本发明涉及中药提取加工
技术领域：
，具体涉及一种提取鸡骨草相思子碱的方法。
背景技术：
：鸡骨草为豆科植物相思子(abruscantoniensis)的干燥全株，中药鸡骨草为豆科相思子属植物，以全株入药，具有利湿退黄，清热解毒，疏肝止痛之功效，是临床常用中药，用于黄疸，胁肋不好，胃脘胀痛，急慢性肝炎、乳腺炎，亦是我国出品中草药品种之一。全草含相思子碱(abrine，即n‐甲基色氨酸)、胆碱(choline)、腺苷类、甾醇类、三萜皂苷类、黄酮类、氨基酸、糖类。相思子碱(abrine)又叫相思豆碱、n-甲基色氨酸，为棱柱状结晶(水)，分解点295℃，旋光度+44°(0.28g溶于10ml0.5mol/l盐酸中)。1g溶于约100ml甲醇，微溶于水，不溶于乙醚，溶于稀酸和碱。分子式c12h14n2o2，分子量218.25。目前已有关于鸡骨草提取相思子碱的方法，但仍存在着一些问题。公开号为cn102432521a的一种从鸡骨草中提取相思子碱的方法，其提取相思子碱的步骤为:a.取毛鸡骨草原料切段，加酸性水浸泡提取2-3次，提取液过滤加入阳离子交换树脂中吸附，去离子水洗至中性，再用40-90％乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩得浸膏；b.上述浸膏采用高速逆流色谱分离，紫外检测器在线监测，收集目标流分，减压干燥得相思子碱。但该方法相思子碱提取含量相对较低，且在分离过程中使用剧毒的氯仿，以及对人体神经有害的甲醇，不安全且有害于健康。公开号为cn102875443a的一种萃取相思子碱的方法，其萃取步骤如下:鸡骨草原料粉碎20-80目，投入萃取釜，通入液态co2和夹带剂，在压力20-30mpa、温度40-55℃条件下，萃取30-60min，在压力5-9mpa、温度40-60℃条件下解析，得萃取物；上述萃取物用酸水溶解，用纳滤膜过滤，滤液再用反渗透膜浓缩，浓缩液调节ph5-6加乙醇溶液醇沉，滤出得沉淀物用70-99％甲醇溶液溶解重结晶2-3次，即得相思子碱。该方法使用co2在高压条件下萃取，生产工艺要求较高，投入成本高。因此，目前尚未见一种安全环保、投入低、提取高效的鸡骨草相思子碱提取方法。技术实现要素：为解决上述技术问题，本发明提供了一种提取鸡骨草相思子碱的方法。本发明是通过以下技术方案予以实现的:一种提取鸡骨草相思子碱的方法，该方法包括以下步骤:s1:鸡骨草烘干、粉碎，加水，灭菌，在28-35℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解，加稀盐酸或乙酸等酸溶液调节使溶液ph呈酸性，再加入质量浓度为1.0-3.5％的壳聚糖溶液，搅拌均匀后静置，过滤取滤液；s2:滤液经活性炭脱色除杂，浓缩干燥，使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶2-3次，再用稀盐酸或乙酸等酸溶液溶解并调节ph4.3-6.5,通过大孔树脂吸附，加入盐酸溶液洗脱，洗脱1-2次得洗脱液，调节洗脱液ph至中性用纳滤膜过滤取滤液，再经活性炭脱色除杂，加入乙醇溶液搅均，过滤取沉淀；s3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱，含水率为0.8-3.5％；真空冷冻干燥的真空度为150-300pa。所述步骤s1中烘干温度为45-60℃，烘干时间为6-8h，鸡骨草粉碎粒径为40-80目。所述步骤s1中鸡骨草粉与水的质量比为1:3-10。所述步骤s1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的0.8-5.2％。所述步骤s1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.2-0.6:0.4-0.8。所述步骤s1中加酸调节溶液至ph4.2-6.5。所述步骤s1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的0.5-3.6％。所述步骤s2中盐酸溶液体积分数为10-50％。所述步骤s2中纳滤膜截留分子量为240-300。所述步骤s2中乙醇溶液浓度85-100％。所述步骤s2中大孔树脂为ab-8、hpd-200a、hpd-100c的一种。本发明的有益效果在于:本方法使用酶解法提取鸡骨草相思子碱具有以下优点:1、使用酶对鸡骨草进行酶解，反应条件温和，可以释放鸡骨草中的物质，提高相思子碱的提取率；2、壳聚糖溶液可以澄清溶液，活性炭可以脱色除杂；3、纳滤膜选择性地截留分子量为240-300，可以有效地除去非相思子碱的成分，提高提取的相思子碱纯度；4、乙醇极性相对弱，相思子碱在其中溶解度很小，极易形成沉淀，有利于相思子碱与其他成分的分离。使用本方法2kg鸡骨草提取物含量为2085-2351mg,纯度为96.1-98.5％。具体实施方式以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步描述，但要求保护的范围并不局限于所述。