一种乌苯美司的制备方法与流程

本发明涉及制药领域，具体而言，涉及一种乌苯美司的制备方法。

背景技术：

乌苯美司(iubenimex；nn)，也称为bestatin，化学式为n-[(2s,3r)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酰基]-l-亮氨酸，是一种竞争性的，可逆的蛋白酶抑制剂。它对精氨酰氨基肽酶(氨基肽酶b)，白三烯a4水解酶(显示环氧化物水解酶和氨基肽酶活性的锌金属蛋白酶)，丙氨酰氨基肽酶(氨肽酶m/n)，亮氨酰/胱氨酰氨基肽酶(催产素/血管加压素酶)(白三烯d4水解酶)有抑制作用。正在研究用于治疗急性骨髓性白血病。它源自橄榄链霉菌(streptomycesolivoreticuli)。已发现ubenimex抑制催产素，加压素，脑啡肽和各种其它肽和化合物的酶促降解。

乌苯美司可增强免疫功能，用于抗癌化疗、放疗的辅助治疗，老年性免疫功能缺陷等。可配合化疗、放疗及联合应用于白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症及造血干细胞移植后，以及其它实体瘤患者。

现有技术中，乌苯美司在合成过程中大多采用四氢呋喃、三乙胺作为溶剂或者催化剂等，这些试剂本身不环保，后续处理负担比较大，会产生大量的废水废气，而且三乙胺这种有机碱容易残留在产物中，造成有机溶剂残留的问题。

有鉴于此，特提出本发明。

技术实现要素：

本发明的第一目的在于提供一种乌苯美司的制备方法，该制备方法中摒弃了以往采用的有机碱、四氢呋喃、二氯甲烷、n、n二甲基甲酰胺等有机溶剂作为反应溶剂、乙酸乙酯作为萃取溶剂。直接采用乙酸乙酯作为反应和萃取溶剂，节约了成本同时避免了使用四氢呋喃、二氯甲烷、n、n二甲基甲酰胺所带来的安全环保隐患，采用弱酸强碱无机盐作为碱催化剂，降低了成本，同时避免三乙胺残留溶剂对成品质量的影响，整个制备方法过程中充分做到了避免使用有机溶剂，操作简便，绿色环保，在提高了乌苯美司产品质量的同时，收率高。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明提供了一种乌苯美司的制备方法，包括如下步骤：

(a)dcc(二环己基碳二亚胺)催化条件下，溶剂为乙酸乙酯，将l-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、hobt(1-羟基苯并三氮唑)缩合得到活化酯溶液；

(b)将(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酸、弱酸强碱无机盐混合搅拌过程中，滴加所述活化酯溶液进行反应得到n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸；

(c)n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸在pd/c催化下，氢气还原得到乌苯美司。

现有技术中，由于乌苯美司可增强免疫功能，用于抗癌化疗、放疗的辅助治疗，老年性免疫功能缺陷等。可配合化疗、放疗及联合应用于白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症及造血干细胞移植后，以及其它实体瘤患者，因此鉴于其广泛的应用，对其具体制备工艺的研究显得非常具有实际意义。

但是，传统的乌苯美司在合成过程中大多采用四氢呋喃、二氯甲烷、n、n二甲基甲酰胺、三乙胺作为溶剂或者催化剂等，这些试剂本身不环保，后续处理负担比较大，会产生大量的废水废气，而且三乙胺这种有机碱容易残留在产物中，产生有机溶剂残留的问题。

本发明为了解决上述技术问题，提供了一种乌苯美司的制备方法，该制备方法中，采用无机的弱酸强碱盐代替传统的三乙胺这种有机碱，无机盐最好选择碳酸氢钠或碳酸氢钾，更优选择为碳酸氢钠，由于溶于水时呈现弱碱性从而促进反应的顺利进行，但是需要注意的是，这里一定不要选择碱性过强的盐，因为如果碱性过强，l-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐的苄酯会脱落，从而影响到反应的顺利进行，因此在进行选择时要选择碱性比较适宜的盐。

