本发明涉及生物制剂技术领域，具体涉及一种糖化血红蛋白在线溶血酶法检测试剂盒。
背景技术：
世界卫生组织估计，全世界有1.8亿人患有糖尿病。糖化血红蛋白(糖化hb)对于糖尿病患者来说是一个非常重要的检查指标。hba1c为hb的β链n末端的α氨基被糖化的糖化hb，在糖化hb中，也被作为糖尿病诊断等的特别重要的指标。目前，hba1c的测定方法主要有离子交换层析法、高效液相色谱法、亲和层析法、放射免疫法、酶免疫法和胶乳免疫凝集法等，以上方法或是需专业的昂贵设备、或是检测准确度、抗干扰性、速度等尚不理想，一定程度上限制了其在临床上的大规模应用。
新开发的糖化血红蛋白酶法检测试剂盒利用了氧化还原反应，克服了上述几种方法的灵敏度较低、重复性差、耗时难以大量检测等缺点，具有检测灵敏度高、反应产物无污染且抗干扰能力强等优点；该糖化血红蛋白酶法检测试剂盒具体操作为：从患者采集edta抗凝新鲜全血，进行红细胞的自然沉降，然后加入到250ul试剂盒的溶血缓冲液中，室温溶血10分钟；将得到的25ul溶血试样与112ul试剂r1a和48ul试剂r1b混合，于37℃温浴3分钟，读取吸光度a1。再向反应体系中加入70ul试剂2，于37℃温浴2分钟，读取吸光度a2。δa＝a2-a1。测定时可选择751nm和571nm处的吸光值。其中，hb浓度可由波长751nm处的吸光度求出，hba1c浓度可由波长571nm处的吸光度求出。
但是，上述的试剂盒由于糖化血红蛋白是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物,因此需要溶解红细胞以释放糖化血红蛋白，现有技术的方案多是采用的多少单独先设置一个溶血试剂进行溶血，然后再进行后续的其它检测步骤；但是这一溶血过程需要一定的时间,因此仍存在样本需要手工溶血，溶血时间长，样本量大，不适合poct检测等一些待改进地方；此外，现有的糖化血红蛋白酶法检测试剂盒在检测过程需要将红细胞沉降回收起到一个富集的效果，而且样本需求量比较大，试剂盒结构的不合理导致的这一耗时、繁琐的过程，不适合现有poct检测的快速、简便的检测需求。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种糖化血红蛋白在线溶血酶法检测试剂盒，该试剂盒创造性地采用三试剂组成结构，该结构的试剂盒具有无需手工溶血，溶血时间短，样本量小，适合poct检测的优点。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种糖化血红蛋白在线溶血酶法检测试剂盒，该试剂盒由试剂r1、试剂r2、试剂r3组成，其中：
试剂r1为：
10-1000mmol/l吗啉代丙烷磺酸(3-(n-吗啉)丙磺酸)，
10-1000mmol/ln-环乙基-2氨基乙烷磺酸，
1-200g/l聚氧乙烯十二烷基醚(十二烷基聚氧乙烯醚)，
100-10000ku/l金属蛋白酶(在试剂r1a中)，
0.1-10mmol/l2-(碘苯基)-3-(2，4-二硝基苯)-5-(2，4-二磺苯基)-2h四唑钠盐；
试剂r2为：0.1-10mmol/l吗啉代乙基磺酸，
0.5-50mmol/lcacl2；
试剂r3为：10-1000mmol/ltris-hcl，
1-150ku/l高活性果糖缬氨酸氧化酶，
30-600ku/l过氧化物酶，
0.01-0.5mmol/ln-(羧甲基氨羰基)-4，4双偶(二甲胺)-二苯胺钠盐。
作为进一步优选，本发明试剂盒的组成如下：
试剂r1为：10-900mmol/l吗啉代丙烷磺酸，
10-900mmol/ln-环乙基-2氨基乙烷磺酸，
1-150g/l聚氧乙烯十二烷基醚，
100-8000ku/l金属蛋白酶，
0.5-10mmol/l2-(碘苯基)-3-(2，4-二硝基苯)-5-(2，4-二磺苯基)-2h四唑钠盐；
试剂r2为：0.5-10mmol/l吗啉代乙基磺酸，
