细胞培养上清中外泌体快速提取器的制作方法

文档序号:11174012阅读:1032来源:国知局
细胞培养上清中外泌体快速提取器的制造方法与工艺

本实用新型涉及一种提取器,尤其是一种细胞培养上清中外泌体快速提取器。



背景技术:

外泌体(Exosome)发现于1986年,是一种直径40~150nm的双层膜囊泡状结构小体,可由机体内多种细胞如免疫细胞、干细胞、心血管细胞、网织红细胞、血小板、神经细胞和肿瘤细胞等主动分泌产生,广泛分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等体液中。

外泌体携带大量特异性的蛋白质(如细胞因子、生长因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物质,在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗肿瘤免疫等生理过程,与多种疾病的发生和进程密切相关。由于外泌体的特殊结构和功能,使得它具有潜在的应用价值,一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标,另一方面也可以作为治疗手段,未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。

外泌体的分离纯化一直是科研工作者关注的问题,获得高纯度的外泌体对后续的研究至关重要。目前人们多采用超速离心、免疫磁珠、超滤、沉淀或试剂盒等方法实现外泌体的提取分离。



技术实现要素:

本实用新型所要解决的技术问题是,提供一种简便易操作,不但能高效提取且不影响外泌体生物活性的细胞培养上清中外泌体快速提取器。

为了解决上述技术问题,本实用新型采用的技术方案是:一种细胞培养上清中外泌体快速提取器,包括管盖和管体,管体由4个可拆卸的管身由螺口旋转连接组成,螺口连接处配有密封垫,4个管身分别为顶层管身、第一层中间管身、第二层中间管身和底层管身,顶层管身、第一层中间管身、第二层中间管身中各有一个滤网。

所述管盖和管体通过螺口旋转或卡扣连接。

所述顶层管身内置的为0.22um滤网。

所述第一层中间管身内置的为100nm滤网。

所述的第二层中间管身内置的为40nm滤网。

所述的底层管身的底端为锥型平底或锥型圆底。

本实用新型的有益效果是:使用简便,易操作,能高效提取细胞上清液中的外泌体,一次性的无菌器具,保证了提取操作过程无污染。

附图说明

图1是本实用新型细胞培养上清中外泌体快速提取器结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本实用新型作进一步详细说明:

如图1所示,本实用新型的细胞培养上清中外泌体快速提取器,包括管盖1和管体2,管体2由4个可拆卸的管身由螺口旋转连接组成,螺口连接处配有密封垫,4个管身分别为顶层管身2A、第一层中间管身2B、第二层中间管身2C和底层管身2D,顶层管身2A、第一层中间管身2B、第二层中间管身2C中各有一个滤网3A、3B、3C。

所述管盖1和管体2通过螺口旋转或卡扣连接。

所述顶层管身2A内置的为0.22um滤网3A。

所述第一层中间管身2B内置的为100nm滤网3B。

所述的第二层中间管身2C内置的为40nm滤网3C。

所述的底层管身2D的底端为锥型平底或锥型圆底。

本发明外泌体快速提取器的原理:由于外泌体是一个大小约几十纳米的囊状小体,利用不同孔径滤膜通过离心的方法对样品进行选择性分离,获得外泌体。

上述细胞培养上清中外泌体快速提取器使用方法如下:

步骤一:在洁净工作台中把提取器的管盖打开,将管身放到试管架上。

步骤二:收集细胞培养上清液,3000g,10min离心。

步骤三:离心后,取上清液,弃掉沉淀。

步骤四:将细胞培养上清转移至提取器中,提取器每次可以分离提取细胞培养上清≤15ml,拧紧管盖,3000g,15min离心。

步骤五:离心后,分别拧开螺口,用无菌1ml枪头吸取1mlPBS反复吹洗顶层管身2A内置的滤网3A后将悬液弃掉;用另一支无菌1ml枪头吸取1mlPBS反复吹洗第一层中间管身2B内置的滤网3B,将含有外泌体的悬液放到外泌体收集瓶内;再用无菌1ml枪头吸取1mlPBS反复吹洗二层中间管身2C内置的滤网3C,将含有外泌体的悬液放到另一个外泌体收集瓶内。

步骤六:如果上清液的体积超过15ml,那么需要把提取器的管体组装上再开始操作,操作步骤同上(步骤一~步骤五)。

综上所述,本实用新型的内容并不局限在上述的实施例中,相同领域内的有识之士可以在本实用新型的技术指导思想之内可以轻易提出其他的实施例,但这种实施例都包括在本实用新型的范围之内。

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