另外，本发明在溶剂选择上选择的为乙酸乙酯，改进了传统需要同时采用四氢呋喃、二氯甲烷、n、n二甲基甲酰胺中一种为反应溶剂、乙酸乙酯为萃取溶剂。避免两种溶剂同时使用。节约了成本的同时避免了使用四氢呋喃、二氯甲烷、n、n二甲基甲酰胺等所带来的安全隐患。传统工艺之所以需要采用四氢呋喃、二氯甲烷、n、n二甲基甲酰胺，是因为四氢呋喃、二氯甲烷、n、n二甲基甲酰胺本身溶解性好，原料(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酸，还有hobt(1-羟基苯并三氮唑)能够发生反应的关键在于，其具有良好溶解性的介质中充分分散以促进反应的正常进行，但是本发明利用了dcc催化以先形成活化酯溶液，做成活化酯后采用乙酸乙酯为溶剂，其溶解性已经可以满足工艺要求，不需要采用四氢呋喃、二氯甲烷、n、n二甲基甲酰胺即保证反应的顺利进行，并且通过采用弱酸强碱无机盐也一部分解决了溶解性的问题，提高了溶解性，可见本发明采用的弱酸强碱无机盐不仅起到了催化作用，也间接起到了作为溶解介质的作用。

本发明乌苯美司的制备工艺的总反应方程式为：

步骤(a)中，优选地，先添加l-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、hobt，乙酸乙酯，并将温度控制在0-5℃之间，然后添加含有dcc的乙酸乙酯溶液，将温度升高至15-20℃之间，反应4-5h，一般在后续真正发生反应的时候将温度升高以保证反应的正常进行，前期温度在0-5℃之间是为了防止温度太高副反应的发生。

优选地，含有dcc的乙酸乙酯溶液按照滴加的方式进行，通过逐渐滴加的方式可以保证反应平稳的进行，以控制反应进度，避免剧烈反应。

步骤(b)中，将碳酸氢钠最好配制成10-20wt％的碳酸氢钠溶液，因为碳酸氢钠通过配制成溶液，可以提高反应原料的分散性，提高反应的催化性能。

另外，添加碳酸氢钠溶液后，温度一般控制在10-15℃之间，并通过快速搅拌的方式以加快各原料之间的互溶。

优选地，滴加活化酯溶液后，15-20℃之间反应4-5h，得到目的产物，但是还是需要后续分离的步骤以纯化目的产物，一般采用tlc来跟踪反应终点(乙酸乙酯：石油醚＝2:1、紫外254nm)。

优选地，反应后将产物n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸进行一系列的分离步骤得到纯化后的产物，具体步骤最好按照如下操作进行：过滤分离有机相后，洗涤、干燥以及浓缩操作，干燥后得到浓缩物，向浓缩物中加入石油醚搅拌2-3h，过滤，干燥以浓缩，石油醚的添加也是为了将目的产物更好的分散在有机相里面。

优选地，向浓缩物中加入石油醚搅拌2-3h，过滤后，40-45℃的条件下干燥，经过干燥后得到分离纯化后的产物，经过测定该步骤的收率可以达到94％以上。

步骤(c)中，溶剂采用的为冰醋酸，反应压力控制在1.5-2mpa之间，反应温度控制在20-30℃之间。该步骤通过将n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸催化还原，pd/c、氢气的条件下脱掉cbz的保护基，得到最终的目的产物乌苯美司，但是此时得到的乌苯美司为粗品，后续通过酸溶碱沉的方法结晶以获得成品。因此最好将反应得到的乌苯美司粗品进行过滤、分离以进一步纯化。

最后，后续的后处理步骤最好按照如下步骤进行：将乌苯美司粗品在70-80℃、压力-0.05～-0.1mpa之间进行浓缩后，添加丙酮搅拌后，过滤，添加氨水析晶后，过滤即可。

优选地，添加氨水后，调节溶液的ph值在5-6之间，0-5℃析晶4-5h。

还有优选地，析晶后过滤加入丙酮搅拌2-3h，40-50℃之间干燥得到乌苯美司成品。

现有技术的一锅法在合成n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸的过程中使用的四氢呋喃、乙酸乙酯两种溶剂，本发明的工艺仅使用乙酸乙酯作为溶剂，节约了成本的同时避免了使用四氢呋喃所带来的安全隐患。还有，一锅法在合成n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸的过程中使用的是三乙胺为碱催化剂，本发明采用碳酸氢钠为碱催化剂，节约成本的同时，避免三乙胺残留溶剂对成品质量的影响。另外，一锅法在合成n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸的过程中需要进行浓缩四氢呋喃，而本发明的工艺反应结束直接萃取处理，更易操作，并不需要对四氢呋喃进行单独处理，省时省力，也比较环保。最后，一锅法合成的n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸收率无本发明的工艺高。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明的乌苯美司的制备方法，摒弃了以往采用的有机碱、四氢呋喃等有机溶剂的添加，有机溶剂仅仅采用乙酸乙酯，节约了成本同时避免了使用四氢呋喃所带来的安全隐患，采用弱酸强碱无机盐作为碱催化剂，节约成本的同时，避免三乙胺残留溶剂对成品质量的影响，整个制备方法过程中避免使用有机溶剂，操作过程简便，容易操作，在提高了乌苯美司产品的同时，收率高；

