本发明涉及一种新的达肝素钠的制备工艺。
背景技术：
达肝素钠是一种低分子肝素钠盐，主要用于治疗急性深静脉血栓。预防急性肾功能衰竭或慢性肾功能不全者进行血液透析和血液过滤期间体外循环系统中发生凝血。治疗不稳定型冠状动脉疾病，如：不稳定型心绞痛和非q波型心肌梗死。预防与手术有关的血栓形成。
与普通低分子肝素钠相比，达肝素钠具有如下明显优势：更低的重均分子量(5600-6400)，更大的axa/aiia值(1.9-3.2)，更长的半衰期(2.8-4.1h)，这些特点使达肝素钠较普通低分子肝素钠更为安全、有效。
目前，已有7篇专利报道的达肝素钠制备工艺，其中有5篇已经授权。
专利cn101942038a在肝素钠溶液中加入含有甲基的溶剂，在特定稳定和酸性条件下，与亚硝酸钠反应，硼氢化钠还原，乙醇沉淀，紫外灭菌器照射，乙醇沉淀，过氧化氢氧化，乙醇沉淀，乙醇脱水，真空干燥得到达肝素钠，在产品纯化上采用乙醇分级沉淀。缺点是在制备过程中，加入了含有甲基的有机溶剂，导致在最终达肝素钠成品质量标准中需要加入有机残留溶剂检测，增加了检测工作量和降低了产品的质量。
专利cn102558393a采用的工艺是将肝素钠溶于纯化水中，盐酸调节ph值，亚硝酸钠降解，硼氢化钠还原，乙醇沉淀，双氧水氧化脱色，再用超滤膜超滤，冻干得到达肝素钠，在产品纯化上采用超滤膜超滤。缺点是使用了昂贵的分子量截流过滤膜，大量的使用截流过滤膜，增加了生产成本。
专利cn104045743a采用的工艺是肝素钠溶于纯化水中，用盐酸或者醋酸调节ph值，亚硝酸钠降解，硼氢化钠还原，乙醇沉淀，超滤膜超滤，除菌，冻干得到达肝素钠。缺点是本工艺没有加入双氧水氧化除杂脱色，降低了最终产品达肝素钠的质量，并且采用超滤膜超滤进行纯化，增加了生产成本。
专利cn104045744a采用的工艺是肝素钠溶于纯化水中，用醋酸调节ph值，亚硝酸钠降解，硼氢化钠还原，阴离子交换树脂进行层析，洗脱液用乙醇沉淀，除菌，冻干得到达肝素钠。缺点是本工艺加入硼氢化钠后，搅拌时间过长，延长了整体工艺的时间，并且没有加入双氧水氧化除杂脱色，降低了最终产品达肝素钠的质量。
专利cn104098716a采用的工艺是以肝素钠粗品为原料，通过降解、还原、乙醇沉淀得到低分子肝素钠粗品，再通过氧化、除菌过滤、沉淀脱水得到达肝素钠。缺点是本工艺以肝素钠粗品为原料，延长了生产时间，从氧化、除菌过滤、沉淀脱水实现了“一锅煮”的工艺，不易于中间体的控制。
专利cn105884934a采用的工艺是肝素钠溶于纯化水中，用盐酸调节ph值9.5～10.5，亚硝酸钠降解，硼氢化钠还原，乙醇沉淀，双氧水氧化脱色，超滤膜超滤，除菌，冻干得到达肝素钠。缺点是本工艺在降解时，用盐酸调ph9.5～10.5，再加入亚硝酸钠，这个操作是所有专利没有提到过的，并且采用超滤膜超滤进行纯化，增加了生产成本。
专利cn105440160a采用的工艺是肝素钠溶于纯化水中，用醋酸调节ph值至酸性，亚硝酸钠降解，焦亚硫酸钠还原，加入酶进行酶解，乙醇沉淀，超滤膜超滤，乙醇沉淀，脱水干燥得到达肝素钠。缺点是本工艺采用酶解操作复杂，酶降解产品末端有不饱和基团，稳定性差，成本高。
技术实现要素：
本发明提出了一种新的达肝素钠的制备工艺，得到重均分子量符合药典标准，高纯度、高收率、高活性且质量稳定可控的达肝素钠产品。
本发明针对专利cn104045744a的工艺准要进行了两点的更改：
1、专利cn104045744a加入硼氢化钠在50℃～60℃反应24～48小时，反应时间太长，浪费能源，本发明增加硼氢化钠的加入量，反应1～3小时，大大的缩短反应时间，并且最终产品检测硼含量符合要求。
2、专利cn104045744a没有加入双氧水氧化脱色，并且没有给出加入双氧水的任何技术启示，本发明通过加入过氧化氢氧化除杂脱色，可以得到的高纯度、高收率、高活性且质量稳定可控的达肝素钠产品，产品质量高于现行的ep药典标准，本工艺操作简便，易于工业化大生产。
确定双氧水加入量为肝素钠的20％～40％,双氧水浓度为30％。
