技术总结
本发明涉及一种Cas9/RNP制备PD‑1和LAG3双基因敲除CD19 CAR‑T细胞的方法,包括将用于敲除PD‑1和LAG3基因的sgRNA及Cas9蛋白与电转试剂混合,加入CD4+/CD8+细胞中进行电穿孔转化;采用CD19 CAR慢病毒转染CD4+/CD8+阳性细胞;以及筛选并培养扩增转染后的T细胞已获得PD‑1和LAG3双基因敲除CD19CAR‑T细胞。本发明选用Cas9/RNP基因编辑系统提高了转染效率和转基因的表达效率和时间,简化了CAR‑T细胞的制备流程,增加了系统的可行性和负载量。另外,本发明敲除PD‑1和LAG3双基因时避免使用转染试剂,安全性更高。
技术研发人员:陈相波;雷鸣;田朋飞
受保护的技术使用者:杭州荣泽生物科技有限公司
技术研发日:2018.04.10
技术公布日:2018.09.14