(2)本发明的利用了dcc催化后先形成了活化酯溶液，做成活化酯后利用乙酸乙酯为溶剂，溶解性已经可以满足工艺要求，不需要采用四氢呋喃即可满足溶解性，并且通过采用弱酸强碱无机盐也一部分解决了溶解性的问题，提高了溶解性，可见本发明采用的弱酸强碱无机盐不仅起到了催化作用，也间接起到了溶解的作用，可见从工艺流程设计上也具有一定的创新性，先形成了活化酯降低了反应体系的溶解性要求。

附图说明

为了更清楚地说明本发明发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1-2为本发明实施例1中的乌苯美司产品的确认图谱。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1

乌苯美司的制备方法如下：

1)将l-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、hobt、10倍(v/m)乙酸乙酯依次加入到反应釜中，投料完成不断搅拌降温，缓慢加入dcc的乙酸乙酯溶液，加入过程体系温度0-5℃之间。投料完成后体系在15-20℃间反应4h，tlc跟踪反应终点(乙酸乙酯：石油醚＝2:1、紫外254nm)，得到l-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐的活化酯溶液；

2)将(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酸、10倍(v/m)10％的碳酸氢钠溶液依次加入到反应釜中，搅拌至完全溶解，降温至10-15℃，快速搅拌下滴加l-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐的活化酯溶液，滴加完成后在15-20℃间反应4h左右，tlc跟踪反应终点(乙酸乙酯：石油醚＝2:1、紫外254nm)；

3)过滤分液，水相依次用7倍、2倍(v/m)乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相，乙酸乙酯相依次用6倍0.5wt％的盐酸洗涤一次，6倍5wt％的饱和碳酸氢钠洗涤一次，6倍纯化水洗涤一次；乙酸乙酯溶液经无水硫酸钠干燥2h，过滤、浓缩至干，向浓缩物中加入5倍(v/m)石油醚，搅拌2h分散，过滤、40-45℃下干燥得n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸，收率94-98％；

4)在室温下将n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸、pd/c(30％)溶解在15倍(v/m)的冰醋酸中，搅拌混合均匀后加入到反应釜中，氮气氢气依次置换三次，1.5-2mpa下搅拌反应至不吸氢为至；

5)过滤后的滤液在80℃、-0.1mpa下浓缩至干，浓缩物中加入10倍(v/m)丙酮，搅拌分散4h，过滤、40-45℃下鼓风干燥得乌苯美司醋酸盐；

6)将乌苯美司醋酸盐溶解在盐酸溶液中，溶液降温至0-5℃之间，用15wt％的氨水调节溶液ph值至5-6。0-5℃下析晶5h，过滤，固体用丙酮打浆3h，过滤，40℃下干燥得到乌苯美司成品，收率为90.5％，具体确认图谱见附图1-2。

实施例2

乌苯美司的制备方法如下：

1)将l-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、hobt、10倍(v/m)乙酸乙酯依次加入到反应釜中，投料完成不断搅拌降温，缓慢加入dcc的乙酸乙酯溶液，加入过程体系温度0-5℃之间。投料完成后体系在15-20℃间反应5h，tlc跟踪反应终点(乙酸乙酯：石油醚＝2:1、紫外254nm)，得到l-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐的活化酯溶液；

2)将(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酸、10倍(v/m)20％的碳酸氢钠溶液依次加入到反应釜中，搅拌至完全溶解，降温至10-15℃，快速搅拌下滴加l-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐的活化酯溶液，滴加完成后在15-20℃间反应5h左右，tlc跟踪反应终点(乙酸乙酯：石油醚＝2:1、紫外254nm)；

