一、技术领域
本发明属于天然产物分离纯化技术领域，具体涉及一种制备稳定化莱菔素的方法。
二、
背景技术：
莱菔素又称莱菔子素、萝卜籽素等，分子式为c6h9nos2，系统名为(e)4-异硫氰酸基-1-(甲基亚磺酰基)-1-丁烯，其在常温下为糖浆状黄色液体，易溶于水、甲醇、乙醇、氯仿、乙醚等溶剂。相关研究表明莱菔素在抗氧化、抗病毒、降血压、抗血小板凝聚、促消化、预防心血管疾病等方面具有强烈的生物学活性，并且对肝癌、乳腺癌、肺癌、食道癌、前胃癌有明显的阻断作用，是一种具有市场潜力和经济价值的天然活性物质。然而，由于温度、光照、溶剂等因素的影响，莱菔素在生产、运输及贮存中迅速出现降解，致使目前虽然公开了高纯度的莱菔素提取工艺，但却尚未出现稳定化的莱菔素，这就直接限制了其作为抗癌药物的进一步开发和利用。因此，研发一种制备稳定化莱菔素的方法从而延长莱菔素的保存时间，将对其作为一类新药的实际应用提供技术基础。
现有关于莱菔素稳定性的研究，如2016年公开的田桂芳撰写的博士论文《天然产物莱菔素的降解机理及稳定性研究》，该论文介绍了一种利用喷雾干燥的技术提高莱菔素稳定性的工艺，该工艺的过程是：先制备出麦芽糊精、羟丙基β环糊精、大豆分离蛋白、牛血清白蛋白、壳聚糖等膜材的水溶液，然后加入莱菔素，利用实验型喷雾干燥机将各水溶液转变为微囊粉末，以此提高莱菔素的稳定性。该方法的主要缺点是：①将莱菔素加入制备出的膜材水溶液中，而莱菔素在水溶液中极不稳定，在数分钟内即开始降解；②进行喷雾干燥时进风温度达到180℃，而莱菔素在此温度下降解速率更快；③相比于未进行微囊包埋的莱菔素，虽然制备出的微囊包埋莱菔素能够有效隔绝氧气，但由于莱菔素在①和②时已经明显降解，因此，该法难以制备出高纯度莱菔素产品。又如申请号为201510081274.2、名称为“提高莱菔素稳定性的方法”的发明专利，该专利介绍了将莱菔素添加于聚乙二醇或植物油中来提高莱菔素稳定性的方法。该方法的不足之处是：①未对聚乙二醇和植物油进行脱水处理，而莱菔素即使与微量的水接触也会发生降解，致使其稳定性降低；②未说明需将莱菔素避光保存，而莱菔素在光照下则会发生变化加速分解，同样导致其稳定性降低；③该专利得到的结果为：在360天，莱菔素-80℃至120℃时的降解速率显著降低至对照组的20.3％～35.8％。即通过该专利公布的保存方法，莱菔素仍然在发生降解，即使是在-80℃这样的极端温度下仍在降解，说明其尚不具有足够的稳定性，而莱菔素的降解产物会对人体产生多种毒副作用，因而，该法保存的莱菔素不能应用于医药或食品行业。
三、
技术实现要素：
本发明是针对现有莱菔素保存方法的不足，提供一种制备稳定化莱菔素的方法，本方法具有操作简单，条件温和，使用常规工业化设备，莱菔素稳定性高等特点。
本发明的原理是：微波真空低温干燥设备是微波能技术与真空技术相结合的一种新型微波能应用设备，它兼备了微波及真空干燥的一系列优点，适用于处理不能在高温条件下进行干燥的样品，有利于规避能使莱菔素发生降解的外界因素，故可用其对莱菔素进行干燥；研磨分散机是一种在高转速条件下将物料均匀分散混合的机械设备，可利用其进行莱菔素与无水辅料粉的分散混合，从而配制出莱菔素分散物；冷冻干燥是将含水物料先冷冻到冰点以下，使水转变为冰，然后在较高真空下将冰转变为蒸气而除去的干燥方法，莱菔素在水溶液中极不稳定，易发生降解，故可利用冷冻干燥技术对莱菔素分散物进行脱水干燥，以制备出含水量极低的莱菔素；莱菔素是含有一个碳碳双键的异硫氰酸基类化合物，具有极强的抗氧化活性，故在制备过程中需要对其进行脱氧充氮的处理，并且密封保存，以增强制备的莱菔素的稳定性；莱菔素是一种光敏物质，容易受到光线激活而发生光化学降解，故在制备及保存过程中需要避光，以增强制备的莱菔素的稳定性；莱菔素是一种温敏物质，温度的升高可以加速莱菔素的降解，故在制备及保存过程中温度不宜过高，以增强制备的莱菔素的稳定性。
本发明的目的是通过以下途径实现的：一种制备稳定化莱菔素的方法，以脱脂胭脂萝卜籽粉为原料，通过制备莱菔素，制备无水辅料粉，制备莱菔素分散物，制备稳定化莱菔素等步骤，制备出保质期长达12～14月不发生降解的稳定化莱菔素。其具体的工艺步骤如下：
