本发明涉及微生物
技术领域：
，具体涉及一株类短短芽孢杆菌及其应用。
背景技术：
：随着天然气勘探技术的发展越发成熟，天然气的开采变得简单。但是天然气不便运输，为了让天然气到每家每户，就得保证天然气的运输。天然气开采出来后，经过压缩机压缩成为液体之后，能够级大的降低运输难度和成本。在天然气的压缩过程中，会产生大量采输水，采输水中含有的凝析油和增压机房的废机油混在一起排到废水池中。其中废机油的主要成分为水、灰尘、金属粉末、炭黑、色素、不饱和烃类、有机酸、盐、沥青胶态物质、沥青质、沥青酸、含氧化合物主要是酸、醇、醛、酮、酯、内酯、胶质噻吩类、氢化噻吩类、硫化物、二硫化物、硫醇：脂肪族胺及芳香胺，以及含吡啶环的化合物、芳烃、烯烃。凝析油是指从凝析气田的天然气中凝析出来的液相组分，又称天然汽油，其主要成分是c5～c8烃类的混合物，并含有少量大于c8的烃类以及二氧化硫、噻吩类、硫醇类、硫醚类和多硫化物等杂质，馏分多在20℃～200℃，比重小于0.78，其重质烃类和非烃组分的含量比原油低，挥发性好。这类采输水成分复杂且含有许多的有毒有害物质，达不到国家排放标准，使用常规的化学方法处理，效果不理想且容易造成二次污染。目前，已有多篇报道公开，一些芽孢杆菌具有降解含油废水的能力，如申请号为：201410354185.6的专利，再如题目为“短短芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌降解原油烃机制研究”的文献等。但这些菌普遍存在诸多局限，如：需要多种菌同时作用才能达到较好的降解效果；针对地域性、特异性含油废水，处理效果弱等。四川泸州市江阳区存在诸多油井站废水池，每年产生大量含油废水，无法实现有效处理后达标排放，为当地居民生活带来极大的不便与健康威胁。因此，针对当地提供一种特异性的、处理效果优良的含油废水处理菌剂，具有重要的现实意义。技术实现要素：本发明的目的是提供一株类短短芽孢杆菌及其应用。为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一株类短短芽孢杆菌，菌种名称：类短短芽孢杆菌，brevibacillusparabrevis，于2017年10月25日保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：cgmccno.14835。相应的，一株类短短芽孢杆菌，其16srdna测序结果如seqidno1所示。相应的，所述的类短短芽孢杆菌在处理含油废水中的应用。优选的，所述的类短短芽孢杆菌在处理含油废水中的应用，具体步骤为：(1)将所述类短短芽孢杆菌扩大培养至菌液浓度为107～108cfu/ml，得接种菌液；(2)将所述接种菌液摇匀，与麸皮按1:1的比例混匀，30℃下晾干，得菌剂；(3)将稻草、待处理的含废油废水按质量为1:1混合，再按接种量为8％接种所述菌剂，加水调节水分至65％，待堆体温度升至40℃后，进行曝气，至温度降至与外界温度一致为止；反应20天后，废水处理完成。优选的，步骤(3)所述曝气，具体为：曝气速率为90l/min，曝气时间2h/天。优选的，所述含油废水为天然气采输水。本发明具有以下有益效果：1、本发明提供了一种特异性处理四川泸州市江阳区含油废水的菌种，不用与其它菌联合，单独使用即可达到极佳的处理效果。2、本发明还提供了所述菌种制备成菌剂的制备方法和使用方法，成本低廉、方法简便、效果显著。具体实施方式1、培养基的准备：(1)浮油选择性培养基：称取硝酸铵3g，磷酸氢二钾0.5g，磷酸二氢钾0.5g，无机盐溶液2ml，废机油10ml，琼脂18g，补水至1000ml，调节ph至7.0，在120～122℃下高温灭菌25～30min。(2)活化培养基：称取硝酸铵3g，磷酸氢二钾0.5g，磷酸二氢钾0.5g，无机盐溶液2ml，废机油10ml，琼脂18g，补水至1000ml，调节ph至7.0，在120～122℃下高温灭菌25～30min。(3)发酵扩大培养基：称取硝酸铵3g，磷酸氢二钾0.5g，磷酸二氢钾0.5g，无机盐溶液2ml，废机油10ml，琼脂18g，补水至1000ml，调节ph至7.0，在120～122℃下高温灭菌25～30min。(4)液体培养基：蛋白胨10g，酵母膏2g，牛肉膏5g，氯化钠5g,补水至1000ml，ph7.0，在121℃下高温灭菌30min。(5)含油液体培养基：硝酸铵3g，磷酸氢二钾0.5g，磷酸二氢钾0.5g，无机盐溶液2ml，废机油10ml，琼脂18g，补水至1000ml，调节ph至7.0，在120～122℃下高温灭菌25～30min。(6)无机盐溶液(质量分数)：mgso40.4％,cuso40.1％，mnso40.1％，feso40.1％,cacl20.1％。2、类短短芽孢杆菌的筛选(1)收集四川泸州市江阳区通滩镇金宝山村1社油井站废水池的浮油，富集培养2～3周，培养好的菌液按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6的浓度梯度依次稀释，分别从各浓度的稀释液中吸取0.1ml菌液，于上述浮油选择性培养基平板均匀涂布，在30℃下恒温培养24h，镜检各菌落形态，挑取短杆状菌落，反复划线分离纯化，获得该菌菌株。