本发明涉及snp位点，具体地说，涉及一个与猪100kg体重背膘厚相关的snp位点及其应用。
背景技术：
我国是一个养猪大国，猪肉产量和质量的市场需求日益增加，提高猪肉产量、改善猪肉胴体质量，成为育种科学家长期以来不断探索的工作。早期的育种工作主要集中与猪的表型选择，随着基因组工作的不断推进和遗传标记的广泛开发，分子选择正逐渐成为可靠而有效的选择方法。
单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism，snp)标记是第三代snp位点，是指在基因组dna序列上有单个碱基的突变而产生的一种多态性，这种突变包括单碱基的颠换、转换、插入和缺失。snp具有量大、高频率、低突变率等优点，广泛应用于基因组分析、生物信息自动化检测、简单和复杂疾病的遗传研究、畜牧育种标记及全球种族遗传学等研究。snp位点辅助选择育种，是在分子水平上对目标性状进行选择，可以不受环境影响，通过遗传背景选择，减少连锁累赘，从而加速育种过程及精准度。
全基因组关联分析(genome-wideassociationstudies，gwas)是畜禽经济性状遗传改良和机理解析的重要方法。随着二代测序技术的发展，全基因组重测序和简化基因组测序技术成为高通量snp分型的有力工具，gbs(genotyping-by-sequencing)是简化基因组测序的经典代表，是一种高效的全基因组snp分型方法，可以从群体中直接鉴定snp并进行分型，能以较低的成本获得几万到几十万不等的snp分型信息，已被广泛应用于动植物的snp位点开发、群体遗传分析、全基因组关联分析以及基因组选择育种等研究中(dedonatoetal.，2013；elshireetal.，2011；heetal.，2014)。
猪的背膘厚表示脂肪多少，背膘厚度越厚瘦肉率越低，相反，则瘦肉率高。由于背膘厚与猪产肉性能有强相关性，所以在育种中具有重要的研究意义。
若能够筛选一种与猪背膘厚显著相关的snp位点或snp分子标记，则有助于为猪的标记辅助选择育种提供有利的理论依据。
技术实现要素：
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一个与猪100kg背膘厚相关的snp位点及其应用。
为了实现本发明的目的，本发明的技术方案如下：
一方面，本发明提供了一种与猪100kg体重背膘厚相关的snp位点，该位点为基因组版本ensemblsscrofa10.2的chr1：175791493，该位点的等位基因为a和t，有a/a、t/t和a/t三种基因型。
所述snp位点位于seqidno.1所示的核苷酸序列中第101位碱基。
本发明通过测定并记录杜洛克猪的100kg体重背膘厚，对3757头杜洛克公猪进行gbs测序，鉴定到102,254个snp覆盖了猪的整个基因组，严格质控后剩余66,737个用于3702头杜洛克猪纯种群体的100kg体重背膘厚的gwas研究，得到了一个与100kg体重背膘厚显著相关的snp(chr1：175791493)位点。统计该snp位点在重测序的地方猪种(金华猪、五指山猪、陆川猪、梅山猪、荣昌猪、莱芜猪、二花脸猪、河套猪和民猪)与商品猪种(杜洛克猪、长白猪、约克夏猪和杜长大猪)中的snp频率，发现其snp频率分布在地方猪种和商品猪种中存在显著差异，商品猪中a为优势等位基因，地方猪中t为优势等位基因。
其中，商品猪表现为比地方猪增重快、瘦肉率高。
另一方面，本发明提供了所述snp位点在猪的标记辅助选择育种中的应用。
所述应用具体体现为一种利用所述snp位点对猪进行辅助育种的方法，可包括以下步骤：
(1)检测样品猪在所述snp位点的基因型；
(2)选择具有优势等位基因基因型的样品猪进行优势品系的选育。
作为优选，选择基因型为aa纯合猪进行优势品系的选育。
其中，所述优势品系主要表现为背膘厚低、瘦肉率高。
进一步地，所述步骤(1)可采用直接测序，或先扩增含所述snp位点的片段再检测的方式进行，例如，设计引物，从seqidno.1所示的序列中扩增出含有所述snp位点的片段，再检测该位点上的等位基因。
本发明还提供了所述snp位点在鉴定商品猪/地方猪优势品系中的应用。
另一方面，用于扩增含有本发明所述snp位点片段的引物对也属于本发明的保护范围。所述引物对的作用为：从seqidno.1所示的序列中扩增出含有所述snp位点的片段。
本发明的有益效果在于：
本发明对猪chr1：175791493的snp位点进行基因分型，并对该snp位点与猪100kg体重背膘厚进行关联分析，分析发现，snp频率分布在地方猪种和商品猪种中存在显著差异，商品猪中a为优势等位基因，地方猪中t为优势等位基因，为猪的标记辅助选择提供了科学依据。
附图说明
图1为猪100kg体重背膘厚gwas结果的曼哈顿图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1猪背膘厚全基因组关联分析
1、试验材料
以杜洛克猪纯种群体为研究对象，收集2007年8月至2016年1月出生的33,960头个体(12,987头公猪和20,973头母猪)的生产性能记录用于本发明。严格按照猪场内部规范测定猪100kg体重背膘厚(backfatthicknessat100kgliveweight，bf)。
2、试验方法
2.1100kg体重背膘厚测定
当猪只体重达到100±5kg时，开始进行终测；使用alokassd-500型b超仪测定倒数3-4肋间处的背膘厚，校正到100kg体重时的数值。测量时探头、探头模及被测部位应紧密，但不要重压；探头直线平面与猪背正中线纵轴面垂直，不可斜切。