(1)制备莱菔素
采用现有制备莱菔素的技术，按照专利号为201510270292.5介绍的方法，经过超滤及纳滤膜分离、萃取、制备色谱及高压低温浓缩等步骤制备纯度高于99％的莱菔素，用于第(3)步制备莱菔素分散物。
(2)制备无水辅料粉
将市售的食品或医药级粉末状果糖、葡萄糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇等置于微波低温真空干燥箱中，在真空度为0.06～0.09mpa，温度为40～45℃的条件下进行干燥1～3小时，即制备出无水粉末状果糖、葡萄糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇，亦称无水辅料粉，用于下步制备莱菔素分散物。
(3)制备莱菔素分散物
前两步完成后，按照第(1)步制备的莱菔素体积与第(2)步制备的无水辅料粉质量之比(l/kg)为1∶5～10的比例，先将第(2)步制备的无水辅料粉投入研磨分散机中，研磨5～10分钟后再将第(1)步制备的莱菔素投入，在转速为6000～9000rpm的条件下研磨15～30分钟，即制备出莱菔素分散物，用于下步制备稳定化莱菔素。
(4)制备稳定化莱菔素
第(3)步完成后，将第(3)步制备出的莱菔素分散物分装于容积为10～20ml的棕色玻璃瓶中，放置好冻干瓶塞，再置于低温冰箱中，在-40～-20℃下预冷5～10h后放入带压盖装置的真空冷冻干燥机中，在温度为-50～-40℃、真空度为20～50pa下冷冻干燥24～48h，然后向冷冻干燥机中通入氮气，继续处理15～30分钟，最后压盖密封，即制备出稳定化莱菔素。将其置于温度为-20～4℃的条件下避光保存12～14月，莱菔素纯度仍保持在99％以上。
本发明采用上述技术方案后，主要有以下效果：
1、本发明方法以脱脂萝卜籽粉为原料，首先制备出纯度高于99％的莱菔素，再通过微波低温真空干燥、研磨分散、冷冻干燥、脱氧充氮等操作，制备出保质期可长达12～14月而不发生降解的稳定化莱菔素，产品质量符合市场要求，所用生产设备均为工业化设备，生产条件易实施，操作方便，适合规模化生产。
2、本发明方法采用微波低温真空干燥技术对固体辅料进行脱水干燥，又采用了冷冻干燥技术对莱菔素进行脱水脱氧充氮处理，最大限度地脱除了产品中可能残存的水分和氧气，显著增强了莱菔素的稳定性。
3、本发明方法还综合考虑了光照、温度、有氧环境等外界条件对莱菔素的影响，并采取了避光、低温、负压和脱氧充氮的措施，尽可能地消除能使莱菔素发生降解的不利因素，从而显著增强了莱菔素的稳定性。
4、本发明提供的制剂方法包含添加果糖、葡萄糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇等的固体制剂，丰富了莱菔素的保存方法，也使得制备出的稳定化莱菔素可广泛应用于药物研究与开发及食品保健品等领域中。
5、本发明生产过程中无“三废”产生，是典型的绿色生产工艺，便于推广应用。
四、具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步说明本发明。
实施例1
一种制备稳定化莱菔素的方法，其具体工艺步骤如下：
(1)制备莱菔素
采用现有制备莱菔素的技术，按照专利号为201510270292.5介绍的方法，经过超滤及纳滤膜分离、萃取、制备色谱及高压低温浓缩等步骤制备纯度高于99％的莱菔素，用于第(3)步制备莱菔素分散物。
(2)制备无水辅料粉
将市售的食品或医药级粉末状果糖、葡萄糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇等置于微波低温真空干燥箱中，在真空度为0.06mpa，温度为40℃的条件下进行干燥1小时，即制备出无水粉末状果糖、葡萄糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇，亦称无水辅料粉，用于下步制备莱菔素分散物。
(3)制备莱菔素分散物