实施例一一种提取鸡骨草相思子碱的方法，该方法包括以下步骤:s1:鸡骨草烘干、粉碎，加水，灭菌，在28℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解，加稀盐酸溶液调节使溶液ph呈酸性，再加入质量浓度为1.0％的壳聚糖溶液，搅拌均匀后静置，过滤取滤液；s2:滤液经活性炭脱色除杂，浓缩干燥，使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶2次，再用乙酸等酸溶液溶解并调节ph4.3,通过ab-8大孔树脂吸附，加入盐酸溶液洗脱，洗脱1次得洗脱液，调节洗脱液ph至中性用纳滤膜过滤取滤液，再经活性炭脱色除杂，加入乙醇溶液搅均，过滤取沉淀；s3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱，含水率为0.8％；真空冷冻干燥的真空度为150pa。步骤s1中烘干温度为45℃，烘干时间为6h，鸡骨草粉碎粒径为40目。步骤s1中鸡骨草粉与水的质量比为1:3。步骤s1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的0.8％。步骤s1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.2:0.4。步骤s1中加酸调节溶液至ph4.2。步骤s1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的0.5％。步骤s2中盐酸溶液体积分数为10％。步骤s2中纳滤膜截留分子量为240。步骤s2中乙醇溶液浓度85％。实施例二一种提取鸡骨草相思子碱的方法，该方法包括以下步骤:s1:鸡骨草烘干、粉碎，加水，灭菌，在30℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解，加稀盐酸溶液调节使溶液ph呈酸性，再加入质量浓度为1.5％的壳聚糖溶液，搅拌均匀后静置，过滤取滤液；s2:滤液经活性炭脱色除杂，浓缩干燥，使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶3次，再用稀盐酸溶液溶解并调节ph4.7,通过hpd-100c大孔树脂吸附，加入盐酸溶液洗脱，洗脱2次得洗脱液，调节洗脱液ph至中性用纳滤膜过滤取滤液，再经活性炭脱色除杂，加入乙醇溶液搅均，过滤取沉淀；s3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱，含水率为1.3％；真空冷冻干燥的真空度为180pa。步骤s1中烘干温度为48℃，烘干时间为6.5h，鸡骨草粉碎粒径为50目。步骤s1中鸡骨草粉与水的质量比为1:5。步骤s1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的2.1％。步骤s1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.3:0.5。步骤s1中加酸调节溶液至ph4.8。步骤s1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的1.1％。步骤s2中盐酸溶液体积分数为21％。步骤s2中纳滤膜截留分子量为245。步骤s2中乙醇溶液浓度89％。实施例三一种提取鸡骨草相思子碱的方法，该方法包括以下步骤:s1:鸡骨草烘干、粉碎，加水，灭菌，在31℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解，加稀盐酸或乙酸等酸溶液调节使溶液ph呈酸性，再加入质量浓度为2.2％的壳聚糖溶液，搅拌均匀后静置，过滤取滤液；s2:滤液经活性炭脱色除杂，浓缩干燥，使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶2次，再用稀盐酸或乙酸等酸溶液溶解并调节ph5.4,通过hpd-200a大孔树脂吸附，加入盐酸溶液洗脱，洗脱2次得洗脱液，调节洗脱液ph至中性用纳滤膜过滤取滤液，再经活性炭脱色除杂，加入乙醇溶液搅均，过滤取沉淀；s3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱，含水率为2.3％；真空冷冻干燥的真空度为200pa。步骤s1中烘干温度为52℃，烘干时间为7.2h，鸡骨草粉碎粒径为62目。步骤s1中鸡骨草粉与水的质量比为1:7.3。步骤s1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的3.9％。步骤s1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.5:0.7。步骤s1中加酸调节溶液至ph5.6。步骤s1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的2.8％。步骤s2中盐酸溶液体积分数为42％。步骤s2中纳滤膜截留分子量为266。步骤s2中乙醇溶液浓度95％。