本发明的制备工艺通过肝素钠经过亚硝酸钠降解、硼氢化钠还原、过氧化氢氧化脱色、阴离子交换树脂的纯化，得到重均分子量符合药典标准，高纯度、高收率、高活性且质量稳定可控的达肝素钠产品，本方法有效除去有色杂质，使达肝素钠产品颜色更白。此外，本制备工艺操作简便，易于工业化大生产，具有重要的应用前景。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种达肝素钠制备工艺：①称取4kg肝素钠，加入18倍纯化水中，在常温下搅拌0.5小时后溶解。②用醋酸调节ph2.0，加入92g亚硝酸钠，25℃搅拌反应4小时。③用氢氧化钠调节上述的降解液至ph8.0，加入240g硼氢化钠，45℃搅拌反应2小时，然后降至室温，用醋酸调节ph3.5，搅拌反应10分钟，再用氢氧化钠调节至ph6.8，加入1.6kg氯化钠，搅拌溶解，得到还原液；④在上述还原液中加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到还原沉淀物；⑤在上述还原沉淀物中加入16倍纯化水，再加入1.6kg氯化钠，搅拌溶解，用氢氧化钠调节ph9.8，室温下加入30％1000ml双氧水，搅拌反应2小时，再用盐酸调节ph7.2，得到氧化液；⑥在上述氧化液中加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到还原沉淀物；⑦采用阴离子交换树脂，按40～60mg低分子肝素钠上样，温度为室温，紫外检测波长为uv254nm，上样结束后，先用纯化水洗涤，直至洗涤液为中性，再用2.5％氯化钠溶液洗涤，洗涤的终点为254nm紫外吸收降至基线平稳，再用2.3mol/l的氯化钠溶液洗脱，洗脱的终点为254nm紫外吸收降至基线平稳，收集洗脱液。⑧用盐酸将洗脱液调节ph6.8，加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到沉淀，在沉淀中加入一定量纯化水溶解，得到溶解液。⑨将溶解液放入冻干机冻干，得到最终产品2.08kg。
实施例2
一种达肝素钠制备工艺：①称取4kg肝素钠，加入18倍纯化水中，在常温下搅拌0.5小时后溶解。②用醋酸调节ph2.6，加入110g亚硝酸钠，25℃搅拌反应4小时。③用氢氧化钠调节上述的降解液至ph7.1，加入200g硼氢化钠，50℃搅拌反应2小时，然后降至室温，用醋酸调节ph3.2，搅拌反应20分钟，再用氢氧化钠调节至ph6.0，加入1.6kg氯化钠，搅拌溶解，得到还原液；④在上述还原液中加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到还原沉淀物；⑤在上述还原沉淀物中加入16倍纯化水，再加入1.6kg氯化钠，搅拌溶解，用氢氧化钠调节ph10.1，室温下加入800ml双氧水，搅拌反应2小时，再用盐酸调节ph6.9，得到氧化液；⑥在上述氧化液中加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到还原沉淀物；⑦采用阴离子交换树脂，按40～60mg低分子肝素钠上样，温度为室温，紫外检测波长为uv254nm，上样结束后，先用纯化水洗涤，直至洗涤液为中性，再用2.6％氯化钠溶液洗涤，洗涤的终点为254nm紫外吸收降至基线平稳，再用2.5mol/l的氯化钠溶液洗脱，洗脱的终点为254nm紫外吸收降至基线平稳，收集洗脱液。⑧用盐酸将洗脱液调节ph6.7，加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到沉淀，在沉淀中加入一定量纯化水溶解，得到溶解液。⑨将溶解液放入冻干机冻干，得到最终产品2.01kg。
实施例3
一种达肝素钠制备工艺：①称取4kg肝素钠，加入20倍纯化水中，在常温下搅拌0.5小时后溶解。②用醋酸调节ph2.9，加入140g亚硝酸钠，20℃搅拌反应4小时。