一种超声辅助提取高粱麸皮中二氢槲皮素的方法与流程

本发明属于天然产物化学技术领域，具体涉及一种超声辅助提取高粱麸皮中二氢槲皮素的方法。

背景技术：

二氢槲皮素又叫花旗松素、紫杉叶素，其化学名为3,5,7,3',4'一五轻基二氢黄酮，英文名dihydroquercetin，taxifolin，3,5,7,3',4'-pentahydroxyflavanone，分子式为c15h12o7，分子量为304.26。二氢槲皮素是天然黄酮类活性成分之一，属于维生素pp家族，具有很强的抗氧化能力。它能从人体中有效地消除过量的自由基，促进毛细血管的渗透性，改善免疫功能，减少癌症的形成；是防止心血管疾病、有效恢复毛细血管弹性、阻止发炎和肿块形成的优良天然药物。同时，二氢槲皮素还是高效的天然食品抗氧化剂，它的抗氧化作用超过其它诸如槲皮素、芸香苷和合成抗氧化剂等。二氢槲皮素广泛存在于松科植物中，如海岸松、落叶松、花旗松，并且是落叶松中含量最大的黄酮类化合物，但是二氢槲皮素在植物中含量偏低，一般只有0.3～5.7％，这些因素使得二氢槲皮素的价格较为昂贵，这也进一步阻碍了它的工业化生产和应用。

高粱是我国北方和西南地区的主要作物之一，主要用于酿酒和饲料工业，少部分作为杂粮食用。高粱麸皮约占高粱籽粒质量的12％，含有大量的原花青素、花青素、单宁、酚类、甾醇等，具有较高的抗氧化能力，高粱麸皮因此也具有抗癌防癌功效。前期研究发现，高粱麸皮中含有二氢槲皮素组分，但目前尚未有从高粱麸皮中提取分离二氢槲皮素的文献报道和专利申请。超声辅助提取是利用超声波产生的高速、强烈的空化效应和搅拌作用破坏药材的细胞，使溶剂渗透到药材细胞中而提取有效成分的一种绿色、环保、高效、节能的提取方法，具有提取时间短，提取效率高的优点，采用超声辅助提取高粱麸皮中二氢槲皮素的方法至今未见相关文献报道。本发明可进一步扩大高粱麸皮的开发和利用，同时也为二氢槲皮素的提取提供新资源和新方法，可产生良好的社会效益和可观的经济效益。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种超声辅助提取高粱麸皮中萃取二氢槲皮素的方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：一种超声辅助提取高粱麸皮中二氢槲皮素的方法，按照下述步骤进行：

(1)以高粱麸皮为原料，干燥后粉碎过20～200目筛；

(2)将高粱麸皮粉末与乙醇水溶液按一定质量体积比混合，在超声条件下进行提取，经抽滤后，对滤渣重复萃取三次，合并提取液，减压浓缩至无醇味的浸膏；

(3)将步骤2所述浸膏上大孔吸附树脂层析柱进行初步分离，上样后，先用蒸馏水洗脱除去未吸附的水溶性杂质，再用一定体积分数的乙醇水溶液洗脱，收集有效馏分液；

(4)将上述有效馏分液减压浓缩至无醇味，置于低温条件下，使其析出结晶粗产物；粗产物再经重结晶、真空干燥后得二氢槲皮素纯品。

步骤(2)中，所述乙醇的水溶液中乙醇的体积分数为10～95％；高粱麸皮与水的用量比为1g:10～50ml；所述提取过程在超声设备中进行，超声频率25khz，功率100～300w，温度25～70℃的条件下，超声提取5～60min。

步骤(3)中，所述大孔吸附树脂为非极性或中等极性，具体型号为d101、ab-8和ads-17等；所述一定体积的乙醇水溶液中，乙醇的体积分数为30～95％；所述有效馏分液为经hplc检测含有二氢槲皮素的馏分液。

步骤(4)中，所述低温条件为0～4℃；所述重结晶的具体步骤为：将二氢槲皮素粗产物，用热水溶解，趁热抽滤，搅拌冷却，放于0-4℃条件下重结晶，反复结晶三次，得到二氢槲皮素。