前两步完成后，按照第(1)步制备的莱菔素体积与第(2)步制备的无水辅料粉质量之比(l/kg)为1∶5的比例，先将第(2)步制备的无水辅料粉投入研磨分散机中，研磨5分钟后再将第(1)步制备的莱菔素投入，在转速为6000rpm的条件下研磨15分钟，即制备出莱菔素分散物，用于下步制备稳定化莱菔素。
(4)制备稳定化莱菔素
第(3)步完成后，将第(3)步制备出的莱菔素分散物分装于容积为10ml的棕色玻璃瓶中，放置好冻干瓶塞，再置于低温冰箱中，在-40℃下预冷5h后放入带压盖装置的真空冷冻干燥机中，在温度为-50℃、真空度为20pa下冷冻干燥24h，然后向冷冻干燥机中通入氮气，继续处理15分钟，最后压盖密封，即制备出稳定化莱菔素。将其置于温度为-20℃的条件下避光保存12月，莱菔素纯度仍保持在99％以上。
实施例2
一种制备稳定化莱菔素的方法，其具体工艺步骤如下：
(1)制备莱菔素
采用现有制备莱菔素的技术，按照专利号为201510270292.5介绍的方法，经过超滤及纳滤膜分离、萃取、制备色谱及高压低温浓缩等步骤制备纯度高于99％的莱菔素，用于第(3)步制备莱菔素分散物。
(2)制备无水辅料粉
将市售的食品或医药级粉末状果糖、葡萄糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇等置于微波低温真空干燥箱中，在真空度为0.075mpa，温度为42℃的条件下进行干燥2小时，即制备出无水粉末状果糖、葡萄糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇，亦称无水辅料粉，用于下步制备莱菔素分散物。
(3)制备莱菔素分散物
前两步完成后，按照第(1)步制备的莱菔素体积与第(2)步制备的无水辅料粉质量之比(l/kg)为1∶7的比例，先将第(2)步制备的无水辅料粉投入研磨分散机中，研磨7分钟后再将第(1)步制备的莱菔素投入，在转速为7500rpm的条件下研磨25分钟，即制备出莱菔素分散物，用于下步制备稳定化莱菔素。
(4)制备稳定化莱菔素
第(3)步完成后，将第(3)步制备出的莱菔素分散物分装于容积为10ml的棕色玻璃瓶中，放置好冻干瓶塞，再置于低温冰箱中，在-30℃下预冷7h后放入带压盖装置的真空冷冻干燥机中，在温度为-45℃、真空度为35pa下冷冻干燥36h，然后向冷冻干燥机中通入氮气，继续处理25分钟，最后压盖密封，即制备出稳定化莱菔素。将其置于温度为4℃的条件下避光保存13月，莱菔素纯度仍保持在99％以上。
实施例3
一种制备稳定化莱菔素的方法，其具体工艺步骤如下：
(1)制备莱菔素
采用现有制备莱菔素的技术，按照专利号为201510270292.5介绍的方法，经过超滤及纳滤膜分离、萃取、制备色谱及高压低温浓缩等步骤制备纯度高于99％的莱菔素，用于第(3)步制备莱菔素分散物。
(2)制备无水辅料粉
将市售的食品或医药级粉末状果糖、葡萄糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇等置于微波低温真空干燥箱中，在真空度为0.09mpa，温度为45℃的条件下进行干燥3小时，即制备出无水粉末状果糖、葡萄糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇，亦称无水辅料粉，用于下步制备莱菔素分散物。
(3)制备莱菔素分散物
前两步完成后，按照第(1)步制备的莱菔素体积与第(2)步制备的无水辅料粉质量之比(l/kg)为1∶10的比例，先将第(2)步制备的无水辅料粉投入研磨分散机中，研磨10分钟后再将第(1)步制备的莱菔素投入，在转速为9000rpm的条件下研磨30分钟，即制备出莱菔素分散物，用于下步制备稳定化莱菔素。
(4)制备稳定化莱菔素
第(3)步完成后，将第(3)步制备出的莱菔素分散物分装于容积为20ml的棕色玻璃瓶中，放置好冻干瓶塞，再置于低温冰箱中，在-20℃下预冷10h后放入带压盖装置的真空冷冻干燥机中，在温度为-40℃、真空度为50pa下冷冻干燥48h，然后向冷冻干燥机中通入氮气，继续处理30分钟，最后压盖密封，即制备出稳定化莱菔素。将其置于温度为4℃的条件下避光保存14月，莱菔素纯度仍保持在99％以上。