③用氢氧化钠调节上述的降解液至ph7.2，加入320g硼氢化钠，55℃搅拌反应3小时，然后降至室温，用醋酸调节ph3.5，搅拌反应20分钟，再用氢氧化钠调节至ph7..2，加入1.6kg氯化钠，搅拌溶解，得到还原液；④在上述还原液中加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到还原沉淀物；⑤在上述还原沉淀物中加入16倍纯化水，再加入1.6kg氯化钠，搅拌溶解，用氢氧化钠调节ph9.9，室温下加入1200ml双氧水，搅拌反应2小时，再用盐酸调节ph6.6，得到氧化液；⑥在上述氧化液中加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到还原沉淀物；⑦采用阴离子交换树脂，按40～60mg低分子肝素钠上样，温度为室温，紫外检测波长为uv254nm，上样结束后，先用纯化水洗涤，直至洗涤液为中性，再用2.7％氯化钠溶液洗涤，洗涤的终点为254nm紫外吸收降至基线平稳，再用2.6mol/l的氯化钠溶液洗脱，洗脱的终点为254nm紫外吸收降至基线平稳，收集洗脱液。⑧用盐酸将洗脱液调节ph6.7，加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到沉淀，在沉淀中加入一定量纯化水溶解，得到溶解液。⑨将溶解液放入冻干机冻干，得到最终产品1.94kg。
实施例4
一种达肝素钠制备工艺：①称取4kg肝素钠，加入20倍纯化水中，在常温下搅拌0.5小时后溶解。②用醋酸调节ph3.2，加入160g亚硝酸钠，20℃搅拌反应4小时。③用氢氧化钠调节上述的降解液至ph6.9，加入460g硼氢化钠，55℃搅拌反应3小时，然后降至室温，用醋酸调节ph3.5，搅拌反应20分钟，再用氢氧化钠调节至ph6.8，加入1.6kg氯化钠，搅拌溶解，得到还原液；④在上述还原液中加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到还原沉淀物；⑤在上述还原沉淀物中加入16倍纯化水，再加入1.6kg氯化钠，搅拌溶解，用氢氧化钠调节ph10.5，室温下加入1600ml双氧水，搅拌反应2小时，再用盐酸调节ph7.3，得到氧化液；⑥在上述氧化液中加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到还原沉淀物；⑦采用阴离子交换树脂，按40～60mg低分子肝素钠上样，温度为室温，紫外检测波长为uv254nm，上样结束后，先用纯化水洗涤，直至洗涤液为中性，再用2.7％氯化钠溶液洗涤，洗涤的终点为254nm紫外吸收降至基线平稳，再用2.7mol/l的氯化钠溶液洗脱，洗脱的终点为254nm紫外吸收降至基线平稳，收集洗脱液。⑧用盐酸将洗脱液调节ph7.0，加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到沉淀，在沉淀中加入一定量纯化水溶解，得到溶解液。⑨将溶解液放入冻干机冻干，得到最终产品1.95kg。
实施例5
一种达肝素钠制备工艺：①称取4kg肝素钠，加入22倍纯化水中，在常温下搅拌0.5小时后溶解。②用醋酸调节ph4.0，加入172g亚硝酸钠，30℃搅拌反应4小时。③用氢氧化钠调节上述的降解液至ph6.8，加入600g硼氢化钠，55℃搅拌反应3小时，然后降至室温，用醋酸调节ph3.6，搅拌反应20分钟，再用氢氧化钠调节至ph6.8，加入1.6kg氯化钠，搅拌溶解，得到还原液；④在上述还原液中加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到还原沉淀物；⑤在上述还原沉淀物中加入16倍纯化水，再加入1.6kg氯化钠，搅拌溶解，用氢氧化钠调节ph10.4，室温下加入1000ml双氧水，搅拌反应2小时，再用盐酸调节ph6.9，得到氧化液；⑥在上述氧化液中加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到还原沉淀物；⑦采用阴离子交换树脂，按40～60mg低分子肝素钠上样，温度为室温，紫外检测波长为uv254nm，上样结束后，先用纯化水洗涤，直至洗涤液为中性，再用2.7％氯化钠溶液洗涤，洗涤的终点为254nm紫外吸收降至基线平稳，再用2.8mol/l的氯化钠溶液洗脱，洗脱的终点为254nm紫外吸收降至基线平稳，收集洗脱液。⑧用盐酸将洗脱液调节ph7.2，加入2倍乙醇，静置过夜，弃去上清液，得到沉淀，在沉淀中加入一定量纯化水溶解，得到溶解液。⑨将溶解液放入冻干机冻干，得到最终产品1.86kg。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。