本发明属于改良培养基领域，具体涉及一种适合于印度梨形孢真菌生长的改良溶磷培养基。
背景技术：
印度梨形孢作为一种新近发现的植物内生真菌，能够在水稻、小麦、大麦、拟南芥等100多种植物根系共生，已经明确的生物功能包括促进植物生长，提高植物抗逆性(抗旱、抗盐、抗病)，能促进植物对养分的吸收利用。
目前，国内外对微生物溶解难溶磷酸盐的研究采用的主要是pvk(pikovskaya)和nbrip(nationalbotanicalresearchinstitute'sphosphategrowthmedium)两种通用培养基；但由于微生物的千差万别，上述两种培养基只是能够证明某一微生物可以溶解某些难溶磷酸盐，且nbrip也主要是用于溶磷微生物的快速筛选，通用的pvk培养基很难将微生物溶磷功效发挥到最大。目前关于印度梨形孢真菌溶解难溶磷的报道极少，也无关于印度梨形孢溶磷培养基的优化的先例，这成为印度梨形孢溶磷研究和应用一大障碍。因pvk、nbrip不能全面评价印度梨形孢对磷酸盐的溶磷效果，因此，我们开发一种溶磷培养基来全面、综合评价印度梨形孢溶磷效果，为印度梨形孢制备微生物菌肥奠定基础。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明要解决的技术问题是改良一种微生物溶磷研究通用的pvk培养基，使之能够更全面评价印度梨形孢的溶磷功效，为其后续溶解难溶磷酸盐特性研究及微生物菌肥制作奠定基础。
为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究和不懈探索，最终获得了如下技术方案：
本发明对印度梨形孢在pvk培养中的所需碳源、所需氮源及培养ph值三个对其生长影响较大的因素进行优化，从而得到适宜印度梨形孢生长的pvk培养基，从而增强其溶磷效果。
一种适合于印度梨形孢生长的改良溶磷培养基，组分包括：可溶性淀粉15.0g、ca(no3)20.5g、nacl0.2g、mgso4·7h2o0.1g、kcl0.1g、酵母提取物0.5g、mnso4·h2o0.002g、feso4·7h2o0.002g、琼脂粉18.0g(液体培养基不加琼脂粉)，蒸馏水溶解定容至1l，并用1nnaoh调节ph至8.0。
优选地，如上所述的一种适合于印度梨形孢真菌生长的改良溶磷培养基，其难溶磷酸盐和培养基其余组分需分开单独灭菌，然后再将难溶磷酸盐加入到已灭菌的培养基剩余组分中。
本发明优点
与现有技术相比，本发明的优点为：相比原始pvk培养基该培养基更适宜印度梨形孢生长，更能反应印度梨形孢溶解难溶性磷酸盐的效果。
说明书附图
图1为pvk培养基改良前后溶解磷酸铁对比图。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
实施例1碳源、氮源筛选
供筛选的碳源为：葡萄糖、果糖、蔗糖、可溶性淀粉。
供筛选的氮源为：(nh4)2so4、kno3、nh4no3、牛肉膏、ca(no3)2。
按以下配方配置培养基(g/l)：碳源10.0g、氮源0.5g、酵母提取物0.5g、kc10.2g、mgso4·7h2o0.1g、feso4·7h2o0.002g、mnso4·4h2o0.002g、琼脂粉18.0g，ph7.2，121℃，20min灭菌。将印度梨形孢菌饼接种于不同碳源、氮源的培养基中央，于生化培养箱28℃，黑暗倒置培养，培养7天后测定菌落直径，以菌落直径大小选择较优的碳源和氮源。
供选碳源中可溶性淀粉的菌落生长最好，平均直径达27.3mm，供选的硝酸钙的菌落生长最好，平均直径为53.0mm。所以筛选出可溶性淀粉为适宜碳源，硝酸钙为适宜氮源。
实施例2适宜碳、氮量及ph值的确定
利用l9(34)正交组合(见表1)进行适宜碳、氮量及ph值的确定试验。
表1正交试验因素水平表
表2l9(34)正交试验结果表
通过印度梨形孢在培养基上的生长情况(菌落直径)，进行筛选适宜的碳、氮量及ph值，其结果见表2、表3，可以确定本试验对印度梨形孢选出的理论较优培养基配方组合为a2b2c3，即可溶性淀粉10.0g、硝酸钙0.5g、ph8.0。
表3正交结果方差分析
实施例3pvk培养基改良前后溶解磷酸铁对比
为检验改良培养基的溶磷效果，选择了原始培养基基本不能溶解的磷酸铁作为供试难溶磷源，具体方法为：1、培养基配置：①改良溶磷培养基配置按如下比例：可溶性淀粉15.0g、ca(no3)20.5g、nacl0.2g、mgso4·7h2o0.1g、kcl0.1g、yeastextract0.5g、mnso4·h2o0.002g、feso4·7h2o0.002g加入蒸馏水溶解并定容至1l，用1nnaoh调节ph至8.0，分装至250ml三角瓶，每瓶50ml，121℃高温高压灭菌20min；②常规pvk培养基配置按如下比例：葡萄糖10.0g、(nh4)2so40.5g、nacl0.2g、mgso4·7h2o0.1g、kcl0.1g、yeastextract0.5g、mnso4·h2o0.002g、feso4·7h2o0.002g加入蒸馏水溶解并定容至1l，用1nnaoh调节ph至7.0，分装至250ml三角瓶，每瓶50ml，121℃高温高压灭菌20min。
2、接种培养：培养基冷却至室温后分别加入0.25g/l(1l培养基中加入0.25g)已灭菌的磷酸三钙、磷酸铝、磷酸铁及50μl106cfu/ml浓度的印度梨形孢孢子液，于150rpm，28℃条件下培养一周取样(1ml)测定水溶性磷含量。
在接种印度梨形孢培养一周后分别取样测定了改良培养基和培养基中的水溶性含量，其中加入磷酸三钙、磷酸铝和磷酸铁的改良培养基中水溶性磷含量分别为194.66mg/l、157.29mg/l、54.17mg/l，较原始培养基水溶性磷含量分别提高了0.2倍、0.4倍和3倍，效果明显，具体结果见图1。