一种miR-181b靶基因筛选的方法与流程

文档序号:15457505发布日期:2018-09-15 01:31阅读:来源:国知局

技术特征:

技术总结
本发明公开了一种筛选miR‑181b靶基因的方法,该方法以山羊卵巢组织cDNA为模板,在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下,利用引物RUNX1在PCR条件下进行扩增,得到确定的PCR产物为RUNX1基因3'UTR区的序列;然后构建双荧光素酶报告系统,检测荧光素酶活性,初步鉴定miR‑181b的靶基因;采用RT‑qPCR法检测miR‑181b对RUNX1基因在mRNA水平的影响;采用Western blot法检测miR‑181b对RUNX1基因在蛋白水平的影响。明确了RUNX1 3'UTR区存在与miR‑181b的结合位点,利用现代分子生物技术验证了miR‑181b与靶基因RUNX1的靶向调控关系,miR‑181b可以抑制RUNX1基因在mRNA和蛋白水平上的表达,进一步确认了RUNX1是miR‑181b的目标靶基因。为进一步研究miR‑181b对奶山羊乳卵巢发育和产羔性能的影响奠定了基础。

技术研发人员:曹斌云;安小鹏;宋宇轩;李广;高可心
受保护的技术使用者:西北农林科技大学
技术研发日:2018.03.09
技术公布日:2018.09.14
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