本发明属于生物技术应用领域，具体地，涉及一种mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法。
背景技术：
乳腺癌是女性最常见的癌症，主要包括导管癌和小叶癌。2016年美国ca（acancerjournalforclinicians）公布的最新统计数据显示，美国2016年预计将有420840例女性患乳腺癌，占女性新发恶性肿瘤的38%，居女性恶性肿瘤发病率第一位，并且死亡人数将达52930例。更为严重的是全球的乳腺癌发病率正在逐年增长。
细胞培养是生物与健康相关研究领域的一项重要技术。随着生命科学的迅速发展，目前细胞培养已成为细胞生物学、分子生物学、遗传学和免疫学等学科研究的重要基础。为了深入探讨细胞的生长活动规律、有关疾病的病理和药物的药理（毒理）机制，开发具有不同针对性的细胞培养方法具有重要意义。其中，mda-mb-231乳腺癌细胞作为人源性高转移乳腺癌细胞，常用于乳腺癌的体内外研究。
技术实现要素：
发明目的：本发明提供了一种mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，用于多种人源以及非人源细胞的培养。
技术方案：本发明提供了一种mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，包括以下步骤：用移液枪将mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基吸尽，加入3-5mlpbs洗涤细胞2-3次，向细胞培养皿中加入1-2ml0.38%的胰蛋白酶，于37℃条件下消化3-5min，加入2-3ml的新鲜的mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基，使用移液枪吹打细胞培养皿底40-50次；将液体移至细胞离心管中，在1000-1500g/min条件下离心3-10min，用移液枪去除上清液，加入2-3ml新鲜的mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基，使用移液枪上下吹打细胞40-50次；平均加入到3-8个细胞培养皿中，进行扩大培养。本发明所述的mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，方法合理，易于实现，细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，镜下观察透亮、分裂相更多、形态及分散度佳，可以方便应用于乳腺癌的体内外研究。
进一步的，上述的mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，所述胰蛋白酶中还包含0.01%的edta。可以与胰蛋白酶相配合，迅速使贴壁细胞脱离培养皿，减少胰蛋白酶对细胞的损伤。
进一步的，上述的mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，所述mda-mb-231乳腺癌细胞专用包括70-90%的基础培养基以及10-30%的胎牛血清。胎牛血清可以进一步为培养的细胞提供营养物质，同时还能终止胰蛋白酶的消化作用。
进一步的，上述的mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖80-90份、碳酸氢钠10-20份、丙酮酸钠8-18份、脂肪酸白蛋白4-16份、氯化钾30-50份、无水硫酸镁5-12份、氯化钠60-80份、无水磷酸二氢钠8-16份、叶酸0.2-0.6份、肌醇0.5-1.5份、烟酰胺0.2-0.8份、无水氯化钙20-40份、硝酸铁0.1-0.5份、丁二酸5-10份、丁二酸钠9-18份、d-泛酸钙0.2-0.8份、n-异丙基甲基丙烯酰胺0.2-0.8份、酒石酸胆碱0.5-1份、核黄素0.1-0.3份、盐酸硫胺0.1-0.5份、盐酸吡哆辛0.1-0.6份、l-丙酰胺-l-谷氨二肽0.2-1份、乙酸酯1-3份、生物素0.5-0.8份、硫辛酸0.2-0.8份、酚红钠0.8-1.5份和去离子水100份。
进一步的，上述的mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，所述基础培养基还包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：l-盐酸精氨酸5-10份、l-盐酸胱氨酸3-8份、l-丝氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、l-盐酸组氨酸4-6份、l-异亮氨酸8-20份、l-亮氨酸7-18份、l-盐酸赖氨酸10-20份、l-甲硫氨酸1-6份、l-苯丙氨酸2-8份、l-苏氨酸5-15份、l-色氨酸1-3份、l-酪氨酸5-9份和l-缬氨酸8-12份。
进一步的，上述的mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，所述基础培养基还包括2-5份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子3-8份、白介素62-5份、白介素101-4份、白介素123-6份、tnf-β2-10份、gm-csf1-5份。基础培养基组分合理，营养丰富，可以为细胞培养提供更多的营养物。
进一步的，上述的mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。所述链霉素选自10000μg/ml。可以有效防止培养细胞被污染。
进一步的，上述的mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，所述青霉素选自10000u/ml，青霉素和链霉素活性好，效果佳。
进一步的，上述的mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，所述细胞培养皿为10cm细胞培养皿。