2.2基于gbs技术的猪全基因组snp分型方法
通过模拟酶切猪基因组，预测了36种常见的ⅱ型限制性内切酶以及24种双酶切组合在猪基因组中的酶切效果；根据研究目的和群体特点，选择ecorⅰ-mspⅰ双酶切组合用于猪的gbs建库，并对gbs实验和分析流程进行了优化，建立了基于gbs技术的猪全基因组snp分型方法。通过对3757头杜洛克猪进行gbs测序，鉴定到的102,254个snp覆盖了猪的整个基因组。
2.3全基因组关联分析
严格质控后剩余66,737个snp用于对3702头杜洛克猪100kg体重背膘厚(bf)进行全基因组关联分析。
2.4snp质控
为了获得可靠的gwas结果，本发明采用以下条件进行质控：(1)maf≥0.05；(2)hwe≥10e-6；(3)每个snp的两种纯合子个体数均≥30。
2.5与经济性状显著相关的snp位点
基因组水平显著位点的检测，采用独立标记数进行bonferroni校正，独立标记数的计算使用plinkindep-pairwise命令获得，得到bonferroni基因组水平5％显著水平的p值为0.05/14,084＝3.55×10-6，而潜在的关联的p值阈值为1.0/14,084＝7.10×105。
根据该标准，得到一个与猪多种经济性状达到bonferroni校正的5％基因组水平显著的snp位点(p<10-5.45)。
3、结果与分析
本发明以3702头杜洛克群体为对象，利用优化的gbs测序获得的102,254个snp对猪的100kg体重背膘厚进行了gwas分析，确定了一个与猪100kg体重背膘厚显著相关的snp(chr1：175791493)位点，如图1所示。
实施例2snp(chr1：175791493)在不同品种猪中的频率分布
1、试验材料
地方猪种：6头莱芜猪，5头二花脸猪，6头河套猪，6头民猪，5头金华猪，6头五指山猪，6头陆川猪，14头梅山猪和9头荣昌猪。商品猪种包括：16头杜洛克猪，12头长白猪、8头约克夏猪和36头杜长大猪。
2、试验方法
2.1基因组dna的提取
采用qiagen公司的giaampdnamini试剂盒提取基因组dna，具体操作步骤如下：
(1)向1.5ml的离心管中加入180μl的atl缓冲液，再加入20μl蛋白酶k，混匀；
(2)取20mg左右的耳组织样品放入上述溶液中，55℃消化8h；
(3)向消化好的组织液中加入3μl的rnasea，37℃恒温水浴锅中放置30min，目的是降解组织溶液中的rna；
(4)再向溶液中加入200μlal溶液，旋涡振荡混匀后放入70℃水浴锅中消化10min；待离心管恢复至室温，加入200μl无水乙醇，再次涡旋震荡混匀；
(5)将上述溶液全部加入dna吸附柱中，室温放置2min后，13000rpm离心1min；
(6)离心结束后，弃滤出液，并将吸附柱放进另一个新的2ml收集管中，加入500μlpw1溶液，13000rpm离心1min；
(7)离心结束后，再将吸附柱放进另一个新的2ml收集管中，加入500μlpw2溶液，13000rpm离心3min；
(8)倒掉收集管中的溶液，用纸巾擦净收集管管口的液体，再次将吸附柱放在收集管中，13000rpm离心2min；
(9)将dna吸附柱的盖子打开，放入已编好号的1.5ml离心管中，室温放置2min，使管中残留的乙醇挥发完；
(10)向吸附柱的正中心加入120-150μlae缓冲液，室温放置2min后，13000rpm离心1min，所得溶液即为基因组dna。基因组dna经过1％琼脂糖凝胶电泳检测合格后，用nanodrop定量浓度；再将浓度统一稀释到50ng/μl，用于下一步实验。
2.2snp(chr1：175791493)在各品种猪全基因组重测序数据中的频率
将各品种猪基因组dna送测序，统计snp(chr1：175791493)在以上地方猪种和商品猪种重测序数据中的频率分布。
3、结果与分析
snp(chr1：175791493)在不同地方猪种和商品猪种中的snp频率分布结果如表1所示，在地方猪种和商品猪种中存在显著差异。商品猪中a为优势等位基因，地方猪中t为优势等位基因。
表1snp(chr1：175791493)在不同地方猪种和商品猪种中的snp频率
得到了一种与猪100kg体重背膘厚相关的snp标记，在瘦肉率低的群体中，通过选择等位基因a的个体进行育种，可以提高育种后群体的瘦肉率。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110>中国农业大学
<120>一个与猪100kg体重背膘厚相关的snp位点及其应用
<130>khp171115699.0
<160>1
<170>siposequencelisting1.0
<210>1
<211>201
<212>dna
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>1
gagcagcggctgcaacctacgccagagcttgtggcagggttgattccttaacctgctgag60
cagggccaggtatcaaccctgcattctcacagagatcatgacagatccttaacctgctga120
gccacagtgggaattccaatgagttattttaaatttttgattgggagttcccactatgtc180
taaataggaatggtggtgtct201