料粉碎至60-80目,装入滤网,用蒸馏水反复冲洗后,使用脱脂剂进行脱脂,干燥,得到脱脂骨粉;

脱钙步骤:将脱脂骨粉用脱钙剂进行洗涤,得到脱钙骨粉;

该脱脂和脱钙步骤中,能有效地脱除鹿骨料中的脂溶性成分和钙质,能减少制备过程,胶原蛋白的损耗,即提高蛋白多肽的收率。脱脂剂可以选自包括但不限于三氯甲烷和乙醇的混合水溶液,如三氯甲烷:乙醇:水=(1-2):(1-2):1,采用该种脱脂剂可以在不损耗骨蛋白的基础上,有效地去除骨料中的脂溶性成分。脱钙剂可以选自EDTA或稀盐酸,前者以螯合作用与钙形成沉淀,后者溶解钙质,在该0.5mol/L浓度范围下,对鹿骨蛋白的损坏性小;

提取步骤:向脱钙骨粉中加入稀NaOH溶液至pH=12-13,50-60℃微波辅助进行提取,得到初提液;

本步骤中,采用稀碱液提取的方式,能在保证提取效率的同时,有效地减少对鹿骨蛋白的损耗;而浓度过高,有可能造成蛋白变性,浓度过低,提取效率不高;

碱酶解步骤:向初提液中加入稀盐酸至pH=9-10,加入碱性蛋白酶,55-65℃微波辅助酶解,得到初级酶解液;

再次酶解步骤:向初级酶解液中加入中性蛋白酶和胰蛋白酶,45-55℃微波辅助酶解,加热至80-90℃灭活,静置,过滤,得到蛋白多肽液;

碱酶解步骤和再次酶解步骤结合,一方面能有效利用体系pH变化的趋势,更加彻底地酶解,以得到分子链更短、更易吸收的蛋白多肽,即加入碱酶酶解后,体系pH值略有下降,再加入中性蛋白酶和胰蛋白酶酶解,两种酶在体系的pH值下酶活性均达到较高水平;本步骤中,过滤方式可采用常规的多层纱布常压过滤,为了一步地高蛋白多肽液的均一性,可采用微孔过滤,微孔过滤的孔径可选22μm;

浓缩步骤:将精提液减压浓缩至Brix为45-55°,即得鹿骨胶原蛋白多肽的膏状体,本步骤制得的膏状体具有较好的稳定性,不易变性。

实施例1:

一种鹿骨蛋白多肽,其制备方法依次包括:

脱脂步骤:将鹿骨料粉碎至60-80目,装入由三层孔径为22目的纱布叠合而成的滤网,用蒸馏水反复冲洗后,使用三氯甲烷:乙醇:水=1.5:1.5:1进行脱脂,干燥,得到脱脂骨粉;

脱钙步骤:将脱脂骨粉用0.5mol/L EDTA进行洗涤,得到脱钙骨粉;

提取步骤:向脱钙骨粉中加入稀NaOH溶液至pH=12-13,55℃微波辅助进行提取,得到初提液;其中微波频率为1500-3000MHz,功率为5kW;

碱酶解步骤:向初提液中加入稀盐酸至pH=9-10,以2500U/g脱钙骨粉的加料比加入Alcalase碱性蛋白酶,60℃微波辅助酶解,得到初级酶解液;其中微波频率为2000MHz,功率为5kW;

再次酶解步骤:向初级酶解液中加入中性蛋白酶和胰蛋白酶,50℃微波辅助酶解,加热至85℃灭活,静置,采用22μm微孔膜过滤,得到蛋白多肽液;其中中性蛋白酶的加料比为2500U/g脱钙骨粉,胰蛋白酶的加料比为3500U/g脱钙骨粉;

浓缩步骤:将精提液减压浓缩至Brix为50°,即得鹿骨胶原蛋白多肽的膏状体,收率为86.6%,寡肽比例为77.3%。

实施例2:

一种鹿骨蛋白多肽,其制备方法依次包括:

脱脂步骤:将鹿骨料粉碎至60-80目,装入由三层孔径为22目的纱布叠合而成的滤网,用蒸馏水反复冲洗后,使用三氯甲烷:乙醇:水=1:2:1进行脱脂,干燥,得到脱脂骨粉;

脱钙步骤:将脱脂骨粉用0.5mol/LHCl进行洗涤,得到脱钙骨粉;

提取步骤:向脱钙骨粉中加入稀NaOH溶液至pH=12-13,60℃微波辅助进行提取,得到初提液;其中微波频率为1500-3000MHz,功率为5kW;