有益效果：本发明所述的mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，方法合理，易于实现，细胞生长速度快，细胞状态好，其中，mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基可以为细胞培养提供更多的营养物（包括生长因子等），细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，镜下观察透亮、分裂相更多、形态及分散度更佳，可以有利于生物与健康相关研究。
具体实施方式
下面将通过几个具体实施例，进一步阐明本发明，这些实施例只是为了说明问题，并不是一种限制。
实施例1
一种mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，包括以下步骤：用移液枪将mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基吸尽，加入3mlpbs洗涤细胞2次，向10cm细胞培养皿中加入1ml0.38%的胰蛋白酶，于37℃条件下消化5min，加入2ml的新鲜的mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基，使用移液枪吹打细胞培养皿底40次；将液体移至细胞离心管中，在1000g/min条件下离心10min，用移液枪去除上清液，加入2ml新鲜的mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基，使用移液枪上下吹打细胞40次；平均加入到3个细胞培养皿中，进行扩大培养。
其中，所述mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基包括70%的基础培养基以及30%的胎牛血清。所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖80份、碳酸氢钠10份、丙酮酸钠8份、脂肪酸白蛋白4份、氯化钾30份、无水硫酸镁5份、氯化钠60份、无水磷酸二氢钠8份、叶酸0.2份、肌醇0.5份、烟酰胺0.2份、无水氯化钙20份、硝酸铁0.1份、丁二酸5份、丁二酸钠9份、d-泛酸钙0.2份、n-异丙基甲基丙烯酰胺0.2份、酒石酸胆碱0.5份、核黄素0.1份、盐酸硫胺0.1份、盐酸吡哆辛0.1份、l-丙酰胺-l-谷氨二肽0.2份、乙酸酯1份、生物素0.5份、硫辛酸0.2份、酚红钠0.8份和去离子水100份。
另，所述基础培养基还包括3份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：l-盐酸精氨酸5份、l-盐酸胱氨酸3份、l-丝氨酸3份、甘氨酸1份、l-盐酸组氨酸4份、l-异亮氨酸8份、l-亮氨酸7份、l-盐酸赖氨酸10份、l-甲硫氨酸1份、l-苯丙氨酸2份、l-苏氨酸5份、l-色氨酸1份、l-酪氨酸5份和l-缬氨酸8份。
再，所述基础培养基还包括2份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子3份、白介素62份、白介素101份、白介素123份、tnf-β2份、gm-csf1份。
进一步的，所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且，所述青霉素选自10000u/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。此外，所述胰蛋白酶中还包含0.01%的edta。
实施例2
一种mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，包括以下步骤：用移液枪将mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基吸尽，加入5mlpbs洗涤细胞3次，向10cm细胞培养皿中加入2ml0.38%的胰蛋白酶，于37℃条件下消化3min，加入3ml的新鲜的mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基，使用移液枪吹打细胞培养皿底50次；将液体移至细胞离心管中，在1500g/min条件下离心3min，用移液枪去除上清液，加入3ml新鲜的mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基，使用移液枪上下吹打细胞50次；平均加入到8个细胞培养皿中，进行扩大培养。
其中，所述mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基包括90%的基础培养基以及10%的胎牛血清。所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖90份、碳酸氢钠20份、丙酮酸钠18份、脂肪酸白蛋白16份、氯化钾50份、无水硫酸镁12份、氯化钠80份、无水磷酸二氢钠16份、叶酸0.6份、肌醇1.5份、烟酰胺0.8份、无水氯化钙40份、硝酸铁0.5份、丁二酸10份、丁二酸钠18份、d-泛酸钙0.8份、n-异丙基甲基丙烯酰胺0.8份、酒石酸胆碱1份、核黄素0.3份、盐酸硫胺0.5份、盐酸吡哆辛0.6份、l-丙酰胺-l-谷氨二肽1份、乙酸酯3份、生物素0.8份、硫辛酸0.8份、酚红钠1.5份和去离子水100份。
另，所述基础培养基还包括8份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：l-盐酸精氨酸10份、l-盐酸胱氨酸8份、l-丝氨酸6份、甘氨酸5份、l-盐酸组氨酸6份、l-异亮氨酸20份、l-亮氨酸18份、l-盐酸赖氨酸20份、l-甲硫氨酸6份、l-苯丙氨酸8份、l-苏氨酸15份、l-色氨酸3份、l-酪氨酸9份和l-缬氨酸12份。
再，所述基础培养基还包括5份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子8份、白介素65份、白介素104份、白介素126份、tnf-β10份、gm-csf5份。