本发明全文使用的含油废水，均来自四川泸州市江阳区通滩镇金宝山村1社油井站废水池。经检测，其具体成分表如表1所示。表1含油废水成分表(2)菌株性状特征如下：形态特征：该菌在浮油选择性分离培养基中的营养细胞为杆状，革兰氏阳性，长0.8～2.0μm，宽0.6～1μm；在30℃培养3～4天形成芽孢，芽孢大小0.6～0.8×1.2～1.5μm，为圆形或圆柱形。培养性质：该菌置于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板培养：在35℃下培养24h可大量生长，菌落表面凸起，白色，表面不光滑有褶皱，菌落不透明，边缘呈规则圆形，菌落粘性小，随着培养时间的增加变为乳黄色。分子生物学鉴定：提取该菌株全基因组dna，pcr扩增16srdna片段进行测序，测序结果如seqidno1所示。测序结果在ncbi中进行比对，比对结果显示该菌株为类短短芽孢杆菌。本发明的类短短芽孢杆菌于2017年10月25日保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：cgmccno.14835。3、类短短芽孢杆菌的扩大培养(1)将上述类短短芽孢杆菌接种至活化培养基中，30℃恒温箱中活化培养48h，得活化菌种；将活化菌种接种到扩大发酵培养基，在30℃、120rmp条件下振荡培养48h，得接种菌液，经发酵扩大培养后得到的接种菌液浓度为107～108cfu/ml。4、将类短短芽孢杆菌用于处理含油废水(1)实验室观察将上述扩大的接种菌液按照8％的接种量(即体积为10％含油液体培养基)接种到含油液体培养基中，初始浮油呈现黑色且均匀的分散在培养基表面，有明显的油水分层；接种2～3天后，浮油颜色发生变化，呈现出土黄色或黄白色，浮油变成小圆球状，分散于整个培养基中；接种约4～5天后，小圆球在分散成为更小的小颗粒，均匀地分布于培养基中；接种7天之后，油和水分辨不明显，整个培养基呈黄白色浑浊状液体。(2)实际生产中的处理1)将步骤3扩大培养得到的接种菌液摇匀，与麸皮按质量比1:1的比例混匀，30℃下晾干，用自封袋封装成1kg/袋的菌剂。2)将稻草、待处理的含废油废水按质量为1:1混合，再按接种量为8％接种步骤1)制备的菌剂，混匀后，加水调节混合物水分至65％。将混合物装入微生物处理反应器中，待堆体温度升至40℃后，以90l/min的速率曝气，每天曝气2h，直至温度降至与外界温度一致为止。平均反应20天后，废水达到排放标准。下面结合具体实施例对本发明进行进一步解释说明。实施例一：类短短芽孢杆菌最适接种量优选使用上述步骤3扩大培养后的接种菌液，接种到5ml/管的液体培养基中，30℃，120rpm恒温摇床培养24h，将培养后的菌液摇匀后，分别接种5ml(接种量5％)、8ml(接种量8％)、10ml(接种量10％)菌液到100ml含油量为10％的含油液体培养基中，30℃，120rpm恒温摇床培养7d，每个接种量做3个平行和1个空白(加相同体积的水代替菌液)。7d后取出摇瓶，分别将摇瓶内的液体转入500ml空三角瓶中，加入100ml石油醚(沸点为30～60℃)，超声30min，摇床震荡2h，分液漏斗分离，下层为水层，上层为含油的石油醚，用250ml烧杯收集上层液体，45℃挥发掉石油醚，称重。按以下公式计算降解率：浮油降解率＝(m4-m3)/(m2-m1)×100％其中，m1：空500ml三角瓶的质量；m2：装入含油液体后500ml三角瓶的质量；m3：空250ml烧杯的质量；m4：挥发掉石油醚后的250ml烧杯的质量。结果为：5％接种量的浮油降解率为63％，8％接种量的浮油降解率为67％，10％接种量的浮油降解率为66％。菌液接种量在8％左右较为适宜，接种量增加时，降解率不再增加，甚至呈略下降趋势。接种量过大时，菌间可能因养分、生存空间等条件有限，从而降低生物活性。实施例二：类短短芽孢杆菌特异性处理油井站废水的效果(1)以上述步骤3制备的类短短芽孢杆菌扩大培养至1×107cfu/ml，摇匀后与麸皮1:1混匀，制成菌剂，作为处理组。以短短芽孢杆菌(cgmccno.2148)扩大培养至1×107cfu/ml，摇匀后与麸皮1:1混匀，制成菌剂，作为对照组。(2)取四川泸州市江阳区通滩镇金宝山村1社油井站废水池的含油废水，经测定，废水中的含油量为63.56％。将所述废水分为等量的两份，分别接种处理组和对照组菌剂。接种量均为8％。按上述步骤4的方法进行废水处理，分别于处理的第7、15、30天，取样检测废水的含油量，并计算降解率，结果如表2所示。表2效果对比表由上表可以看出，虽然都是有降解油污效果的芽孢杆菌，但针对江阳区本地的特异性含油废水，本发明的类短短芽孢杆菌菌剂处理效果尤佳，对照组的短短芽孢杆菌菌剂效果不理想。发明人在操作中，还试验了其它一些被证明具有一定处理油污效果的短短芽孢杆菌(因未进行微生物保藏，在此未列出实验数据)，但针对该特异性含油废水，处理效果均不理想。