0.5-40mmol/lcacl2；
试剂r3为：10-1000mmol/ltris-hcl，
1-100ku/l高活性果糖缬氨酸氧化酶，
30-500ku/l过氧化物酶，
0.05-0.5mmol/ln-(羧甲基氨羰基)-4，4双偶(二甲胺)-二苯胺钠盐；
作为最优选，本发明试剂盒的组成如下：
试剂r1为：800mmol/l吗啉代丙烷磺酸，
800mmol/ln-环乙基-2氨基乙烷磺酸，
100g/l聚氧乙烯十二烷基醚，
800ku/l金属蛋白酶，
5mmol/l2-(碘苯基)-3-(2，4-二硝基苯)-5-(2，4-二磺苯基)-2h四唑钠盐；
试剂r2为：5mmol/l吗啉代乙基磺酸，
20mmol/lcacl2；
试剂r3为：800mmol/ltris-hcl，
80ku/l高活性果糖缬氨酸氧化酶，
250ku/l过氧化物酶，
0.5mmol/ln-(羧甲基氨羰基)-4，4双偶(二甲胺)-二苯胺钠盐。
本发明上述试剂盒的配制，就按照上述各组分的含量以水如去离子水等为溶剂进行溶解配比的，为行业常规配比方式。
本发明的优点和有益效果：
1.本发明糖化血红蛋白在线溶血酶法检测试剂盒，在原来糖化血红蛋白酶法检测试剂盒基础上进行改进，将原来试剂盒的四试剂变成了三试剂，去除前期样本手工溶血的过程，溶血时间由手工溶血10min改为仪器直接孵育5min，试剂盒配方调整后分析灵敏度更高、创造性的实现了样本量从原来的25-30ul减少到2ul的预料不到的技术效果，该样本量的减少符合糖化血红蛋白临床检测要求自动化、快速性、大批量、经济性特点的同时降低手工溶血带来的误差，有利于临床大规模应用，并适用于poct检测。
2.同时，本发明在研发过程中前期始终不能克服原来四试剂导致的反应时间长以及样本使用量多的不足，后来通过申请人创造性的劳动，发现在试剂r1中通过同时引入的具有溶血作用的聚氧乙烯十二烷基醚以及用来水解糖化蛋白质的金属蛋白酶的结构设置，达到了在样本溶血的同时金属蛋白酶快速水解样本中的糖化蛋白质、使其分解为较小的糖化肽片段和糖化氨基酸、实现了溶血的同时水解糖化蛋白质可以缩短反应时间，然后将果糖缬氨酸氧化酶作用于该糖化蛋白质的分解物进行氧化还原反应，产生的过氧化氢的量与参与反应的糖化蛋白的量成正比，通过测定因氧化而显色的显色基质的显色量来确定过氧化氢的量，从而间接的达到测定糖化蛋白质的目的。本发明在样本溶血前加装全血混匀时序，该全血混匀装置包括但不限于一种圆盘状的自动混匀装置，通过旋转该装置来达到自动混匀的目的。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明，但并不仅限于下述实施例。
本发明所述的高活性果糖缬氨酸氧化酶为zl200810166329.x中记载的核苷酸序列号为seqid.no.1、氨基酸序列号为seqid.no.2的高活性果糖缬氨酸氧化酶。
实施例1：
以蒸馏水为溶剂，按照常规配制试剂方法配制糖化血红蛋白在线溶血酶法检测试剂盒各配方，如表1所示。
表1糖化血红蛋白在线溶血酶法检测试剂盒各配方
实施例2：
从患者采集edta抗凝新鲜全血，放置于全血混匀装置混匀5min内即可混匀，然后取2ul混匀的全血样本与120ul试剂r1和50ul试剂r2混合，于37℃温浴3分钟，读取吸光度a1。再向反应体系中加入70ul试剂r3，于37℃温浴2分钟，读取吸光度a2。δa＝a2-a1。测定时可选择751nm和571nm处的吸光值。其中，hb浓度可由波长751nm处的吸光度求出，hba1c浓度可由波长571nm处的吸光度求出。本发明上述的操作过程通过本发明三试剂的试剂盒配方调整后分析灵敏度提高，不需要红细胞沉降回收，省略这一耗时、繁琐的步骤，从而达到一个快速、简便的检测效果。
以上实施例是对专利的说明和进一步解释，而不是对本发明的限制，在本发明的精神和权利保护范围内所做的任何修改，都落入本发明的保护范围。