3)过滤分液，水相依次用7倍、2倍(v/m)乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相，乙酸乙酯相依次用6倍0.5wt％的盐酸洗涤一次，6倍5wt％的饱和碳酸氢钠洗涤一次，6倍纯化水洗涤一次；乙酸乙酯溶液经无水硫酸钠干燥2h，过滤、浓缩至干，向浓缩物中加入5倍(v/m)石油醚，搅拌3h分散，过滤、40-45℃下干燥得n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸，收率94-98％；

4)在20-30℃条件下将n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸、pd/c(30％)溶解在15倍(v/m)的冰醋酸中，搅拌混合均匀后加入到反应釜中，氮气氢气依次置换三次，1.5-2mpa下搅拌反应至不吸氢为至；

5)过滤后的滤液在70℃、-0.05mpa下浓缩至干，浓缩物中加入10倍(v/m)丙酮，搅拌分散5h，过滤、40-45℃下鼓风干燥得乌苯美司醋酸盐；

6)将乌苯美司醋酸盐溶解在盐酸溶液中，溶液降温至0-5℃之间，用15wt％的氨水调节溶液ph值至5-6。0-5℃下析晶4h，过滤，固体用丙酮打浆3h，过滤，50℃下干燥得到乌苯美司成品，收率为92.3％。

实施例3

乌苯美司的制备方法如下：

1)将l-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、hobt、10倍(v/m)乙酸乙酯依次加入到反应釜中，投料完成不断搅拌降温，缓慢加入dcc的乙酸乙酯溶液，加入过程体系温度0-5℃之间。投料完成后体系在15-20℃间反应4h，tlc跟踪反应终点(乙酸乙酯：石油醚＝2:1、紫外254nm)，得到l-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐的活化酯溶液；

2)将(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酸、10倍(v/m)20％的碳酸氢钠溶液依次加入到反应釜中，搅拌至完全溶解，降温至10-15℃，快速搅拌下滴加l-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐的活化酯溶液，滴加完成后在15-20℃间反应4h左右，tlc跟踪反应终点(乙酸乙酯：石油醚＝2:1、紫外254nm)；

3)过滤分液，水相依次用7倍、2倍(v/m)乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相，乙酸乙酯相依次用6倍0.5wt％的盐酸洗涤一次，6倍5wt％的饱和碳酸氢钠洗涤一次，6倍纯化水洗涤一次；乙酸乙酯溶液经无水硫酸钠干燥2h，过滤、浓缩至干，向浓缩物中加入5倍(v/m)石油醚，搅拌2h分散，过滤、40-45℃下干燥得n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸，收率94-98％；

4)在20-30℃条件下将n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸、pd/c(30％)溶解在15倍(v/m)的冰醋酸中，搅拌混合均匀后加入到反应釜中，氮气氢气依次置换三次，1.5-2mpa下搅拌反应至不吸氢为至；

5)过滤后的滤液在75℃、-0.085mpa下浓缩至干，浓缩物中加入10倍(v/m)丙酮，搅拌分散4h，过滤、40-45℃下鼓风干燥得乌苯美司醋酸盐；

6)将乌苯美司醋酸盐溶解在盐酸溶液中，溶液降温至0-5℃之间，用20wt％的氨水调节溶液ph值至5-6。0-5℃下析晶5h，过滤，固体用丙酮打浆2h，过滤，45℃下干燥得到乌苯美司成品，收率为91.4％。

比较例1

将(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酸、l-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、hobt、四氢呋喃溶依次加入到反应釜中，投料完成体系搅拌下降温到0℃左右，依次缓慢加入三乙胺和dcc，加入过程体系温度不超过10℃。投料完成后体系在15℃～20℃间反应，搅拌反应过夜，tlc跟踪反应终点(乙酸乙酯：石油醚＝2:1、紫外254nm)。

过滤，滤液在45℃、-0.085mpa下减压浓缩至干，得黄色油状物浓缩物，加入15倍(v/m)乙酸乙酯溶解，溶液依次用4倍0.5n的盐酸洗涤一次、4倍0.5n的饱和碳酸氢钠洗涤一次、4倍纯化水洗涤一次，乙酸乙酯溶液经无水硫酸钠干燥2小时。

过滤、浓缩至干，向浓缩物中加入10倍(v/m)石油醚，搅拌2小时分散，过滤、40℃～45℃下干燥得n-[(2s,3r)-3-苄氧甲酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-l-亮氨酸，收率80％-82％。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。