这可能是因为，本发明的类短短芽孢杆菌在该环境下产生了特异性优选变化，尤其适用于当地油污废水处理。实施例三：类短短芽孢杆菌处理江阳区含油废水效果使用上述步骤4(将类短短芽孢杆菌用于处理含油废水)中在实际生产中的处理方法，对江阳区当地含油废水进行处理。具体参数及效果如表3所示。表3处理效果表效果例1例2例3废水初始含油量65.76％57.53％55.48％废水第7天含油量25.01％21.03％19.80％油污第7天降解率61.97％63.45％64.31％废水第15天含油量12.13％11.01％9.07％油污第15天降解率81.55％80.86％83.65％废水第30天含油量4.23％3.59％2.25％油污第30天降解率93.57％93.76％95.94％序列表<110>中国科学院成都生物研究所中煤科工集团重庆设计研究院有限公司<120>一株类短短芽孢杆菌及其应用<160>1<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>1505<212>dna<213>类短短芽孢杆菌(brevibacillusparabrevis)<400>1agggggcgtgctatacatgcaagtcgagcgagggttttcggaccctagcggcggacgggt60gagtaacacgtaggcaacctgcctctcagaccgggataacatagggaaacttatgctaat120accggataggtttttggattgcatgatccgaaaagaaaagatggcttcggctatcactgg180gagatgggcctgcggcgcattagctagttggtggggtaacggcctaccaaggcgacgatg240cgtagccgacctgagagggtgaccggccacactgggactgagacacggcccagactccta300cgggaggcagcagtagggaattttccacaatggacgaaagtctgatggagcaacgccgcg360tgaacgatgaaggtcttcggattgtaaagttctgtgtagggatttccaccaatggacgaa420gtctgatgagcacgccgcgggacgatgagtctcgatgtaaagtctgtgtcagggacgaca480cgtgccgttcgatagggcgtaccttgacggtacctgacgagaaagccacggctaactacg540tgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttgtccgggatttattgggcgtaaa600gcgcgcgcaggcggctatgtaagtctggtgttaaagcccggagctcaactccggttcgca660tcggaaactgtgtagcttgagtgcagaagaggaaagcggtattccacgtgtagcggtgaa720atgcgtagagatgtggaggaacaccagtggcgaaggcggctttctggtctgtaactgacg780ctgaggcgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaa840acgatgagtgctaggtgttgggggtttcaataccctcagtgccgcagctaacgcaataag900cactccgcctggggagtacgctcgcaagagtgaaactcaaaggaattgacgggggcccgc960acaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttga1020catcccgctgaccgctctggagacagagcttcccttcggggcagcggtgacaggtggtgc1080atggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaaccc1140ttatctttagttgccagcattcagttgggcactctagagagactgccgtcgacaagacgg1200aggaaggcggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgct1260acaatggttggtacaacgggatgctacctcgcgaggggacgccaatctctgaaaaccaat1320ctcagttcggattgtaggctgcaactcgcctacatgaagtcggaatcgctagtaatcgcg1380gatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccacg1440ggagtttgcaacacccgaagtcggtgaggtaaccgcaaggagccagccgccgaagtgggt1500tgttt1505当前第1页12