碱酶解步骤:向初提液中加入稀盐酸至pH=9-10,以2000U/g脱钙骨粉的加料比加入Alcalase碱性蛋白酶,65℃微波辅助酶解,得到初级酶解液;其中微波频率为2000MHz,功率为5kW;

再次酶解步骤:向初级酶解液中加入中性蛋白酶和胰蛋白酶45℃微波辅助酶解,加热至80℃灭活,静置,采用22μm微孔膜过滤,得到蛋白多肽液;其中中性蛋白酶的加料比为3000U/g脱钙骨粉,胰蛋白酶的加料比为4000U/g脱钙骨粉;

浓缩步骤:将精提液减压浓缩至Brix为45°,即得鹿骨胶原蛋白多肽的膏状体,收率为85.1%,寡肽比例为79.0%。

实施例3:

一种鹿骨蛋白多肽,其制备方法依次包括:

脱脂步骤:将鹿骨料粉碎至60-80目,装入由三层孔径为22目的纱布叠合而成的滤网,用蒸馏水反复冲洗后,使用三氯甲烷:乙醇:水=2:1:1进行脱脂,干燥,得到脱脂骨粉;

脱钙步骤:将脱脂骨粉用0.5mol/L EDTA进行洗涤,得到脱钙骨粉;

提取步骤:向脱钙骨粉中加入稀NaOH溶液至pH=12-13,60℃微波辅助进行提取,得到初提液;其中微波频率为1500-3000MHz,功率为5kW;

碱酶解步骤:向初提液中加入稀盐酸至pH=9-10,以2000U/g脱钙骨粉的加料比加入Alcalase碱性蛋白酶,55℃微波辅助酶解,得到初级酶解液;其中微波频率为2000MHz,功率为5kW;

再次酶解步骤:向初级酶解液中加入中性蛋白酶和胰蛋白酶45℃微波辅助酶解,加热至80℃灭活,静置,采用22μm微孔膜过滤,得到蛋白多肽液;其中中性蛋白酶的加料比为2000U/g脱钙骨粉,胰蛋白酶的加料比为3000U/g脱钙骨粉;

浓缩步骤:将精提液减压浓缩至Brix为55°,即得鹿骨胶原蛋白多肽的膏状体,收率为84.7%,寡肽比例为75.4%。

对比例1:

对比例1与实施例1不同的是,提取步骤未采用微波辅助,收率为54.1%,寡肽比例为80.4%。

对比例2:

对比例2与实施例1不同的是,碱酶解步骤和再次酶解步骤均未采用微波辅助,收率为76.4%,寡肽比例为61.7%。

对比例3:

对比例3与实施例1不同的是,提取步骤、碱酶解步骤和再次酶解步骤均未采用微波辅助,收率为56.4%,寡肽比例为64.9%。

性能检测与效果评定

1、抗氧化能力测定

将10μmol/L的Trolox储备液加磷酸盐缓冲液稀释成浓度为0.05、0.10、0.20、0.40、0.80、1.6μmol/L的标准溶液,以磷酸盐缓冲液为阴性对照,以荧光半衰时间为纵坐标,以Trolox浓度为横坐标,绘制标准曲线。

取0.01g的实施例1-3的鹿骨蛋白多肽,以蒸馏水为空白对照,加100mL的磷酸盐缓冲液进行稀释,再分别采用磷酸盐缓冲液稀释按10倍、100倍、1000倍、10000倍、100000倍稀释,将稀释液进行测定,其结果如下表所示:

表1抗氧化能力测试结果

2、小鼠负重试验

采用SPF雄性小鼠,体重为18-22g,每试验组10只,共40只,分别进行负重游泳测定,实验期间环境温度为22-24℃,湿度50-54%。采用实施例1得到的鹿骨蛋多肽,设定剂量为0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.5g/kg.bw,以灭菌水为对照组,拌食喂养30天,进行负重游泳试验。

表2负重游泳试验

灌胃喂养30天后,各剂量组小鼠,相对于对照组小鼠的负重游泳时间明显延长。说明本申请提供的鹿骨蛋白多肽具有提高机体抗疲劳作用。

3、稳定性试验

将实施例1-3与对比例1-3的鹿骨蛋白多肽以1:10的配比加至50°的白酒中,震荡溶解,得到鹿骨蛋白多肽的养生酒,取1L养生酒以3000rpm的速度离心5min,观察养生酒的外观以及是否有沉淀,测量沉淀体积,结果如下表所示:

表3稳定性试验结果

如上表所示,该申请获得的鹿骨蛋白多肽具有较高的动力学稳定性,该蛋白多肽制备养生酒后不易变质,不易产生沉淀,品质较高。

上述实施方式仅为本发明的优选实施方式,不能以此来限定本发明保护的范围,本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

再多了解一些
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