实施例四一种提取鸡骨草相思子碱的方法，该方法包括以下步骤:s1:鸡骨草烘干、粉碎，加水，灭菌，在35℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解，加稀盐酸等酸溶液调节使溶液ph呈酸性，再加入质量浓度为3.5％的壳聚糖溶液，搅拌均匀后静置，过滤取滤液；s2:滤液经活性炭脱色除杂，浓缩干燥，使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶2次，再用乙酸等酸溶液溶解并调节ph6.1,通过hpd-100c大孔树脂吸附，加入盐酸溶液洗脱，洗脱1次得洗脱液，调节洗脱液ph至中性用纳滤膜过滤取滤液，再经活性炭脱色除杂，加入乙醇溶液搅均，过滤取沉淀；s3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱，含水率为2.9％；真空冷冻干燥的真空度为240pa。步骤s1中烘干温度为58℃，烘干时间为8h，鸡骨草粉碎粒径为75目。步骤s1中鸡骨草粉与水的质量比为1:9。步骤s1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的4.6％。步骤s1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.5:0.8。步骤s1中加酸调节溶液至ph5.5。步骤s1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的3.2％。步骤s2中盐酸溶液体积分数为45％。步骤s2中纳滤膜截留分子量为300。步骤s2中乙醇溶液浓度100％。实施例五一种提取鸡骨草相思子碱的方法，该方法包括以下步骤:s1:鸡骨草烘干、粉碎，加水，灭菌，在35℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解，加稀盐酸溶液调节使溶液ph呈酸性，再加入质量浓度为3.5％的壳聚糖溶液，搅拌均匀后静置，过滤取滤液；s2:滤液经活性炭脱色除杂，浓缩干燥，使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶3次，再用乙酸等酸溶液溶解并调节ph6.5,通过hpd-200a大孔树脂吸附，加入盐酸溶液洗脱，洗脱2次得洗脱液，调节洗脱液ph至中性用纳滤膜过滤取滤液，再经活性炭脱色除杂，加入乙醇溶液搅均，过滤取沉淀；s3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱，含水率为3.5％；真空冷冻干燥的真空度为300pa。步骤s1中烘干温度为60℃，烘干时间为8h，鸡骨草粉碎粒径为80目。步骤s1中鸡骨草粉与水的质量比为1:10。步骤s1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的5.2％。步骤s1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.6:0.4。步骤s1中加酸调节溶液至ph6.5。步骤s1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的3.6％。步骤s2中盐酸溶液体积分数为50％。步骤s2中纳滤膜截留分子量为240。步骤s2中乙醇溶液浓度85％。实验例一公开号为cn102432521a的一种从鸡骨草中提取相思子碱的方法，其提取相思子碱的步骤为:鸡骨草切段，每次8倍量ph2的盐酸水溶液常温浸泡4小时，提取2次，提取液过滤后加入732阳离子交换树脂柱中吸附，去离子水洗至中性，再取6bv60％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液减压浓缩得12g粗提物。取氯仿、甲醇、水按5:4:2混合，充分分层后，取下相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机750rpm，泵入上相做流动相，待系统平衡后，流速调节为3ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续分离，合并流分减压干燥得白色粉末相思子碱。实验例二公开号为cn102875443a的一种萃取相思子碱的方法，其萃取步骤如下:鸡骨草粉碎80目，通入液态co2，调节压力27mpa、温度45℃，达到上述参数，再通入80％甲醇溶液，萃取50min，在压力5mpa、温度60℃条件下解析萃取物。所得萃取物用ph2的硫酸水溶液溶解，用截留分子量500的中空纤维素膜纳滤，滤液再用反渗透膜浓缩，浓缩液调节ph5加乙醇溶液醇沉，滤出得沉淀物用90％甲醇溶液溶解重结晶2次，干燥得相思子碱。取鸡骨草14kg，平均分成7份，每份2kg，分别按实施例一、实施例二、实施例三、实施例四、实施例五、实验例一、实验例二的方法提取相思子碱，并使用hplc测定提取物中相思子碱的含量，结果如表1所示。表1鸡骨草相思子碱提取结果项目提取物重量/mg提取物中相思子碱含量/％实施例一214098.5实施例二235196.1实施例三208597.3实施例四224597.8实施例五233698.2实验例一110096.5实验例二185097.2从上表可知，采用本方法在不同条件下提取2kg鸡骨草，提取物重量为2085-2351mg，提取物中相思子碱含量为96.1-98.5％，基本上均高于实验例一的提取物重量1100mg，提取物中相思子碱含量为96.5％，实验例二的提取物重量1850mg。因此，采用本方法提取鸡骨草中的相思子碱相较现有技术具有显著的效果，有较大的应用价值。当前第1页12