本发明的有益效果：本发明公开的超声辅助提取高粱麸皮中二氢槲皮素的方法，所用提取溶剂和高粱麸皮原料低廉易得，涉及到的工艺流程简单，操作简便，涉及到的化学药剂成本较低，可回收重复使用，无有毒有害试剂污染，可进行工业化生产，可用于医药用原料药。

附图说明

图1为从高粱麸皮中分离得到二氢槲皮素单体化合物的hplc图。

具体实施方式

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1

取粉碎过20目筛的高粱麸皮粉末100g，加入1000ml体积分数为10％的乙醇水溶液，在超声频率25khz，功率100w，温度25℃的条件下，超声提取5min，提取结束后，经抽滤，滤渣重复提取三次，合并滤液，真空减压浓缩至无醇味；将浓缩液以3ml/min流速上大孔树脂色谱柱(ab-8大孔吸附树脂，非极性，玻璃柱型号为φ3.0*l100cm)，以同样的流速，用2000ml蒸馏水冲洗柱子；采用体积分数为30％的乙醇水溶液洗脱，收集二氢槲皮素有效馏分液，用高效液相色谱检测(方法见实施例3)；将收集的有效馏分液经减压浓缩至无醇味，于0℃下静置，析出结晶后过滤，得二氢槲皮素粗品；将二氢槲皮素粗产物，用热水溶解，趁热抽滤，搅拌冷却，将该滤液于0℃的条件下静置，经重结晶，室温真空干燥后，得二氢槲皮素纯品。经hplc检测，二氢槲皮素纯度高于97.56％，提取率为80.3％。

实施例2

取粉碎过200目筛的高粱麸皮粉末100g，加入5000ml体积分数为95％的乙醇水溶液，在超声频率25khz，功率300w，温度70℃的条件下，超声提取60min，提取结束后，经抽滤，滤渣重复提取三次，合并滤液，真空减压浓缩；将浓缩液液以3ml/min流速上大孔树脂色谱柱(ads-17大孔吸附树脂，非极性，玻璃柱型号为φ3.0*l100cm)，以同样的流速，用2000ml蒸馏水冲洗柱子；采用体积分数为95％的乙醇水溶液洗脱，收集二氢槲皮素有效馏分液，用高效液相色谱检测(方法见实施例3)；将收集的有效馏分液经减压浓缩至无醇味，于4℃下静置，析出结晶后过滤，得二氢槲皮素粗品；将二氢槲皮素粗产物，用热水溶解，趁热抽滤，搅拌冷却，将该滤液于4℃的条件下静置，经重结晶，室温真空干燥后，得二氢槲皮素纯品。经hplc检测，二氢槲皮素纯度高于95.16％，提取率为，提取率为83.7％。

实施例3

本实施例为二氢槲皮素检测方法的实施例。

二氢槲皮素通过高效液相色谱法检测，二氢槲皮素产品在检测波长为290nm，经安捷伦zorbaxsb-c18柱(4.6×250mm，5μm)分离(流动相：a相为0.1％的乙酸水溶液，b相为甲醇；流速为1ml/min，柱温为25℃，梯度洗脱)，色谱图如图1所示，二氢槲皮素在25.45min处出现色谱峰，在同一色谱条件下，该峰的保留时间与山柰苷对照品的保留时间一致。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种超声辅助提取高粱麸皮中二氢槲皮素的方法，属于天然产物化学技术领域。该方法以高粱麸皮为原料，经超声辅助提取、抽滤，减压浓缩、低温静置、离心、分离/富集、洗脱、馏分液低温静置、结晶和重结晶、干燥的步骤，得到二氢槲皮素纯品。本发明方法可用于高纯度二氢槲皮素的工业化生产，所用高粱麸皮原料低廉易得，工艺流程简单，操作简便，成本低，无有毒有害试剂污染，可用于医药用原料药。

技术研发人员：段玉清;罗孝平;崔洁媚;张海晖;张迪;蔡梅红
受保护的技术使用者：江苏大学
技术研发日：2017.07.24
技术公布日：2017.09.29