进一步的，所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且，所述青霉素选自10000u/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。此外，所述胰蛋白酶中还包含0.01%的edta。
实施例3
一种mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，包括以下步骤：用移液枪将mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基吸尽，加入4mlpbs洗涤细胞2次，向10cm细胞培养皿中加入2ml0.38%的胰蛋白酶，于37℃条件下消化4min，加入2ml的新鲜的mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基，使用移液枪吹打细胞培养皿底48次；将液体移至细胞离心管中，在1200g/min条件下离心5min，用移液枪去除上清液，加入3ml新鲜的mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基，使用移液枪上下吹打细胞45次；平均加入到6个细胞培养皿中，进行扩大培养。
其中，所述mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基包括80%的基础培养基以及20%的胎牛血清。所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖86份、碳酸氢钠18份、丙酮酸钠12份、脂肪酸白蛋白9份、氯化钾40份、无水硫酸镁8份、氯化钠75份、无水磷酸二氢钠12份、叶酸0.4份、肌醇1份、烟酰胺0.5份、无水氯化钙30份、硝酸铁0.3份、丁二酸7份、丁二酸钠14份、d-泛酸钙0.5份、n-异丙基甲基丙烯酰胺0.5份、酒石酸胆碱0.7份、核黄素0.2份、盐酸硫胺0.3份、盐酸吡哆辛0.4份、l-丙酰胺-l-谷氨二肽0.6份、乙酸酯1.8份、生物素0.7份、硫辛酸0.6份、酚红钠1.2份和去离子水100份。
另，所述基础培养基还包括5份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：l-盐酸精氨酸8份、l-盐酸胱氨酸6份、l-丝氨酸5份、甘氨酸3份、l-盐酸组氨酸5份、l-异亮氨酸12份、l-亮氨酸10份、l-盐酸赖氨酸15份、l-甲硫氨酸3份、l-苯丙氨酸4份、l-苏氨酸9份、l-色氨酸2份、l-酪氨酸6份和l-缬氨酸9份。
再，所述基础培养基还包括4份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子5份、白介素63份、白介素102份、白介素125份、tnf-β8份、gm-csf2份。
进一步的，所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且，所述青霉素选自10000u/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。此外，所述胰蛋白酶中还包含0.01%的edta。
实施例4
一种mda-mb-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，包括以下步骤：用移液枪将mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基吸尽，加入5mlpbs洗涤细胞2次，向10cm细胞培养皿中加入2ml0.38%的胰蛋白酶，于37℃条件下消化5min，加入2-3ml的新鲜的mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基，使用移液枪吹打细胞培养皿底50次；将液体移至细胞离心管中，在1500g/min条件下离心5min，用移液枪去除上清液，加入2ml新鲜的mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基，使用移液枪上下吹打细胞50次；平均加入到6个细胞培养皿中，进行扩大培养。
其中，所述mda-mb-231乳腺癌细胞专用培养基包括70的基础培养基以及30%的胎牛血清。所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖82份、碳酸氢钠25份、丙酮酸钠10份、脂肪酸白蛋白8份、氯化钾38份、无水硫酸镁8份、氯化钠70份、无水磷酸二氢钠10份、叶酸0.5份、肌醇1.2份、烟酰胺0.5份、无水氯化钙30份、硝酸铁0.4份、丁二酸6份、丁二酸钠12份、d-泛酸钙0.6份、n-异丙基甲基丙烯酰胺0.5份、酒石酸胆碱0.7份、核黄素0.2份、盐酸硫胺0.4份、盐酸吡哆辛0.3份、l-丙酰胺-l-谷氨二肽0.8份、乙酸酯1.8份、生物素0.6份、硫辛酸0.7份、酚红钠1份和去离子水100份。
另，所述基础培养基还包括6份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：l-盐酸精氨酸5份、l-盐酸胱氨酸8份、l-丝氨酸6份、甘氨酸1份、l-盐酸组氨酸4份、l-异亮氨酸12份、l-亮氨酸12份、l-盐酸赖氨酸20份、l-甲硫氨酸1份、l-苯丙氨酸2份、l-苏氨酸5份、l-色氨酸2份、l-酪氨酸6份和l-缬氨酸10份。
再，所述基础培养基还包括2份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子3份、白介素65份、白介素104份、白介素123份、tnf-β5份、gm-csf3份。
进一步的，所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且，所述青霉素选自10000u/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。此外，所述胰蛋白酶中还包含0.01%的edta。
以上所述仅是发明的几个实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。